PCR技术在支原体检测中的应用

致病性支原体感染造成的危害非常广泛，在人类、动物、植物和昆虫中，可引起多种疾病。但在支原体的诊断中，因其生长缓慢、营养要求高以及交叉抗原的存在，限制了培养法和血清学方法在支原体诊断中的应用。随着分子生物学技术的发展，PCR技术已广泛应用于支原体的诊断中。本文主要概述了普通PCR、PCR—ELISA、巢式PCR、实时荧光定量PCR、逆转录PCR、多重PCR技术在支原体检测中显示的优越性，这些技术为支原体的检测提供了快速、灵敏、特异的检测方法。     

肿瘤微转移的检测及临床意义

微转移可能作为恶性肿瘤转移的早期过程已受到肿瘤工作者的重视。其检测方法有ＨＥ染色法、免疫组化染色法、ＰＣＲ以及Ｒｔ－ＰＣＲ技术,流式细胞仪技术。对乳腺癌患者,微转移具有明确的意义,对其他肿瘤的临床分期,治疗的选择亦有重要意义。     

PCR基因芯片

基因芯片(gene chips)可以快速、微型化、自动化地检测大量基因,成了生物医学研究的重要推动力.随着微加工技术的发展, 我们建立了有1 200个微反应池的PCR基因芯片,将基因芯片和聚合酶链式反应(PCR)技术结合在一起.PCR基因芯片综合了基因芯片体积小却可以检测大量基因,以及PCR敏感而且容易发现各种基因变异的特点,采用以PCR 为基础,而非以分子杂交为基础的检测方式,克服了杂交技术所存在的内在缺陷,大大增强了实验的敏感性和可重复性;扩展了基因芯片在生物医学领域中应用的范围,更适用于各种基因重排、基因突变和基因缺失的鉴定.PCR反应采用荧光探针作实时定量分析.在临床肿瘤和白血病的诊断、人类基因组分析、基因多态性和疾病易感性鉴定、遗传性疾病的基因诊断、动物和植物基因变异筛选、各种病原微生物鉴定等多方面会有广泛应用前景.     

PCR-CTPP在DNA 碱基切除修复基因SNP分型中的应用

目的：分析两对引物‐聚合酶链式反应（PCR‐CTPP）在碱基切除修复（BER）途径基因单核苷酸多态性（SNP）分型中的应用,为发现新的SNP检测方法提供实验依据。方法采用PCR‐CTPP扩增BER途径关键蛋白OGG1、XRCC1及APE14个常见SNP位点OGG1 Ser326Cys、XRCC1 Arg399Gln、APE1 Asp148Glu及‐141T／G（位于启动子区域）的DNA片段,凝胶电泳显像后判读基因型,同时与DNA测序的方式比对各基因位点的准确性。结果 PCR‐CTPP方法基因分型结果与DNA测序得到的基因分型结果完全一致。结论 PCR‐CTPP技术可靠、快速,其广泛应用能够有助于基因SNP的分型研究。     

Technique for the microdissection of human high resolution chromosome subsequent polymerase chain reaction and microcloning]

In this paper is reported a simple technique for the microdissection of specific regions of human high resolution chromosome subsequent PCR and microcloning. This technique was successfully used to microdissect 4 chromosomal pieces from the distal one third from band 11.2 to the terminal of the short arm of Y chromosome where the testis determining factor located, PCR 30 cycles, and obtained 3.6 x 10(4) clones. This technique the highlight to establish a gene library of many specific regions of human chromosome hereafter.     

Nested polymerase chain reaction for early diagnosis of typhoid fever

Typhoid fever, caused by Salmonella typhi, is an important cause of morbidity and mortality in many developing countries. A rapid and sensitive method for the detection of S. typhi is essential for early diagnosis. This was a study to prospectively evaluate the sensitivity and specificity of nested polymerase chain reaction (PCR) to identify the S. typhi using flagellin gene related primers. The study was carried out in the department of Microbiology, Mymensingh Medical College, Mymensingh between July, 2010 and June, 2011, including 82 individuals of different age and sex. Of them, 62 were clinically suspected cases of typhoid fever and remaining 20 were apparently healthy controls. Cultures as well as PCR of blood specimens were performed for each of the cases. Among the 62 suspected typhoid fever cases, 8(12.9%) were blood culture positive and 55(88.7%) were PCR positive for S. typhi. All culture positive cases were positive by PCR and among 54 culture negative cases, 47(87%) were positive by PCR. Neither of the healthy controls was positive by PCR or blood culture. The sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of PCR using blood culture as gold standard were 88.7%, 100%, 100% and 74% respectively for typhoid fever. In this study, the PCR appears highly specific, very sensitive and superior to blood culture for the early diagnosis of typhoid fever.     

仅采用 PCR 进行分子克隆的方法探索

目的：针对目前各种费时且易失败的克隆方法和价格昂贵的试剂盒等问题,对一种仅采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）分子克隆方法进行了探索。方法利用高保真的 DNA 聚合酶具有3＇-核酸外切酶活性的特点,采用 PCR 把载体和插入片段扩增出来,二者的扩增产物先加限制性内切酶 DpnI 后再按一定比例混合来消化甲基化的 DNA 模板,最后把DpnI 消化产物直接转化到感受态细胞来得到克隆基因。结果是一种简单、高效、可靠、且仅采用 PCR 的分子克隆方法,并利用此方法成功地把构建在载体 pET 上的α-突触核蛋白全长基因和构建在 pCDNA3.1上的乙酰胆碱受体亚基的全长基因分别重新构建在载体 pGEX-4T-1和 pGEMHE 上。结论在 PCR 扩增时能够通过引物设计来确定克隆位点,所以该方法可以把任何 DNA片段插入到质粒载体内的任何位置,而不需要考虑载体多克隆位点限制的问题。此外,该方法省去了传统的酶切消化、纯化回收和连接过程。     

构建RNA干扰载体特异性抑制绿色荧光蛋白表达的研究

目的:利用PCR构建RNA干扰质粒载体的方法,促进RNA干扰技术的广泛开展.方法:PCR方法获得小鼠U6 27启动子序列,以及干扰绿色荧光蛋白(EGFP)表达的siRNA的相应DNA模板序列.将其序列克隆入pUC19,获得RNA干扰载体pU6-siEGFP.将pU6-siEGFP及pcDNA3.1/EGFP共转导COS-7细胞,观察EGFP表达情况.结果:所构建的pU6-siEGFP能够成功干扰COS-7细胞中EGFP的表达.结论:PCR方法成功构建了RNA干扰载体,为RNA干扰技术在更多实验室的广泛开展奠定基础.     

应用MGB探针检测人丙型肝炎病毒的基因型

目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒（HCV）的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。     

Hepatitis B virus enhancer Ⅰ in chronic carriers resistant to interferon treatment

1　ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＴｈｅｎａｔｕｒａｌｈｉｓｔｏｒｙｏｆｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ (ＨＢＶ)ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙａｃｏｍ ｐｌｅｘｉｎｔｅｒｐｌａｙｂｅｔｗｅｅｎｉｎｔｒｉｎｓｉｃｖｉｒａｌｆａｃｔｏｒｓａｎｄｔｈｅｈｏｓｔｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｇａｉｎｓｔｔｈｅｖｉｒｕｓ.Ａｌｐｈａｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ (αＩＦＮ )ｉｎｈｉｂｉｔｓｖｉｒａｌｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｃｅｌｌｕｌａｒｉｍｍｕｎｉｔｙａｓｓｏｃｉａｔ…