PCR法和TP-ELISA法检测梅毒的结果分析

目的:探讨巢式PCR法在血液样本梅毒检测中适用性.方法:运用常规及巢式PCR 扩增了梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)的DNA多聚酶I基因(DNA polymerase I,polA) 的特异性片段,与血清学方法比较,评价了两方法在诊断梅毒中的意义.结果:用PCR法和TP-ELISA检测89份拟诊为梅毒的血液标本,TP-ELISA方法与巢式polA(DNA polymerase I)PCR结果差异有统计学意义;巢式PCR敏感性高于常规PCR.结论:巢式polA(DNA polymerase I )PCR虽然具有高度敏感、特异等优点,但对全血、血清等标本要求较高,是否适合用于血液样本的检测有待进一步研究.     

PCR扩增梅毒螺旋体polA基因及其在一期梅毒诊断中的应用

目的提高对梅毒诊断的灵敏性和特异性.方法运用PCR扩增了梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶I基因(polA)的特异性片段,检测了该方法的特异性和灵敏性;用该方法检测了118例生殖器溃疡,同时用Tp PCR试剂盒和血清学方法平行检测同批病人的溃疡或血清标本.结果polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏性约为20个Tp拷贝;检测118例生殖器溃疡标本,用Tp PCR试剂盒为对照,polA PCR方法的特异性和灵敏性分别为96.8%和95.7%,两种PCR检验结果差异无显著性(x2=o.25,P＞0.05);polA PCR方法与血清学方法对一期梅毒诊断结果差异有显著性(x2=4.45,P＜0.05).结论 polA PCR方法高度敏感、特异,在一期梅毒诊断中优于血清学方法,可作为血清学方法的补充用于梅毒的诊断.     

PCR扩增梅毒螺旋体poIA基因及其在一期梅毒诊断中的应用

目的提高对梅毒诊断的灵敏性和特异性。方法运用PER扩增了梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶I基因(polA)的特异性片段,检测了该方法的特异性和灵敏性;用该方法检测了118例生殖器溃疡,同时用Tp PCR试剂盒和血清学方法平行检测同批病人的溃疡或血清标本。结果polA PCR只在扩增Tp时有特异性产物,灵敏性约为20个Tp拷贝;检测118例生殖器溃疡标本,用Tp PCR试剂盒为对照,polA PCR方法的特异性和灵敏性分别为96.8％和95.7％,两种PCR检验结果差异无显著性(x2=0.25,P>0.05);polA PCR方法与血清学方法对一期梅毒诊断结果差异有显著性(x2=4.45,P<0.05)。结论polA PCR方法高度敏感、特异,在一期梅毒诊断中优于血清学方法,可作为血清学方法的补充用于梅毒的诊断。     

一期梅毒半巢式聚合酶链反应检测的效果

目的 探讨半巢式聚合酶链反应（PcR）在一期梅毒早期诊断中的意义。方法应用半巢式PCR检测一期梅毒溃疡组织液和血清中TP-DNA,与IPPA结果进行比较。结果60例临床诊断为一期梅毒患者,溃疡组织液、血清半巢式PCR和TPPA检测的阳性分别为56例（93．33％）、13例（21．67％）和53例（88．33％）。组织液半巢式PCR检测结果与血清半巢式PCR检测结果比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,与rI胛A结果比较,差异无统计学意义（D0．05）。结论半巢式PCR检测一期梅毒溃疡组织液中TP-DNA较检测血清中的TP-DNA敏感性高、特异强,可做为TPPA诊断早期梅毒的有效补充。     

重庆地区梅毒螺旋体基因分型及其临床相关性研究

目的：调查重庆地区梅毒螺旋体基因亚型的分布,初步探讨基因亚型与临床相关性。方法：收集2010年6月至2013年10月重庆地区421例梅毒标本,用巢式PCR检测梅毒螺旋体DNA多聚酶I基因（DNA polymerase I gene,polA）,然后扩增阳性标本酸性重复蛋白基因（acid repeat protein,arp）和苍白密螺旋体重复家族基因（treponema pallidum repeat,tpr）及TP0548基因,分别根据Pillay标准基因分型和三基因分型法进行分型,利用双侧Fisher’s exact test进行数据统计分析,初步探讨不同基因亚型与血清固定、梅毒复发和吉海反应的相关性。结果：163例标本polA PCR检测阳性,arp、tpr基因和TP0548基因亚型分别以14型、d型和f型为主。正规驱梅治疗12月后,32例患者血清固定,其中tpr基因d型（1１例）、a和b型（各2例）和f型（1例）;3例患者梅毒复发,其中TP0548基因c型（2例）和f型（1例）;8例发生吉海反应,其中14f/f（4例）,14d/f（3例）和未分型（1例）。结论：重庆地区梅毒螺旋体以14、d和f型为优势型。梅毒血清固定可能与tpr基因b型相关,14f/f基因型的二期梅毒患者易发生苄星青霉素治疗后的吉海反应。     

日本血吸虫感染分子诊断技术的研究

目的建立检测日本血吸虫感染的巢式PCR技术。方法设计2对巢式引物特异性扩增日本血吸虫高拷贝的Sjα1基因片段,分析反应的敏感性和特异性,并对感染小鼠血清、全血样本以及实验和现场钉螺样本进行检测。结果建立的巢式PCR方法特异性扩增日本血吸虫420bp的Sjα1片段,和曼氏血吸虫没有交叉,基因组DNA作为模板时最低检测量为0.1fg。小鼠感染日本血吸虫后2周的血清样本即能检测出特异性DNA,建立的方法能同时检测血清和全血标本。钉螺实验感染4hr后能检测到日本血吸虫DNA,现场采集钉螺的检测结果显示比传统的镜检方法敏感性高。结论建立的巢式PCR检测日本血吸虫感染具有较高的敏感性和特异性,为疾病诊断和媒介调查提供了新的分子生物学检测技术。     

弓形虫(Toxoplasma gondii)的PCR检测方法在笼养猕猴群中的应用

目的建立快速、灵敏、特异及检测结果易判断的PCR方法，并应用于大规模猕猴种群的弓形虫常规检测中。同时比较巢式PCR和单一PCR的一致性。方法根据弓形虫保守基因p30（SAG1）设计了内、外两对进行巢式PCR扩增以及B1基因设计一对引物进行单一PCR扩增，将DNA样本进行10倍倍比稀释，以检测巢式PCR反应的灵敏度；并对医学生物学研究所自繁猕猴共150只进行了弓形虫检测。结果巢式PCR检测法检测限度可达10^-3ng/uL，而且方法特异。两种PCR法检测结果基本一致，其中巢式PCR检测阳性率（10％）稍高于单一PCR检测阳性率（8．67％）。结论巢式PCR和一次PCR方法都可应用于猕猴弓形虫的常规检测中，并提示巢式PCR比单一PCR更敏感、检出率更高。     

免疫PCR法诊断梅毒螺旋体抗原和抗体的方法学研究

目的建立免疫PCR方法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法学,并比较两种方法学的敏感性、特异性和重复性。方法选择2011年我院梅毒血清学ELISA法检测者1520例并梅毒分期;建立免疫PCR法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法,然后对梅毒螺旋体血清学阳性标本10倍系列稀释,比较免疫PCR法敏感性;同时采用正常健康血清标本观察免疫PCR法特异性;最后采集梅毒阳性血液分装成两份标本,监测两种免疫PCR法试验批内和日间重复性。结果1520例患者中,梅毒患者136例。梅毒患者中女性占77．2％（105／136）．孕妇占19．1％（26／136）。梅毒分期以一期梅毒感染为主,与其他期比较具有统计学意义（P〈0．05）。IPCR-Ag法检测梅毒螺旋体抗原敏感性是ELISA法的10。倍,TPPA和TRUST法的10^6。IPCR-Ab法检测梅毒螺旋体抗体敏感性是ELISA法的10。倍,TPPA和TRUST法的10^5。两种免疫PCR法测检查正常健康人群梅毒螺旋体结果均为阴性。IPCR-Ab法试验批内CV为11．6l％,日间CV为18．12％;IPCR-Ag法试验批内CV为18．61％,日间CV为22．24％,两者相比具有统计学意义（P〈0．05）。结论免疫PCR法检测梅毒螺旋体具有高度的敏感性和特异性,但重复性较差。     

扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗（HAART）6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞（PBMC）和高度纯化的CD4＋T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4＋T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率（93.3%）明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率（10.0%）。结论 PBMC纯化CD4＋T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。     

梅毒螺旋体Tp0993重组蛋白的表达及鉴定

目的表达、鉴定梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0993（rTp0993）,为进一步评价其在梅毒血清学诊断中的意义奠定基础。方法 PCR扩增去除信号肽核苷酸序列的Tp0993基因,构建原核重组体pET-28a/Tp0933并诱导表达蛋白;Ni-NTA法纯化重组蛋白,Western blot检测表达产物的抗原性。结果成功构建了原核重组体pET-28a/Tp0993,经诱导表达了一分子量大约为40 Ku的重组蛋白;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者血清特异性识别。结论 rTp0993有较好的抗原性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的作用奠定了基础。     

巢式PCR检测梅毒螺旋体DNA方法研究

目的建立一种血清梅毒螺旋体DNA提取及PCR鉴定方法。方法基于化学热裂解法和柱式核酸提取原理进行血清梅毒螺旋体DNA提取。根据文献筛选优化引物建立巢式PCR检测体系,并对实验方法的特异性、抗干扰性、检测梯度进行评价。结果建立的实验方法特异性好、抗干扰性强,对TRUST为1：8以上的标本检测全部为阳性。结论提取梅毒螺旋体DNA及PCR鉴定有助于梅毒的快速诊断,对于血液中梅毒螺旋体增殖能力判断具有重大潜在应用价值。     

压电免疫传感器与ELISA、TPPA法在梅毒筛查试验中的对比研究

目的研制压电免疫传感芯片法快速检测梅毒特异性抗体。方法采用吸附-交联法将梅毒基因工程重组抗原固定在镀金石英晶体表面。运用压电免疫传感阵列检测技术快速检测梅毒特异性抗体。以压电免疫传感芯片为实验方法,以ELISA作对照方法,以TPPA作为确认方法进行对比研究。结果30份临床样本,实验方法与对照方法的灵敏度均为100％,特异度分别是85％和75％,一致率分别是90％和83．3％。压电蛋白芯片法与TPPA法检测数据之间存在相关关系,属半定量实验。结论运用压电免疫传感阵列对梅毒螺旋体抗体进行快速检测,具有灵敏度高、特异性好,检测速度快等优点,特别适用于野战条件下献血者血液快速筛查。     

献血人群梅毒感染多因素logistic回归分析

目的了解东莞市自愿无偿献血人群梅毒螺旋体感染的现状和易感高危因素，为减少输血传播性疾病以及为献血者的招募提供参考依据。方法采用回顾性调查方法，运用多因素条件logistic回归分析2006年东莞市无偿献血者56311份血液标本梅毒检测结果以及相关影响因素，所有标本的检测均采用酶联免疫吸附法进行初筛。梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法确诊。结果东莞市2006年自愿无偿献血人群梅毒感染率为6．66‰，高于全国平均水平。多因素条件logistic回归分析显示：人口的流动性、职业、学历、献血次数等因素与无偿献血人群梅毒感染有关。流动无偿献血者梅毒感染较常住人口的比数比为86．93；学生、军人是最低危的献血人群，与其相比，生产、运输和机械设备操作人员、无业或不便分类以及工作不固定人员等则是相对高危的献血人群（比数比为106．48）；无偿献血人群的学历每降低一个等级其梅毒感染几率的比数比为3，23；初次献血者较固定的无偿献血者梅毒感染率高，初次献血者较固定的无偿献血者梅毒感染的比数比为73．43。结论梅毒在东莞市呈现一定的流行趋势，人口的流动性、职业、学历、献血次数与无偿献血人群梅毒感染相关。     

半套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立半套式PCR和DNA探针技术由于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Q热立克次体的16S和23S rRNA基因及其间区的序列。设计3条引物,建立了扩增16S－23S mRNA基因间区的半套式PCR方法,并将扩增片段制成探针,建立了斑点杂交技术。结果 10株Q热立克次体分离株均可扩增出572bp的PCR条带,而对照菌都为阴性,此半套式PCR方法的灵敏度高达1pg;用九里株扩增片段标记后制成的探针,与10个Q热立克次体分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,此杂交方法的灵敏度为0．5ng。结论 基于Q热立克次体16S－23S rRNA基因间区的半套式PCR和DNA探针技术具有较好的特异性和灵敏度,可联合应用于Q热的病原学诊断。     

深圳宝安区普通劳务工未婚男女梅毒感染状况调查分析

目的了解深圳宝安区普通劳务工未婚男女梅毒感染状况并分析其危险原因,为宣传和预防梅毒知识,加强男女婚前梅毒检测的必要性提供参考依据。方法随机抽查本区工厂、工地及车站等劳务工人员共5183例,采集受检者静脉血3-4ml,采用甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）方法进行梅毒抗体初筛,对筛选出的阳性标本再用梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）和化学发光免疫法同时进行确诊,结合临床资料和流行病学综合判断梅毒感染。结果普通劳务工未婚男女梅毒总感染率为2．9％（148／5183）,其中男性2．0％（41／2062）,女性3．4%（107／3121）,男女之间比较差异有统计学意义（P〈O．05）;工厂为2．6％（75／2857）,工地为3．1％（42／1342）,车站为3．2％（31／984）,工地和车站场所梅毒感染率略高于工厂,两者差异无统计学意义（P〉0．05）;30岁以上人群梅毒阳性率明显高于30岁以下的人群。差异有统计学意义（P〈O．05）;小学（3．3％）和初中（2．8％）文化层次的人群明显高于高中及中专（1．8％）以上的人群,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论宝安区普通劳务工未婚男女梅毒感染率比较高,应加强梅毒危害及预防相关知识的宣传,提倡和加强必要的婚前检测,减少或杜绝婚后夫妻互相传播及先天性梅毒婴儿出生。     

不同梅毒检测方法在孕妇梅毒筛查中的应用

目的探讨酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶试验(TPPA)和甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST)三种梅毒血清学检测方法在孕妇梅毒筛查中的应用。方法对2012年3月~2014年3月间就诊的24 964例孕妇同时采用ELISA、TPPA和TRUST等方法进行血清学检测,对检测结果进行分析。结果 24 964例孕妇标本中ELI-SA阳性180例,TPPA阳性178例,TRUST阳性74例。新感染患者74例,既往感染的患者104例,患者阳性率为0.71%;TPPA和ELISA检测结果比较差异无统计学意义(P=0.754,κ=0.972),在45例一期梅毒患者中,阳性符合率为97.78%,23例二期梅毒患者阳性符合率为95.65%,在6例三期梅毒患者中,阳性符合率为100.00%;TPPA和TRUST检测结果有显著性差异(P0.001,κ=0.476),在一期梅毒中的阳性符合率为71.11%,在二期梅毒中的阳性符合率为100.00%,在三期梅毒中的阳性符合率为66.67%。结论对于孕妇梅毒筛查,可先用ELISA方法进行筛查,提高初检结果的检出率,阳性结果通过TPPA确诊,用TRUST试验观察疗效、判断预后。     

Real-time PCR与常规PCR在Q热立克体检测中的比较

目的比较与评价Real-time PCR与常规PCR,寻求适合于Q热患者早期诊断的方法。方法应用Taq Man探针定量PCR、SYBR Green染料定量PCR、巢式PCR和普通PCR四种方法分别对T-A克隆的Q热立克次体基因htp AB片断进行灵敏性、特异性和重复性检测及评价。结果 Taq Man PCR方法的灵敏度分别为SYBR Green PCR、巢式PCR和普通PCR的10倍、10倍和100倍。重复性测试Taq Man法Ct变异系数CV:0.2%~3.0%,SYBR Green法的CV:0.3%~6.0%。Taq Man和SYBR Green PCR均耗时约1h,巢式PCR耗时约2.5h,普通PCR耗时约1.5h。四种方法检测25种相关病原菌结果均为阴性。结论 Taq Man探针定量PCR方法具有很好的特异性、灵敏性、重复性和可操作性,可用于Q热患者临床早期诊断。     

三种方法检测梅毒螺旋体抗体比较分析

目的比较三种梅毒血清学实验检测方法的准确性及在临床诊断中的价值。方法分别用甲苯胺江不加速试验(TRUST),梅毒螺旋体明胶颗粒凝胶试验(TPPA)检测在化学发光法筛查中发现的梅毒螺旋体抗体(TP)阳性标本95例。结论三种方法中化学发光法阳性率略高,应联合应用。