GW3965在Raji细胞中对BLyS表达的影响

目的 探讨肝X受体(liver X receptors,LXRs)的特异性激动剂GW3965在Raji细胞中对B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)表达的影响.方法 MTT法检测不同浓度的GW3965(浓度分别为0.5、5、10 μmol/L)对Raji细胞活性的影响,观察时间为...     

增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响

目的 建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用.方法 采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA31/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率.结果 真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势.结论 成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感.     

DNA聚合酶Pol(t)在紫外损伤诱导基因组高突变中的作用

目的 研究DNA聚合酶Polt在紫外损伤耐受及基因组高突变产生中的生物学作用.方法 紫外线照射稳定高表达DNA聚合酶iota(DNA polymerase iota,Pol(t))的HEK293T细胞系(Pol(t)-HEK293T),MTT法检测紫外损伤后细胞的存活率;supF报告基因体内突变检测系统检测基因的突变频率.结果 MTT法结果提示紫外照射后稳定高表达Pol(t)的细胞系与对照组相比细胞存活率没有显著差异;supF报告基因结果显示稳定高表达Pol(t)的细胞系其基因突变频率高于对照组细胞.结论 DNA聚合酶Pol(t)的高表达对紫外损伤后细胞的存活率没有显著影响,不能提高细胞对紫外损伤的耐受,在紫外损伤中pol(t)主要参与诱发体内基因组高突变的产生.     

皮肤创伤修复中uPA/uPAR的表达及作用的研究

目的：探讨皮肤创伤修复中uPA/uPAR的表达规律及意义。方法：应用免疫组化,Western Blot细胞培养,ELISA等方法检测小鼠皮肤伤缘和培养的单层角质形成细胞创伤模型的uPA/uPAR的表达。结果：创伤后uPA/uPAR的表达增高,伤后12－24h uPA/uPAR的表达高峰。结论：创伤促进了uPA/uPAR的表达,伤后uPA/uPAR的表达增高促进了皮肤创伤愈合表皮再生过程。     

小鼠表皮角质形成细胞中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节

目的探讨小鼠表皮角质形成细胞(KC)中Ca2+对组织型纤溶酶原激活剂(tPA)表达的调节作用及其与分化的关系.方法采用免疫组化及原位杂交技术定性、定量检测低Ca2+(0.05mmol/L)及高Ca2+(1.5mmol/L)浓度对tPA、tPAmRNA的表达及表皮KC分化的影响.结果与未经Ca2+处理的对照相比,低Ca2+浓度下培养的表皮KC中,tPAmRNA及tPA量均增加(P＜0.05),KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性,KC胞体较小,细胞形态趋于圆形;而高Ca2+浓度下的培养表皮KC中,tPAmRNA及tPA量显著增加(P＜0.001),K10抗原呈强阳性表达,KC胞体增大,形态为典型的多角形.结论Ca2+浓度的增高促进了tPAmRNA及tPA的表达,并与KC分化有关.     

体外培养条件下毛囊bulge细胞分泌的β神经生长因子的检测

目的定性定量地检测毛囊bulge细胞体外培养条件下分泌的β-神经生长因子(β-nerve growth factor,β-NGF)及其与bulge细胞生长状态的关系.方法首先使用显微操作技术剥离出原代组织,然后培养原代细胞,使用超薄切片和透射电镜技术来观察原代细胞超微结构,使用酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法测定原代bulge细胞分泌的β-NGF,利用免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)方法检测原代细胞中β-NGF的表达.结果成功培养出原代bulge细胞,ICC方法检测到原代培养的bulge细胞质表达强阳性β-NGF.超薄切片和透射电镜技术能够显示出原代培养bulge细胞的内部结构,即核质比大,细胞器较少.通过ELISA方法能够测定出原代细胞分泌的β-NGF与体外原代培养的bulge细胞特性呈规律性变化.结论原代bulge细胞分泌的β-NGF呈规律性表达,即生长高峰时期表达最为丰富,这与毛囊bulge细胞的生长状态具有规律性变化有关,因此他们具有必然的联系.     

大鼠生后发育期皮肤和毛囊中角蛋白14的研究

目的 研究大鼠新生和幼年期的皮肤和毛囊中角蛋白14的mRNA的分布和含量的变化。方法 生后第1至49天Wistar大鼠分为32组，测定毛发周期，并用放射标记的原位杂交方法（in situ hybridization,ISH）对皮肤和毛囊石蜡切片上角蛋白14mRNA的分布进行了研究和半定量分析。结果 大鼠的第1毛发周期明显短于第2周期，和小鼠同期相比也有差别；角蛋白14mRNA主要见于表皮基底/基上层和毛囊上部外根鞘等部位的角质形成细胞及皮脂腺细胞等，其他区域及细胞无角蛋白14mRNA阳性信号检见。结论 大鼠新生和幼年期皮肤和毛囊中角蛋白14mRNA的表达与在成人和人胚胎皮肤中的规律有一定差异。     

兔角膜碱烧伤后早期尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体的表达

作为纤溶酶原激活剂／纤溶酶原激活剂抑制剂(plasminogen activator／plasminogen activator inhibitor，PA／PAI)级联的重要因子，尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase type PA，uPA)及其受体uPA-R具有高效的分解细胞外环境蛋白酶的作用。研究表明，uPA和uPA-R在角质形成细胞的迁移、增殖、分化以及重建上皮组织等方面发挥着十分重要的作用，但有关它们在角膜碱烧伤中的作用鲜见报道。本实验对兔角膜碱烧伤后早期uPA和uPA-R的表达进行了研究。     

医学院校研究生细胞培养课的组织与实施

医学院校研究生在课题研究阶段普遍要用到细胞培养技术，所以在基础学习阶段有必要针对性地开展细胞培养实验课。通过七年来的探索．建立了一套行之有效的培训方法，经过此课程的学习，学员基本掌握了细胞培养的基础知识和基本操作，为今后的研究打下良好基础。