表面等离子体共振生物传感器对病原菌快速检测研究

目的 建立基于表面等离子体共振(SPR)生物传感器的核酸检测技术,为实时、在线检测病原菌奠定技术基础.方法 应用SPR生物传感器实时在线分析系统,在传感器表面固定探针分子,对溶液中的靶序列进行杂交检测,研究该检测方法的灵敏度、特异性及可重复性等.结果 实验中建立的核酸检测方法能够实现对靶序列的实时检测,检测下限达4×102CFU/ml.结论 该实验建立的核酸检测方法,具有灵敏度高、特异性强、可重复性好等优点,SPR传感器技术在核酸杂交检测工作中有着广阔的应用前景.     

SM耐药结核杆菌rpsL88codon突变发夹探针检测研究

目的：应用发夹DNA探针检测结核杆菌耐链霉素（SM）rpsL88codon点突变，并对照测序结果。方法：运用软件Beacon designer设计rpsL88codon的发夹DNA探针，建立其扩增体系及发夹DNA探针芯片检测方法；比较相应扩增产物测序结果。结果：通过ScanArray Express观测到标准株及耐SM-PCR产物与发夹DNA探针杂交后信号区别明显；耐SM组rpsL88codon突变检出率为60％，发夹DNA探针检测方法与测序法符合率85％。结论：rpsL88codon突变是结核杆菌耐链霉素的主要原因之一，发夹DNA探针技术是一种高灵敏的核酸点突变检测技术，并与测序结果有较好的检测符合率。     

2005-2006年铜绿假单胞菌医院感染及耐药性分析

目的了解2005年1月-2006年12月医院铜绿假单胞菌感染分布及其对不同类型抗菌药物的耐药情况,以指导临床合理用药。方法采用法国生物梅里埃公司的API系统及VITEK2系统进行细菌鉴定,用K-B法及VITEK2进行药敏试验,用WHONET5.4软件分析病原菌的耐药性。结果铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均〉70%,对环丙沙星的耐药率最低,约30%。结论铜绿假单胞菌仍是医院病原菌感染的主要致病菌之一,加强耐药性监测,合理应用抗菌药物十分重要。     

EmbB303codon突变检测的液相荧光观测研究

目的设计针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB303codon的分子信标,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子信标与embB303codon扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacondesigner设计embB基因包含303codon的分子信标,应用荧光分光光度计检测embB303codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐乙胺丁醇embB303codonPCR产物与分子信标杂交后荧光信号存在显著差异;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB303codon突变检出率为6％,测序法突变检出率为6％。结论embB303codon点突变不是结核杆菌耐乙胺丁醇的主要原因;应用荧光分光光度计直接检测液相杂交荧光具有简单、灵敏等优点;分子信标技术可以有效检测单碱基靶点突变。     

肺炎克雷伯菌噬菌体的分离和生物学特性

目的以临床分离的肺炎克雷伯菌肺炎亚种为指示菌,从污水中分离出该菌的噬菌体,并对其基本生物学特性进行研究。方法以双层琼脂法从污水中分离噬菌体,电镜观察噬菌体颗粒,紫外线诱导和丝裂霉素C诱导法鉴定是否属于溶原性噬菌体,进行一步生长实验和最佳感染复数的测定,双层琼脂法测定宿主谱。结果从污水中分离出肺炎克雷伯菌肺炎亚种的噬菌体1株,电镜下该噬菌体头部直径约为180 nm,尾长约210 nm;噬斑透明,直径4-7 mm;最佳感染复数为4;一步生长曲线显示潜伏期为35 min,裂解期为40 min,裂解量为94 PFU/细胞。结论该噬菌体属长尾噬菌体科,是裂解性噬菌体,宿主谱较窄,仅对部分肺炎克雷伯菌肺炎亚种和少量大肠埃希菌敏感。     

血清多种肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值

目的 探讨多肿瘤标志物联合检测对肺癌诊断的临床价值.方法 应用蛋白芯片法检测肺癌组(n=1 021)及健康体检者(n=827)血清中糖类抗原19-9(CA19-9)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)及糖类抗原15-3 (CA15-3)的表达水平.结果 不同病理类型肺癌中,4种血清肿瘤标志物在非小细胞肺癌中的阳性率均明显高于小细胞肺癌,差异有统计学意义(P＜0.05).CA19-9、CEA、CA125及CA15-3 4种肿瘤标志物单项检测对肺癌诊断的敏感性、特异性均不高;联合检测时诊断敏感性未见明显改善,但随着联合检测标志物种类的增加,特异性明显增加,均在98％以上.4项联合检测时对肺癌诊断具有最高的特异性(100％).结论 CA19-9、CEA、CA125及CA15-3 4种肿瘤标志物联合检测能明显增加诊断的特异性.     

乙型脑炎病毒靶序列浓度对LSAW基因传感器检测系统的影响

目的 探讨乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis vires,JEV)靶序列浓度值对漏声表面波(LSAW)基因传感器检测系统的影响.方法 LSAW基因传感器表面固定终浓度为0.5 μmol/L的JEV探针,然后用pH 7.6的10 mmol/L PBS缓冲液(含Na+ 0.3 mol/L)中和终浓度为0.05、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 μmoL/L的JEV靶序列杂交,分别记录相位变化及反应所需时间.结果 与JEV探针反应引起的相位变化是先缓慢上升后趋于缓和的趋势,以1.0 μmol/L靶序列浓度为分界线;杂交平衡时间上除0.05 μmol/L的时间短以外,其他的未见明显变化趋势,当靶序列浓度为1.0 μmol/L,杂交反应平衡时间为33 min.结论 随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的相位变化呈典型的饱和曲线趋势;靶序列浓度为1.0 μmol/L、杂交反应的平衡时间为33 min,是LSAW基因传感器杂交的最适反应条件.     

应用荧光原位杂交技术对50例羊水标本产前诊断的研究

目的 探讨荧光原位杂交技术诊断未培养羊水细胞非整倍体的临床应用价值.方法 选用X、Y、13、18、2l号特异性探针对50例有产前诊断指征的孕妇进行羊水间期细胞的FISH分析及染色体核型分析.结果 被检50例羊水未培养细胞均获得诊断结果,检测出"21 三体"3例,检测结果与染色体核型分析及随访相符.结论 应用染色体特异性探针对羊水间期细胞进行FISH分析可用于胎儿染色体非整倍体的产前诊断,该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点.     

预防术后感染的新型外固定装置研制

目的 为降低骨科外固定架使用中术后感染的发生率,自行研制出扣合式全环外固定装置并进行其力学稳定性测试.方法 运用Solidworks软件设计外固定架,并用三维有限元方法和万能材料试验机对设计的全环外固定架进行测试,判断其抗轴向、侧向、扭转力稳定性,进而对全环外固定架的各项参数进行生物力学优化.结果 在力学性能上,发明的扣合式全环外同定装置在抗轴向稳定性上与现有的半环槽式外固定架差异无统计学意义(P0.05),但是前者在抗侧向、扭转力稳定性上要显著性由于后者(P<0.05);综合上述结果,证明发明的扣合式外固定装置的力学稳定性显著性优于半环槽式外固定架;其稳定性随着固定圆环个数、圆环间距、克氏针夹角的增加而增加,当克氏针夹角达到90度时固定效果最好.结论 扣合式全环外固定架在保留半环外固定架安装便捷的基础上,极大提高了其力学稳定性,不仅可极大缩短手术时间,减少围手术期医院感染的发生,而且可降低骨折愈合过程中发生针道感染的发生率.     

荧光原位杂交技术在膀胱癌诊断中的应用

目的 应用染色体特异性探针对尿脱落细胞进行FISH分析膀胱移行细胞癌的染色体畸变.方法 选用3、7、9、17号染色体特异性探针对50例膀胱移行细胞癌患者尿液的脱落细胞进行荧光原位杂交研究,并同时做细胞学检查.结果 膀胱癌患者尿液脱落细胞中3、7、9、17号染色体数目畸变阳性率分别为28%、32%、56%和38%,其中9号染色体畸变率较高,但与膀胱癌的分级无明显相关关系;3、7和17号染色体数日畸变与膀胱癌的分期密切相关.结论 膀胱癌的发生发展与染色体的畸变有关,应用FISH检测膀胱癌患者尿液细胞染色体数目畸变,可以作为膀胱癌诊断、预后判断的一项辅助方法,该方法具有快速、准确、灵敏度高的优点.