原花青素B1对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用及其机制

目的：观察原花青素B1（PB1）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。方法：体外培养的处于对数生长期的小鼠巨噬细胞RAW264.7分为对照组（细胞不进行处理）、LPS组（细胞给予2 mg·L^-1LPS）、PB1组（细胞给予10 μmol·L^-1 PB1）和PB1+LPS组（细胞给予2 mg·L^-1LPS+10 μmol·L^-1 PB1）。显微镜下观察各组细胞形态表现，流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平、细胞凋亡率和细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86及Toll样受体4（TLR4）表达水平。结果：与对照组比较，LPS组细胞皱缩变圆，但PB1组和PB1+LPS组细胞形态表现变化不明显。与对照组比较，LPS组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞中ROS水平降低（P<0.05）。与对照组比较，LPS组细胞凋亡率升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与对照组比较，LPS组细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达水平升高（P<0.05）；与LPS组比较，PB1+LPS组细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达水平降低（P<0.05）。结论：LPS通过诱导细胞中ROS水平升高引起细胞损伤，PB1通过降低ROS水平，下调细胞表面膜分子CD16/32、CD40、CD86和TLR4表达对细胞发挥保护作用。     

Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制

目的 探讨Toll样受体4（TLR4）接头分子髓样分化因子88（MyD88）和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1（IL-1）受体（TIR）结构域衔接蛋白（TRIF）基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。 方法 体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因（MyD88-KO组和TRIF-KO组）,设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^－1乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1（Arg1） mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ干扰素（INF-γ）和白细胞介素10（IL-10）水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。 结果 采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高（P<0.05）;与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低（P<0.05）。细胞形态表现, Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低（P<0.05）,INF-γ和IL-10水平差异无统计学意义（P>0.05）;与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低（P<0.05）,INF-γ水平差异无统计学意义（P>0.05）,IL-10水平明显升高（P<0.05）;与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高（P<0.05）,INF-γ和IL-10水平差异无统计学意义（P>0.05）。Western blotting法检测,与未处理Raw264.7组比较,Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）,Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α（IκB-α）和p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。分子对接,乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4,结合能分别为－2.72、－3.24和－3.66。 结论 乳酸作用巨噬细胞后,可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB,促进M2极化。     

抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合碳点通过高尔基体应激对MG63细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响

目的：探讨抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合碳点（CDs）对人骨肉瘤MG63细胞增殖、凋亡和氧化应激等的影响,阐明抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合CDs的细胞生物学特性。方法：以抗坏血酸和聚乙烯亚胺为原料,用微波法合成抗坏血酸-聚乙烯亚胺复合CDs。采用MTT法检测MG63细胞增殖率,流式细胞术检测不同细胞周期MG63细胞百分比。将MG63细胞分为空白对照组、转染阴性对照组、转染GOLPH3-siRNA组、CDs组、转染阴性对照+CDs组、转染GOLPH3-siRNA+CDs组。采用RT-PCR法检测各组MG63细胞中高尔基体磷酸化蛋白3（GOLPH3）的基因表达水平并计算基因沉默效率,流式细胞术检测各组MG63细胞凋亡率以及MG63细胞中活性氧（ROS）水平。结果：与空白对照组比较,随着CDs浓度的增加,MG63细胞的增殖率降低;在24和48 h时,CDs浓度大于40 mg·L^-1时,MG63细胞增殖率明显降低（P<0.05）;在72 h,CDs浓度大于20 mg·L^-1时,细胞增殖率明显降低（P<0.05）。与对照组比较,40 mg·L^-1CDs组G₀/G₁期MG63细胞百分比明显升高（P<0.01）,S期MG63细胞百分比明显降低（P<0.01）。倒置荧光显微镜下CDs具有一定的光致发光特性;与非碳点组（空白对照组、转染阴性对照组、转染GOLPH3-siRNA组）比较,碳点组（CDs组、转染阴性对照+CDs组、转染GOLPH3-siRNA+CDs组） MG63细胞凋亡率和细胞中ROS水平升高（P<0.05）。结论：CDs具有低毒性和光致发光特性,可以阻滞细胞周期,并促进细胞凋亡和ROS生成。GOLPH3具有抗凋亡和抑制ROS生成的作用,对细胞的存活起到一定的保护作用。     

益生菌对卵巢摘除致雌激素缺乏小鼠牙周组织中IL-17表达的影响及其意义

目的：探讨益生菌干预对雌激素缺乏小鼠牙周组织中白细胞介素17（IL-17）表达的影响,阐明雌激素缺乏与牙周炎关联性的可能机制。方法：选取8周龄健康雌性C57BL/6J小鼠15只,随机分为假手术组、卵巢摘除组和益生菌干预组（卵巢摘除术后行益生菌灌服）,每组5只。采用平均骨密度测量技术检测实验前后小鼠骨矿物质密度（BMD）,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测小鼠骨髓细胞和牙龈组织中IL-17mRNA表达水平,流式细胞术检测小鼠骨髓中辅助性T细胞17（Th17）占CD4⁺ TCRβ⁺细胞的百分率。结果：与假手术组比较,卵巢摘除组小鼠BMD明显降低（P<0.05）,骨髓细胞和牙龈组织中IL-17 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）,Th17细胞占骨髓CD4⁺TCRβ⁺细胞百分率明显升高（P<0.05）;与卵巢摘除组比较,益生菌干预组小鼠BMD明显增加（P<0.05）,骨髓细胞和牙龈组织中IL-17 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05）,Th17细胞占骨髓CD4⁺TCRβ⁺细胞百分率明显降低（P<0.05）;与假手术组比较,益生菌干预组小鼠股骨BMD、骨髓细胞和牙龈组织中IL-17 mRNA表达水平及Th17细胞占骨髓CD4⁺TCRβ⁺细胞百分率差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：益生菌干预能阻止雌激素缺乏导致的小鼠牙周组织中IL-17水平升高,对雌激素缺乏引起的牙周炎具有预防作用。     

移植Toll样受体3处理脐带间充质干细胞对小鼠狼疮性肾炎的治疗效果及其机制

目的 探讨Toll样受体3（TLR3）激活对人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）移植治疗狼疮性肾炎（LN）的效果,并初步阐明其作用机制。 方法 培养hUC-MSCs并鉴定,10 mg·L^－1聚肌胞苷酸处理hUC-MSCs。45只MRL/Lpr雌性小鼠随机分为模型组、hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组,另取15只C57BL/6C雌性小鼠作为对照组;小鼠尾静脉注射hUC-MSCs或聚肌胞苷酸处理的hUC-MSCs。给药后,每2周测定1次小鼠24 h尿蛋白水平;8周后采血并取肾组织,酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清中抗双链DNA（dsDNA）抗体水平和肾组织中肿瘤坏死因子α（TNF?α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）水平。HE染色和PAS染色观察各组小鼠肾组织病理形态表现,免疫荧光染色检测各组小鼠肾组织中IgG和补体C3沉积。Western blotting法检测各组小鼠肾组织中蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关蛋白表达水平。 结果 hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞特征。与对照组比较,模型组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显升高（P<0.05）,肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,肾组织中出现肾小球系膜细胞增生、肾小管萎缩坏死和炎症细胞浸润现象,肾组织中IgG和C3沉积明显（P<0.05）,肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,而微管相关蛋白1轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和酵母ATG6的同系物（Beclin1）蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较,给药4周时TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平降低（P<0.05）,6和8周时hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠24 h尿蛋白水平均明显降低（P<0.05）,血清中抗dsDNA抗体水平降低（P<0.05）,肾组织中TNF?α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,肾组织病变有一定程度的改善,肾组织中IgG和C3沉积减少（P<0.05）,且TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织改善更为明显;hUC-MSCs组和TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中Akt和mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与hUC-MSCs组比较,TLR3+hUC-MSCs组小鼠肾组织中LC3Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 TLR3能够增强hUC-MSCs移植治疗小鼠LN的作用,可抑制肾组织炎症反应并调节细胞自噬水平。     

奥利司他联合EZH2抑制剂GSK126对胰腺癌细胞脂质代谢重编程的影响

目的 阐明果蝇zeste基因增强子的人类同源物2（EZH2）抑制剂抗胰腺癌疗效不理想的可能机制,为探索新的胰腺癌治疗方案提供依据。 方法 采用不同浓度（0~50 μmol·L^－1）EZH2抑制剂GSK126分别处理胰腺癌PANC-1细胞、CFPAC-1细胞和胰腺转移癌SW1990细胞,CCK-8法检测各组细胞存活率。将3种细胞各分为对照组和GSK126组,GSK126孵育48 h后采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,油红O染色观察各组细胞中脂滴形成情况,检测各组细胞中甘油三酯（TG）水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中凋亡基因含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1、3、7、9（Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7、Caspase-9）和血管内皮生长因子A（VEGFA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）及干性标志基因CD133、CD24和CD44 mRNA表达水平,以及脂代谢相关基因脂肪酸合成酶（FASN）、乙酰辅酶A羧化酶a （ACACA）、柠檬酸合成酶（CS）、ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD）和酰基辅酶A合成酶短链家族成员2 （ACSS2）mRNA表达水平。将3种细胞各分为对照组、GSK126组、FASN抑制剂奥利司他（Orlistat）组和GSK126+Orlistat组,细胞孵育48 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率,计算两药联合指数（CI）,油红O染色观察各组细胞中脂滴形成情况,检测各组细胞中TG水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中凋亡基因Caspase-1、Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9及干性基因CD133、CD24和CD44 mRNA表达水平。 结果 GSK126呈浓度依赖性抑制胰腺癌细胞增殖。与对照组比较,GSK126组3种细胞凋亡率和凋亡基因mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05）,GSK126组SW1990细胞中VEGFA和PANC-1细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低（P<0.05）,3种细胞中CD133及CFPAC-1和SW1990细胞中CD24 mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）。与对照组比较,GSK126组3种细胞中脂滴数量明显增加,TG水平和FASN mRNA表达水平均明显升高（P<0.05或 P<0.01）,其他脂代谢相关基因也有不同程度升高。与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126 +Orlistat组细胞存活率明显降低（P<0.05或P<0.01）,经计算两药CI均<1,具有协同作用。与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+Orlistat组细胞中脂滴数量明显减少;与对照组和GSK126组比较,GSK126+Orlistat组细胞中TG水平明显降低（P<0.01）,凋亡基因和干性基因mRNA表达水平明显升高（P<0.05或 P<0.01）;与对照组、GSK126组和Orlistat组比较,GSK126+ Orlistat组细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。 结论 GSK126在抑制胰腺癌细胞增殖的同时可诱发细胞内脂代谢重编程,削弱了其抗癌效果,联合使用FASN抑制剂Orlistat可部分逆转该效应,协同抑制细胞增殖,明显增强细胞凋亡并降低干性基因表达。     

小檗碱联合辛伐他汀对动脉粥样硬化模型大鼠的抗动脉粥样硬化作用及其机制

目的：探讨小檗碱联合辛伐他汀对动脉粥样硬化（AS）模型大鼠胸主动脉组织中血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素18（IL-18）和白细胞介素10（IL-10）表达的影响,阐明小檗碱联合辛伐他汀抗动脉硬化的作用机制。方法：48只大鼠随机分为对照组,模型组,辛伐他汀组,低、中和高剂量小檗碱联合辛伐他汀组,每组8只。给药4周后取大鼠血清和胸主动脉组织,HE染色法观察各组大鼠胸主动脉组织病理形态表现,双抗体夹心ABC-ELISA法检测各组大鼠血清中VEGF、TGF-β1、IL-18和IL-10水平,全自动生物化学分析仪测定各组大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）水平,免疫组织化学法检测各组大鼠胸主动脉组织中VEGF、TGF-β1、IL-18和IL-10蛋白表达水平。结果：HE染色,与对照组比较,模型组大鼠主动脉内膜明显增厚、细胞内外有脂质沉积,内膜下可见坏死物沉积,内壁出现斑块、不平整,血管腔狭窄;与模型组比较,高剂量小檗碱联合辛伐他汀组大鼠动脉血管壁无明显斑块出现,内膜增厚不平整明显改善。与模型组比较,辛伐他汀组和不同剂量小檗碱联合辛伐他汀组大鼠血清中TC、TG和LDL-C水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,HDL-C水平明显升高（P<0.05）。ABC-ELISA法检测,与模型组比较,辛伐他汀组和不同剂量小檗碱联合辛伐他汀组大鼠血清中VEGF和IL-18水平均降低（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和IL-10水平升高（P<0.05）。免疫组织化学法检测,与模型组比较,辛伐他汀组大鼠胸主动脉组织中IL-18蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,TGF-β1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;不同剂量小檗碱联合辛伐他汀组大鼠胸主动脉组织中VEGF和IL-18蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）,TGF-β1和IL-10蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：小檗碱联合辛伐他汀能通过下调小鼠血清和胸主动脉组织中VEGF和IL-18蛋白表达水平,上调TGF-β1和IL-10蛋白表达水平,发挥抗AS作用。     

发酵红参总皂苷对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转化的抑制作用及其机制

目的 探讨发酵红参总皂苷（FRGTS）对高糖诱导下肾小管上皮细胞发生上皮细胞-间充质转化（EMT）的抑制作用,并阐明其作用机制。 方法 将大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞分为正常对照组（5.5 mmol·L^－1 D-葡萄糖）、高糖组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖）、沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂EX527组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋10.0 μmol·L^－1.EX527）、FRGTS组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋25 mg·L^－1FRGTS）和EX527+FRGTS组（30.0 mmol·L^－1 D-葡萄糖＋10 μmol·L^－1 EX527＋25 mg·L^－1FRGTS）。采用免疫荧光法检测各组细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中E-cadherin、α-SMA和SIRT1 mRNA表达水平,ELISA法检测培养上清液中Ⅰ型胶原（ColⅠ）水平,Western blotting 法检测各组细胞中SIRT1、转化生长因子β1（TGF-β1）和Smad3 蛋白表达水平。 结果 高糖培养48 h后,与正常对照组比较,高糖组NRK-52E细胞中E-cadherin 蛋白表达水平和mRNA表达水平降低（P<0.01）,α-SMA 蛋白表达水平和mRNA表达水平升高（P<0.01）,NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高（P<0.01）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高（P<0.01）;与高糖组比较,FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平升高（P<0.01）,α-SMA mRNA表达水平降低（P<0.05）,NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平降低（P<0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05或P<0.01）,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）;与FRGTS组比较,EX527+FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,α-SMA mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高（P<0.05）,SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。 结论 FRGTS可通过上调SIRT1表达,进而抑制TGF-β1/Smad信号通路,有效抑制肾小管上皮细胞发生EMT。     

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

目的：观察髓样分化因子88（MyD88）抑制肽（MIP）对脂多糖（LPS）激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法：将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组（不进行处理）、LPS组（给予1 mg·L^-1 LPS处理）和不同剂量MIP+LPS组（分别给予25、50和100μmol·L^-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS）。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素18（IL-18）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg-1）蛋白表达水平。结果：LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少（P<0.05或P<0.01）。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低（P<0.01）;与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高（P<0.05或P<0.01）。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,且呈剂量依赖性。结论：MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。     

孟鲁司特钠通过抑制TLR4/NF-κB信号通路影响哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡

目的：探讨孟鲁司特钠（Mon）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡及炎症因子分泌的影响,阐明哮喘大鼠气道重塑及炎症反应的分子机制。方法：采用卵清蛋白致敏和激发构建急性哮喘大鼠模型,原代培养大鼠气道平滑肌细胞,取第5代细胞用于实验。实验分为对照组（正常气道平滑肌细胞）、模型组（哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞）和治疗组（哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞+Mon干预）。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测各组细胞上清液中白细胞介素6（IL-6）和转化生长因子β1（TGF-β1）水平,Western blotting法检测各组细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Toll样受体4（TLR4）和核因子κB（NF-κB）p65蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞中TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平。结果：与对照组比较,模型组和治疗组细胞活性明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）,IL-6和TGF-β1水平升高（P<0.05）,PCNA、CyclinD1、Bcl-2、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平及TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bax蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,治疗组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,IL-6和TGF-β1水平降低（P<0.05）,PCNA、CyclinD1、Bcl-2、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平及TLR4和NF-κB p65 mRNA表达水平均明显降低（P<0.05）,而Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：Mon可抑制哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡,减轻哮喘气道炎症反应,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

妊娠期糖尿病患者胎盘组织中Apelin和APJ的表达及其对滋养层细胞胰岛素抵抗和行为的影响

目的 观察妊娠期糖尿病（GDM）患者胎盘组织中Apelin和其受体血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白（APJ）表达情况,探讨其对滋养层细胞胰岛素抵抗（IR）、增殖和侵袭能力的影响。 方法 收集GDM患者（GDM组,30例）和糖耐量正常（NGT）孕产妇（NGT组,30例）胎盘组织。采用免疫组织化学法检测2组研究对象胎盘组织中Apelin和APJ阳性表达率,Western blotting法检测胎盘组织中Apelin和APJ蛋白表达水平,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胎盘组织中Apelin、APJ和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）mRNA表达水平,Pearson相关分析法分析Apelin和APJ mRNA表达水平与AMPK mRNA表达水平的相关性。体外培养滋养层细胞HTR-8/SVneo（HTR-8）,分为对照组、Apelin组、高糖组（HG组）、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组;采用Western blotting法检测各组细胞中Apelin、APJ和胰岛素信号传递中胰岛素受体底物1（IRS1）、胰岛素受体底物2（IRS2）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）蛋白表达水平及磷脂酰肌醇3-激酶蛋白磷酸化（p-PI3K/PI3K）和AMPK蛋白磷酸化（p-AMPK/AMPK）水平,5-溴-2-脱氧尿嘧啶（EdU）试剂盒检测各组细胞EdU阳性表达率,Transwell小室实验检测各组侵袭细胞数。 结果 Apelin和APJ在胎盘绒毛组织中广泛表达;与NGT组比较,GDM组患者胎盘组织中Apelin和APJ mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。相关性分析,GDM组患者胎盘组织中Apelin和APJ mRNA表达水平与AMPK mRNA表达水平呈正相关关系（R²=0.148,P<0.05;R²=0.275, P<0.05）。Western blooting法检测,与对照组比较,Apelin组细胞中Apelin、APJ、IRS1、IRS2和GLUT4蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AMPK/AMPK比值明显升高（P<0.05）,HG组、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组细胞中Apelin、APJ、IRS1、IRS2和GLUT4蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AMPK/AMPK比值均明显降低（P<0.05）;与HG组比较,HG+Apelin组细胞中IRS1、IRS2和GLUT4蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AMPK/AMPK比值明显升高（P<0.05）,HG+Apelin+anti-APJ组细胞中上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。EdU和Transwell小室实验,与对照组比较,Apelin组细胞EdU阳性表达率和侵袭细胞数明显升高（P<0.05）,HG组、HG+Apelin组和HG+Apelin+anti-APJ组细胞EdU阳性表达率和侵袭细胞数均明显降低（P<0.05）;与HG组比较,HG+Apelin组细胞EdU阳性表达率和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05）,HG+Apelin+anti-APJ组上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 Apelin和APJ在GDM患者胎盘组织中表达降低,外源性给予Apelin后可改善滋养层细胞IR,并促进HG环境下的滋养层细胞增殖和侵袭能力,其机制可能与Apelin上调AMPK信号通路蛋白表达有关。     

miR-150-5p与NCAPG的靶向关系及其对肝细胞肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的 探究miR-150-5p与非SMC凝聚体Ⅰ复合物亚基G（NCAPG）的靶向关系及其对肝细胞肝癌（HCC）细胞生物学功能的影响，为HCC的临床诊断和治疗提供潜在靶点。 方法 通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与NCAPG的靶向关系。将HCC Huh7细胞根据转染质粒不同分为模拟物阴性对照（mimic NC）组、miR-150-5p模拟物（miR-150-5p mimic）组、miR-150-5p模拟物+过表达阴性对照（miR-150-5p mimic+ovNC）组和miR-150-5p模拟物+过表达NCAPG（miR-150-5p mimic+ovNCAPG）组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中NCAPG mRNA表达水平，Western blotting法检测各组细胞中NCAPG蛋白表达水平，5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）实验检测各组细胞EdU阳性率，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Transwell实验检测各组细胞中迁移和侵袭细胞数。将裸鼠分为agomiR-NC组、agomiR-150-5p组、agomiR-150-5p+过表达阴性对照（agomiR-150-5p+ovNC）组和agomiR-150-5p+过表达NCAPG（agomiR-150-5p+ovNCAPG）组，Huh7细胞皮下成瘤，检测各组裸鼠肿瘤体积和质量。 结果 双荧光素酶报告基因实验证实NCAPG是miR-150-5p的靶基因。与mimic NC组比较，miR-150-5p mimic组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显降低（P<0.05），细胞凋亡率明显升高（P<0.05），迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）；与miR-150-5p mimic+ovNC组比较，miR-150-5p mimic+ovNCAPG组Huh7细胞中NCAPG mRNA和蛋白表达水平及EdU阳性率明显升高（P<0.05），细胞凋亡率明显降低（P<0.05），迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加（P<0.05）。与agomiR-NC比较，agomiR-150-5p组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显减少（P<0.05）；与agomiR-150-5p+ovNC组比较，agomiR-150-5p+ovNCAPG组裸鼠Huh7细胞移植瘤体积和质量明显增加（P<0.05）。 结论 miR-150-5p通过靶向结合抑制NCAPG表达进而抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长，促进细胞凋亡。     

上调Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨上调Mg²⁺/Mn²⁺依赖性蛋白磷酸酶1F（PPM1F）对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。 方法 鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组（转染pcDNA3.1质粒）和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组（转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。 结果 与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F 组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低（P<0.05或P<0.01）,迁移细胞数明显减少（P<0.05）。 结论 上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1 细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P.g-LPS）对巨噬细胞中铁死亡相关因子表达水平的影响,阐明铁死亡相关因子在牙周炎发病机制中的作用。 方法 培养小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞,分为实验组和对照组,实验组加入10 mg·L^－1P.g-LPS 分别处理6 、12 和24 h,对照组不做任何处理。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组RAW264.7细胞中长链酯酰辅酶A合成酶4（ACSL4）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和转铁蛋白受体1（TfR1）mRNA表达水平,2',7'-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针法检测2组RAW264.7细胞中活性氧（ROS）水平,硫代巴比妥酸（TBA）法检测2组RAW264.7细胞中丙二醛（MDA）水平,亚铁离子荧光探针（FeRhonox-1）法检测2组RAW264.7细胞中亚铁离子（Fe²⁺）水平,Western blotting法检测2组RAW264.7细胞中ACSL4、GPX4和TfR1蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,处理6、12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中GPX4 mRNA表达水平降低（P<0.05）,处理12和24 h后ACSL4和TfR1 mRNA表达水平升高（P<0.05）;处理12和24 h后,实验组RAW264.7细胞中ACSL4和TfR1蛋白表达水平升高（P<0.05）,GPX4蛋白表达水平降低（P<0.05）。与对照组比较,实验组RAW264.7细胞中ROS、MDA和Fe²⁺水平升高（P<0.05）,且随时间增加呈上升趋势。 结论 P.g-LPS诱导下RAW264.7细胞中铁死亡相关因子ACSL4和TfR1表达水平升高,而GPX4表达水平降低,并且呈时间依赖性,提示上述铁死亡相关因子的变化可能与牙周炎发病机制有关。