X射-线对肺癌细胞DNA修复基因XRCC1表达水平的影响

目的:研究X-射线对肺癌细胞X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross complementing gene 1,XRCC1)表达的影响,探讨DNA碱基切除修复机制在肺癌细胞对放疗耐受中的可能作用.方法:以噻唑蓝还原法(MTT)检测X-射线对肺癌细胞(人肺腺癌细胞株 A549)抑制率的影响,实时荧光定量PCR技术检测X-射线处理后肺癌细胞XRCC1 mRNA的表达水平.结果:肺癌细胞抑制率多数情况下随X-射线照射时间的延长及照射剂量的增大而增加,呈照射时间依赖性(P＜0.05)和剂量依赖性(P＜0.05);X-射线照射后肺癌细胞XRCC1 mRNA的表达水平均先增高后降低,4 Gy组和8 Gy组在72 h表达水平最高(P＜0.05),16 Gy组和32 Gy组在48 h表达水平最高(P＜0.05).结论:X-射线照射可引起肺癌细胞XRCC1 mRNA表达水平的明显改变,提示DNA碱基切除修复机制可能在肺癌细胞对放疗的耐受中起了重要的作用.     

大肠癌细胞 XRCC2基因对电离辐射损伤的反应

目的：构建稳定的XRCC2基因沉默大肠癌细胞系及阐明沉默XRCC2基因表达的大肠癌细胞对电离辐射损伤的反应。方法采用Western blot法检测不同肿瘤细胞系人大肠癌细胞系（ T84、HT29、Lovo）、食管癌EC9706细胞、乳腺癌MCF－7细胞和人正常胚肾HEK293细胞中XRCC2蛋白的表达水平。大肠癌T84细胞经0、2、4、8、12 Gy X射线照射后和8 Gy X线照射后0、6、24、48 h,用Western blot法和实时定量PCR法测定XRCC2蛋白和mRNA的表达水平。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,用嘌呤霉素进行细胞筛选,采用Western blot法和实时定量PCR法,检测沉默XRCC2蛋白和mRNA表达的效率。将XRCC2 shRNA质粒转染T84细胞,经X线照射后,采用单细胞凝胶电泳测定沉默XRCC2基因表达的T84细胞的DNA损伤修复。结果与人正常胚肾HEK293细胞相比,在不同肿瘤细胞系中XRCC2蛋白均呈不同程度的高表达,其中在大肠癌T84细胞中XRCC2蛋白表达最高。随着X线照射剂量的增加,T84细胞中XRCC2蛋白的表达水平逐渐升高,8 Gy照射后XRCC2蛋白表达水平在48 h内随着时间的延长而逐渐升高;XRCC2 mRNA表达也表现出随剂量增加和时间延长而逐渐升高。与未处理的细胞相比,转染XRCC2 shRNA质粒的细胞中XRCC2蛋白和mRNA表达明显下降,约分别减少了70％和60％。照射后的T84细胞DNA损伤修复中shRNA－XRCC2组TDNA％、TM和OTM均显著高于未处理组和shR-NA－SC组,差异有统计学意义（t＝15.12、11.36、13.15,P＜0.01）。结论成功建立了稳定表达XRCC2基因沉默的大肠癌T84细胞系,XRCC2基因沉默导致辐射诱导的DNA损伤修复能力下降。     

薏苡仁注射液联合X线照射对人肺腺癌细胞A549抑制作用的机制研究

目的 探讨薏苡仁注射液(康莱特)联合X线照射对人肺腺癌细胞A549抑制作用的机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞A549,分成4组:A549对照组(给予1640培养液);A549康莱特组(给予20 μl康莱特);A549照射组(照射4 Gy剂量的X线);A549联合组(给予20 μl康莱特,同时4 Gy的X线照射).正常细胞系人脑微血管内皮细胞 (HBMEC),分成2组:HBMEC对照组(给予0.9%氯化钠溶液);HBMEC康莱特组(给予20 μl康莱特).磺酰罗丹明(SRB)染色法检测康莱特及X线照射对各组细胞的抑制率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测增殖、凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、p53、Bcl-2、Bax mRNA在各组细胞中表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达水平.将各组结果进行比较.结果 康莱特联合放疗对6组细胞体外抑制率、PCNA、p53、Bcl-2、Bax mRNA及4种因子的蛋白表达比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).其中与A549对照组比较,A549康莱特组、A549照射组、A549联合组的抑制率、PCNA和 Bcl-2 mRNA及4种因子的蛋白表达降低,p53、Bax mRNA及其蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);HBMEC康莱特组与HBMEC对照组比较,抑制率、4种因子表达比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 康莱特可通过调控肿瘤细胞的增殖凋亡来抑制肺腺癌细胞生长,该药与放射联合治疗可进一步增强对肿瘤的抑制作用,探讨康莱特作用机制对指导临床肺腺癌治疗有一定的价值.     

肺癌细胞株c-erbB-2基因与放疗抵抗的相关关系

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线.结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(均P<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P0.05).存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株D0值依次为1.18 Gy±0.05 Gy、1.67 Gy±0.13Gy和1.50 Gy±0.26Gy,细胞株间差异无统计学意义(F=0.287,P0.05),Dq值分别为3.98 Gy±0.03Gy、2.43 Gy±0.47Gy和1.32 Gy±0.08 Gy(F=61.670,P<0.05),其中CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株之间差异有统计学意义(P分别为<0.05、<0.05、<0.01).结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;三种细胞株中,CALU-3对?射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关.     

非小细胞肺癌细胞株c-erbB-2基因的表达

目的:分析非小细胞肺癌细胞株中人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因的mRNA水平和蛋白水平.方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株c-erbB-2蛋白水平.结果:肺腺癌CALU-3细胞株c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,差异有统计学意义(P＜0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:c-erbB-2基因在肺腺癌CALU-3细胞株中的表达均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株.     

c-erbB-2基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的相关性

目的:探讨人类表皮生长因子受体-2(c-erbB-2)基因与非小细胞肺癌细胞株放疗抵抗的关系。方法:采用RT-PCR测定肺腺癌(CALU-3和A549)和鳞癌NCL-H520细胞株的c-erbB-2 mRNA水平;采用流式细胞术检测CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的c-erbB-2蛋白水平;绘制CALU-3、A549和NCL-H520细胞株的存活曲线。结果:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2 mRNA水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05);CALU-3细胞株c-erbB-2蛋白的阳性率均高于A549和NCL-H520细胞株,有显著性差异(P均<0.05),而A549和NCL-H520细胞株之间无显著性差异(P>0.05)。存活曲线显示,CALU-3、A549和NCL-H520细胞株间D0值无显著性差异(F=0.287,P>0.05),CALU-3和A549、A549和NCL-H520、CALU-3和NCL-H520细胞株间Dq值均有显著性差异(P值分别<0.05、<0.05、<0.01)。结论:肺腺癌CALU-3细胞株的c-erbB-2基因在mRNA和蛋白水平均高于腺癌A549和鳞癌NCL-H520细胞株;3种细胞株中,CALU-3对γ射线最不敏感,NCL-H520最敏感;推测c-erbB-2基因高表达可能与肺腺癌CALU-3细胞株放疗抵抗有关。     

人肺腺癌细胞A549放射治疗前后Dystrobrevin蛋白表达的变化

目的射线诱导肺腺癌A549细胞凋亡,于凋亡高峰时检测放疗前后dystrobrevin的表达,探讨其与放射剂量及凋亡的关系。方法人肺腺癌A549细胞株培养24 h后用10 Gy X线照射,分别培养6 h、14 h、23 h、40 h,应用Hoechest33258荧光染色在荧光显微镜下观察细胞形态变化——细胞的凋亡,并计算凋亡率。采用Western blot检测0 Gy、6 Gy、10Gy照射A549细胞14 h后dystrobrevin蛋白表达水平的变化。结果 10 Gy X射线照射A549细胞株后14 h凋亡率达到高峰。Western blot检测显示,随着放射剂量的增加,α-dystrobrevin有下降的趋势,而ε-dystrobrevin有升高的趋势。结论人肺腺癌A549细胞株在能量为6-MV,剂量率为300 cGy/分,接受10 Gy X线照射后14 h出现明显的凋亡;并且在此时间点上随着放射剂量的增加α-dystrobrevin和ε-dystrobrevin变化趋势不同。     

高能X射线对肺腺癌A549细胞ERCC1表达的影响

目的 检测高能X射线对肺腺癌A549细胞与顺铂耐药相关的基因--切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达的影响.方法 对A549细胞进行X射线照射,总剂量10 Gy/(5 d·5f).利用RT-PCR检测照射前及照射开始后第1～4周细胞的ERCC1基因的表达;免疫组织化学SABC法检测照射前后细胞ERCC1蛋白的表达.结果 照射后第1～3周A549细胞ERCC1 mRNA及蛋白的表达水平比照射前显著升高,差异有显著性(F=152.00、26.63,q=6.03～28.31,P<0.01).结论 肺腺癌A549细胞照射后可能出现顺铂耐药.     

pEgr1-hsTRAIL质粒对肺腺癌A549细胞放射敏感性及DR4和DR5表达水平的影响

目的:检测转染pEgr1-hsTRAIL质粒的人肺腺癌A549细胞放射敏感性变化及其对死亡受体（DR）4和DR 5 mRNA和蛋白表达的影响,探讨pEgr1-hsTRAIL质粒的辐射增敏效应和诱导细胞凋亡的可能机制。方法:实验分为正常对照（Normal control）组、pEgr1-hsTRAIL组、6 Gy X线照射组和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组。A549细胞经过阳离子脂质体转染、X线深部治疗机照射后,利用平板克隆形成试验检测细胞放射敏感性,反转录RCR（RT-PCR）法检测DR4和DR5 mRNA表达变化,Western blotting法检测DR4和DR5蛋白表达的变化。结果：正常对照组和pEgr1-hsTRAIL组A549细胞的平均致死剂量（D0值）分别为3.26和1.91 Gy,说明pEgr1-hsTRAIL质粒能够增强A549细胞的放射敏感性。RT-PCR显示,转染pEgr1-hsTRAIL质粒对DR4和DR5 mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而6 Gy X线照射后DR4和DR5 mRNA表达均显著高于正常对照组（P<0.05）,转染pEgr1-hsTRAIL质粒后再进行6 Gy X线照射,DR4和DR5 mRNA表达水平均显著高于正常对照组（P<0.05）,但只有DR5 mRNA表达水平显著高于6 Gy X线照射组（P<0.05）。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,DR4和DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL组无明显变化,而在6 Gy X线照射和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组表达增加,其中DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组增加更明显。结论:重组表达质粒pEgr1-shTRAIL能够增强A549细胞放射敏感性,且能增强DR5辐射诱导表达,而对DR4的辐射诱导表达无明显增强作用。     

Ku80在人肺癌中的表达水平与放疗前后表达变化的实验研究

目的：基于Ku80在辐射诱导的DNA修复中的作用,研究不同病理类型肺癌中Ku80的表达水平,并以人肺癌A549细胞接种裸鼠模型评估放疗对Ku80表达的影响。方法使用免疫组化及荧光定量PCR分别检测不同病理类型肺癌Ku80蛋白和mRNA的表达水平。将A549细胞接种到裸鼠上再以不同剂量的射线照射,并分别在24、48h后处死,用免疫组化及荧光定量PCR检测Ku80蛋白和mRNA的表达水平。结果肺癌组织表达的Ku80蛋白、mRNA水平高于正常肺组织（均P＜0.01）。在肺癌亚组中,肺腺癌和鳞癌比小细胞肺癌表达更高的Ku80蛋白、mRNA水平（均P＜0.01）。接种在裸鼠的人肺癌A549细胞经过不同剂量射线照射后Ku80 mRNA的表达增加,并具有剂量和时间依赖性。结论 Ku80在放疗引起的DNA破坏过程中起到重要的作用。肺鳞癌和腺癌的Ku80表达高于小细胞肺癌,这可能是肺鳞癌和腺癌放射敏感性逊于小细胞肺癌的原因之一。Ku80表达水平可能在预测肺癌的放射敏感性方面具有重要价值,可以成为肺癌放射增敏治疗的一个新靶点。     

XRCC1基因在维吾尔族、汉族乳腺癌组织中的表达及差异

目的:检测DNA修复基因XRCC1在维吾尔族、汉族乳腺癌组织及癌旁组织中的表达状况,探讨其与乳腺癌发生的关系及种族差异.方法:选取维吾尔族和汉族乳腺癌患者各70例,应用实时荧光定量PCR测定癌组织及癌旁组织中XRCC1 mRNA的表达.其中随机选取维、汉各27例,采用Western blot法检测癌组织及癌旁组织中XRCC1蛋白表达.结果:XRCC1 mRNA在维、汉乳腺癌组织中表达均高于相应癌旁组织(P＜0.05),蛋白在维、汉乳腺癌组织中表达均低于相应癌旁组织(P＜0.05),在转录水平表现出种族差异(P＜0.05).结论:XRCC1在乳腺癌组织及癌旁组织中存在转录及翻译水平的差异表达,并表现出种族差异性.     

XRCC1在散发性结直肠癌中表达的基础研究

背景与目的 X线交叉互补修复基因1（X—ray repair cross—complementing gene 1,XRCC1）编码的蛋白参与电离辐射和氧化损伤引起的DNA碱基切除修复和单链断裂修复过程。方法应用免疫组化SP法检测95例肠癌组织与49例正常大肠组织中XRCC1的蛋白表达,分析它们与临床病理参数的关系。结果肠癌组XRCC1蛋白的表达率为85．3％（81／95）,与正常结肠组织的表达率44．9％（22／49）相比差异显著（p=0.000）。结论XRCC1表达高低可能代表肠癌组织DNA损伤程度．可能成为预测肠癌恶性行为指标之一。     

XRCC1基因在食管癌组织、癌旁组织中的蛋白表达与临床因素的相关性研究

目的:探讨DNA修复基因XRCC1在人食管癌组织、癌旁组织中的蛋白表达及其临床意义。方法:应用免疫印迹技术对66例食管癌患者的癌、癌旁组织中XRCC1的蛋白表达水平进行检测和比较。结果:66例食管癌患者XRCC1在癌组织的蛋白表达高于癌旁组织(P<0.05);淋巴结转移阳性患者组XRCC1在癌组织与癌旁组织的表达差异程度高于淋巴结转移阴性患者组(P<0.05);不同临床分期、病理类型、鳞癌中不同分化程度、族别病例组之间XRCC1在食管癌和癌旁表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:XRCC1的蛋白表达在癌组织和癌旁组织表达差异程度与食管癌发生及淋巴结转移有关联。     

DNA修复基因XRCC1密码子194多态性与肺癌易感性研究

 目的 研究DNA修复基因XRCC1密码子194多态性与肺癌易感性的关系，并探索其与吸烟可能的交互作用。方法 采用病例-对照研究,收集原发性肺癌患者396例为病例组,同时抽取465名当地健康居民作为对照组,进行流行病学调查。运用PCR-RFLP方法分析XRCC1基因Arg194Trp位点的多态性。应用Logistic回归模型分析该位点多态性与肺癌易感性的关系。结果 等位基因Arg和Trp在病例组的频率分别为69.82%和30.18%，在对照组中则分别为74.30%和25.70%，两组间有显著差异(P=0.0386)。携带纯合突变基因型Trp/Trp者患肺癌的风险显著高于携带野生型Arg/Arg者，其OR值为1.72 (95%CI:1.05-2.80)。携带纯合型Trp/Trp的吸烟者患肺癌的风险约为携带野生型Arg/Arg的非吸烟者的7倍(OR=7.18,95%CI:3.09- 16.66)；是携带野生型的吸烟者的2倍(OR=2.02,95%CI:0.92-4.43)。结论 DNA修复基因XRCC1密码子194的多态性可能与肺癌的易感性有关，且在吸烟者中，Trp/Trp基因型可使肺癌发病风险显著提高，提示XRCC1可能通过遗传因素及遗传因素与环境致癌因素的交互作用影响肺癌的危险性。     

XRCC 2 基因多态性与非小细胞肺癌易感性的关系

目的:观察非小细胞肺癌易感性与XRCC2基因 C41657T 及G4234C多态性及基因频率之间的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对226例非小细胞肺癌患者和300例正常对照者XRCC 2基因 C41657T及G4234C多态性进行了分析.结果:中国北方汉族人存在XRCC 2基因C41657T及G4234C多态性;两组人群两个多态位点基因型、等位基因及单体型频率无统计学差异(均P＞0.05);但分层分析显示非吸烟者XRCC 2 41657T基因携带者患非小细胞肺癌风险是XRCC 2 C 41657C基因型的1.85倍(95% CI: 1.02 ～3.36),患腺鳞癌的风险是XRCC 2 C41657C基因型的2.45倍( 95% CI=1.05～5.72) ,而XRCC 2 基因G4234C多态性吸烟状况及病理分类的分层分析两组之间无统计学差异(P 0.05).结论:XRCC 2基因41657T等位基因可能是非吸烟中国北方汉族人非小细胞肺癌及腺鳞癌的发病危险因素.     

XRCC1在脑胶质瘤中的表达及与放疗的相关性研究

目的初步探讨脑胶质瘤x线修复交叉互补基因1（XRCC1）的表达与不同级别脑胶质瘤及放疗的关系．方法将26例脑胶质瘤标本分为4组,经免疫组化染色后,观察XRCC1的表达部位和程度．结果XR-CC1在脑胶质瘤中的表达呈棕黄色粗大颗粒,定位于细胞核内,阳性细胞散在或局灶性分布,染色强度及分布无明显规律．不同级别胶质瘤的XRCC1阳性表达无显著性差异（P〉0．05）．结论XRCC1的表达与脑胶质瘤的病理分级无明显相关性,测定XRCC1的表达水平可为胶质瘤的个性化放射治疗提供部分参考依据．     

DNA修复基因XPCC3多态性与子宫内膜异位症发病相关性分析

目的研究DNA修复基因XRCC3多态性与子宫内膜异位症发病风险的关系。方法采用病例-对照研究的方法,应用PCR-RELP方法检测子宫内膜异位症患者与非子宫内膜异位症妇女XRCC3基因Thr241Met的多态性分布,并分析其多态性与子宫内膜异位症疾病病理过程的关系。结果XRCC3基因多态性在内异症组与对照组存在显著差异(P<0.05),Thr/Met基因表达在内异症组显著增强(P<0.05);Thr241Met基因多态性与内异症病理分期无相关性。结论具有XRCC3 Thr/Met基因型或Met等位基因的个体对内异症的发生有易感性,但与内异症的临床病理分期无关。     

修复基因XRCC1多态性在肝癌发病机制中的作用

目的 探讨DNA损伤修复基因XRCC1多态与肝癌遗传易感性的关系.方法 本研究选取了60例肝癌患者及60例正常自愿对照者进行研究,采用限制性片段长度多态性方法,比较不同基因型与肝癌发病的关系.结果 变异型等位基因XRCC1 194位点Arg/TrP及Trp/Trp的出现率在肝癌组和对照组中分别是31.67％和11.67％,P ＜0.05;而野生基因型XRCC1 Arg/Arg出现率在肝癌组和对照组中分别是68.33％和88.33％,P ＞0.05.变异型等位基因XRCC1 280 Arg/His及His/His的出现率在肝癌组和对照组中分别是30.00％和15.00％,P ＜0.05;而野生基因型XRCC1 Arg/Arg出现率在肝癌组和对照组中分别是70.00％和85.00％,P ＞0.05.变异型等位基因XRCC1 399 Arg/Gln及Gln/Gln的出现率在肝癌组和对照组中分别是36.67％和13.33％,P ＜0.05;而野生基因型XRCCl Arg/Arg出现率在肝癌组和对照组中分别是63.33％和86.67％,P＞0.05.结论 XRCC1基因Arg194Trp、Arg280His及Arg399Gln三个位点的基因单核苷酸多态在肝癌的发生机制中起着至关重要的作用.     

在晚期非小细胞肺癌中XRCC1和XPD基因多态性的联合和铂类化疗的关系

目的探讨DNA修复基因XRCC1和XPD两种基因多态性的联合与接受铂类治疗的非小细胞肺癌（NSCLC）患者临床疗效及生存时间的关系。方法对接受铂类治疗的108例ⅢB期和Ⅳ期NSCLC患者,利用聚合酶链反应（PCR）结合限制性片段长度多态性（RFLP）来检测XRCC1第399位点和XPD第751位点基因多态性,通过电话随访等方式获得患者的生存状态,以STATA软件分析比较基因多态性与铂类化疗疗效及生存时间的关系。结果在所有接受含铂药物治疗的患者中,化疗总有效率为21.6%。携带XRCC1 Arg/Gln基因型和XPD Lys/Gln基因型的患者有更高有效率（33.33%）,但此类患者与其他各种基因型患者相比,化疗有效率的差异无统计学意义（P〉0.05）。Cox比例风险模型显示,携带XRCC1 Arg/Gln基因型和XPD Lys/Gln基因型的患者中位生存时间（MST）最长35.5个月,但与其他基因型患者相比,MST差异无统计学意义（P〉0.05）。结论同时携带XRCC1 Arg/Gln和XPD Lys/Gln基因型的NSCLC患者,使用含铂方案化疗可能有更高的有效率和更长的生存期。但此结果仍需扩大样本进一步验证。