广州市荔湾区餐饮业厨工诺如病毒感染情况及影响因素调查

目的了解荔湾区餐饮业厨工的诺如病毒隐性感染情况,分析厨工感染诺如病毒的影响因素,为制定诺如病毒感染性腹泻防控对策提供可靠的科学依据。方法采用分层抽样的横断面调查法。通过采集调查对象的粪便或肛拭子样本进行诺如病毒检测来了解目标人群的感染情况,采用real-time PCR核酸检测方法对粪便或肛拭子进行诺如病毒核酸检测;通过调查问卷分析厨工诺如病毒感染的影响因素,调查问卷内容分为厨工一般情况、工作状况、卫生饮食习惯、近期健康情况及检测结果。结果共525名厨工参与调查,经核对有效资料500份,有效率为95.24%。500份样本中检出6份诺如病毒核酸阳性,阳性率为1.20%;且阳性组年龄高于阴性组(t=-12.868,P0.001),阳性组与阴性组在工作状况内容方面、卫生习惯及饮食习惯、近期健康情况上差异均无统计学意义(P0.05)。结论广州市荔湾区餐饮业厨工诺如病毒隐性感染率为1.20%,餐饮业有暴发诺如病毒感染性腹泻的潜在危险,应该加强厨工诺如病毒感染情况的监测,落实相关卫生监督措施。     

基于聚合酶区和衣壳区测序的诺如病毒暴发疫情溯源

目的 分析一起厨工相关诺如病毒暴发的病原学特征,为诺如病毒感染的溯源提供证据.方法 利用Fil-marray病原体检测系统初筛,根据感染性腹泻诊断标准WS 271-2007进行细菌分离,同时进行诺如病毒荧光PCR检测,对诺如病毒阳性核酸进行聚合酶区和衣壳区序列扩增,测序比对,利用Mega软件分析同源性.结果 49份患者...     

一起诺如病毒感染性腹泻暴发的调查分析

目的查找一起群体性感染性腹泻暴发的原因,为制定相应的防控措施提供依据。方法采取现场流行病学调查和采集粪便及食物标本进行致病菌检测和诺如病毒检测。结果采集的7份粪便标本诺如病毒检测阳性,均为诺如病毒I型,未检出致病菌,食物标本诺如病毒检测阴性。结论本次事件为食物或餐（炊）具诺如病毒污染所引起的感染性腹泻暴发,加强餐饮业的规范化管理及加强卫生监督监测是预防此类事件发生的重要措施。     

深圳市龙华区2019年札如病毒基因分型以及进化分析

目的 分析2019年深圳市龙华区札如病毒的基因型别,掌握辖区内札如病毒的流行情况。方法 采用实时荧光定量PCR对283份龙华区感染性腹泻疫情样本进行轮状病毒、诺如病毒和札如病毒核酸检测,对札如病毒阳性样本核酸采用RT-PCR（反转录-聚合酶链式反应）扩增,并对扩增产物进行序列测定和遗传进化分析。结果 2019年龙华区共发生感染性腹泻聚集性疫情24起,共采集283份样本。其中由诺如病毒引起15起（占62.5%）,札如病毒引起4起（占16.6%）,札如和诺如病毒共同引起1起（占4.1%）,未检测出病原体4起（占16.6%）。283份感染性腹泻疫情样本中,诺如病毒检测阳性率为17.7%（50/283）;札如病毒阳性率为8.1%（23/283）,轮状病毒未检出,所有病例无混合感染情况。23例札如阳性样本有5例VP1条带扩增成功,扩增效率为21.7%,基因亚型鉴定分析结果表明2株为GII.3型,3株为GII.4型。结论 在2019年龙华区腹泻疫情方面,GⅡ.3和GⅡ.4型是札如病毒的主要型别。诺如依然是龙华区感染性腹泻中引起散发和暴发的首要病原体,星状,轮状,腺状仅在散发病例中发现,而札如已成为引起急性腹泻病的重要病原体,应尽快开展龙华区对札如病毒的常规检测和进一步的分子分型工作。     

2006年深圳市急性肠胃炎的流行病学和病毒学调查

目的研究2006年深圳市急性肠胃炎发病的主要病因。方法收集深圳急性肠胃炎粪便样本200份（包含122份散发样本和78份暴发样本）,采用RT—PCR的方法进行急性肠胃炎相关病毒检测。结果44％（88／200）的样本为诺如病毒阳性,9％（18／200）为轮状病毒A阳性,2％（4／200）为星状病毒阳性,2％（4／200）为肠道腺病毒阳性,还有8％（16／200）的样本为混合感染。其中散发样本中检出腺病毒、轮状病毒、星状病毒和诺如病毒GI、诺如病毒GII5种病毒,而诺如病毒GII是3次暴发样本中的唯一病原。对22例NoVGII阳性样本测序后的系统发育分析表明NoVGII．4variants2006bcluster是造成2006年深圳市肠胃炎暴发的主要诱因．其次为NoVGII．12和GII．4Hunter簇。结论NoVGII．4是2006年流行于深圳的主要病毒株．     

基于磁珠的可视化基因芯片在诺如病毒快速检测中的应用

目的建立可用于临床样本检测的基于磁珠的可视化基因芯片检测方法。方法在玻璃芯片上以链霉亲和素包被的磁珠作为标记物,采用生物素标记的核酸为样品,通过链霉亲和素与生物素的亲和作用,进行核酸杂交检测,杂交结果以肉眼或通过普通显微镜观测,验证方法的特异性、灵敏性及重复性。结果方法检测的灵敏度为50ng,特异性和重复性均较好;对20份临床粪便样本分别进行PCR和芯片检测,芯片检测结果与PCR方法检测结果一致。20份临床样本中,6份阳性,其中1份为诺如病毒Ⅰ型、5份为诺如病毒Ⅱ型,14份阴性。结论方法显示具有高效、实用和可视化的特点,可同时检测样品中含有的诺如病毒Ⅰ型、诺如病毒Ⅱ型;检测时间短,能够满足口岸诺如病毒的快速检测要求,具有较好的实用价值,对于进一步开发更多指标的微生物检测方法具有很好的示范作用。     

水中诺如病毒富集及定量检测研究

目的 评估MCE-PEG富集法(混合硝酸纤维素膜第一次富集和PEG沉淀第二次富集)对水中诺如病毒的富集效果及检测灵敏度,为水源性诺如病毒胃肠炎疫情暴发的确定提供有效的实验室检测方法.方法 把含有诺如病毒的粪便加入纯净水中,用MCE-PEG方法富集后,荧光PCR绝对定量检测富集前后水的病毒浓度,评估该方法的病毒回收率.同时梯度稀释粪便悬液,分别加入纯净水中,评估该方法的灵敏度.结果 经过混合硝酸纤维素膜第一次富集后待滤水被浓缩100倍,病毒平均回收率为56.12%,灵敏度是待滤水中病毒浓度为10拷贝/μl.PEG沉淀第二次富集后,浓缩倍数为1000倍,病毒平均回收率为42.47%,灵敏度是待滤水中病毒浓度为1拷贝/μl.结论 MCE-PEG富集法操作简单、材料价格实惠、易于购买、病毒回收率及灵敏度较高,可望进一步优化后广泛应用于不同水中病毒富集浓缩检测,为水源性诺如病毒胃肠炎疫情暴发的确定提供了有效的实验室检测方法.     

一起肠道病毒感染性腹泻疫情的调查处理

目的了解某中学诺如病毒感染性腹泻暴发的特点和流行原因，总结暴发疫情调查处理的经验。方法按照病例定义开展病例搜索，采用描述性流行病学和回顾性队列研究方法进行分析，样本采用RT—PCR方法检测诺如病毒核酸。结果该起感染性腹泻事件发病17人，罹患率为1．9％o。采集腹泻患者粪便样本9份，RT—PCR核酸检测阳性7份；学校剩余食物及环境相关样本13份均为阴性。结论根据现场流行病学调查及实验室检测结果，认定该事件为一起诺如病毒感染引起的腹泻暴发。     

1起老年精神病区诺如病毒感染暴发的调查

目的:对广东省某精神专科医院老年精神三科暴发的一起诺如病毒急性胃肠炎医院感染进行调查。方法:采用现场流行病学方法进行调查,使用RT-PCR检测诺如病毒。结果:2011年6月17日～6月22日共发生10例诺如病毒胃肠炎,全部为住院患者;该病区14.4%的患者被感染;对收集到的10份大便标本进行诺如病毒检测,其中6份结果阳性;通过隔离治疗患者等综合措施,疫情得到控制。结论:此次急性胃肠炎医院感染暴发是由诺如病毒引起的,暴发于调查处理后1个最长潜伏期(3天)内得到控制。     

液相芯片检测轮状病毒和诺如病毒方法的建立

目的建立一种多重PCR结合液相芯片技术同时检测A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒的方法。方法建立多重PCR扩增方法,将PCR产物与偶联核酸探针的微球混合物进行杂交,利用Luminex 200液相芯片检测仪来检测杂交结果。对建立的A型轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒液相芯片检测方法进行灵敏度、干扰性分析,并应用该方法对68份粪便样品的核酸进行检测。结果灵敏性实验结果表明,该方法对GII型诺如病毒的检测灵敏度较高,检出限为10 pg/PCR;对轮状病毒的检出限为100 pg/PCR;该方法对GI型诺如病毒的检测灵敏度较低,检出限为1 ng/PCR。干扰性实验结果表明,轮状病毒、GI型诺如病毒和GII型诺如病毒的液相芯片检测,当病毒之间的模板量不同时(1∶1、1∶2、2∶1、1∶5、5∶1、1∶10、10∶1、1∶100、100∶1),仍能够准确检测;对68份临床粪便样品的核酸进行检测,检测出A型轮状病毒样品19份,GI型诺如病毒样品1份,GII型诺如病毒样品18份;轮状病毒和GII型诺如病毒混合感染1份,GI和GII型诺如病毒混合感染1份。结论本研究建立的轮状病毒和诺如病毒液相芯片检测方法通...     

牡蛎中诺如病毒核酸两种提取方法比较

目的寻找简便有效的更适合长期监测的牡蛎中诺如病毒核酸提取的方法。方法通过甘氨酸聚乙二醇富集后硅胶膜离心
柱法（方法A）和蛋白酶K生物消化后顺磁性硅胶基法（方法B）两种核酸提取方法,采用实时RT-PCR检测自然状态的牡蛎和人
工染毒状态的牡蛎来进行比较。结果两种方法的阳性检出率没有差异,总体比较方法B的病毒回收率高。结论方法B优于
方法A,且方法B更快捷,故方法B更适合长期监测。
     

3种国产丙型肝炎病毒核酸定量与罗氏试剂检测性能的初步评价

目的评价3种国产丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量试剂检测性能。方法应用已批准上市占国内市场50%以上的3种国产HCV RNA定量检测试剂,瑞士Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Test定量试剂,分别检测经Ortho和DiaSorin公司抗-HCV EIA试剂,CHIRON公司RIBA HCV 3.0SIA及MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测判定的139份抗-HCV阳性及165份抗-HCV阴性血浆样本。采用SPSS 16.0统计学软件,用χ2检验对4种HCV RNA定量试剂阳性检出率进行分析。结果 304份临床样本检测中,3种（A、B、C）国产HCV RNA定量试剂的阳性检出率显著低于瑞士Roche公司的HCV RNA定量试剂阳性检出率（11.51%、12.83%、14.80%vs 26.97%,χ2值分别为23.38、19.08、13.63,P〈0.01）,国产A、B、C试剂的阳性检出率较为一致（χ2值为1.47,P〉0.05）。国产HCV RNA定量试剂漏检样本的HCV RNA载量小于50IU/ml。以罗氏试剂检测HCV RNA水平为依据,国产试剂检测抗-HCV阴性样本的检出与HCV RNA水平不相关（即高值和低值均有检出）。结论应提高国产HCV RNA定量试剂的灵敏度和线性检测范围。     

猴副流感病毒5型实时荧光定量PCR方法的建立与初步应用

目的建立猴副流感病毒5型（SV5）实时荧光定量PCR方法,并初步应用于猴样本检测。方法根据SV5病毒NP基因保守片段设计特异引物和TaqMan探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立SV5实时荧光定量PCR方法;对该方法的线性、敏感性、特异性及稳定性进行测定;并使用该方法对24个猴样品进行检测。结果成功建立SV5实时荧光定量PCR方法;该方法线性范围为（6．8×10^9～6．8×10^5）copy／μL,灵敏度为6．8copy／μL,批内变异系数（CV）为0．63％～8．71％,批间CV为1．52％-12．38％,而且方法特异性好;在24个猴肺样品中未检测出阳性。结论该方法的建立为实验动物和动物源性生物制品中SV5的定量检测奠定了基础。     

上海市金山区某小学一起GⅡ.P7-GⅡ.6型诺如病毒感染疫情的确认及流行病学调查

目的 分析一起学校诺如病毒感染性腹泻疫情流行病学特征及其感染病毒基因型别,探讨可能传播途径,为制定有效控制策略提供科学依据。方法 制定统一病例定义,开展主动病例搜索,采用描述性流行病学和回顾性队列研究进行分析;采集发病学生和老师粪便或肛拭子,食堂员工肛拭子及食堂环境样本,发病班级环境样本,运用实时荧光RT-PCR进行诺如病毒核酸检测,应用常规RT-PCR扩增诺如病毒多聚酶区和衣壳蛋白N/S区,PCR产物纯化、测序,序列经核酸比对确认,应用MEGA 7.0软件编辑基因序列,构建系统进化树;采用Excel2017软件建立数据库,OpenEpi3.03在线软件进行统计学分析。结果 2019年5月4—13日,本起疫情报告病例44例,罹患率为5.42%（44/812）,学生41例,教师3例;病例主要表现为呕吐（70.45%）,腹泻（36.36%）;流行曲线提示同源暴露后继之以接触模式传播,五（2）班罹患率（38.46%）高于其他9个班级;发病前3日接触类似病例（RR=6.43,95%CI=3.69~11.21）及近距离暴露呕吐物（RR=5.26,95%CI=3.20~8.65）均为本起疫情危险因素。检测证实：10份学生、3份老师及1份厨工粪便或肛拭子样本GⅡ型诺如病毒核酸阳性;随机测序样本序列比对：Jinshan|xingtaschool01|2019、Jinshan|xingtaschool02|2019等7株同属GⅡ.P7-GⅡ.6型诺如病毒,指示病毒同源。结论 结合流行病学调查、临床资料和实验室检测结果,证实本次疫情为由隐性感染厨工污染饭盒后继之以接触传播导致的GⅡ.P7-GⅡ.6型诺如病毒感染性疫情。     

自一蜱虫中检测出新型布尼亚病毒核酸阳性

目的 了解发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)的传播机制.方法 采集病人体表及居住环境蜱,通过Real-time PCR筛查蜱中的病毒核酸.结果 病人体表蜱中检测出发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核酸阳性.结论 提示蜱可能为该新病原体的传播媒介对疾病的防控具有重要的指导意义.     

一种诺如病毒快检试剂盒的评价

目的系统评价一种诺如病毒快检试剂盒的检测性能。方法收集130份非轮状病毒感染的腹泻样本,分别采用德国拜发公司生产的RIDA快速检测试剂盒和检验检疫行业标准中推荐的RT-PCR方法平行检测诺如病毒,统计分析两种方法的检测结果 ,并用RT-PCR测定快检试剂盒的最低检测下限。结果在130例腹泻样本中,快检试剂盒检出21例诺如病毒阳性,检出率为16.2%,RT-PCR检出24例诺如病毒阳性,检出率为18.5%。两种检测方法的符合率为97.7%(127/130),两种方法的检测结果差异无统计学意义(P=0.25),快检试剂盒的最低检测下限可达到1 000拷贝数。结论基于固相膜免疫测定的诺如病毒快检试剂盒具有较高的特异性和灵敏度,可以用于临床病毒性腹泻样本的快速筛检和国境口岸的应急检测。     

甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒行业标准的验证

目的规范和提高甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）的质量,提出本行业标准并加以验证。方法使用市场上4家试剂盒对本标准的外观、阳性和阴性参考品符合率、最低检测限、重复性和稳定性等项目进行试验验证。结果除试剂盒D（北京金豪制药股份有限公司生产）外观和重复性项目不符合外,其他试剂盒的验证结果均符合标准的规定。加速稳定性试验结果显示,试剂盒A（中山大学达安基因股份有限公司生产）检测重复性参考品R2和25℃下放置2d条件下出现较多不合格结果,其他产品均符合标准规定。结论多数试剂盒的验证结果符合行业标准的要求,说明本标准整体具有合理性。本标准的建立有利于进一步规范和提高该类产品的质量,为将来核酸检测试剂盒加速稳定性条件的探索工作提供了依据。     

广州市医院成人病毒性腹泻的分子流行病学研究

目的了解广州市医院门诊成人病毒性腹泻的感染情况和分子流行病学特征。方法2011年6月至2012年5月在广州市两家哨点医院收集门诊18岁以上腹泻患者粪便标本127份。采用酶联免疫技术检测A群轮状病毒,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测粪便标本中的诺如病毒、星状病毒和札幌病毒,聚合酶链反应（PCR）检测腺病毒。结果共127份腹泻患者粪便标本,其中男性占54．33％（69／127）,女性占45．67％（58／127）,年龄以60岁以上所占比例最高,为25％（7／28）。127份粪便标本中,单一腹泻病毒感染25份,阳性率19．69％,其中检出轮状病毒阳性7份,阳性率5．52％（7／127）;诺如病毒阳性11份,阳性率8．66％（11／127）;札幌病毒3份,腺病毒阳性3份,阳性率均为2．36％（3／127）;星状病毒1份,阳性率0．79％（1／127）。未见混合感染,发病具有明显的秋冬季节升高现象,诺如病毒、札幌病毒、腺病毒、星状病毒流行株为别为GII-4型、GI-2型、AD41和HAstV-1。结论医院就诊成人腹泻病例中约I／4为病毒性腹泻．其中诺如病毒是最重要的病原体,感染对象主要是60岁以上人群。     

麻疹患儿粪便麻疹病毒核酸的检测及临床意义

目的：探讨麻疹患儿肠道排毒情况和粪便病毒核酸快速检测的临床意义。方法38例临床诊断麻疹患儿,入院时均有发热、皮疹等麻疹感染症状。在入院2d内同时采集咽拭子和粪便标本。标本在冷链条件下送传染病诊治国家重点实验室,采用RT- PCR法检测麻疹病毒核酸及Ct值。同时对部分咽拭子和粪便标本扩增均阳性的PCR产物进行基因测序。结果38例患儿粪便麻疹病毒核酸阳性37例,占97.4%,Ct值23.8±3.04;咽拭子病毒核酸阳性35例,占92.1%,Ct值28.0±4.0。两者阳性率比较,差异无统计学意义（χ^2=0.029,P＞0.05）;两组Ct值比较,差异有统计学意义（t=5.23,P＜0.05）。3例患儿咽拭子和粪便标本的麻疹病毒基因型（均为H1a基因亚型）和核苷酸序列完全一致。结论粪便病毒核酸快速检测与咽拭子标本具有相同的临床诊断价值,粪便病毒核酸拷贝数高于咽拭子病毒核酸,且粪便标本的采集具有方便、无痛苦,依从性好,不易受人为因素的影响,值得推广。