慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能状态与乙型肝炎病毒载量的关系

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞功能状态与乙型肝炎病毒（HBV）载量的关系。方法采集23例CHB患者和8例健康人的抗凝外周静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），在重组人白细胞介素4和重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的作用下培养使DCs增殖、成熟，以间接免疫荧光流式细胞技术分别检测DCs表面CD8O、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达；以ELISA法检测DCs培养上清液中IL-12的水平；将培养成熟的DCs与HBsAg共同孵育，用丝裂霉素C处理后再与自体PBMCs共同培养，在培养结束前12h加入OH-TDR，收集细胞，以β液闪计数仪测定cpm值；同期用定量聚合酶链反应技术测定CHB患者外周血HBV载量。结果23例患者DCs表面CD86、HLA-DR和ICAM-I的表达水平，DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平均显著低于健康对照组：CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0.01，P〈0.01．P〈0.001和P〈0.001）；DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平也与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0.001和P〈0.01）。结论CHB患者外周血DCs的成熟和功能存在障碍，DCs的功能状态与血液中HBV的载量密切相关，并可能对HBV的清除产生重要的影响。     

CD28+/CD152+:B7协同刺激分子在重症肺炎免疫紊乱发病机制中的作用研究

目的 研究CD28+/CD152+:B7协同刺激分子在重症肺炎免疫紊乱发病机制中的可能作用.方法 以流式细胞术分析22例重症肺炎外周血中CD3+T细胞上CD28+、CD152+表达及CD14+单核细胞上的CD86+、HLA-DR+表达.评价CD28+、CD152+、CD86+与HLA-DR+相关性;APACHE Ⅱ评分和CD28+、CD152+、CD86+、HLA-DR+表达的相关性.结果 重症肺炎病人入院24 h内CD3+T细胞及CD86+,HLA-DR+表达较正常对照组显著减少(P＜0.05);CD28+、CD152+表达较正常对照组显著增加(P＜0.05);CD8+CD3+、CD4+ CD3+阳性的T细胞无显著变化(P＞0.05).存活组重症肺炎入院第10天和第1天比较APACHE Ⅱ评分显著减少(P＜0.01);CD28+、CD152+、CD86+、HLA-DR+表达显著升高(P＜0.05);CD3++T细胞也显著增加(P＜0.05);CD8+ CD3+,CD4+ CD3+阳性的T细胞无显著变化(P＞0.05).重症肺炎协同刺激分子CD28+与HLA-DR+无显著相关(r=-0.12,P＞0.05),与APACHE Ⅱ评分无相关(r=-0.30,P＞0.05);协同刺激分子CD152+与HLA-DR+呈正相关(r=0.61,P＜0.01),与APACHE Ⅱ评分无相关(r=0.15,P＞0.05);协同刺激分子CD86+与HLA-DR+呈正相关(r=0.65,P＜0.01),与APACHE Ⅱ评分无相关(r=-0.38,P＞0.05).结论 重症肺炎患者外周血中T细胞协同刺激分子表达异常:CD86+下降,而CD28+、CD152+升高,重症肺炎患者外周血T细胞处于"无能"状态;重症肺炎患者恢复期CD28+、CD86+、CD86+、HLA-DR+升高,提示适度的特异性免疫有利于重症肺炎患者康复.CD86+、CTLA4与HLA-DR+相关,进一步说明CD28+/CD152+:B7协同刺激分子可能与重症肺炎的发生、发展有关.     

含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸对人外周血树突状细胞抗肿瘤作用的影响

目的：研究含未甲基化CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN)对人外周血树突状细胞(dendritic cells，DC)分化、成熟及其抗肿瘤作用的影响。方法：分离正常人外周血DC,透射电镜观察CpG ODN刺激组和未刺激组DC的超微结构，流式细胞仪分析其表面HLA-DR、CD86的表达，MTT法检测其对同种异体混合淋巴细胞反应(mixed—lymphocyte reactor，MLR)中T细胞增殖的影响及调节T细胞杀伤肿瘤的能力。结果：与未刺激组相比，CpG ODN刺激组DC表面突起细、长且规则，粗面内质网增多，空泡减少甚至消失；同时DC表面HLA-DR、CD86的表达上调，能明显促进MLR中T细胞的增殖，增强DC调节T细胞杀伤肿瘤活性：结论：CpG ODN可诱导人外周血DC分化成熟，增强DC调节T细胞杀伤肿瘤活性。     

慢性乙肝患者及HBV携带者CD8^＋T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达研究

目的研究慢性乙肝（CHB）患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8＋T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况,并探讨其与疾病进展的关系。方法收集32例经阿德福韦酯治疗的CHB患者,31例HBV携带者和28例正常对照,采集CHB患者治疗前后及HBV携带者和正常对照外周血。采用流式细胞术检测CD4＋和CD8＋T细胞数量和比例,以及CD8＋CD38＋和CD8＋HLA-DR＋T细胞比例,HBV DNA和生化由本院检验室检测。结果 CHB患者治疗前CD8＋CD38＋T细胞比例显著高于HBV携带者和正常对照组,阿德福韦酯治疗后显著降低（P〈0.05）。HBV携带者CD8＋CD38＋T细胞比例高于正常对照组（P〈0.05）。CHB患者治疗前CD8＋HLA-DR＋T细胞比例显著高于正常对照组（P〈0.01）,但与HBV携带者无明显差异,阿德福韦酯治疗后显著下降,仍高于正常水平（P〈0.05）。结论 HBV感染可以引起CD8＋T活化水平显著升高,阿德福韦酯抗病毒治疗能够降低CD8＋T的活化。CD8＋T活化水平是良好的HBV感染病情评价指标。     

慢性乙型肝炎患者树突状细胞培养与功能检测方法

目的:建立从人外周血分离培养树突状细胞(dendritic cell,DC)及检测其表型与诱导淋巴细胞增殖能力的方法.方法:从未接受抗病毒治疗的CHB患者外周血中分离单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的完全培养基中诱导培养为DC,流式细胞仪检测细胞表型,混合淋巴细胞反应检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力.结果:CHB患者外周血单核细胞,在体外可诱导出具有典型形态及生物学活性的DC.患者DC的HLA-DR、CD80、CD86的表达率分别为(44.77±8.127)%、(36.65±6.867)%、(32.16±6.340)%,CHB患者DC刺激淋巴细胞增殖的SI为1.39±0.375.与正常人DC相比明显降低(P<0.01).结论:CHB患者单个核细胞能被诱导培养为DC;通过检测DC表型和刺激淋巴细胞增殖能力可以了解CHB患者抗HBV免疫功能.     

核因子-κB圈套寡核苷酸转染对小鼠成熟树突状细胞生物学特性的影响

目的 探讨核因子KB圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)转染对小鼠成熟树突状细胞(DCs)生物学特性的影响.方法 体外诱导Balb/c小鼠骨髓细胞生成未成熟DCs(imDCs),经抗原OVA以及LPS孵育后成为OVA冲击的骨髓来源成熟nCs(mDCs),流式细胞仪检测DCs表面分子CDllc以及MHC-Ⅱ的表达予以鉴定;将NF-KB decoy ODN体外转染小鼠骨髓来源成熟DCs,同时设立阴性对照组(转染NF-KB"变异"ODN)以及未转染组,EMSA检测转染后NF-KB的活性变化;流式细胞仪检测各组DCs表面共刺激分子(CIMO、CDSO、CD86)的表达;混合淋巴细胞反应观察各组DCs对OVA致敏的T淋巴细胞增殖的影响.结果 成功培养出骨髓来源成熟DCs;NF-κB decoy ODN转染DCs的NF-KB活性明显降低(P<0.05),DCs表面CD40、CDS0共刺激分子的表达与阴性对照组、未转染组比较无明显改变(P0.05),而CD86的表达与其他各组比较明显降低(P<0.05);在混合淋巴细胞反应中,NF-KB decoy ODN转染DCs对T细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),而阴性对照组与未转染组的DCs具有强烈的激发T细胞增殖的能力(P<0.05).结论 NF-KB decoy ODN转染DCs可能通过CD86的表达降低显著抑制抗原特异性T细胞活化,该改良的DCs有可能用于哮喘的免疫治疗.     

慢性粒细胞白血病患者树突状细胞抗原加工递呈和迁移功能观察

目的:研究细胞因子体外联合诱导培养的慢性粒细胞白血病(CML)患者树突状细胞(DCs)的表型和抗原递呈、分泌和迁移功能的变化.方法:分离CML患者(CML组)和健康志愿者(正常组)外周血单个核细胞(PMNCs),经培养获取贴壁细胞,将CML组和正常组的贴壁细胞及K562细胞用细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α体外诱导10 d后,流式细胞仪检测细胞的免疫表型;培养5 d后,用ELISA检测细胞的内吞功能;应用混合淋巴细胞培养分析3组DCs对静息T细胞的免疫刺激活性.结果:正常组、CML组、K562组DCs的特异性标志CD83和共刺激分子标记CD80和CD86以及CD11和HLA-DR的表达差异无统计学意义(P＞0.05);DCs的抗原吞噬、迁移能力和对T细胞的免疫刺激活性,CML组和K562组之间差异无统计学意义(P＞0.05),CML组和正常组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CML患者DCs的免疫表型和正常人相似,但其抗原捕获、递呈和迁移功能有缺陷.     

IL-4调控DC-SIGN表达对树突状细胞免疫学功能的影响及与结核病发生的关系

目的 研究IL-4调控树突状细胞特异性非整合素(dendritic-cell specific ICAM-3 grabbing non-integrin,DC-SIGN)的表达对树突状细胞免疫学功能的影响,以探讨DC-SIGN表达与结核病发生的关系.方法 用不同剂量的IL-4(5、10、50、100、200 ng/ml)调控DCs表面DC-SIGN的表达水平;根据加入IL-4剂量将DCs分为5ng/ml组和50 ng/ml组,分别加入100 ng/ml的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、结核杆菌H37Rv菌悬液共培养.应用流式细胞仪检测各组DCs表型(CD11c、DC-SIGN、CD83、CD86、HLA-DR),ELISA法检测细胞培养液中IL-12、IL-10含量,混合淋巴细胞培养法检测各组DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果 ①IL-4能调控DC-SIGN的表达水平,并呈剂量依赖性,当加入IL-4的剂量由5 ng/ml增加到50ng/ml时,DC-SIGN的表达水平显著增加(P＜0.05).当IL-4的剂量由50 ng/ml增至200 ng/ml时,DC-SIGN的表达水平虽仍随IL-4剂量增加而增加,但差异无统计学意义(P＞0.05).②表达不同水平DC-SIGN的DCs成熟度无显著差异(P＞0.05).③表达不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS、H37Rv诱导后,培养液中IL-12含量无显著差异(P＞0.05),加入LPS诱导后培养液中IL-10含量也无显著差异(P＞0.05),但DC-SIGNhigh-DCs加入H37Rv诱导后培养液中IL-10含量明显高于DC-SIGNlow-DCs(P＜0.05).④表达不同水平DC-SIGN的DCs加入LPS诱导后刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力差异无统计学意义(P＞0.05).DC-SIGNhigh-DCs加入H37Rv诱导成熟后与DCs加入LPS诱导成熟后刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力相当(P＞0.05),但DC-SIGNlow-DCs加入H37Rv诱导后刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力明显低于其他3组(P＜0.05).结论 DC-SIGNhigh-DCs加入H37Rv诱导后分泌IL-10水平明显高于DC-SIGNlow-DCs,但DC-SIGNlow-DCs加入H37Rv诱导后刺激T淋巴细胞增殖的能力明显降低.DC-SIGN表达过高或过低均不利于机体抗结核免疫应答.     

甲状腺相关眼病患者与正常人眼眶前脂肪细胞表面抗原表达的比较

目的:研究甲状腺相关眼病(TAO)与正常人眼眶前脂肪细胞表面抗原的表达.方法:采用组织块培养法对TAO和正常人的眼眶前脂肪细胞进行体外培养,用流式细胞术对其细胞表面抗原CD29,CD44,CD49d,HLA-DR进行检测.结果:TAO和正常人眼眶前脂肪细胞均表达CD29,CD44和CD49d,TAO患者较正常人表达HLA-DR明显增强(P＜0.05).结论:TAO患者与正常人的眼眶前脂肪细胞均来源于间充质干细胞,TAO的眼眶前脂肪细胞可能参与了TAO的眶内炎症.     

产后甲状腺炎患者树突状细胞免疫功能的研究

目的 通过对产后甲状腺炎(PPT)患者外周血树突状细胞(DCs)免疫功能及状态的观察,探讨DCs与PPT发生发展的关系.方法 用流式细胞术(FACS)分别检测经培养后来源于PPT患者及正常健康人外周血DCs上CD83、CD80、CD86的表达水平.结果 来源于PPT患者外周血DCs上CD83、CD80、CD86分子的表达水平显著高于正常组(P＜0.05),同种混合淋巴细胞反应显示PPT患者组DCs免疫刺激能力显著高于正常组(P＜0.01).结论 DCs免疫功能及成熟分化的增加与PPT的发生密切相关.     

慢性乙型肝炎不同脾虚兼证与外周血树突状细胞表型及功能的关系

目的： 研究慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B, CHB）患者不同脾虚兼证与外周血树突状细胞（dendritic cell, DC）表型及功能的关系。 方法：CHB患者60例,按中医证候诊断标准分为脾虚肝郁、脾虚湿热和脾肾两虚组,每组20例,10名健康人为正常对照。分离各组外周血单个核细胞,体外诱导培养DC,流式细胞仪测定DC表型,酶联免疫吸附检测法测定DC分泌白细胞介素10（interleukin-10, IL-10）浓度,同步检测患者生化指标及乙肝病毒的脱氧核糖核酸（hepatitis B virus DNA, HBV-DNA）水平。 结果：CHB患者DC体外诱导增殖能力较正常人下降,DC成熟表面标记物显著低于正常人（P〈0.05）。不同证候CHB患者DC表面标记物CD80、CD86和CD1a表达阳性率均低于正常人（P〈0.05）。脾虚肝郁证患者CD80、CD1a和HLA-DR表达阳性率显著高于脾肾两虚证（P〈0.05）,脾虚湿热证患者CD1a表达阳性率显著高于脾肾两虚证（P〈0.05）。CHB患者DC培养上清中IL-10浓度显著高于正常人（P〈0.05）。脾肾两虚证患者DC培养上清中IL-10含量高于脾虚肝郁证（P〈0.05）。 结论：在CHB发病过程中,不同脾虚兼证CHB患者DC的表型及功能间存在差异,提示中医证候分类与机体免疫功能之间存在一定相关性。     

寡脱氧核糖核苷酸致敏树突状细胞对OVCAR-3卵巢癌细胞株杀伤作用的实验研究

目的探讨含有未甲基化“胞嘧啶-磷酸二酯键-鸟嘌呤（CpG）基序”的寡脱氧核糖核苷酸（CpGODN）致敏人外周血来源树突状细胞（DC）在卵巢癌免疫治疗中的作用。方法应用CpGODN2006联合肿瘤相关抗原CA125体外冲击致敏DCs,流式细胞技术检测DC膜表面CD1α、CD8、CD86和人白细胞DR抗原（HLA-DR）的表达,用EHSA测定DC培养上清液中白细胞介素（IL）-12的分泌水平;四唑盐（MTT）比色试验法检测活化DCs对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）杀伤OVCAR-3卵巢癌细胞株作用的影响。结果CpG ODN2006联合CA125在体外可明显激活人外周血来源DCs,DC表面分子CD83、CD86和HLA-DR表达的阳性细胞百分率[（85±4）％、（87±12）％和（92±7）％]明显高于未致敏组[（19±4）％、（67±9）％和（63±6）％]（P＜0．01）;联合致敏后DCs培养上清液中白细胞介素（IL）-12分泌水平为（467±84）ng／L,与未致敏组[（60±9）ng／L]和单纯CA125致敏组[（97±16）ng／L]相比差异有统计学意义（P＜0．01）;联合刺激后的DCs可以促进T淋巴细胞的增殖,增殖活性显著高于未致敏组和单纯CA125致敏组（P＜0．01）,且相同效靶比下所诱导的CTLs对OVCAR-3卵巢癌细胞的杀伤活性显著强于未致敏组、单纯CA125致敏组和单纯CpGODN致敏组（P＜0．01）。结论CpGODN联合CA125体外致敏DC可诱导产生对OVCAR-3卵巢癌细胞的免疫杀伤作用,是一种临床应用前景良好的肿瘤免疫治疗方法。     

Association of T regulatory cells with natural course and response to treatment with interferon-α in patients with chronic hepatitis B infection

Background  Regulatory T cell populations, particularly CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells, have been implicated in the persistence of hepatitis B virus (HBV) infection. However, no clear relationship has been established between the frequency of CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells in the peripheral blood and either the disease phases in the natural history of chronic HBV infection or in the response to interferon-α therapy.

Methods  In the present study, three different common markers of CD4⁺CD25⁺ T regulatory cells were used to determine the numbers of T regulatory cells in healthy controls and in patients with chronic HBV infection.

Results  No significant difference was found when samples were gated for CD25^hi and CD25⁺FoxP3⁺ T cells. A significant correlation was found between the number of CD4⁺ Treg cells that gated with CD25⁺FoxP3⁺ and CD25⁺CD127^low/- in healthy controls and in patients with chronic hepatitis B (CHB) (r=0.67, 0.59; P <0.01). The percentages of Treg cells were (8.56±2.01)% in asymptomatic carriers (Asc), (8.74±3.04)% in inactive HBsAg carriers, (10.7±2.93)% in CHB and (7.42±1.28)% in healthy controls (F=11.1, P <0.001). The percentage of Treg cells in patients with CHB was higher than in asymptomatic HBV patients, inactive HBsAg carriers, or healthy controls (P <0.01). The proportion of CD4⁺CD25⁺CD127^low/- T cells in patients who responded to interferon-α was (11.9±3.3)%, (9.1±2.4)% and (9.0±2.9)% at baseline, week 12 and week 24 after treatment, respectively (Z=2.42, P <0.05; Z=2.67, P <0.01).

Conclusions  These results suggest that the proportion of the CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells might be affected by the application of different markers in process to detect T regulatory cells. The frequency of Treg cells was increased in patients with CHB, which might be associated with the disease activity of these patients and contribute to prevention of extensive liver damage. A decline in Treg cells at week 12 of treatment might be associated with a better response to treatment with interferon-α.

     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞内HBcAg存在与肝组织学改变的关系

目的 在证实外周血单核细胞诱导的树突状细胞（dendriticcell，DC）中存在HBV的基础上，研究树突状细胞中存在HBcAg与肝组织学改变的关系。方法 通过对24例慢性乙型肝炎患者和8例健康对照者外周血单核细胞诱导树突状细胞，采用流式细胞仪检测树突状细胞共刺激分子（CD80／CD86／CD40／CD54）等表达情况，并结合患者肝组织病理改变评价结果进行比较。结果 慢性乙型肝炎者树突状细胞的CD40、CD86表达率明显低于正常对照组（P〈0．01），CD80明显高于正常对照组（P〈0．01），而慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞中HBcAg阳性组和阴性组之间无明显差异（P〉0．05）。肝组织病理改变中，阴性组的汇管区炎细胞浸润、肝组织炎症总积分均显著高于阳性组（P〈0．05）。结论 乙肝病毒可能对外周血DC表达CD80、CD86、CD40等功能性共刺激分子有明显影响，而与DC内HBV的存在与否无明显关系；DC内HBcAg存在者肝组织炎症程度相对较轻。     

RNA干扰阻断受者树突状细胞表面CD80/CD86通过诱导T细胞凋亡调控T细胞低反应

Background Despite extensive research, the mechanisms of immature dendritic cells (DCs) induced immune hyporesponsiveness remain incomplete. Methods Recipient DCs from C3H mouse bone marrow cells were incubated with donor antigen from splenic lymphocyte of C57BL/6 mouse, these DCs were transfected with CD80/86 specific siRNA using lentiviral vectors. Flow cytometry was used to evaluate expression of CD80/86 on the antigen-pulsed recipient DCs. Immune regulatory activity was examined by mixed lymphocyte reaction, in which irradiated DCs were cultured with C3H spleen T cells. After the reaction, IL-2, IL-4, IL-10 and INF-γ levels of mixed lymphocyte reaction culture supernatant were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The apoptotic T lymphocytes were identified by Annexin V and CD3 staining. Results There was a significant inhibition of CD80/86 expression in DCs transfected with CD80/86 lentiviral vectors compared with the control groups (P <0.05), indicating the specificity of RNA interference. Enzyme-linked immunosorbent assay results showed a significant reduction of INF-γ, IL-2 and IL-10 in the CD80/86 lentivirus transfected group compared to the control groups (P <0.05). There was no significant difference in IL-4 levels between the groups (P >0.05). We also showed that CD80/86 low DCs loaded with alloantigen 1) stimulated low T cell proliferative responses via the indirect recognition pathway and 2) enhanced apoptotic activity (P <0.05) in co-cultured T cells. Conclusions Lentiviral vector transfection can effectively and specifically knock down target genes in DCs. The CD80/86 low DCs may show tolerogenic activity via induction of T-cell apoptosis, thereby modulating activity of recipient-derived DCs. The use of this approach may potentially be clinically applicable.     

系统性红斑狼疮患者血清中IL-10抑制抗原递呈细胞表面HLA-DR和CD80的表达

目的:研究系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者血清中的IL-10对正常单核细胞分化形成的树突状细胞(dendriticcells,DCs)及其前体单核细胞抗原递呈相关膜表面分子表达的影响。方法:分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),并采用GM-CSF IL-4方案诱导分化形成DCs,在此过程中加入不同IL-10水平的SLE患者血清或混有IL-10中和抗体的SLE患者血清,联合培养7天后收集细胞,经形态学鉴定,以流式细胞术检测HLA-DR、CD80、CD86的表达。结果:在SLE血清的作用下,DCs的HLA-DR、CD80的表达下调,CD86表达不受影响;中和SLE血清中的IL-10后,HLA-DR、CD80表达能够恢复。其前体细胞单核细胞的HLA-DR、CD80的表达也可被SLE血清下调,用中和抗体中和IL-10后,其表达可部分恢复。结论:高IL-10水平的SLE血清能够抑制DCs及其前体单核细胞表面分子HLA-DR、CD80的表达,对抗原递呈细胞的功能可能产生影响。     

In vitro induction of specific anti-tumoral immunity against laryngeal carcinoma by using human interleukin-12 gene-transfected dendritic cells

Background  Objective evaluation of the antitumor effect of interleukin-12 (IL-12) gene-transfected dendritic cell (DC) vaccine on laryngeal carcinoma requires in vivo and in vitro tests. The aim of this study was to investigate the function of IL-12 gene transfected DC at initiating specific immune response to laryngeal carcinoma in vitro．

Methods  Recombinant adenovirus with IL-12 gene was constructed. DCs were isolated from the peripheral blood of patients with laryngeal carcinoma, pulsed with tumor lysate of laryngeal carcinoma cells (DC⁺Ag), and transfected with IL-12 (DC-IL-12⁺Ag). The cells pheotypes including CD83, CD86 and HLA-DR on surface of DCs were assayed by flow cytometry (FCM). The concentration of IL-12 in culture supernatant of DCs and interferon γ (IFN-γ) in culture supernatant of T cells cocultured with DCs were quantified by ELISA. Methyl thiazolys tetrazolium (MTT) was used to evaluate proliferation of autologous T lymphocytes and activation of cytotoxic T lymphocytes (CTL) stimulated by IL-12-transfected DCs pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells.

Results  The recombinant adenovirus expressing IL-12 gene was constructed successfully. Gene-transfected DC plused with tumor lysate with IL-12 (DC-IL-12⁺Ag) expressed higher level of CD83, CD86 and produced higher level of IL-12 than untransfected DCs (DC⁺Ag) (CD83: (60.2±1.8)% vs. (50.7±1.2)%, P <0.05; CD86: (88.9±2.1)% vs. (78.2±3.9)%, P <0.05; IL-12: (262.5±3.0) ng/L vs. (103.8±5.1) ng/L, P <0.05). The proliferation of autologous T lymphocytes and production of IFN-γ stimulated by DC transfected with IL-12 were more obviously than untransfected DCs. Cytotoxicity of CTL stimulated by IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells were significantly stronger than stimulated by untransfected DC.

Conclusion  It is a promising approach for IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate to increase the antitumoral effect.

     

慢性乙型肝炎患者替比夫定治疗后血清IL-17的变化及意义

目的 比较慢性乙型肝炎（CHB）患者替比夫定（LdT）治疗前后血清白细胞介素-17（IL-17）水平的变化,探讨IAT对CHB患者血清中IL-17的影响.方法 收集105例CHB患者血清,以35例健康体检人群IL-17为基线评价指标,采用ELISA方法检测血清IL-17的水平,特异性荧光探针PCR法检测血清HBV-DNA水平;CHB组加用替比夫定抗病毒治疗24周,观察治疗前后血清中IL-17及HBV-DNA的变化.结果 （1）治疗前CHB患者较健康对照组血清中IL-17水平明显升高（P＜0.05）,轻、中、重度CHB患者治疗前血清IL-17水平组间比较,重度＞中度＞轻度,差异有统计学意义（P＜0.05）;（2）治疗后血清IL-17及HBV-DNA水平较治疗前下降（P＜0.05）,CHB轻、中、重度各组血清IL-17水平与该组治疗前水平相比均降低（P＜0.05）,治疗后轻、中、重度各组组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;（3）血清中HBV-DNA含量与IL-17水平呈正相关（r=0.722,P ＜0.05）.结论 替比夫定通过抑制HBV复制能够降低CHB患者血清IL-17水平,使肝细胞功能得到一定恢复.