顺铂联合伊立替康注入综合疗法对HeLa细胞和HEK-293细胞的影响

目的 研究顺铂(DDP)联合伊立替康(Irinotecan)注入综合疗法对HeLa细胞和HEK-293细胞的影响,以评估该模型作为检测方法的有效性,为中晚期宫颈癌的综合化疗提供优化线索.方法 不同浓度DDP,Irinotecan,及双药联合作用于对数生长期的HeLa或HEK-293细胞,通过形态学观察、四甲基偶氮唑盐法(MTT)细胞活力测定,Ki67染色等检测药物对细胞的影响.结果 自10μg/mL DDP对HeLa和HEK-293细胞生长均有抑制作用.自10μM Irinotecan对HeLa细胞生长抑制明显.10μ g/mL DDP与低至2.5μMIrinotecan联合对HeLa细胞抑制作用显著强于同浓度单药.相同联合用药对HEK-293细胞的抑制作用明显较弱.结论 DDP与Irinotecan联合应用,不但提高了DDP综合疗法的效果,而且降低了化疗药物的使用剂量,此类联合治疗可望减轻患者的不良反应.相同联合方案对两种细胞的不同疗效提示了HeLa细胞作为宫颈癌体外模型的特异性.该研究可为宫颈癌综合疗法顺铂联合化疗方案的制定提供理论指导.     

NS基因克隆及人成骨肉瘤细胞和人胚胎肾细胞NS基因的表达

目的：研究nucleostemin(核干细胞因子，NS)基因在人成骨肉瘤细胞(0S-732)和人胚胎肾细胞(HEK-293)的表达情况，井克隆该基因的部分片段。方法：以0S-732细胞和HEK-293细胞为实验材料，进行细胞总RNA的提取、反转录反应、PCR反应、NS基因片段的克隆及测序等。结果：(1)提取的总RNA质量很高，基本上无降解；(2)0S-732细胞和HEK-293细胞中均有NS基因的表达，并且在相同量底物的情况下，0S-732细胞NS基因的表达量明显高于HEK-293细胞；(3)将PCR产物成功地与pGEM-T克隆载体连接，构建为FGEM-T-NS质粒，测序结果表明NS基因片段序列与基因库中登陆的序列完全一致。结论：本成功地从0S-732细胞和HEK-293细胞克隆到NS基因片段，0S-732细胞NS基因的表达量明显高于HEK-293细胞。     

对苯二酚诱导293T细胞凋亡的研究

目的 在体外实验探讨对苯二酚对细胞的毒性机制.方法 采用MTT比色、DNA凝胶电泳、流式细胞术来检测其对苯二酚对293T细胞的影响.结果 对苯二酚对293T细胞的生长具有明显的抑制作用,且随着对苯二酚浓度的增加对293T细胞生长抑制愈加明显;293T细胞经80μM对苯二酚作用后,凋亡率达到70%;琼脂糖凝胶电泳显示细胞DNA呈梯状降解.结论 对苯二酚在体外能够明显抑制293T细胞的增长,其毒性作用可能与诱导细胞凋亡有关.     

凋亡相关蛋白在汉坦病毒诱导HEK-293细胞凋亡过程中的表达及意义

目的 探讨Bcl-2、Bax及Caspase-3在汉坦病毒诱导人胚肾细胞(HEK-293)凋亡过程中的变化,为研究汉坦病毒诱导人胚肾细胞损伤的机制提供参考.方法 体外培养HEK-293细胞,分为正常对照组和汉坦病毒处理的感染组,采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原;用Westen blot方法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平.结果 汉坦病毒感染HEK-293细胞1d后即开始出现荧光阳性细胞,随着时间延长,荧光强度逐渐增强,细胞胞浆内出现大量片状或颗粒性的黄绿色荧光;Western blot结果显示,与对照组比较,汉坦病毒感染1d后Bcl-2、Bax蛋白及Caspase-3酶原活化片段表达量未见明显变化(P＞0.05),感染3d和5d后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Caspase-3酶原活化片段表达升高(P＜0.05).结论 汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,其损伤机制可能与Bcl-2表达减少和Bax蛋白表达上调,通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡有关.     

溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族（SLC26A）的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法
构建多种人类SLC26A转运体－绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞（HEK-293）中。用
全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细
胞膜上表达,并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并
具有一定的离子选择性。结论SLC26A转运体家族能够在HEK-293 细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在
HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法,为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。
     

5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用

目的：探讨5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-dC）对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其机制。方法：采用四甲基偶氮噻唑氮蓝（MTT）法测定5-Aza-dC对A549细胞生长的影响;考马斯亮蓝G-250染色法测定5-Aza-dC作用后A549细胞蛋白质含量;Hoechst 33258荧光染色检测A549细胞凋亡和形态改变。结果：40～100μg/mL 5-Aza-dC对A549细胞的增殖有明显抑制作用,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）,并具有明显的时效和量效关系,同时蛋白质相对含量下降。60～100μg/mL 5-Aza-dC作用后A549细胞出现明显形态改变且凋亡增加。结论：5-Aza-dC对人肺腺癌A549细胞的生长具有抑制作用,并引起蛋白质相对含量明显下降和细胞凋亡,其机制可能与阻滞细胞周期,蛋白质功能改变及诱导细胞凋亡有关。     

丙戊酸抑制肝癌细胞生长的研究

目的：探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对人肝癌细胞株HepG2细胞生长的影响。方法：将VPA以不同浓度（0．5,1,1．5,3mmol／L）不同作用时间作用于HepG2细胞,检测PVA对细胞增殖的抑制作用;Hochest33258染色观察细胞形态学改变。结果：VPA对细胞生长有抑制作用;VPA处理后细胞Hochest染色可见细胞凋亡;VPA与化疗药物有协同效应。结论：VPA能有效抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡并与化疗药物有协同抗癌作用。     

复方苦参方剂对大肠癌LoVo细胞体外增殖凋亡的影响

目的：探讨复方苦参方剂对大肠癌LoVo细胞体外增殖及凋亡的影响．方法：台盼蓝染色法和MTT法测定中药对LoVo细胞抑制作用与时间和剂量的关系,用荧光显微镜、流式细胞仪对细胞凋亡进行检测．结果：复方苦参方剂可抑制Lovo细胞的生长,实验范围内其抑制作用呈时间与剂量依赖关系．经中药作用48h后,LoVo细胞可检测细胞凋亡峰．中药组凋亡率为（7．3±1．5）％,与对照组（2．1±0．5）％相比有明显升高（P〈0．05）．结论：复方苦参方剂具有一定的抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡的作用．     

黄芪注射液对结肠癌SW480细胞的生长抑制作用

目的：探索研究黄芪注射液对人结肠癌细胞株SW480细胞的生长抑制和凋亡作用机制。方法：实验设空白对照组、奥沙利铂对照组和黄芪注射液实验组（125、250、500、1 000μg/ml）。MTT法检测黄芪注射液对SW480细胞生长增殖和凋亡的影响;流式细胞仪PI染色检测SW480细胞的凋亡。结果：与空白对照组相比,黄芪注射液对SW480细胞生长增殖有明显的抑制作用,且与作用浓度呈正比（P=0.000〈0.01）;流式细胞仪显示,黄芪注射液作用SW480细胞48 h后,125、250、500、1 000μg/ml各组的凋亡率分别为24.2%、42.6%、64.1%、84.0%,较空白对照有明显升高,有显著性差异（P=0.000〈0.01）。结论：黄芪注射液能抑制SW480细胞生长,促进结肠癌细胞凋亡。     

20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的:研究20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝染色、噻唑蓝(MTT)法、Hochest33258染色和DNA Ladder方法分别测定20(S)-原人参二醇对DU145和PC3细胞凋亡诱导作用。结果:20(S)-原人参二醇可明显降低DU145和PC3细胞存活率和细胞活性,IC50分别为38.0μmol/L和28.6μmol/L。20(S)-原人参二醇处理后DU145和PC3细胞核出现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNA Ladder条带。结论:20(S)-原人参二醇可有效诱导人前列腺癌DU145和PC3细胞的凋亡并有剂量依赖关系。     

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。     

利福平对U20S细胞增殖和代谢的影响

目的：观察利福平对U20S细胞增殖和代谢的影响。方法：常规培养人U20S细胞株,分别加入不同浓度的利福平（50、250、500、750、1000μg/mL）,分别采用四唑盐（MTT）法测定24h、48h细胞增殖率,测定24h细胞外液LD含量、LDH活性,ELISA法测定细胞5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）摄取量。结果：利福平可以剂量依赖性地抑制细胞增殖（P〈0.01）,增加细胞外液LD含量和LDH活性（P〈0.05,P〈0.01）,降低细胞DNA合成量。结论：高浓度利福平明显抑制U20S细胞的增殖和DNA合成,并影响细胞的代谢能力,提示在骨关节结核局部用药时需注意控制药物浓度。     

La（C7H5O3）2·（C9H6NO）抑制Hela细胞生长作用机制研究

目的：观察La（C7H5O3）2·（C9H6NO）对体外培养的Hela细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法：应用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果：不同浓度的La（C7H5O3）2·（C9H6NO）处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖受到显著抑制,并呈浓度及时间依赖性;0．5、1．0、5．0、10．0μmol／L La（C7H5O3）2·（C9H6NO）处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著减少（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论：La（C7H5O3）2·（C9H6NO）对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖诱导人结肠癌SW1116凋亡的作用

目的：研究D-葡萄糖衍生物2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖（COPADG）对人结肠癌SW1116细胞生长增殖的影响,进而探讨COPADG诱导SW1116细胞凋亡的作用。方法：用不同浓度的COPADG处理SW1116,采用MTT法测定其对SW1116细胞生长增殖的抑制作用,通过DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察其对SW1116细胞诱导凋亡的效应。结果：COPADG能抑制SW1116细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;COPADG能诱导结肠癌SW1116细胞凋亡;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰。结论：COPADG在体外可显著诱导结肠癌SW1116细胞凋亡。     

氯化镧水杨酸8-羟基喹啉配合物抑制BGC -803细胞增殖及核分裂的研究

目的：观察氯化镧水杨酸8－羟基喹啉配合物（La（C7 H5 O3）2·（C9 H6 NO）·2H2 O）对体外培养的BGC －803细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法以BGC－803细胞为研究对象,应用MTT法检测细胞增殖活性、HE染色法检测细胞分裂、Annexin V－FITC染色法检测细胞凋亡率,以确定不同浓度配合物对细胞增殖和核分裂的影响。结果不同浓度La（C7H5O3）2·（C9H6NO）·2H2O处理BGC－803细胞24～72 h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度及时间依赖性;1．0、5．0、10．0μg/ml La（C7 H5 O3）2·（C9 H6 NO）·2H2 O处理24 h后,BGC－803细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低（P＜0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P＜0．01）。结论 La（C7H5O3）2·（C9 H6 NO ）·2H2 O对BGC－803细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期导致诱导凋亡有关。     

HDAC2 siRNA转染对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨RNA干扰沉默组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)基因表达对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 培养人胰腺癌PaTu8988细胞株,并将其随机分为5组:空白对照组,20 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,40 nmol／L HDAC2 siRNA阴性组,20 nmol／L HDAC2 siRNA组,40 nmol／L HDAC2 siRNA组。合成针对HDAC2基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),利用阳离子脂质体将HDAC2 siRNA瞬时转染人胰腺癌PaTu8988细胞,分别采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测HDAC2基因及蛋白的表达;MTT比色法检测细胞的增殖率;流式细胞术测定细胞凋亡率。结果: 与空白对照组和阴性siRNA 组对比,HDAC2 siRNA组的HDAC2基因和蛋白的表达水平均明显下降(P均<0.05),细胞增殖率减慢(P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论: 采用RNA干扰沉默人胰腺癌细胞HDAC2基因表达,可抑制癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

补肾健脾中药联合5-FU对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的血清药理学研究

目的：观察补肾健脾中药联合5-FU对人肝癌细胞株HepG2的抑制增殖和促进凋亡作用。方法：运用血清药理学和体外细胞培养方法,分别观察补肾健脾中药血清、5-FU药物血清及二者合用药物血清,对肝癌细胞HepG2的抑制增殖和促进凋亡作用。结果：补肾健脾中药血清、5-FU药物血清对HepG2细胞具有抑制增殖、促进凋亡、使细胞周期停滞在G0/G1期的作用,当二者合用时作用可明显增强。结论：补肾健脾中药联合5-FU可明显增强对肝癌细胞HepG2的抑制增殖和促进凋亡作用,体现一定的增效作用。     

TNF-α对人lrg基因表达的调控

目的：观察TNF-α对脂多糖应答基因（lrg）在人HEK293和U937细胞中表达的影响．方法：正常培养人胚肾细胞（HEK293）和人单核细胞（U937）,用TNF—α（终浓度1×10^6U／L）刺激2h．提取刺激前后HEK293和U937细胞的总蛋白,用纯化后的兔抗人Lrg抗血清作一抗（1：1000）,对TNF—α刺激前后的HEK293和U937细胞进行Western Blot分析．提取刺激前后HEK293和U937细胞的总RNA,用RT—PCR分析TNF-α对lrg在细胞中表达的影响．以B-actin为内参．结果：Western Blot分析显示,用TNF-α刺激2h后,妇在人HEK293和U937细胞内的蛋白含量明显上升;RT—PCR结果显示,用TNF-α刺激2h后,人HEK293和U937细胞内的垤mRNA水平明显上升．结论：TNF-α的刺激增强了人HEK293和U937细胞内lrg的表达,提示lrg可能参与了TNF—α诱导的炎症反应．     

槲皮素对TGF-β诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化的影响

目的探讨槲皮素对TGF—β诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法在体外分别采取槲皮素及阴性对照DMSO干预经或不经TGF—B（10ng／mL）诱导的人肺癌A549细胞12、24、48、72h后,MTT法检测不同浓度槲皮素对A549细胞增殖的影响;RT—PCR和Westemblot实验检测上皮间质转化标志性因子E—cad—herin、N—cadherin、Vimentin的表达变化。结果与阴性对照组相比,不同浓度槲皮素作用的实验组A549细胞的增殖能力降低,同时在mRNA和蛋白水平E—cadherin上调以及N—cadherin、Vimentin的表达下调（P〈0．05）。结论槲皮素能够抑制TGF—β诱导的人肺癌A549细胞的增殖,且呈时间一剂量依赖性,阻止A549细胞发生上皮间质转化,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力。