Ca2+调节人表皮角质形成细胞中PAI-3的表达

目的探讨Ca2 对人表皮角质形成细胞(keratinocyte, KC)中PAI-3表达的调节作用.方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高低Ca2 浓度作用下,培养的人表皮KC中PAI-3的表达变化.结果 PAI-3 mRNA及蛋白质在高低Ca2 浓度下培养的人表皮KC中均有表达,并且高Ca2 浓度培养条件下较低Ca2 浓度下明显增强.PAI-3阳性染色在低Ca2 浓度培养下主要位于核膜周围,而在高Ca2 浓度培养条件下主要位于细胞质.结论 Ca2 调节人表皮KC中PAI-3的表达,PAI-3可能具有调节KC分化的作用.     

小鼠表皮角质形成细胞中Ca^2＋对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的：探讨小鼠表皮角质形成细胞（KC）中Ca^2 对组织型纤溶酶原激活剂（tPA)表达的调节作用及其与分化的关系。方法：采用免疫组化及原位杂交技术定性，定量检测低Ca^2 (0.05mmol/L)及高Ca^2 （1．5mmol/L)浓度对tPA,tPA mRNA的表达及表皮KC分化的影响。结果：与未经Ca^2＋处理的对照相比，低Ca^2 浓度下培养的表皮KC中，tPA mRNA3及tPA量均增加（P＜0．05），KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性，KC胞体较小，细胞形态趋于圆形；而高Ca^2 浓度下的培养表皮KC中，tPA mRNA及tPA量显著增加（P＜0．001），K10抗原呈强阳性表达，KC胞体增大，形态为典型的多角形。结论：Ca^2 浓度的增高促进了tPA mRNA及tPA的表达，并与KC分化有关。     

小鼠表皮角质形成细胞中TNF-α对PAI-2表达的调节

目的 探讨表皮角质形成细胞中TNF-α对PAI-2表达的调节及其生物学意义。方法 利用免疫细胞化学、TUNEL反应及免疫细胞化学／TUNEL双标等方法，观察TNF-α作用下，培养的表皮角质形成细胞及其脱落细胞中PAI-2表达的变化及凋亡发生的情况。结果 在TNF-α作用下，脱落细胞中PAI-2的表达明显增加，凋亡细胞的数量增多，PAI-2在凋亡细胞中的表达也增强，而在一些胞体较大、形态呈多角形的凋亡细胞中PAI-2表达的增加更为明显。结论 在高度分化的表皮角质形成细胞中，TNF-α可促进PAI-2的表达并可诱导凋亡的产生，就与KC凋亡的关系而言，TNF-α所诱导的。PAI-2可分为两种，一种与KC凋亡有关，另一种与KC凋亡无关。     

表皮角质形成细胞分化中tPA分泌的研究

目的探讨表皮角质形成细胞中,tPA分泌的变化及其对细胞分化的影响.方法利用免疫细胞化学、酶联免疫吸附测定等方法,检测高浓度Ca2 作用下,培养的小鼠分化表皮角质形成细胞表面及培养上清中tPA表达的变化.结果高Ca2 浓度下,KC分化标记物K10在培养24h即有较强的表达,与此同时,在培养上清中检测到大量分泌tPA;培养24h以后,随着培养时间的延长,KC培养上清中分泌tPA的含量呈现出降低趋势,KC表面tPA量则呈现出增加趋势,当有L-精氨酸存在时,上述两种趋势均明显减弱.结论小鼠表皮KC分化过程中存在tPA的分泌,分泌tPA能通过其赖氨酸位点进一步吸附于KC表面,进而促进KC的分化.     

小鼠表皮角质形成细胞中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的探讨小鼠表皮角质形成细胞(KC)中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂(tPA)表达的调节作用及其与分化的关系.方法采用免疫组化及原位杂交技术定性、定量检测低Ca2+(0.05mmol/L)及高Ca2+(1.5mmol/L)浓度对tPA、tPAmRNA的表达及表皮KC分化的影响.结果与未经Ca2+处理的对照相比,低Ca2+浓度下培养的表皮KC中,tPAmRNA及tPA量均增加(P＜0.05),KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性,KC胞体较小,细胞形态趋于圆形;而高Ca2+浓度下的培养表皮KC中,tPAmRNA及tPA量显著增加(P＜0.001),K10抗原呈强阳性表达,KC胞体增大,形态为典型的多角形.结论Ca2+浓度的增高促进了tPAmRNA及tPA的表达,并与KC分化有关.     

PAI-3在正常成人皮肤中的表达及作用的初步研究

目的探讨PAI-3在成人皮肤中的表达,为进一步研究PAI-3在皮肤表皮增殖、分化中的作用及机制提供基础.方法采用免疫组织化学技术和RT-PCR检测PAI-3和uPA在成人皮肤中的表达.结果检测到PAI-3 mRNA及uPA mRNA的表达,PAI-3在正常成人皮肤组织中主要位于表皮的基底层、颗粒层和棘层,在分化程度较高的表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中,其表达增强,而uPA主要位于皮肤表皮的基底层.结论PAI-3在正常成人皮肤中有表达并与表皮KC的分化有关.     

组织型纤溶酶原激活剂在人胚胎表皮角质形成细胞分化中的作用

目的 探讨组织型纤溶酶原激活剂（tPA)参与人表皮角质形成细胞（KC）分化调控的作用。方法 采用免疫细胞化学（ICC）及原位杂交（ISH）技术定性、定量检测早、中、晚期人胚胎表皮KC中tPA蛋白及mRNA的表达。结果 （1）tPA在人胚胎期表皮KC中表达量明显高于出生后期。胚胎期的表达高峰在胚胎中期。胚胎晚期其蛋白水平开始降低。而tPAmRNA表达则维持在相对较高水平。（2）tPA在人胚胎期主要存在于分化程度高的表皮浅层KC内。（3）tPA聚集于KC胞膜下方。结论 tPA参与表皮KC分化的调控。     

H2O2对体外正常人黑素细胞和角质形成细胞共培养模型中黑素合成功能的影响

 目的 探讨不同浓度H2O2对黑素细胞(melanocyte,MC)和角质形成细胞(keratinocyte,KC)共培养体系的细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)表达的影响。方法 培养原代人表皮MC和KC,建立共培养模型。采用MTT法测定细胞增殖,NaOH法测定细胞黑素含量,实时PCR方法观察TYR基因的表达。结果 KC和MC以3∶1浓度混合时,可形成稳定共培养模型。高浓度H2O2作用下,共培养细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),TYR基因表达显著降低(P<0.05);低浓度H2O2(<0.1 mmol/L)作用下,细胞增殖受到轻度抑制,TYR基因表达增高(P<0.05)。结论 H2O2对MC与KC共培养体系的作用复杂,对黑素合成功能可呈现双向作用。     

AnnexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞中表达的研究

目的探讨annexinⅡ在已分化人表皮角质形成细胞(keratinocyte,KC)中的表达.方法采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术检测早、中、晚期人胚胎表皮KC及成人表皮KC中annexinⅡ蛋白的表达.结果①annexinⅡ在人胚胎期表皮KC中的表达随胚胎的发育逐渐增强,在成人期表皮KC中的表达明显高于胚胎期.②annexinⅡ呈胞膜方式表达,主要分布于基底上层的分化KC中.结论annexinⅡ可能参与表皮KC分化的调控.     

诱导表皮角质形成细胞体外分层的途径及机制

目的探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制.方法在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度.结果胚胎龄16 d的胎鼠皮片经气液界面培养3 d后,其表皮基底上角质形成细胞由2层增加为5层;经气液界面培养7 d后,胎鼠皮片表皮基底上角质形成细胞的局部区域分层已可达8层,细胞呈现更为分化的形态.在高浓度Ca2 (1.5 mmol/L)条件下培养7 d后,培养角质形成细胞发生了分层,分化标记物角蛋白K10在分层角质形成细胞中的表达明显增加.结论气液界面培养法及高浓度钙离子能诱导表皮角质形成细胞的体外分层,同时促进其分化.     

芳维A酸氨丁三醇诱导HaCat细胞基因表达谱研究

目的通过研究芳维A酸氨丁三醇（AT）诱导永生化人类角质形成细胞（HaCat）细胞后的基因表达差异,初步探讨第三代维A酸治疗银屑病的机制。方法应用基因芯片技术,检测浓度为10^-6mol／L的AT诱导HaCat细胞24h后,相对于空白组细胞基因表达谱的改变,并用实时PCR对芯片结果进行验证。结果在4000条人类全长eDNA中,有580条的表达量差异达到2倍以上,其中注释完整的基因有253条（143条表达量增加,110条表达量减少）。异常表达的基因主要参与细胞周期及细胞免疫两个过程。结论利用基因芯片技术可同时高通量地研究第3代维A酸对HaCat细胞基因表达的影响,并且发现该类药物能够通过调控细胞周期等多种途径发挥其药理学作用。     

节段型白癜风皮损区角朊细胞表达干 细胞因子的实验研究

目的：了解节段型白癜风皮损区角朊细胞（ＫＣ）表达干细胞因子（ＳＣＦ）的状况。方法：采用原位杂交及免疫组化技术对８例活动期和９ 例稳定期节段型白癜风患者皮损ＫＣ内ＳＣＦ的表达进行了观察。结果：活动期皮损ＫＣ表达ＳＣＦ明显增强，稳定期皮损与正常皮肤ＫＣ的表达状况无显著差异。结论：稳定期皮损ＫＣ内ＳＣＦ的正常表达为黑素细胞（ＭＣ）自体移植治疗节段型白癜风，移植ＭＣ能够长期存活提供了一定的实验依据，活动期ＫＣ内ＳＣＦ表达增强提示ＳＣＦ可能参与了该型白癜风的发病。     

表皮角质形成细胞分化无血清培养方法的建立

目的建立一种研究角质形成细胞分化的细胞培养方法.方法细胞培养采用无血清无钙离子的角质形成细胞生长培养基(keratinocyte growth medium,KGM),通过改变培养基中的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化状态,并对分化标记物K10以及在银屑病患者受损表皮中表达异常增高的组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activa-tor,tPA)通过免疫细胞化学技术(immunocytochemistry,ICC)分别进行检测.结果低钙(0.09mmol/L)培养条件下,细胞处于未分化状态,K10染色为阴性,tPA呈弱阳性表达;高钙(1.5 mmol/L)条件下,细胞出现分层分化,K10染色为阳性,tPA的表达明显增强.结论通过改变KGM的钙离子浓度来调节角质形成细胞的分化,可用于角质形成细胞分化的研究.     

人胚胎干细胞分化为角质形成细胞过程中标志物的表达特点

目的：诱导人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）定向分化为角质形成细胞K-hESCs（keratinocyte derived from human embryonic stem cells）, 并分析诱导过程中K-hESCs不同标志物的表达特点。方法：运用含骨形成蛋白4、维甲酸和N2添加剂的上皮分化培养基直接诱导hESCs分化为K- hESCs,通过染色体核型分析检测K-hESCs核型,通过实时定量PCR检测K-hESCs在分化的不同时期基因的表达及其与原代人牙龈上皮细胞（human gingival epithelial cells,HGECs）、人永生化口腔上皮细胞（human immortalized oral epithelial cells,HIOECs）、人永生化皮肤角质形成细胞HaCaT的基因表达差异;利用免疫组织化学检测不同标志物在K-hESCs的蛋白表达。结果：运用上皮分化培养基成功地诱导hESCs分化为上皮样细胞K-hESCs; K-hESCs核型具有正常46条染色体,无结构异常;K-hESCs中角质形成细胞标志物基因p63的表达明显低于HaCaT细胞（P<0.05）,而与HGECs和HIOECs中的表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：运用上皮分化培养基可成功诱导hESCs分化为具有正常核型的K-hESCs;标志物的表达特点提示诱导hESCs分化为K-hESCs的过程是从hESCs向单层上皮干细胞分化继而转向复层上皮终末分化发展的趋势,最终得到的K-hESCs类似于单层鳞状上皮干细胞向终末分化初始阶段的角质形成细胞,该阶段的细胞由上皮干细胞静止状态被激活,处于分化初始高增殖活力阶段。     

阿魏酸钠抑制高糖诱导系膜细胞表达PAI-1和p38MAPK

目的：观察阿魏酸钠（SF）对高糖诱导系膜细胞（GMC）表达PAI-1蛋白和细胞信号转导分子p38MAPK的影响。方法：原代培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24h、48h收集细胞。用免疫细胞化学检测各组细胞p38MAPK的表达,流式细胞术检测PAI-1蛋白。结果：48h内,高糖促进PAI-1和p38MAPK蛋白的表达,而SF能明届抑制高糖的这种作用,其作用随SF浓度的增加和作用时间的延长而加强。结论：SF能拈抗高糖诱导的GMC表达PAI-1增多和抑制p38MAPK信号通路