探讨血红蛋白对PCR检测乙型肝炎的影响

目的:探讨血红蛋白对弱阳性乙型肝炎(HBV)PCR定量检测结果造成的影响.方法:采用煮沸法处理血清,分别设置阴性对照和阳性对照(含量3.0×104 copies/mL HBV DNA).取浓度分别为0.1 μg/L、0.5 μg/L、1.0 μg/L、2.5 μg/L、5.0 μg/L、25.0 μg/L、50.0 μg/L、100.0 μg/L、500.0 μg/L的血红蛋白10 μL加入管中,补充血清(含3.0×104 copies/mL HBV DNA)至总体积40 μL.用煮沸法提取,荧光定量PCR检测HBV DNA.结果:血清标本中加入血红蛋白浓度＜5.0 μg/L的HBV DNA PCR结果全为阳性,经配对χ2检验与阳性对照差异无显著性(P>0.05).加入血红蛋白浓度≥5.0 μg/L时出现假阴性,经配对χ2检验与阳性对照的差异有显著性(P<0.05).从各浓度组的变异系数CV观察,血红蛋白浓度越高出现假阴性的机率就越大.结论:在HBV DNA PCR检测时,应纯化核酸避免血红蛋白对结果造成的影响.     

探讨血红蛋白对PCR检测乙型肝炎的影响

目的 :探讨血红蛋白对弱阳性乙型肝炎 (HBV) PCR定量检测结果造成的影响。方法 :采用煮沸法处理血清 ,分别设置阴性对照和阳性对照 (含量 3.0× 10 4 copies/ m L HBV DNA)。取浓度分别为 0 .1μg/ L、0 .5 μg/ L、1.0μg/ L、2 .5 μg/ L、5 .0 μg/ L、2 5 .0 μg/ L、5 0 .0 μg/ L、10 0 .0 μg/ L、5 0 0 .0 μg/ L 的血红蛋白 10 μL 加入管中 ,补充血清 (含3.0× 10 4 copies/ m L HBV DNA)至总体积 4 0 μL。用煮沸法提取 ,荧光定量 PCR检测 HBV DNA。结果 :血清标本中加入血红蛋白浓度 <5 .0 μg/ L 的 HBV DNA PCR结果全为阳性 ,经配对 χ2检验与阳性对照差异无显著性 (P>0 .0 5 )。加入血红蛋白浓度≥ 5 .0μg/ L时出现假阴性 ,经配对χ2 检验与阳性对照的差异有显著性 (P<0 .0 5 )。从各浓度组的变异系数 CV观察 ,血红蛋白浓度越高出现假阴性的机率就越大。结论 :在 HBV DNA PCR检测时 ,应纯化核酸避免血红蛋白对结果造成的影响     

磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

磁性纳米粒子与链霉亲和素的连接及初步应用

目的在磁性纳米粒子表面偶联上链霉亲和素,用于VEGF质粒的提纯.方法用缩合反应将链霉亲和素偶联在磁性纳米粒子上, NBT/BCIP显色法和放射性核素标记法测定链霉亲和素的连接;利用生物素和链霉亲和素的高亲和力将生物素连接的探针连接在磁性纳米粒子上,制备成三链螺旋磁性纳米粒子;修饰好的粒子从含有VEGF质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.结果显色反应证实链霉亲和素连接在磁性纳米粒子表面,核素标记法显示其结合率在室温时为2.5 μg/100 μg,65 ℃时为22.28 μg/100 μg;三链螺旋磁性纳米粒子可以提纯出质粒,且纯度较高.结论通过一定修饰的磁性纳米粒子可以从含有质粒的细菌裂解上清液中提纯质粒.     

壳聚糖基因纳米粒子对L02细胞的作用

目的研究壳聚糖基因纳米粒子(CNP)、精氨酸化壳聚糖基因纳米粒子(ANP)和十六烷基化壳聚糖基因纳米粒子(HNP)对人正常肝细胞系L02细胞的作用。方法采用复凝聚方法制备CNP、ANP和HNP,粒度及zeta电位分析仪进行纳米粒子表征。将浓度分别为5、10、30、50μg/ml(以DNA含量计)的各种纳米粒子与L02细胞共育,采用MTT法进行细胞毒性评价,流式细胞分析技术进行细胞凋亡检测。结果CNP、ANP和HNP的zeta电位为12.10～14.63mV,粒径约为148.07～179.47nm。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,细胞存活率开始降低;达到50μg/ml时,存活率降至最低。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,可以诱导L02细胞发生凋亡,随纳米粒子浓度的升高,凋亡率升高。结论当达到一定浓度时,CNP、ANP和HNP对L02具有一定细胞毒性,可诱导细胞产生凋亡。     

液质联用法测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量

目的 建立液质联用(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)定量分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的方法.方法 采用LC-MS法检测,ZORBAX Eclipse XDB-C8(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相组成:1‰甲酸水-甲醇(95:5),流速:0.8 mL/min;柱后分流检测,分流比2:1;柱温:25 ℃;ESI电离源:负离子检测模式;干燥气流速:10.0 L/min;雾化室压力:30 psig;干燥气温度:350 ℃.选择离子方式检测(SIM):S-烯丙基-L-半胱氨酸m/z 160和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜m/z 176.结果 S-烯丙基-L-半胱氨酸在0.062 5～2 μg/mL浓度范围内线性关系良好,检测限0.01 μg/mL,日内RSD 4.11%、日间RSD 4.49%, 方法平均回收率为101.63%.结论 此方法简单、准确,适于分析测定大蒜提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的含量,并且测得该提取物中S-烯丙基-L-半胱氨酸的平均含量为0.514 μg/mg.     

漏声表面波传感器生物信号放大系统的研究

目的 研究利用"RecA蛋白-互补单链DNA"探针与bis-PNA/dsDNA复合物相结合,作为生物信号放大系统提高传感器检测灵敏度的可行性.方法 漏声表面波传感器检测通道金膜表面先固定针对人乳头瘤病毒(HPV)的bis-PNA探针,加入HPV基因组DNA与之完全反应后,再加入不同浓度的"RecA蛋白-互补单链DNA"探针,在反应过程中加入ATPγS提供能量,分别探索优化RecA蛋白及ATPγS的最佳反应浓度.结果 当RecA蛋白浓度为45 μg/ml,所引起的相位变化值为(11.74±1.03)°,显著高于其他浓度组(P＜0.01);在最佳RecA蛋白浓度下,当ATPγS浓度为2.5 mmol/L时,所引起的相位变化值为(10.71±0.73)°,显著高于其他ATPγS浓度组(P＜0.01).结论 "RecA蛋白-互补单链DNA"探针复合体与bis-PNA/dsDNA复合物相结合可以有效提高传感器的检测灵敏度,并明显缩短检测时间.     

肽核酸生物传感器检测系统构建时靶序列农度的影响及线性范围的确定

目的探索肽核酸生物传感器检测系统构建时靶序列浓度值对杂交效应的影响,以及靶序列浓度线性范围的确定.方法石英谐振式生物传感器阵列表面先固定上1.5μM的bis-PNA探针,观察终浓度为1pg/L至100μg/L的HBV DNA与探针进行杂交所引起的频率变化及反应所需时间.并对频率下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果靶序列浓度为1 pg/L时,传感器未能检测出任何频率的改变.随着浓度从10 pg/L增加到100μg/L,杂交反应引起的频率下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以10μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势.在10pg/L到10μg/L的浓度范围内,浓度与频率下降值的线性回归方程为lgC=-2.745 5 0.069 1×△F,相关系数r=0.992 3.结论随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的频率下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为:10 pg/L ～ 10μg/L.     

抗坏血酸及L-半胱氨酸的同时快速测定法

目的建立抗坏血酸与L-半胱氨酸的动力学吸光光度同时测定法。方法pH值在2~9时,抗坏血酸与L-半胱氨酸均可与Fe3-+邻菲咯啉混合液反应,生成Fe2-+邻菲咯啉有色配合物,但两者反应速度相差极大。根据这个原理,采用停流流动注射分析法。结果两者测定的线性范围分别为0~24mg.L-1和0~280mg.L-1,相应的检出限为1mg.L-1和16mg.L-1,抗坏血酸与L-半胱氨酸浓度分别为12.0mg.L-1和160.0mg.L-1时,测定的相对标准偏差分别为0.9%和0.6%,采样频率为30样.h-1。结论该法灵敏、快速、准确,选择性较高,且流路及设备简单,实用性强,抗坏血酸及L-半胱氨酸的加标回收率分别可达95.2%和92.8%。     

谷胱甘肽包被的CdTe量子点作为荧光探针测定微量银

目的：建立了一种以CdTe量子点为离子探针测定微量银的新方法。方法：选择谷胱甘肽作为表面修饰剂,合成水溶性CdTe量子点。根据Ag＋对CdTe量子点的荧光猝灭效应,用CdTe量子点作为荧光探针实现了对Ag＋的定量检测。结果：在0.000 1 mol/L、pH值为7.4的磷酸缓冲溶液中,当量子点浓度为0.004 g/L时,反应时间为5 min,体系的相对荧光强度与Ag＋浓度呈良好的线性关系,其线性范围为25.06～98.60μg/L,线性系数为0.995 7,检出限为0.15μg/L。结论：该法已成功应用于实体水样中微量银的测定。