巢式PCR检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV

目的利用巢式PCR方法检测圈养的食蟹猴(Macaca fascicularis)和猕猴(Macaca mulatta)中猴D型逆转录病毒(Simian Type D Retrovirus SRV)和猴泡沫病毒(Simian foamy virus SFV)。方法针对SRV-env和SFV-pol基因的保守区序列设计特异性外引物,然后再设计特异性内引物。将外引物扩增出的片段克隆到PJET1.2blunt载体中作为阳性对照,运用NCBI中BLAST软件比对测序结果。用巢式PCR方法分别检测食蟹猴和猕猴中SRV和SFV。结果发现食蟹猴中SFV感染率为65.2%,SRV感染率为9.5%,猕猴中SFV感染率为60.5%,SRV感染率为12.8%。结论圈养的食蟹猴和猕猴SFV的感染率均较高,SRV感染率很低。     

2例猪弓形虫病的特异PCR诊断与虫株分离

目的应用特异PCR方法诊断猪弓形虫病并通过动物接种的方法分离弓形虫虫株。方法用涂片镜检、特异PCR方法检测病料,用经PCR方法检测为阳性的病料接种小白鼠,经连续传代分离弓形虫虫株。结果病例1的肺及肺门淋巴结涂片镜检见有少量的弓形虫滋养体,但病例2的颌下淋巴结及肺门淋巴结涂片镜检未见有弓形虫滋养体。用特异PCR方法检测两个病例的上述病料,均得到弓形虫的特异条带。小白鼠接种试验从每个病例均分离出一个弓形虫虫株。结论特异PCR诊断方法能较快速、准确地检测猪弓形虫病,小白鼠接种试验是一种较好的弓形虫虫株分离方法。     

淋病奈瑟菌PCR检测的临床应用研究

为评价淋病奈瑟菌ＰＣＲ检测的临床效果,建立了对标准淋病奈瑟菌的ＤＮＡＰＣＲ检测技术。结果显示,ＮＧ ＰＣＲ技术的灵敏度约为３个菌的基因组拷贝。对８种菌株进行ＮＧ ＰＣＲ,只有标准淋病奈瑟菌显示阳性,其余７株非淋球菌菌株均阴性,说明有很好的特异性。对４９例淋病患者同时进行涂片镜检法、细菌培养法和ＰＣＲ法检测的比较,其阳性检出率分别为７６．６％、５２．２％和９５．９％。提示ＮＧ ＰＣＲ方法比涂片和培养法更为敏感,且特异性强,在淋病的诊断,特别是早期诊断中有重要参考价值。     

PCR技术检测RH株弓形虫组织内感染的实验研究

目的：建立敏感，特异的聚合酶链反应（PCR），以检测组织内弓形虫感染。方法：优化PCR反应关键步骤的条件。以相同的B1引物扩增相近的病原体判断其特异性，扩增倍比稀释的DNA检测其灵敏度，并以PCR法检测实验鼠肝，血中DNA的动态变化。结果与免疫组化法进行比较。评价其检测生物学样本的可行性。结果：实验建立的PCR技术的灵敏度能达到检测出一个虫体的DNA，且特异性强，不扩增鼠DNA，人DNA，隐孢子虫，卡氏肺孢子虫，鼠疟原虫的DNA，检测实验感染小鼠血，肝脏样本，在感染后2天，3只鼠血样本PCR结果阳性，3只小鼠肝标本2只阳性；感染后3天至濒死前后有小鼠检测结果均阳性；血样本阳性检出率100%（11/11），肝脏组织样本阳性检出率81.8%(9/11)。结论：PCR方法是一种敏感，特异快速的诊断方法，可用于诊断血和肝脏组织内的弓形虫。     

兔支气管败血波氏杆菌PCR检测方法的建立及应用

目的建立一种简便、快速、敏感、特异的适用于支气管败血波氏杆菌的PCR检测方法。方法根据兔支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica）的fim2基因序列设计了一对特异性引物，进行PCR扩增、特异性和敏感性试验，并将其应用于临床样品的检测。结果利用该PCR方法扩增出425bp的目的基因片段，该产物序列与GeneBank上公布的基因序列同源性为100％。特异性试验表明，该方法对大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌、魏氏梭菌和金黄色葡萄球菌均无交叉性反应；并且最小可检出菌液浓度为3．6CPU。用该PCR方法检测了从江苏、山东等地采集的146份兔鼻拭子，结果检出支气管败血波氏杆菌阳性92例，阳性率为63．01％。结论建立了快速检测支气管败血波氏杆菌的PCR方法。     

不孕症患者弓形虫抗体检测结果分析

目的了解辛集市不孕症患者弓形虫感染情况及影响因素。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)对2010年5月至2014年5月在辛集市第一医院妇产科进行不孕问诊咨询的不孕症患者进行弓形虫抗体检测,同时对不孕患者中的阳性病例进行感染史追溯。结果 811对不孕症患者弓形虫抗体阳性123例,阳性率为7.58%(123/1 622);对照组阳性20例,阳性率为2.61%(20/766),两组比较差异有统计学意义(χ2=22.84,P<0.01)。不孕症患者中男性阳性77例,阳性率为9.49%(77/811);女性阳性46例,阳性率为5.67%(46/811),二者比较差异有统计学意义(χ2=8.45,P<0.01)。在不孕组的123例阳性病例中,有45人经常在外就餐,占36.59%(45/123);有36人喜吃火锅或烧烤,占29.27%(36/123);有30人其家庭中有养猫养狗的情况,占24.39%(30/123)。结论辛集市不孕症患者弓形虫感染率较高,弓形虫感染可能是造成不孕的原因之一。建议对育龄夫妇加强健康教育、改变不良的卫生生活习惯,避免感染弓形虫,以免造成不良后果。     

巢式PCR法检测弓形虫的应用研究

目的 调查山东省商品肉弓形虫污染和动物弓形虫感染情况，并进行SAG2分型研究，分析商业肉制品在弓形虫传播中的作用。方法自由市场采集商品内，用巢式PCR方法检测弓形虫DNA，阳性经纯化PCR产物，进行SAG2临床分型研究。结果共检测商品内89份，阳性22份，阳性率为24．72％。其中，猪肉标本56份，16份阳性，阳性率为28．57％，Ⅰ型13份，Ⅱ型1份，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染1份，未能定型1份；羊肉标本33份，6份阳性，阳性率为18.18％，Ⅰ型5份，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染1份。22份阳性标本中单纯Ⅰ型占81、82％，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染占9．09％，Ⅲ型未能检测到。1份可疑病人血标本阳性，为Ⅰ型。结论肉类弓形虫污染率很高，以Ⅰ型为主，是人类感染的重要来源。家庭食品加工过程中生熟不分与人们对食品鲜美的追求造成误食包囊感染，可能是造成人类弓形虫感染率大幅升高的最为重要的原因之一。     

猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立

目的建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用。方法针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应。扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对。将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度。使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性。用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本。结果使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致。所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3ng/μL,而且方法特异。用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本。结论初步建立SRV-1的巢式PCR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段。     

猕猴结核分枝杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立猕猴结核分枝杆菌PCR快速检测方法。方法根据GenBank中报道的人型结核分枝杆菌标准株H37RV全基因序列，针对其中致病性结核分枝杆菌所特有的保守区域ESAT-6设计一对引物进行TouchdownPCR反应，利用此方法对100份野生来源猕猴全血标本进行检测，并与传统的PPD实验和咽拭子抗酸染色实验结果作比对。结果抽取33份野生来源猕猴的外周血，提取DNA进行扩增，扩增片段经纯化、回收克隆测序后用BLAST软件进行同源性对比，与GenBank中报道的序列基本相同，检测标本中有4份（4／33）为阳性，其中3份（3／33）标本与结核菌素试验和咽拭子抗酸染色试验结果相符合。结论建立了从猴全血中直接检测猴结核分枝杆菌DNA的TouchdownPCR方法，具有敏感性和特异性高，且简便的优点。     

重组弓形虫GRA7的纳米金免疫传感器检测弓形虫GRA7抗体

目的:建立基于重组弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)的纳米金免疫传感器检测血清GRA7抗体,评价其检测性能.方法:体外合成gra7基因,构建重组表达质粒pQE-60-gra7,表达并纯化GRA7,Western blot鉴定其免疫活性;种子生长法制备金纳米棒,构建GRA7的纳米金免疫传感器检测人血清GRA7抗体,评价其灵...