不同浓度丙泊酚对人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 研究不同浓度丙泊酚对人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 以人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞为研究对象，随机将其分为3组，即P₀组(为空白对照)、P₂₅组(给予25μg/mL丙泊酚)和P₅₀组(给予50μg/mL丙泊酚)。对3组细胞分别进行克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验、侵袭实验、划痕愈合实验，观察各组细胞的增殖、迁移、侵袭变化情况。采用Western blot法检测不同浓度丙泊酚对人乳腺癌胞Ki-67、PD-L1的蛋白表达水平的影响；RT-qPCR法检测不同浓度丙泊酚对Ki-67、PD-L1的RNA表达水平的影响。结果 与P₀组比较，P₅₀组人乳腺癌雌激素受体阳性MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭能力均升高，差异有统计学意义(P<0.05);与P₂₅组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。与P₀组相比，P₅₀组PD-L1、Ki-67蛋白表达水平升高，...     

沉默重组蛋白2对NCI-H1688细胞的抑制作用及其Wnt/β连环蛋白信号通路机制

目的：探讨T细胞淋巴瘤常见重排蛋白2（Frat2）通过Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路对小细胞肺癌NCI-H1688细胞增殖的影响,阐明其可能机制。方法：选取生长状态良好的人小细胞肺癌NCI-H1688细胞和正常支气管上皮样细胞HBE细胞,采用Western blotting法和逆转录实时荧光定量-聚合酶链反应（Real-Time RT-qPCR）法分别检测NCI-H1688细胞和HBE细胞中Frat2蛋白及mRNA表达水平。NCI-H1688细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、Frat2-siRNA组和Frat2-siRNA+XAV组。空白对照组细胞不转染,阴性对照组细胞转染阴性对照慢病毒,Frat2-siRNA组转染Frat2-siRNA慢病毒,Frat2-siRNA+XAV组转染Frat2-siRNA慢病毒并同时加入4 μmol·L^-1Wnt信号通路抑制剂XAV939。采用Western blotting法和Real-Time RT-qPCR法分别检测转染后各组细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平,采用MTT法检测各组细胞增殖活性,采用流式细胞术检测不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、c-myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、β-catenin和磷酸化糖原合成酶激酶3（pGSK-3β）蛋白表达水平。结果：与HBE细胞比较,NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组NCI-H1688细胞中Frat2蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组和阴性对照组比较,Frat2-siRNA组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;与Frat2-siRNA组比较,Frat2-siRNA+XAV组细胞增殖活性降低（P<0.05）,G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期和G₂/M期细胞百分率降低（P<0.05）,PCNA、c-myc、Cyclin D1、β-catenin和pGSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）;空白对照组与阴性对照组上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沉默Frat2可抑制小细胞肺癌细胞增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

内分泌腺性血管内皮生长因子对结肠癌LoVo细胞增殖和迁移的促进作用

目的：探讨内分泌腺性血管内皮生长因子（EG-VEGF）对结肠癌LoVo细胞相关恶性行为的影响。方法：采用不同浓度（50、100、200μg·L^-1） EG-VEGF处理的结肠癌LoVo细胞作为EG-VEGF组,采用不含EG-VEGF培养液培养的结肠癌LoVo细胞作为对照组。MTT法检测各组LoVo细胞的增殖活性,流式细胞术（FCM）检测各细胞周期LoVo细胞百分率,细胞划痕实验检测各组结肠癌LoVo细胞迁移率,Transwell实验检测各组结肠癌LoVo细胞迁移数。结果：MTT法,与对照组比较,50、100和200μg·L^-1EG-VEGF组LoVo细胞增殖活性明显升高（P<0.05）,且随着浓度的升高细胞增殖活性升高。FCM检测,与对照组比较,100μg·L^-1EG-VEGF组G₀/G₁期LoVo细胞百分率降低（P<0.05）,S期细胞百分率升高（P<0.05）,G₂+M期细胞百分率变化不明显。细胞划痕实验,100μg·L^-1EG-VEGF组LoVo细胞迁移率较对照组明显升高（P<0.05）。Transwell实验,50、100和200μg·L^-1EG-VEGF组结肠癌LoVo细胞迁移数较对照组明显升高（P<0.05）。结论：EG-VEGF可明显促进结肠癌LoVo细胞增殖和迁移,EG-VEGF可能与结肠癌的恶性发展有关联。     

脂联素通过分泌型卷曲相关蛋白2及相关通路缓解AngⅡ诱导的心肌肥厚

目的 探讨脂联素(APN)通过调控分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)及相关通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚的作用及机制。 方法 出生3d Wistar大鼠中分离出原代心室肌细胞(NRVMs)。采用免疫荧光法检测NRVMs的骨架蛋白α-SMA的表达。将提取的NRVMs分为空白组、1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组,检测不同浓度AngⅡ对NRVMs的作用。将NRVMs分为空白组、AngⅡ组、APN+AngⅡ组、AngⅡ+APN+si-sFRP2组、AngⅡ+APN+LiCl组、APN组、SP600125+AngⅡ组以及SB203580+AngⅡ组检测APN对AngⅡ作用的影响。采用Western blotting法检测各组细胞sFRP2的表达量以及Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活。采用qPCR法检测各组细胞心肌肥厚相关指标以及sFRP2的表达水平。 结果 在NRVMs中加入AngⅡ24 h后,与空白组相比,1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组ANP、BNP的表达升高(F_ANP=27.30, P=0.002;F_BNP=38.18, P=0.002),p-JNK和p-p38表达均升高(F_p-JNK=57.65,P<0.001; F_p-p38 =8.880,P=0.018),sFRP2的表达下调(F_AngⅡ=47.53,P<0.001)。加入APN预处理1 h后,与单加AngⅡ组相比,APN+AngⅡ组NRVMs心功能损伤标志物ANP、BNP的表达降低(F_ANP=101.8,P<0.001;F_BNP=51.14,P<0.001),sFRP2的含量上调(F=88.93,P<0.001),同时Wnt/β-catenin(F=41.33,P=0.006)及p38/JNK(F_p38=73.42,P<0.001;F_JNK=39.28,P=0.002)通路的激活被抑制。加入p38/JNK通路抑制剂后,能够达到APN预处理的效果(F_ANP=122.9, P<0.001; F_BNP= 202.3, P<0.001)。 结论 APN可能通过上调sFRP2,抑制Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活,从而抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚。     

β-雌二醇对宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的 探讨不同浓度β-雌二醇(E₂)对宫颈癌Hela细胞增殖的影响及机制。 方法 体外培养Hela细胞,根据E₂的浓度将其分为对照组、低浓度组、高浓度组。利用CCK8法和细胞克隆形成试验检测E₂对Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪检测E₂对细胞凋亡和周期的影响;Transwell法检测E₂对细胞迁移能力的影响;在对照组和高浓度组中,利用实时定量PCR(qRT-PCR)检测HPV18 E6、E7、p21、p53、CDK2、Rb基因的表达,Western blotting检测p21、p53、CDK2、Rb、Rb磷酸化(pRb)蛋白的表达。 结果 相比于对照组及低浓度组,高浓度组中细胞增长率降低(P<0.001),细胞克隆形成数量被抑制(P=0.013),细胞周期G0/G1期延长(P<0.001)。高浓度E₂可降低HPV18 E6/E7 mRNA表达水平(P=0.049,P=0.043),并下调CDK2、Rb mRNA和蛋白表达水平(P_{CDK2 mRNA}=0.035,P_{Rb mRNA}=0.003,P_CDK2蛋白=0.009,P_Rb蛋白=0.008),上调p21、p53 mRNA和蛋白表达水平(P_{p21 mRNA}=0.042,P_{p53 mRNA}=0.035,P_p21蛋白=0.039,P_p53蛋白=0.043),同时下调pRb蛋白表达水平(P<0.001)。 结论 高浓度E₂能够抑制Hela细胞增殖,其机制可能与抑制HPV18 E6/E7癌基因、促进p53和p21蛋白的表达、调节细胞周期蛋白(CDK2、Rb)的水平进而影响正常细胞周期进程有关。     

雌二醇对Th1细胞极化与肝纤维化形成的影响

目的 探讨雌二醇(E₂)对Th1细胞极化以及与肝纤维化发生的影响。 方法 根据E₂水平将47例肝纤维化患者分为A组(E₂增高组)19例和B组(E₂正常组)28例,阴性对照作为C组(正常人)30例。应用流式细胞术检测T细胞亚群,化学发光法检测透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢP)和Ⅳ型胶原(CⅣ);ELISA法检测干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)和白介素-10(IL-10),比较A、B组之间以及与C组的差异。 结果 A组E₂高于C组和B组(P<0.001)。A组HA、LN、PⅢP、CⅣ均高于C组(P<0.001, P=0.001, P=0.006, P<0.001),B组HA、LN、PⅢP、CⅣ也高于C组(均为P<0.001);A组PⅢP高于B组(P=0.045)。A组CD3⁺T细胞低于C组和B组(P<0.001, P=0.001),CD4⁺T细胞也低于C组和B组(P<0.001, P=0.024),B组CD3⁺、CD4⁺T细胞低于C组(P=0.002, P<0.001);A组、B组CD8⁺T细胞高于C组(P=0.001, P=0.012)。A组IFN-γ高于C组和B组(均为P<0.001),IL-2也高于C组和B组(P<0.001, P=0.003),B组高于C组(P=0.001, P=0.012);A组IL-4低于C组和B组(P=0.002, P=0.016),IL-10也低于C组和B组(P<0.001, P=0.012)。 结论 高E₂在延缓肝纤维化形成的同时也通过Th1细胞极化影响着机体的免疫功能,加速了肝纤维化的发展,E₂在肝纤维化的形成过程中扮演了双重角色。     

骨化三醇对哮喘中TGF-β1所诱导上皮间充质转化的调控作用

目的 探究骨化三醇对TGFβ1所诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)上皮-间充质转化(EMT)的影响,为哮喘气道重塑的防治提供理论依据。 方法 筛选TGF-β1作用于BEAS-2B,诱导EMT的最佳时间,将细胞分为空白组与24、48、72 h TGF-β1组;筛选TGF-β1作用于BEAS-2B,诱导EMT的最佳浓度,将细胞分为空白组与0.1、1、10、100 ng/mL TGF-β1组;加入骨化三醇预处理BEAS-2B细胞,将细胞分为空白组、TGF-β1组、骨化三醇组、TGF-β1+骨化三醇组。Western blotting检测各组细胞E-Cadherin、N-Cadherin、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达量;Transwell法和划痕试验检测各组细胞的迁移能力。 结果 Western blotting结果显示,空白组与24、48、72 h TGF-β1组细胞E-Cadherin蛋白表达量总体差异均有统计学意义(F=53.245, P<0.001),N-Cadherin蛋白表达量的总体差异有统计学意义(F=54.429, P<0.001);与空白组相比,1、10、100 ng/mL TGF-β1组细胞E-Cadherin蛋白表达量总体差异有统计学意义(F=27.368, P<0.001),N-Cadherin蛋白表达量的总体差异有统计学意义(F=14.272, P<0.001),其中10 ng/mL TGF-β1处理细胞48 h,与空白组比较差异最为显著;TGF-β1可激活PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达,以及诱导BEAS-2B间质标志物的表达,TGF-β1主效应差异有统计学意义(P<0.001);加入骨化三醇预处理,可减弱TGF-β1所激活的PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达,亦可减弱TGF-β1所诱导的BEAS-2B间质标志物的表达,骨化三醇主效应差异有统计学意义(P<0.001),TGF-β1与骨化三醇不存在交互作用(P>0.05);Transwell检测结果和划痕试验结果表明,TGF-β1处理组BEAS-2B细胞迁移能力较空白组增强(P<0.001),与TGF-β1组相比,TGF-β1+骨化三醇组BEAS-2B细胞迁移能力减弱(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论 骨化三醇可抑制TGF-β1所诱导的BEAS-2B EMT,从而减轻哮喘气道炎症和气道重塑的发生;这一过程可能与骨化三醇抑制TGF-β1所激活的PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白有关。     

干扰MAD2L1基因表达对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)基因表达对乳腺癌(BC)细胞凋亡的影响及其机制。 方法 采用qRT-PCR检测正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和4种BC细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3和BT-20)中MAD2L1 mRNA表达水平。将MAD2L1 siRNA转染至MDA-MB-231细胞中,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中MAD2L1 mRNA和蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术法检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK(Thr180/Thr182)和p38MAPK等蛋白表达水平。采用p38MAPK抑制剂SB203580联合处理上述细胞,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率的变化;Western blotting检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK和p38MAPK表达水平的变化。 结果 BC细胞系中MAD2L1 mRNA表达水平高于MCF-10A细胞,其中MDA-MB-231细胞最为显著。干扰MAD2L1基因可降低MDA-MB-231细胞中MAD2L1 mRNA和蛋白表达水平(t_mRNA=10.51,P_mRNA<0.001;t_蛋白=18.30,P_蛋白<0.001),同时抑制细胞增殖(F_组别=243.36、F_时间=44.00、F_{组别×时间}=9.881,P均<0.001),促进细胞凋亡(t=9.10,P<0.001),并上调Bax、cleaved-caspase-3和p-p38MAPK蛋白表达水平(t_Bax=15.05,P_Bax<0.001;t_{cleaved-caspase-3}=5.26,P_{cleaved-caspase-3}=0.006;t_p-p38MAPK=28.46,P_p-p38MAPK<0.001),下调Bcl-2蛋白表达水平(t_Bcl-2=14.23,P<0.001)。然而,SB203580处理可抑制MAD2L1基因干扰对MDA-MB-231细胞凋亡的诱导作用(P=0.002)。 结论 干扰MAD2L1基因表达可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与激活p38MAPK信号通路有关。     

敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的：探讨敲低EphB1基因对过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法：体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组（不做任何处理）、H₂O₂组（H₂O₂细胞损伤）、阴性对照组（转染siRNA control）和转染si-EphB1组（转染si-EphB1后H₂O₂细胞损伤）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧（ROS）水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：与空白组比较,H₂O₂组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,ROS和MDA水平升高（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）,而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,ROS和MDA水平降低（P<0.05）,SOD水平升高（P<0.05）。结论：敲低EphB1基因能够抑制H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。     

人脐带间充质干细胞外泌体miR-100对多囊卵巢综合征患者颗粒细胞炎症的影响

目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)来源的外泌体miR-100对多囊卵巢综合征(PCOS)患者颗粒细胞炎症的影响。 方法 选取2021年3月至2021年12月于石家庄市第四医院生殖医学中心就诊的70例PCOS患者为研究对象(PCOS组),同期70例因输卵管因素助孕治疗的非PCOS患者为对照(对照组),比较两组患者的临床基线资料及IVF妊娠结局相关参数。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测患者颗粒细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达。采用二元Logistic回归分析影响PCOS的危险因素。RT-qPCR验证hUC-MSCs外泌体中miR-100的表达水平。合成miR-100模拟物及其对照转染至人卵巢颗粒细胞KGN中,RT-qPCR检测miR-100的表达水平。在脂多糖(LPS)诱导的KGN炎症细胞模型中转染miR-100模拟物及其对照,RT-qPCR检测TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平。采用双荧光素酶报告基因系统检测miR-100对靶基因的调控作用。miR-100过表达后,Western blotting检测KGN炎症模型中Toll样受体4(TLR4)、 p-IκBa、IκBa、p-p65、 p65蛋白水平。 结果 与对照组比较,PCOS组患者体质量指数(BMI)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E₂)、睾酮(T)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、窦卵泡数(AFC)、获卵数升高(P值分别为<0.001、<0.001、0.020、<0.001、<0.001、<0.001、<0.001);但MII卵率和2PN受精率降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。与对照组患者比较,PCOS组患者TNF-α、IFN-γ的mRNA水平升高,差异有统计学意义(P均<0.001)。二元Logistic回归分析结果显示,LH、HOMA-IR、TNF-α、IFN-γ是影响PCOS的危险因素(P值分别为0.031、0.001、0.030、0.005)。RT-qPCR结果显示,miR-100在hUC-MSCs-exos中富集,miR-100过表达可抑制LPS诱导的颗粒细胞炎症因子TNF-α、IFN-γ的mRNA表达水平(P值分别为0.041、<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-100能结合TLR4 mRNA 3’UTR并有效抑制其表达(P<0.001)。Western blotting结果显示,与miR-NC组比较,过表达miR-100后KGN炎症模型中TLR4、 p-IκBa和p-p65蛋白表达降低(P值分别为<0.001、<0.001、0.049),IκBa蛋白水平升高(P<0.001)。 结论 PCOS患者颗粒细胞TNF-α、IFN-γ表达升高,是影响PCOS的危险因素。hUC-MSCs来源的外泌体miR-100可通过靶向TLR4/NF-κB信号通路抑制PCOS颗粒细胞的炎症反应。     

PC12细胞中Vd介导的SPHK1/S1P通路及其在EAE中的潜在功能

目的 探讨维生素D(V_d)通过鞘氨醇激酶1(SPHK1)影响1-磷酸鞘氨醇(S1P)的合成从而对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病过程产生的影响。 方法 体外培养PC12细胞,分别用不同浓度的V_d对PC12细胞进行刺激,分为0、6.25、12.5、25、50、100 nmol/L V_d 组。Western blotting检测SPHK1表达量;RT-PCR检测SPHK1 mRNA的表达;ELISA检测S1P合成量。 结果 加入药物V_d刺激PC12细胞24 h后,不同浓度的V_d组SPHK1表达量较0 nmol/L V_d组减少(P<0.05);RT-PCR检测结果显示,不同浓度的V_d组SPHK1较0 nmol/L V_d 组mRNA亦有下调(P<0.05);不同浓度的V_d组S1P合成量较0 nmol/L V_d 组减少(P<0.05)。 结论 V_d可能通过调节SPHK1的表达来影响S1P的合成,以缓解EAE的发病进程。     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

白藜芦醇对肝癌HepG2细胞中脂肪合成的抑制作用及其机制

目的：探讨白藜芦醇（Res）对肝癌HepG₂细胞脂肪合成的影响,阐明其可能机制。方法：体外培养HepG₂细胞,分为Res组（40μmol·L^-1DMSO稀释的Res作用24h）和对照组（相同浓度的DMSO作用24h）。收集细胞上清,ELISA法检测2组细胞中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）水平。采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）和Western blotting法分别检测2组细胞中脂肪合成酶乙酰辅酶A羧化酶（ACC1）、脂肪酸合成酶（FASN）、硬脂酰辅酶A去饱和酶（SCD1） mRNA和蛋白表达水平,采用Western blotting法检测2组细胞中氧链接N乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化水平。结果：与对照组比较,Res组细胞中TG和TC水平均下降,但差异无统计学意义（t₁=1.886,P<0.05;t₂=2.457,P>0.05）;与对照组比较,Res组细胞中ACC1、FASN、SCD1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,O-GlcNAc糖基化水平明显降低（t=2.87,P<0.05）。结论：Res具有抑制肝癌HepG₂细胞脂肪合成的作用,其机制可能与降低细胞中O-GlcNAc糖基化水平和FASN表达有关。     

LPS对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化的诱导作用及其对β-catenin表达的影响

目的：探讨脂多糖（LPS）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞中上皮间质转化（EMT）标志物及β-连环素（β-catenin）表达的影响,阐明其可能机制。方法：人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为对照组和不同浓度（5、10、20和40 mg·L^-1）LPS组,倒置显微镜观察各组MDA-MB-231细胞的形态表现,免疫荧光实验检测各组MDA-MB-231细胞中β-catenin表达及定位,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和β-catenin mRNA及蛋白表达水平。结果：对照组MDA-MB-231细胞形态表现为上皮细胞表型,不同浓度LPS组MDA-MB-231细胞形态表现为间质细胞表型。免疫荧光实验,β-catenin表达定位主要在细胞核。与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中Vimentin和β-catenin mRNA及蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,以20 mg·L^-1LPS组升高最为明显;与对照组比较,不同浓度LPS组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,以20 mg·L^-1 LPS组降低最为明显。结论：LPS通过下调E-cadherin表达、上调Vimentin表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞发生EMT、侵袭和转移,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

阻断Wnt信号通路对人绒毛膜癌细胞株JEG-3迁移及侵袭能力的影响

目的 观察阻断Wnt信号通路后,人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞迁移及侵袭能力的影响.方法 将人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞传代后,按完全随机法分为实验组和对照组,每组6孔.实验组在常规细胞培养基础上,给予外源性Wnt 信号通路阻断剂DKK-1(100 ng/mL),对照组加入同体积细胞培养基.运用蛋白印迹法(Western blot法)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组细胞中β-catenin、Wnt、E-cadherin、Vimentin 等蛋白及mRNA的表达;采用划痕实验、Transwell实验观测两组细胞迁移及侵袭能力的变化.结果 与对照组相比,实验组β-catenin、Wnt、Vimentin蛋白及mRNA的表达均降低,E-cadherin蛋白及mRNA的表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05);实验组肿瘤细胞迁移及穿膜细胞数较对照组均降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断Wnt信号通路可抑制肿瘤细胞上皮-间充质转化过程,进而降低人绒毛膜癌细胞株JEG-3细胞的迁移及侵袭能力.     

宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移和侵袭的影响及其Wnt/β-catenin信号通路机制

目的：探讨宫颈癌HeLa细胞外泌体对细胞迁移、侵袭及Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响,阐明其外泌体在宫颈癌发生发展过程中的可能作用机制。方法：取对数生长期宫颈癌HeLa细胞,采用超速离心法分离宫颈癌HeLa细胞外泌体,透射电镜下观察外泌体形态表现,Western blotting法检测外泌体标志蛋白CD63和CD81的表达,鉴定分离出来的外泌体。将HeLa细胞分为外泌体组（Exo组）和对照组,2组细胞分别用含和不含HeLa细胞外泌体的培养基培养。共聚焦显微镜下观察HeLa细胞摄取外泌体情况,其中外泌体采用PKH26荧光标记,HeLa细胞用DAPI荧光进行核染色,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验测定细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞中Wnt1、β-catenin和T细胞因子4（TCF4）蛋白表达水平。结果：透射电镜下观察,HeLa细胞中分离的外泌体为是圆形或椭圆形、直径为40~100 nm的囊泡状小体,且富含CD63和CD81蛋白。共聚焦显微镜下观察,Exo组HeLa细胞膜表面有外泌体附着,而对照组HeLa细胞膜表面无外泌体附着。Transwell小室实验,Exo组HeLa细胞中侵袭细胞数明显高于对照组（t=17.894,P<0.01）。细胞划痕实验,Exo组HeLa细胞迁移距离明显长于对照组（t=9.689,P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,Exo组HeLa细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin和TCF4蛋白表达水平均明显升高（t=13.159,P<0.01;t=15.478,P<0.01;t=7.734,P<0.01）。结论：宫颈癌HeLa细胞来源的外泌体可促进宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与HeLa细胞来源外泌体可促进Wnt/β-catenin信号通路的激活及下游TCF4基因的表达有关。     

形觉剥夺性近视模型大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1表达及Wnt/β-catenin信号通路的调控作用

目的：构建形觉剥夺性近视（FDM）大鼠模型,阐明FDM大鼠巩膜成纤维细胞中转化生长因子β1（TGF-β1）的表达及其与Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的关系。方法：40只大鼠随机分为对照组和FDM模型组,每组20只,FDM模型组大鼠建立FDM模型。测定大鼠眼轴长度;取大鼠眼球分离巩膜组织,采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定大鼠巩膜组织中TGF-β1蛋白和mNRA表达水平。分离培养对照组和FDM模型组大鼠巩膜成纤维细胞,对照组大鼠巩膜成纤维细胞作为对照组,FDM模型组大鼠巩膜成纤维细胞分为FDM组和FDM+Dickkopf相关蛋白1（DDK1）组（加入DDK1培养）,采用Western blotting法和RT-PCR法测定各组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、3型核糖核酸酶（DCL3）、结肠腺瘤样息肉蛋白（APC）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）、p21-GSK3β和β-catenin蛋白及mRNA表达水平。结果：与对照组比较,FDM组大鼠眼轴长度均明显增加（P<0.05）,巩膜组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）。对照组、FDM组和FDM+DDK1组大鼠巩膜成纤维细胞中GSK3β蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）,TGF-β1、DCL3、APC、p21-GSK3β和β-catenin蛋白及mRNA表达水平比较差异有统计学意义（P<0.01）;与对照组比较,FDM组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、APC蛋白和mRNA表达水平降低（P<0.05）,DCL3、p21-GSK3β、β-catenin蛋白和mRNA表达水平升高（P<0.05）;与FDM组比较,FDM+DDK1组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、APC蛋白和mRNA表达水平升高（P<0.05）,DCL3、p21-GSK3β、β-catenin蛋白和mRNA表达水平降低（P<0.05）。结论：FDM模型大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1表达水平降低,其水平受Wnt/β-catenin信号通路调控。     

主动灌注与分流栓在猪急性心肌缺血模型中心肌保护作用比较

目的 建立猪急性心肌缺血模型,并对比主动灌注法与分流栓(shunt)法对缺血心肌的保护作用。方法 将30只体重在50～60 kg的雄性猪随机分为5组:对照组、A1(shunt-55%狭窄)组、A2 (shunt-75%狭窄) 组、B1 (主动灌注-55%狭窄) 组、B2 (主动灌注-75%狭窄) 组,(n=6)。手术组缝扎前降支近端部分管腔,分别建立55%、75%冠脉狭窄模型后,检测主动脉压(P₀)力与狭窄后冠脉灌注压(P₁),计算出冠脉有效灌注压(P₁/P₀);Elisa法检测各组血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶-同I酶(CK-MB)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的含量。结果 冠状动脉前降支血管部分缝扎法成功建立了冠状动脉狭窄55%、75%的心肌缺血模型。模型建立成功30 min(或ST段抬高1 mm)后,与对照组相比,手术狭窄组的有效灌注压(P₁/P₀)均显著下降(P＜0.01),TNF-α、cTnI、Mb、CK-MB、IL-6、IL-10显著上升(P＜0.01)。与A组相比,B组的有效灌注压(P₁/P₀)显著增加(P＜0.01),TNF-α、cTnI、Mb、CK-MB、IL-6、IL-10显著降低(P＜0.01),提示B组心肌损伤程度低于A组。结论 与传统的shunt法相比,主动灌注法可以更好的维持心肌灌注压力,提高心肌保护效果。     

体位性心动过速综合征儿童及青少年在直立试验中血流动力学变化

目的 分析体位性心动过速综合征(postural tachycardia syndrome, POTS)儿童及青少年直立试验过程中血流动力学变化及不同心脏指数(cardiac index, CI)患者血流动力学指标的差异。方法 回顾性分析26例POTS患者与12例健康对照者间直立试验过程中总外周血管阻力指数(total peripheral vascular resistance index, TPVRI)、心率和血压的变化,并比较两组间各指标变化趋势。根据每位POTS患者直立试验过程中CI变化趋势将患者分为CI降低组(14例)与CI未降低组(12例), 分析两组患者在直立试验过程中CI、TPVRI、心率、血压变化,并比较两组间各指标变化趋势。结果 POTS患者在直立试验过程中CI显著下降(F=6.936, P=0.001), 心率明显增快(F=113.926, P <0.001),收缩压明显降低(F=6.049, P <0.001),而TPVRI (F=2.031, P=0.138)和舒张压(F=2.018, P=0.113)无明显变化。健康对照组CI在直立后显著升高(F=3.646, P=0.016),同时心率明显增快(F=43.970, P<0.001),收缩压(F=4.043, P=0.020)和舒张压(F=8.627, P<0.001)均明显升高,TPVRI (F=1.688, P=0.190)无明显变化。POTS患者与健康对照组比较,CI (F=6.221, P=0.001)、心率(F=6.203, P<0.001)和收缩压(F=7.946, P<0.001)随时间变化趋势显著不同,而TPVRI和舒张压在两组间的变化趋势差异无统计学意义(P>0.05)。CI降低组与CI未降低组POTS患者在直立试验中CI变化趋势差异有统计学意义(F=14.723, P<0.001), 前者直立后收缩压明显降低(F=8.010, P<0.001),而后者却无明显变化(F=0.612, P=0.639), TPVRI、心率和舒张压在CI降低组与CI未降低组间随时间变化趋势差异无统计学意义(P>0.05)。年龄是POTS患者直立后CI呈下降趋势的独立影响因素(P=0.013, OR=2.233; 95% CI:1.183~4.216)。结论 POTS患者在直立试验过程中存在明显的血流动力学变化,不同患者心输出量变化可能不同,年龄是心输出量下降的独立影响因素。     

酮咯酸氨丁三醇联合丙泊酚对老年患者无痛胃镜检查血流动力学及应激反应的影响

目的 探讨酮咯酸氨丁三醇联合丙泊酚对老年患者无痛胃镜检查术血流动力学及应激反应的影响。方法 按照随机数字表法将120例需进行无痛胃镜检查的患者分为观察组(酮咯酸氨丁三醇联合丙泊酚组)和对照组(单纯丙泊酚组),每组各60例。最终入选观察组58例、对照组59例。检测两组患者麻醉前(T₀)、置入胃镜时(T₁)、术毕(T₂)血清中血糖(BG)、肾上腺素(E)、皮质醇(Cor)的含量并记录两组患者各时间点MAP、HR、S_PO₂的变化;记录两组患者丙泊酚用量、术后清醒时间并对麻醉效果进行评价;观察并记录术中病人出现的不良反应。结果 与T₀时相比,两组患者在T₁和T₂时的BG、E、Cor均增加,特别是两组T₁时的E、Cor与T₀时比较显著增加(P<0.01);观察组在T₁时的 E、Cor与对照组比较均明显降低(P<0.05)。对照组T₁时的MAP和T₁、T₂时的HR与T₀相比均明显增加(P<0.05或<0.01);观察组T₁、T₂时的MAP、HR与对照组比较均明显降低(P<0.05或<0.01)。两组患者麻醉效果优良率、丙泊酚用量、术后清醒时间及不良反应发生率组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或＜0.01)。结论 异丙酚联合酮咯酸氨丁三醇用于老年病人胃镜检查,麻醉效果安全、可靠,能够有效减轻应激反应,检查过程中生命体征平稳、不良反应发生率低。