限制性内切酶酶切及限制性内切酶酶切图谱分析

限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)是一类能够识别DNA的特异序列并在识别位点剪切双链DNA的核酸内切酶。主要存在于原核生物中，大多数来自于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制一修饰体系，限制外源DNA、保护内源DNA。1970年Smith等分离到第一种限     

限制性内切酶和甲基酶识别顺序及序列组建数据库管理系统

DNA分子的顺序测定和分析是分子生物学中的一个基本问题,其序列测定虽有很大进展,但长链DNA分子的序列分析仍比较困难。采用手工方式进行片段序列的分析,既费时费力,又不能保证分析结果的准确性,甚至可能无法实现。为此,人们利用电子计算机对DNA序列分析做了一定的尝试。本文数据库管理系统软件,建立了分子生物学的限制性     

HSV临床分离株的限制性核酸内切酶酶切分析与鉴定

采用三种方法从感染细胞中分离HSV DNA。同时对用三种方法提取的HSV DNA的量以及与细胞DNA分离程度的差别作了比较。采用其中一种方法对10株流行病学上无关的、分别来自疱疹性角膜炎和口唇疱疹病人的分离病毒株,用限制性核酸内切酶BglⅡ、HindⅢ和BamHⅠ进行了酶切分析与鉴定,BglⅡ和HindⅢ可明显区分HSV的型间差别,BamHⅠ可对10株HSV进行株间的鉴定。     

霍乱弧菌染色体DNA限制性内切酶分析

目的 探讨冬季分离的霍乱弧菌与非冬季分离的霍乱弧菌在染色体基因组织构上的差异。染色体酶切位点的差异与菌株生物学性状及变异的关系。方法 采用10％SDS裂解细菌，酚和氯仿抽提染色体及纯化。分别用限制性内切酶BamHI、HindIII、EcoRI和PstI进行染色体DNA酶切。结果 冬季分离的与非冬季分离的霍乱弧菌标本染色体DNA经限制性内切酶酶切后酶切图谱基本一致。流行菌株与非流行菌株染色体DNA酶切图谱差异较大，酶谱明显不同。结论 冬季分离的霍乱弧菌标本与非冬季分离的霍乱弧菌标本生物学性状上的差异不能反映细菌染色体基因组上的差异。流行菌株与非流行菌株在细菌染色体基因结构组上存在明显的差异。     

几株结核杆菌DNA的限制性内切酶谱比较

改良了一种从结核杆菌中提取高分子量ＤＮＡ的方法，并将所获得的三株人型结核杆菌（两株地方株、一株标准株），一株牛型结核杆菌的ＤＮＡ用于ＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ、ＥｃｏＩ、ＨｉｎｄⅢ四种不同的限制性内切酶的消化，经电泳后产生了它们各自的酶谱。结果显示出，牛型结核杆菌的四种酶谱均显著区别于三株人型结核杆菌，说明它作为独立的型别存在；人型结核杆菌标准的ＰｓｔＩ酶谱与两株人型结核杆菌地方株存在显著差异；而两株人     

用限制性内切酶分析溶组织内阿米巴的致病性

用ＳＨ－３，ＳＨ－５，ＳＨ－６，ＳＨ－７和ＳＨ－８５株溶组织内阿米巴的ＤＮＡ增殖３５个周期，将其基因ＤＮＡ用内切酶ＨｉｎｆＩ和ＥｃｏＴ２２Ｉ进行消化后，作琼脂糖凝胶电泳分析，显示，５株虫株ＤＮＡ经３５个循环周期后产生５３１－ｂｐ的产物；经ＨｉｎｆＩ消化后，ＳＨ－３，ＳＨ－５，ＳＨ－６和ＳＨ－７的基因ＤＮＡ产生３个相同的片段，而显示其均与非致病性虫株ＳＡＷ１４２的电泳谱完全相同；而ＳＨ－８基因ＤＮ…     

不同血清群型钩端螺旋体DNA的限制性内切酶谱分析

用7种限制性内切酶分析了不同血清群型钩端螺旋体DNA间的遗传差异。结果表明:CfoI和Eco RI的消化酶谱分辨效果较好,各血清型钩体间多存在明显差异,但同血清型的不同株之间酶谱基本相同。     

限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位稀有突变

目的研究限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测KRAS基因第12位密码子稀有突变的可行性。 方法将采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选检测方法作为实验组,限制性内切酶酶切联合蓝白斑筛选检测方法作为对照组。对照组将KRAS基因第12位密码子突变型(MUT)/野生型(WT)(MUT/WT 12)质粒按0∶1、1∶300、1∶1 000、1∶3 000的比例混合,限制性内切酶酶切PCR产物,酶切后产物进行蓝白斑筛选。实验组将MUT/WT 12质粒按0∶1、1∶3 000、1∶10 000、1∶30 000的比例混合,在对照组方法的基础上酶切产物去磷酸化后再蓝白斑筛选。比较两组蓝白斑克隆数。限制性内切酶酶切鉴定实验组MUT/WT 12为1∶30 000的阳性克隆,一代测序阳性克隆验证插入片段的序列。采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选验证26例肺癌病例游离DNA的KRAS基因第12位稀有突变。 结果对照组1∶3 000的培养皿上白色克隆17个,蓝色克隆2 329个,白色/蓝色克隆为1/137；而实验组1∶30 000的培养皿上白色克隆23个,蓝色克隆394个,白色/蓝色克隆为1/17,1∶30 000实验组白色/蓝色克隆比例明显高于1∶30 00对照组。实验组1∶30 000培养血上5个阳性克隆酶切鉴定出3个阳性,其插入片段为KRAS第12位突变片段。限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选26例肺癌病例可检测出2例为KRAS基因第12位密码子突变。 结论采用限制性内切酶酶切后去磷酸化联合蓝白斑筛选可检测出1∶30 000 KRAS基因稀有突变。     

EcoRⅡ限制性内切酶和甲基化酶基因克隆,表达和缺失突？…

目的 同时克隆ＥｃｏＲⅡ限制性内切酶基因和ＥｃｏＲⅡ甲基化酶基因,初步探讨该限制－修饰系统的协同表达机制。方法 采用外切酶Ⅲ删除法构建单向缺失亚克隆,根据亚克隆的酶活性对上述两种基因进行初步定位,经核酸序列测定确定亚克隆的缺失部位,再以Ｓ１核酸酶保护分析法测定基因的转录起始点。     

用限制性内切酶分析溶组织内阿米巴的致病性

用SH-3、SH-5、SH-6、SH-7和SH-85株溶组织内阿米巴的DNA增殖35个周期,将其基因DNA用内切酶HinfⅠ和EcoT22Ⅰ进行消化后,作琼脂糖凝胶电泳分析,显示,5株虫株DNA经35个循环周期后产生531-bp的产物;经HinfⅠ消化后,SH-3、SH-5、SH-6和SH-7的基因DNA产生3个相同的片段,而显示其均与非致病性虫株SAW142的电泳谐完全相同;而SH-8基因DNA的电泳谱与致病性虫株SAW408的电泳谱一致,而用EcoT22Ⅰ消化结果也显示SH-8的图谱与致病性虫株SAW408的相同,证实了从包囊携带者和有发热、腹泻而无脓血便患者粪便中分离的虫株均属于非致病性虫株,从有发热、腹泻、脓血便的急性阿米巴痢疾患者粪便中分离到的虫株属于致病性虫株,均与酶株群分析相一致。提示,应用多聚酶链反应和限制性内切酶消化基因DNA来检测溶组织内阿米巴的基因型是十分有意义的。     

用限制性内切酶多态性分析23SrRNA快速鉴定李斯特菌种

目的为快速鉴定六种李斯特菌。方法用 PCR 扩增六种参考李斯特菌23SrRNA 基因片段 S_1、S_2,再用限制性内切酶 S_1、S_2,用 API 反应条同时做生化反应。结果 S_2用 XmnI 或 CfoI 酶切,S_2用 AluI 或 ClaI 酶切,可以分别鉴定出这六种参考李斯特菌,结果与 API 反应条一致。结论 PCR-RFLP 能快速、方便地用于李斯特菌的鉴定,且方法可靠、实用,可应用于食品和环境微生物的鉴定。     

用限制性核酸内切酶分析钩端螺旋体DNA的研究

作者选用钩体赖型56601株、017株、秋季型56606株、曼耗2型67020株、1987年分离株87112、87369株,用内切酶EcoR Ⅰ、Bgl Ⅱ、Hha Ⅰ和Hind Ⅲ消化分析其DNA,结果表明:钩体017株的四种内切酶图谱明显不同,在EcoR Ⅰ酶切图谱上,赖型、秋季型、曼耗2型钩体DNA的主要差别在高分子区带,赖型强毒力株017较同型弱毒力株56601在10.5kb处染色较深;三型钩体的Hind Ⅲ酶切图谱仅有细小差异;分离株87112和87369的EcoR I 酶切图谱与赖型56601和017基本一致。在HindⅢ酶切图谱上,分离株87112与赖型56601株、017株相似。提示:限制性核酸内切酶分析可以作为钩体分型和鉴定的手段。     

酵母质粒PCR扩增及酶切在酵母双杂交中的运用

目的:减少对初步筛选获得的阳性克隆进一步鉴定的工作量,防止阳性克隆的丢失.方法:提取酵母双杂交筛选cDNA表达文库获得的阳性克隆酵母细胞质粒,以文库载体插入片段两端特异序列为引物,PCR扩增插入片段,限制性核酸内切酶酶切扩增产物,琼脂糖凝胶电泳,根据带型对阳性克隆进行分类.结果:将初步获得的107株阳性克隆,分为24类,在PCR扩增过程中发现个别克隆含有两种以上的文库质粒.结论:酵母质粒PCR扩增,酶切分类的方法,不仅可以大大减轻阳性克隆进一步鉴定的工作量,避免不必要的浪费,而且还可以避免阳性克隆的丢失.     

医药学科技期刊中的拉丁语学名与限制性内切酶的规范表达

拉丁语原本是意大利中西部一个古国--拉提姆（Latium）的方言,后来罗马帝国侵占了此地,并以此为发祥地,向外进行势力扩张,拉丁语也随之广泛流传于罗马帝国境内,逐渐拉丁语也就成为了官方语言;而基督教普遍盛行后,拉丁语更加深其影响力,随宗教教徒而流传于欧洲.     

沈阳地区肺炎支原体分离株P1蛋白基因限制性酶切图谱分型研究

目的：根据肺炎支原体（MP）P1蛋白基因限制性酶切图谱分类MP临床分离株,调查沈阳地区肺炎支原体流行情况。方法：多聚酶链反应扩增MP FH标准株和MP临床分离株的P1基因片段,扩增产物用限制性内切酶HeaⅢ消化,1.5％琼脂糖凝胶电泳分析。结果：肺炎支牟体临床分离株和FH标准株酶切图谱相同。结论：沈阳地区肺炎支原体分离株属于Ⅱ型。     

中国昆明(KM)小鼠线粒体DNA限制性内切酶图谱的研究

线粒体DNA的限制性内切酶图谱在不同的种系及亚种间存在多态性。我们分别用五种限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅡ、HidⅢ、PstⅠ、MspⅠ对60只中国KM小鼠(雌雄各半)的线粒体DNA进行了酶切电泳分析,结果未发现多态性,且这五种限制性内切酶图谱均与BALB/c小鼠相同。这表明中国KM小鼠与绝大多数实验小鼠一样,均起源于欧州的野鼠M.m.domesticu。未见到KM小鼠经其它亚种野鼠母系遗传污染的迹象。