神经干细胞移植治疗脊髓横断损伤的研究

目的研究神经干细胞移植治疗对脊髓横断损伤的修复作用.方法采用成年S-D大鼠,随机分为脊髓(胸10)横断损伤对照组(n=7)和神经干细胞移植治疗组(n=7).术后10周,感觉运动区皮质注射10?A示踪剂.动物再存活两周后取出相应的脑和脊髓组织,冰冻切片后,采用自由漂浮法行BDA染色显影,光镜观察.两组实验动物均于脊髓横断术后采用BBB评分法定期评估运动功能.结果神经干细胞移植治疗组所有大鼠BBB运动功能评分在横断损伤4周以后明显高于对照组(P＜O.05).BDA神经束路示踪技术研究显示神经干细胞治疗组7只中的6只大鼠在术后12周有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓横断损伤部位,而对照组大鼠均未见再生的皮质脊髓束通过.结论在脊髓横断损伤后应用神经干细胞移植治疗,可明显改善损伤的运动功能.神经干细胞移植治疗促进了皮质脊髓束的再生并重新建立了部分神经纤维联系.BDA神经束路示踪技术为脊髓损伤后神经功能的恢复提供了解剖形态学依据.     

小鼠胚胎干细胞在半横断猫脊髓损伤后急性期移植的实验研究

目的探讨猫脊髓半横断损伤后急性期移植小鼠胚胎干细胞后存活、迁移及对功能的影响.方法胚胎干细胞移植前进行培养诱导和记数绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞.取成年健康猫6只(正常移植组和半横断移植组,每组各3只),其中半横断组实施脊髓半横断手术.正常组和半横断组同时移植带有绿色荧光小鼠胚胎干细胞,7 d后灌注取材并行脊髓组织切片后,在倒置荧光显微镜下观察干细胞存活及迁移情况和对行为功能的影响.结果绿色荧光蛋白标记的胚胎干细胞的阳性率为38%,半横断移植组未见到荧光细胞,正常移植组可看到荧光细胞并迁移一段距离.结论小鼠胚胎干细胞能在成年猫的脊髓存活、迁移.但半横断脊髓损伤组未见荧光细胞,提示炎症急性期不利于移植的干细胞存活或者免疫排斥反应导致干细胞死亡.     

神经干细胞移植联合腹腔注射促红细胞生成素对横断性脊髓损伤大鼠神经轴突的修复作用

目的: 探讨神经干细胞(NSCs)与促红细胞生成素(EPO)共同作用于横断性脊髓损伤大鼠后对损伤区轴突的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法: 40只雌性成年Wistar大鼠,建立T10全横断大鼠脊髓损伤模型后,随机分为对照组、NSCs组、EPO组和联合治疗组,每组10只。术后8周采用BDA皮质脊髓束顺行追踪法和荧光金(FG)皮质脊髓束逆行追踪法评估损伤区脊髓神经轴突再生情况,同时分期采用实验性脊髓损伤运动功能BBB评分法评价大鼠后肢功能恢复情况。结果: BDA 免疫荧光染色和FG免疫荧光染色,联合治疗组可见大量被BDA-cy3红色荧光标记的再生轴突,其中部分再生轴突穿越损伤区到达远端;NSCs组仅见少量轴突再生,无神经轴突通过脊髓损伤区;EPO组偶见散在的神经纤维再生;对照组无明显的轴突再生。联合治疗组大脑皮质中可见少量被FG标记的椎体细胞及轴突发出金黄色荧光,其余3组大脑皮质中无FG标记细胞。大鼠后肢功能BBB评分,在术后1周及1周以后各时段,联合治疗组大鼠BBB评分均高于其他各组(P<0.05)。结论: 脊髓损伤后移植NSCs联合腹腔注射EPO可有效促进脊髓损伤区神经轴突的再生以及脊髓损伤大鼠后肢运动功能的恢复。     

神经干细胞移植联合促红细胞生成素对大鼠脊髓损伤的修复作用

目的:观察神经干细胞(NSCs)联合促红细胞生成素(EPO)对横断性大鼠脊髓损伤的修复作用,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。方法:40只成年雌性Wistar大鼠建立大鼠T10全横断脊髓损伤模型,并随机分为对照组、NSCs组、EPO组和NSCs+EPO组,每组10只。术后8周采用NF-200免疫组织化学染色和免疫荧光染色对各组大鼠损伤区脊髓神经纤维再生情况进行形态学观察;应用BBB评分评估各组大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:组织形态学观察,对照组大鼠横断处脊髓组织残端萎缩,脊髓白质和灰质间可见大量空洞形成,未见有明显的神经纤维再生;NSCs+EPO组大鼠横断处脊髓组织残端轻度萎缩,横断区可见大量呈杂乱、无序生长的神经纤维,可见有连续性神经纤维通过脊髓横断区,脊髓白质和灰质间可见少量空洞形成。NSCs+EPO组大鼠中,FITC共轭抗神经丝蛋白抗体NF-200标记的再生神经纤维在横断区头侧大量再生,呈无序状生长,并通过损伤区到达尾侧;NSCs组大鼠可见少量神经纤维再生,未通过损伤区到达尾侧。NSCs+EPO组大鼠后肢运动功能BBB评分,术后7 d内均高于其他各组(P<0.05);NSCs组大鼠后肢运动功能BBB评分术后7 d内均高于对照组和EPO组(P<0.05)。结论:NSCs移植联合腹腔注射EPO可有效促进大鼠损伤脊髓功能的恢复、轴突的存活和再生。     

绿色荧光蛋白腺病毒表达载体在肌源性干细胞移植修复脊髓损伤实验中的应用

目的:观察绿色荧光蛋白腺病毒表达载体在肌源性干细胞移植修复脊髓损伤实验中的应用。方法:40只成年SD大鼠随机分为移植组(n=20)和对照组(n=20),均进行脊髓半切损伤。伤后9d,移植组于伤处移植体外转染GFP基因的大鼠MDSCs,而对照组仅注射等量PBS,于移植后1、2、3、4周用BBB评分方法测大鼠的运动功能,同时进行损伤脊髓取材、快速冰冻切片进行荧光显微镜观察。结果:移植后1周两组动物运动功能恢复无明显差异;移植后2、3、4周与对照组比较,移植组显著提高运动功能;荧光显微镜观察经绿色荧光蛋白基因标记的肌源性干细胞在损伤脊髓组织局部生长良好,并且有沿着脊髓神经束向头尾两侧迁移的趋势。结论:携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒表达载体的细胞标记方法是安全可靠、简便有效的生物示踪标记方法,可以用于标记细胞移植实验研究。     

人CD34+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的:探讨人脐血来源的CD34 干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础.方法:用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34 脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3 d移植荧光标记的CD34 脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等.结果:脊髓损伤大鼠移植CD34 脐血干细胞5～6 d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10～15 d后可出现爬行,3～4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复.脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生.结论:移植的CD34 脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段.     

骨髓间充质干细胞移植联用褪黑素对大鼠脊髓损伤修复的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植联用褪黑素(MT)对大鼠脊髓损伤修复的影响,并对其作用机制进行探讨。方法:首先采用密度梯度离心法分离培养大鼠BMSCs,以Brdu标记细胞核。然后将48只SD大鼠用改良Allen法制备T10脊髓损伤模型,并随机平均分为MT+BMSCs组、BMSCs组、MT组、模型对照组,另取12只作为空白对照组。分别于造模后1d、3d、7d、14d、21d行神经功能BBB评分及斜板试验,免疫组化检测带标记的BMSCs迁移情况,显微镜下观察移植后脊髓形态结构变化。结果:术后神经功能BBB评分及斜板试验结果MT+BMSCs组优于BMSCs组(P<0.05),BMSCs组优于MT及模型对照组(P<0.05);MT+BMSCs组及BMSCs组损伤阶段脊髓内可见Brdu标记阳性BMSCs存活,且阳性数目前者多于后者,灰质分布较白质多,以注射部位向周围损伤组织迁移;同时显微镜下可观察到MT+BMSCs组脊髓损伤区无明显空腔,空泡小而少,并可见较多神经纤维及细胞。结论:BMSCs联合MT移植促进大鼠损伤脊髓结构和功能恢复的效果明显优于单纯细胞移植组,两者联用具有协同效应。     

人脐血干细胞移植促进大鼠脊髓损伤神经恢复

目的观察移植人脐血CD34 干细胞是否可以存活、分化、促进脊髓损伤的行为和功能恢复.方法26只Wister大鼠随机分成移植组和对照组.移植组行脊髓半切术并移植5-溴脱氧尿核苷(Brdu)标记的脐血CD34 细胞,对照组行脊髓半切术后注射PBS液.采用改良Tarlov评分标准对移植组和对照组所有大鼠在术前和术后24 h、1、2、3、4周进行运动功能评价.组织学和免疫组化分析移植细胞的定位和分化情况.结果移植后在脊髓病理切片中出现Brdu标记人脐血细胞,激光扫描共聚焦显微镜通过免疫荧光双标检测到7%Brdu阳性细胞表达神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP),2%Brdu阳性细胞表达神经元核抗原(NeuN).神经功能检测发现1周后移植组功能恢复较对照组具有显著性差异(P＜0.05).结论移植人脐血干细胞可以促进脊髓损伤的行为和功能恢复,为神经损伤治疗提供了有用的细胞源.     

羊膜间充质干细胞静脉移植治疗脊髓损伤的实验

目的:探讨羊膜间充质干细胞静脉移植对脊髓损伤修复的影响。方法:90只成年SD大鼠按改良Allen′s打击方法建立脊髓损伤模型,随机分为3组:对照组、假移植组和移植组,每组30只。于脊髓损伤后1周经尾静脉移植Brdu标记的羊膜间充质干细胞。3组大鼠分别于损伤后第1 d、3 d、1周及移植后1 d、3 d、1周、2周、4周采用BBB评分法对行为学进行评价。并于移植后1 d、3 d、1周、2周、4周分批处死,切片观察Brdu标记的细胞能否迁移到损伤区。结果:脊髓损伤后第1 d,3组实验动物后肢运动功能BBB评分皆为0分;细胞移植1周后移植组动物BBB评分为5.6±0.6,对照组和假移植组动物BBB评分分别为5.3±0.4和5.2±0.6;细胞移植2周后移植组、假移植组和对照组BBB评分分别为11.3±0.9、6.4±0.5和6.5±0.8;4周后3组实验动物评分分别为13.4±0.9、8.3±0.6和8.5±0.7;在损伤部位出现了Brdu标记的羊膜间充质干细胞。结论:经静脉移植的羊膜间充质干细胞能够迁移到损伤区并对脊髓损伤有一定的修复作用。     

NDGA对移植入损伤脊髓后的化学去细胞肌肉支架中的羊膜上皮细胞存活的影响

目的： 观察NDGA对植入大鼠脊髓损伤处的化学去细胞肌肉支架中的羊膜上皮细胞（AECs）存活的影响,为NDGA在脊髓损伤中的进一步应用提供实验依据。方法：制备化学去细胞肌肉支架并联合Dil标记的6只孕鼠AECs用于大鼠脊髓半横断损伤。将72只模型鼠随机分成生理盐水组(n=18)、20 mg•kg-1NDGA组(n=18)、30 mg•kg-1NDGA组(n=18)和40 mg•kg-1NDGA组(n=18),各组大鼠分别于术后1周每天注射生理盐水和20、30、40 mg•kg-1NDGA,并别于术后1、2和4周取材,荧光显微镜下观察并比较各组大鼠AECs存活的数量;采用免疫组织化学方法观察各组大鼠损伤脊髓新生血管阳性面积百分比和NG2阳性内源性神经干细胞的数量。结果：各组大鼠支架中AECs的数量随着时间的延长均不断减少,移植后1、2和4周各时间点,30 mg•kg-1NDGA组和40 mg?kg-1NDGA组大鼠支架中AECs的存活数量明显高于生理盐水组和20 mg•kg-1NDGA组（P<0.05）;移植1周后,30 mg•kg-1NDGA组和40 mg•kg-1NDGA组大鼠新生血管阳性面积百分比明显低于生理盐水组和20 mg•kg-1NDGA组（P<0.05）;移植1周后,各组大鼠间NG2阳性细胞数量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：NDGA能够明显增加大鼠脊髓损伤后的化学去细胞肌肉支架中移植AECs的存活数量,对损伤脊髓新生血管具有抑制作用,而对于内源性神经干细胞无影响。     

Spinal cord

207624 Classification and surgical management of pos- terior mediastinal and spinal dumbbell tumors in chil- dren/Zhang Jian,(张建,Dept Neurosurg,Beijing Chail- dren’s Hosp Affil Cap Univ Med Sci ,Beijing 100045)… ∥Chin J Neurosurg.-2007 ,23(6) .-438 ~440 Objective To evaluate the classaification and surgi- cal management of”dumbbell tumor”in mediastinumand spinal in children.Methods There were 12 boys and 11 girls with agefrom5 monthsto 6 years (mean age 2 .3± 1 .6 years) .All ca…     

Spine cord

<正>209229 Activation of Rho after spinal cord injury and the collapse of growth cone/Xiao Weidong(Wuhan Univ Zhongnan Hosp,Wuhan 430071)…∥Chin J Neurosurg.-2009,25(3).-283~287Objective To investigate the mechanism of ROCK causing collapse of the growth cone after SCI through observing the activation of RhoA after SCI and the reorganization of F-actin of neuron during mimic ischemia injury in vitro.Methods The model of SCI was made by Allen’s method.The activation expressive varety of RhoA was detected through Western Blot and Pull down assay;In vitro,N2a cells induced by ischemia and ischemia-reperfusion were treated with different diluteY-27632,cell damage was analyzed by MTT;On the other hand,the cytoskeleton of N2a cell were scanned through immunofluorescence techniques by confocal laser microscopy which stanined with Fitc-phalloidin for F-actin visualization.Results The activation of RhoA proteins was increased significantly in the damaged locality during the following phase of SCI.Ischemia induced a striking reorganization of actin cytoskeleton with a weakening of fluorescent intensity of the peripheral filament actin bands and formation of the long and thick stress fibers,but pretreatment of Y-27632 could reversed the changes of ultra-structure on the cellular surface,and the protection of Y-27632 was related with its concentration in determinate bound.MTT assay showed that Y-27632 could prolong the survival time of N2a cells after minmic ischemia-reperfusion for 24 h.     

251例头位胎儿脐带缠绕的临床分析

目的 探讨脐带绕颈对围产儿的影响.方法 选择脐带绕颈251例进行分析:(1)分析脐带长度与脐带绕颈的关系;(2)比较脐带绕颈与不绕颈者对围产儿影响;(3)比较脐带绕颈周数对围产儿影响.结果 脐带过短无1例发生脐带绕颈,脐带过长组的脐带绕颈周数多于脐带正常长度组,两组比较有显著差异(P＜0.01).脐带绕颈的胎儿窘迫率为36.65%,窒息率为17.39%.结论 脐带绕颈与脐带长度有一定的关系,脐带过长是导致脐带绕颈的基本因素.脐带绕颈周数越多,则胎儿窘迫、死胎、窒息发生机率越大.     

脊髓栓系综合征的诊治

脊髓栓系综合征(tetheredcordsyndrome,TCS)是指由于先天或后天的原因如脊柱裂、脊髓脂肪瘤、外伤等引起脊髓末端回缩不良,马尾终丝被粘连、束缚及压迫,使圆锥被牵引而导致发育不良,产生下肢运动失常、排便及排尿功能障碍。TCS的患病率约为0.17%。TCS的膀胱尿道功能障碍发生率高达90%以上,严重者会引起肾功能衰竭,危及生命。1病因、发病机制及病理分型先天性致病因素最常见,如神经管闭合不全等。椎管的外伤和手术也可以导致TCS。前者称原发性TCS,后者称继发性TCS。在胚胎20周时,脊髓末端上移达L3-4椎体水平,40周时位于L3椎体水平。…     

Spinal cord injuries

Spinal Cord injury (SCI) is one of the most devastating and demoralizing ailment for both the patient and the medical practitioner. However, with the better understanding of the pathophysiology, better imaging modalities and emphasis on immobilization and rehabilitation has provided a ray of hope to such patients. The initial care aims at immobilization and evacuation by the classical log roll method and focuses on life-saving procedures. Basic imaging should be augmented with an MRI in doubtful cases. Immobilization either external or internal should be followed by early efforts for rehabilitation. The use of steroids during the acute phase has become controversial. The focus of latest studies has shifted to neuroprotective and regenerative agents.     

Effects of MK-801 on apoptosis of spinal cord neurons after cord injury and fetal cord transplantation in rats

It has been reported that spinal cord injury consistsOf P~ and seconds damages. Most of the pridamages result fIDm exogenous factors such as mechanicalimpact and foe intensity of secontw daxnages is influenced by many internal factors such as ederna, ischenda,inchhed level of neurobosndtters and intheellular calci.urn ions, Presence Of free I'adicals and nixon oalde(NO), etc. Pwhctilarly, excitatory piano acids are considend to Play an important role in the SeCondary autodestrUction of th…     

同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤

脊髓损伤所造成的截瘫 ,至今仍缺乏有效的治疗方法。本实验采用同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤 ,通过观察植入的胚胎脊髓在宿主脊髓内的分化发育过程及对损伤脊髓再生修复的促进作用 ,为进一步探索脊髓损伤后再生修复的机制和胚胎脊髓移植的临床应用提供可能有用的实验依据。1　材料与方法1.1　动物与分组　　Ｗｉｓｔａｒ大鼠 96只 ,体重 (2 0 0± 2 0 )ｇ ,雌雄不拘。随机分为两组 :①胚胎脊髓移植组 :72只 ;②单纯脊髓损伤组 :2 4只。1.2　截瘫模型制备　　采用大鼠胸腰段 (Ｔ11 Ｌ1)脊髓左侧半横切损伤模型。1.3　胚胎脊髓移植　…