尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究

目的：从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法：应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE，用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量，用皮内出血实验测定其出血活性。结果：从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶，它的相对分子质量为25000，没有出血活性，在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白，相对活性为粗毒的3．2倍。结论：从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性，而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。     

抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

目的 从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定,观察其抗凝作用。方法 经DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin,分别采用Biosep-sec-s 2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5％浓缩胶,12％分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定,将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合,测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)。结果 Acoagulatin的相对分子质量为31400,由两个亚基组成,相对分子质量分别为14400和17000,能显著地延长PT和APTT,对TT没有影响。结论 采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒,能分离出纯度高的组分acoagulatin,该组分具有抗凝活性。     

抗凝组分Acoagulatin的纯化鉴定及其抗凝特性

目的 从蝮蛇毒中分离纯化一种组分acoagulatin并进行鉴定。观察其抗凝作用。方法 经DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow离子交换柱层析，从蝮蛇毒中分离、纯化得到acoagulatin，分别采用Biosep-sec-S2000型HPLC分子筛柱层析、还原性SDS-PAGE(5％浓缩胶，12％分离胶)电泳进行纯度和相对分子质量测定，将不同浓度acoagulatin与抗凝兔血混合，测定凝血时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、部分凝血活酶时间(APTT)。结果 Acoagulatin的相对分子质量为31400，由两个亚基组成，相对分子质量分别为14400和17000，能显著地延长PT和APTT，对TT没有影响。结论 采用DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-sepharose Fast Flow两种离子交换柱层析分离蛇毒，能分离出纯度高的组分acoagulatin，该组分具有抗凝活性。     

蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白体内抗凝作用的研究

目的：从中国产蝮蛇毒中分离纯化电泳纯度的类狼疮抗凝蛋白,研究其对动物体内的抗凝作用及机制。方法：测定蝮蛇毒中类狼疮抗凝蛋白对新西兰白兔的活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间和凝血酶时间的影响;对小鼠凝血时间的影响;对大鼠静脉血栓和血小板聚集功能的影响,以及类狼疮抗凝蛋白的溶血性试验。结果：类狼疮抗凝蛋白能显著地延长活化部分凝血活酶时间和凝血时间,明显地抑制静脉血栓的形成,无溶血作用。结论：类狼疮抗凝     

中国蝮蛇蛇毒中小肽SV-PP-3的分离及其抗血小板聚集作用

目的 研究中国蝮蛇蛇毒中具有抑制血小板聚集作用的小肽。方法 采用低温离心、SephadexG-75凝胶层析、高效液相C-18反相层析从蛇毒中分离纯化小肽,并用血小板聚集仪测定分离的小肽在体外对磷酸腺苷(ADP)诱导的兔血小板聚集作用。结果 SV-PP-3是从中国蝮蛇蛇毒中分离出一种相对分子质量为1234.557的新的小肽。SV-PP-3在体外能显著抑制ADP诱导的兔血小板聚集,具有剂量依赖性。结论 SV-PP-3对ADP诱导的兔血小板聚集具有显著的抑制作用。     

中国蝮蛇蛇毒中小肽SV-PP-3的分离及其抗血小板聚集作用

目的 研究中国蝮蛇蛇毒中具有抑制血小板聚集作用的小肽。方法 采用低温离心、Sephadex G-75凝胶层析、高效液相C-18反相层析从蛇毒中分离纯化小肽，并用血小板聚集仪测定分离的小肽在体外对磷酸腺苷(ADP)诱导的兔血小板聚集作用。结果 SV-PP-3是从中国蝮蛇蛇毒中分离出一种相对分子质量为1234．557的新的小肽：SV-PP-3在体外能显著抑制ADP诱导的兔血小板聚集，具有剂量依赖性。结论 SV-PP-3对ADP诱导的兔血小板聚集具有显著的抑制作用。     

一种新型人血小板聚集抑制剂的纯化与初步活性鉴定

目的从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化一种新型人血小板聚集抑制剂,并进行活性鉴定。方法采用阳离子交换与反相高效液相色谱法从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,并命名为敬钊去整合素-I。采用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱测定分子量,用人血制备富含血小板的血浆并加入敬钊去整合素-I,采用血小板聚集仪测定二磷酸腺苷ADP诱导血小板聚集作用。结果从敬钊缨毛蛛粗毒中分离到一种新型多肽组分,其相对分子质量为3 631.42,对血小板具有明显抑制作用,但它对血小板聚集的作用受剂量的影响很大,总的趋势是较低浓度时促进血小板的聚集,较高浓度时则抑制血小板的聚集。结论敬钊去整合素-I是一种源于蜘蛛粗毒的新型人血小板聚集抑制剂,但其对血小板的影响在高浓度与低浓度时产生的效应相反,其准确的作用机制还有待深入研究。     

蝮蛇抗栓酶的临床应用

蝮蛇抗栓酶是从蝮蛇毒中分离并提取纯化的精氨酸酶制剂 ,具有抗凝、溶栓、降脂、降低血粘度、改善血循环等作用 ,在治疗脑血栓、高脂血症、心绞痛及糖尿病并发症等方面都取得良好功效。1　临床应用1 1　脑血栓形成 :脑血栓形成大部分患者伴血液粘度增高 ,而蝮蛇抗栓酶有消耗纤维蛋白原、降低血粘度、抑制血小板聚集作用。治疗方法 :按 0 0 0 84Ｕ (ｋｇ·ｄ)剂量加入 5 %葡萄糖盐水 2 5 0ｍｌ或生理盐水 2 5 0ｍｌ静滴 ,每次 1次 ,4周为一疗程。李军成等报道[1] 治疗脑血栓形成患者 2 0 0例 ,总有效率 93 0 % ,对急性期患者疗效达 99% ,对…     

蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定

目的：从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素（melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS－PAGE）及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法：用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS－PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果：样品经SDS－PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95．97％,相对标准差（RSD）为1．07％。结论：以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。     

猪血小板中分子量5.4×10^4钙结合蛋白的分离、纯化和鉴定

从猪血中分离得到血小板，经反复洗涤后用Triton X-100（1％）溶解血小板，以DEAE纤维素作离子交换层析，经梯度洗脱后，洗脱组分以Dot-blotting放射自显影法进行钙结合活性测定，收集钙结合活性最强的洗脱组分，再以羟基磷灰石作吸附层析，用磷酸缓冲液作梯度洗脱，分离纯化了一种具有较强钙结合活性的蛋白质。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定其分子量为5.4×10^4。该蛋白质能够促进天然磷脂酰丝氨酸（PS）脂质体聚集，并且这种作用依赖钙离子的存在。提示该蛋白质可能属于一类新的钙结合蛋白－Annexins，其功能可能与钙调节的血小板分泌有关，或在血小板骨架成分与膜相互作用时起关键的桥梁作用。     

脑血清对血小板聚集功能的影响

应用Born氏比浊法测定脑血清在体外和体内对腺苷二磷酸（ADP）、花生四烯酸（AA）和血小板活板聚集,其半数抑制浓度（IC50）分别为9．2g/L和22．4g/L,在较高浓度时（终浓度为25g/L或50g/L）,亦显著抑制PAF诱导的血小板聚集（与生理直比较,P＜0．01）,在体内（各组动物均连续灌胃3d,每天1次）,高剂量（11g/kg)的脑血清对ADP和AA诱导的血小板聚集均有显著抑制作用,于末次灌胃0．5h即表现出较强抑制效应药效至少可持续4h;低剂量（5．5g/kg)的脑血清对ADP和AA引起的血小板聚集于给药后0．5h即起效,药效可持续3h但抑制率明显低于高剂量组,且于4h药效基本消失,对AA引起的聚集仅表现为一过性抑制作用;两种剂量的脑血清对PAF诱导的血小板聚集无明显的抑制作用,结果提示,脑血清在体内外均具有明显的抗血小板作用。     

山蒟醇提取物的抗血小板聚集作用?

以山蒟醇提取物在兔的体内和体外-体内进行抗血小板聚集实验。结果表明山蒟醇提取物可抑制由血小板活化因子和花生四烯酸所致的血小板聚集,对2者所致的血小板聚集（体外试验）的IC_（50）。分别为40． 34、345． 46 mg／L。静脉注射山蒟醇提取物30 mg／kg,15 min后产生的抗血小板聚集作用最明显,其对血小板活化因子和花生四烯酸所致的血小板聚集（体内-体外试验）的抑制率分别为82．75％和33．34％;血小板聚集的持续时间分别为60、30 min。这表明山蒟醇提取物对血小板活化因子作用有一定的选择性。     

中华眼镜蛇毒组份M抑制血小板聚集作用机制初探

探讨中华眼镜蛇毒组份Ｍ抑制血小板聚集作用机制;方法：运用卵磷脂法、剩余可凝纤维蛋白原法、纤维蛋白平板法等分别测定了中华眼镜蛇毒组份Ｍ中磷脂酶Ａ_２（ＰＬＡ_２）,纤维蛋白原溶解酶及纤维蛋白溶解等与血小板聚集相关的酶活性,并运用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了组份Ｍ对血小板内细胞骨架蛋白的影响;结果：组份 Ｍ不含 ＰＬＡ_２活性,无纤维蛋白（原）溶解酶活性,亦无ＡＤＰ酶和 ５’－核苷酸酶活性,不影响正常人血浆乳酸脱氢酶的含量,但对ＡＤＰ诱导的血小板细胞内肌动蛋白微丝聚合物的形成有明显抑制作用;结论：中华眼镜蛇毒组份Ｍ对血小板聚集所依赖的血小板内细胞骨架系统的功能有抑制作用。     

莪术二酮抑制凝血酶诱导血小板活化和聚集的研究

目的 研究莪术二酮对凝血酶诱导大鼠血小板活化和聚集的影响,来阐明莪术二酮抗血小板活化的机制.方法 电阻抗法测定凝血酶诱导大鼠洗涤血小板聚集率,计算莪术二酮对其抑制率.荧光分光光度法测莪术二酮抑制血小板胞内钙离子浓度变化.流式细胞术检测血小板P-selectin(CD62p)的表达.Western blot测定磷酸化蛋白的磷酯酶C(PLC)、蛋白激酶C(PKC)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)的变化.结果 400 μmol/L的莪术二酮可以有效地抑制0.3 U/ml凝血酶诱导的大鼠血小板的聚集.50、100 μmol/L的莪术二酮可以显著抑制血小板活化标志物[Ca2+]i上升和P-selectin(CD62p)的表达.在蛋白水平上,莪术二酮可以抑制PLCβ3、PKCθ和MAPKs蛋白的磷酸化.结论 初步认为莪术二酮通过PLC-PKC-MAPKs通路抑制凝血酶诱导的血小板活化和聚集,阐明了莪术二酮抗血小板活化的部分机制.     

灯盏乙素对血栓形成及血小板聚集的影响

目的研究灯盏乙素对血栓形成及血小板聚集的影响.方法采用电刺激大鼠颈动脉血栓模型评价灯盏乙素对血栓形成的影响;应用Born比浊法测定灯盏乙素体内外对兔血小板聚集功能的影响.结果灯盏乙素对电刺激大鼠颈动脉引起的血栓形成具有明显的对抗作用;灯盏乙素体外显著抑制AA和ADP和PAF诱导的兔血小板聚集,其半数抑制浓度(m ed ium inh ib itory concentration,IC50)分别为70.5、39.8和97.7mg/L;灯盏乙素静脉注射也能明显降低AA和ADP、PAF诱导的兔血小板聚集率,且呈剂量-效应关系.结论灯盏乙素有明显的抗血栓形成作用,其机制与其抗血小板聚集作用密切相关.     

8种丹参素衍生物对兔血小板聚集性的影响

目的观察8种丹参素衍生物对兔血小板聚集性的影响。方法体外腺苷二磷酸(ADP)诱导兔血小板聚集。结果8种丹参素衍生物β-苯基乳酸(PLA)、对氟苯基乳酸(p-FPLA)、邻氟苯基乳酸(o-FPLA)、对甲基苯基乳酸(p-MPLA)、邻甲基苯基乳酸(o-MPLA)、邻氯苯基乳酸(o-CIPLA)、间氯苯基乳酸(m-CIPLA)、呋喃基乳酸(FLA)和乙酰水杨酸(ASA)对ADP诱导的家兔血小板聚集性均有剂量依赖的抑制作用,其50%聚集抑制浓度(IC50)值分别为4.37、6.14、9.32、7.56、2.73、3.07、6.30、7.30和7.24(×10     

蛇毒三肽pENW对FeCl3诱导的大鼠动脉血栓形成的抑制作用及其机制

采用FeCl₃诱导的大鼠动脉血栓模型考察蛇毒三肽焦谷氨酸-天冬酰胺-色氨酸(pENW)的抗血栓形成作用,并对其抗血栓作用进行了初步的机制探讨。应用Born比浊法和Grynkiewicz方法分别测定pENW对大鼠血小板聚集功能和血小板内钙水平的影响,通过凝血三项（活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间）考察pENW对凝血系统的影响;实验结果表明,静脉注射pENW（iv）能抑制FeCl₃诱导的大鼠动脉血栓形成(P<0.05),抑制ADP诱导的血小板聚集作用(P<0.05),抑制ADP诱导的血小板胞浆内游离Ca²⁺浓度（［Ca²⁺］_i）升高,但对凝血酶系统没有显著性影响;实验结果提示,pENW具有抗血栓形成作用,其机制可能与抑制血小板聚集、抑制血小板胞浆［Ca²⁺］_i升高有关。     

丙咪嗪抗血小板聚集作用与细胞外Ca_(2+)浓度的关系

目的：观察丙咪嗪抗血小板聚集作用与细胞外Ｃａ２＋浓度的关系。方法：以比浊度法进行血小板聚集实验。结果：丙咪嗪００１～１ｍｍｏｌ／Ｌ浓度明显对抗凝血酶及二磷酸腺苷诱导的人血小板聚集，且其抗血小板聚集作用随着细胞外Ｃａ２＋增加（加入ＣａＣｌ２１ｍｍｏｌ／Ｌ）与降低（加入乙二醇二乙醚二氨四乙酸１ｍｍｏｌ／Ｌ）而呈现减弱和增强现象，与维拉帕米作用相似。结论：丙咪嗪的抗血小板聚集作用可能与抗钙作用有关。     

硝普钠对急性左心衰竭患者血小板聚集功能的影响

目的 :探讨硝普钠 (SNP)对急性左心衰竭 (AHF)患者血小板聚集功能的影响 ,并与乌拉地尔进行比较。方法 :116例急性左心衰竭患者随机分为硝普钠组 ( 5 8例 )及乌拉地尔组 ( 5 8例 ) ,2组患者分别给予硝普钠 5 0mg/2 5 0ml ,滴速 1 0～ 5 0 μg/kg·min及乌拉地尔 5 0mg/2 5 0ml,滴速 2 0～ 8 0 μg/kg·min。于乌拉地尔和硝普钠静滴结束前后 ,2组患者同时抽血测定血小板聚集率。聚集诱导剂为二磷酸腺苷 (ADP)、肾上腺素 (EN)。用药前后血小板聚集率比较采用配对t检验。结果 :用药后硝普钠组患者 2种诱导剂所致血小板聚集率均显著降低 (P均 <0 0 1) ,乌拉地尔组用药前后无显著性差异。结论 :应用硝普钠对急性左心衰竭患者具有广谱抗血小板作用 ,而乌拉地尔则无此作用。急性左心衰竭应用扩血管药物纠正心力衰竭时选择硝普钠可能有助于防治血栓栓塞并发症的发生。     

硫酸镁对血栓形成及血小板活化/聚集的影响

目的 复制FeCl3损伤血管内皮诱导大鼠颈总动脉血栓形成模型，探讨血栓形成时血小板活化和聚集变化及硫酸镁对其影响。方法 将SD大鼠40只随机分为4组，即假血栓对照组、单纯血栓组，此两组均给予生理盐水；Mg-early组和Mg-late组，此两组分别在应用FeCl3前10min和后7min开始持续给予MgSO4，给药1h后颈总动脉取血测定血小板聚集率和血小板表面a颗粒膜蛋白140，血栓段脉管病理形态学检查。结果 早期给镁组明显抑制血栓形成，减轻血栓段脉管重量，抑制血小板聚集，降低血浆GMP-140含量，晚期给镁组对血栓形成及上述指标则无明显影响。结论 血栓形成过程存在血小板活化、聚集，早期给予MgSO4可能抑制血栓形成和血小板活化、聚集。