积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

目的 探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。方法 采用光镜、电镜、∧3H－TdR、∧3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。结果 积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,布且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。结论 积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

【目的】探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。【方法】采用光镜、电镜、3H-TdR、3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。【结果】积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,而且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。【结论】积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

积雪草苷对增生性瘢痕中转化生长因子-βmRNA及基质金属蛋白酶类表达的影响

目的探讨积雪草苷对人增生性瘢痕中转化生长因子β（TGF-β）mRNA和基质金属蛋白酶及其组织抑制剂（MMPS／TIMPS）表达的影响。方法临床上收集烧伤后5～8个月经积雪草苷治疗和非积雪草苷治疗的增生性瘢痕标本各9例。采用原位杂交和免疫组织化学方法，分别检测增生性瘢痕中TGF-β1 mRNA、TGF-β2 mRNA、TGF-β3 mRNA及MMP1、MMP2、TIMP1、TIMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平，并利用图象分析方法进行结果分析。结果TGF-β mRNA在增生性瘢痕中主要表达于成纤维细胞胞质，经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TGF-β1 mRNA表达明显减少，胞质淡染，统计学上与非积雪草苷治疗组TGF-β1 mRNA表达有显著性差异（P〈0．01）；而TGF-β1，mRNA在积雪草苷治疗的增生性瘢痕中表达增多，明显高于非积雪草苷治疗组的TGF-β1 mRNA表达（P〈0．05）。MMPS／TIMPS在增生性瘢痕中也表达于成纤维细胞胞质，经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TIMP1。表达明显减少，与非积雪草苷治疗组TIMP1表达有显著性差异（P〈0．01）；而MMP1、MM2,及TIMP2在上述两组中表达无显著性差异（P〉0．05）。Ⅰ、Ⅲ型胶原在增生性瘢痕中表达．经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中Ⅰ型胶原排列整齐，含量较少，与非积雪草苷治疗组有显著差异（P〈0．05）；而Ⅲ型胶原在两组增生性瘢痕中表达无显著性差异（P〉0．05）。结论积雪草苷通过降低TGF-β1 mRNA表达和增加TGF-β3 mRNA的表达，引起TIMP1表达明显减少，从而MMP1／TIMP1相对比例增加，达到促进Ⅰ型胶原降解，减轻瘢痕增生的作用。     

三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长影响研究

目的 探讨积雪草甙、苦参碱、川芎嗪等中药有效成分对皮肤瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩成纤雏细胞，分别加入不同浓度的积雪草甙、苦参碱、川芎嗪。通过倒置显微镜观察、MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶检测等方法分别观测三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长的影响。结果 与空白对照组相比，实验组中加入积雪草甙0.5mg/ml、苦参碱1．0mg/ml、川芎嗪1．9mg/ml后成纤维细胞数量均明显减少；OD值降低（P〈0．05）；当积雪草甙浓度高于5mg/ml时乳酸脱氢酶含量超出正常范围。结论 有效浓度下，三种中药有效成分均能抑制皮肤瘢痕成纤维细胞生长，其作用强度积雪草甙〉苦参碱〉川芎嗪。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞中有关传导分子mRNA水平的实验研究

目的比较转化生长因子βSmad蛋白（TGF-β／Smads）信号传导通路中有关传导分子mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达。方法切取确诊为瘢痕疙瘩患者的部分瘢痕疙瘩组织,正常者的皮肤作为对照组;细胞总RNA提取;反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测TIEG、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果瘢痕疙瘩中成纤维细胞TIEG、Smad2 mRNA表达远高于正常皮肤,Smad7 mRNA表达低于正常皮肤（P〈0．05）。结论瘢痕疙瘩中的成纤维细胞表达TIEG增高,使表达Smad2增强,Smad7减弱,促使瘢痕生成。     

白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察白藜芦醇对体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞及TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 不同浓度白藜芦醇处理病理性瘢痕成纤维细胞后,应用扫描电镜观察其形态学变化;MTT法检测其增殖状况;分别用反转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞化学染色法检测其TGF-β1/Smads信号通路中相关蛋白TGF-β1,Smads mRNA和蛋白的表达.结果 病理性瘢痕成纤维细胞经白藜芦醇干预后,在形态学上可见到典型的凋亡特征;MTT法检测结果显示,各不同药物浓度组与对照组相比,OD值均偏低,差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1,Smad 2、3、4 mRNA和蛋白表达降低,而Smad 7 mRNA和蛋白表达增加,并且呈剂量依赖关系,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇能通过下调TGF-β1,Smad 2、3、4表达并上调Smad 7表达,来达到其抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖并诱导其凋亡的作用.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的：探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法：收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组、正常皮肤成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组及正常皮肤成纤维细胞对照组4组,用RT-PCR检测各组转化生长因子－β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）mRNA、Smad7mRNA的表达,流式细胞术（flow cytometry,ＦＣＭ）检测各组细胞的周期及凋亡。结果：人瘢痕疙瘩成纤维细胞较正常皮肤成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高（P=0.001）,Smad7mRNA表达降低（P=0.001）,细胞周期停滞于G0/G1期（P=0.035）及细胞凋亡（P=0.006）比例降低;5-氮杂-2-脱氧胞苷干预人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β1mRNA表达降低（P=0.003）,Smad7mRNA回升（P=0.000）,ＦＣＭ显示瘢痕疙瘩成纤维细胞停滞于G0/G1期比例增加（P=0.000）并且细胞凋亡率增加（P=0.047）,而正常皮肤成纤维细胞组无明显变化（P均>0.05）。结论：甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可影响瘢痕疙瘩形成相关因子的表达并且可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,而对正常皮肤的成纤维细胞无明显影响。瘢痕疙瘩的发病可能与相关基因甲基化有关,5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为瘢痕疙瘩治疗的新选择。     

积雪草苷对增生性瘢痕中肿瘤坏死因子αmRNA及Ⅰ型胶原表达的影响

目的 探讨积雪草苷(Asiaticoside)对人增生性瘢痕中肿瘤坏死因子α(Tumour Necrosis Factor alpha,TNF-α)mRNA及Ⅰ型胶原(Type I Collogen)表达的影响.方法 临床上收集烧伤后5-8个月增生性瘢痕标本18例,其中经积雪草苷治疗组和非积雪草苷治疗组各9例.采用原位杂交和免疫组织化学方法,分别检测增生性瘢痕中TNF-αmRNA及I型胶原的表达水平,并利用图象分析.结果 进行结果分析.结果 TNF-α mRNA在增生性瘢痕中主要表达于单核吞噬细胞胞浆,仅少部分表达于基底层细胞胞浆.经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TNF-αmRNA表达明显增多,胞浆浓染,统计学上明显高于非积雪草苷治疗组TNF-α mRNA表达(P＜0.01).Ⅰ型胶原表达于增生性瘢痕中,经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中Ⅰ型胶原含量较少,排列整齐,与非积雪草苷治疗组有显著差异(P＜0.05).结论 积雪草苷能促进增生性瘢痕中TNF-α mRNA的表达,减少Ⅰ型胶原合成,达到减轻瘢痕增生的作用.     

5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响

目的:探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷对人瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用及对人瘢痕疙瘩成纤维细胞相关因子的影响。方法:收集人瘢痕疙瘩以及周围正常皮肤标本原代培养成纤维细胞,分为瘢痕疙瘩成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组、瘢痕疙瘩成纤维细胞对照组、正常皮肤成纤维细胞5-氮杂-2-脱氧胞苷药物干预组及正常皮肤成纤维细胞对照组4组,用RT-PCR检测各组转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA、Smad7mRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞的周期及凋亡。结果:人瘢痕疙瘩成纤维细胞较正常皮肤成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高(P=0.001),Smad7mRNA表达降低(P=0.001),细胞周期停滞于G0/G1期(P=0.035)及细胞凋亡(P=0.006)比例降低;5-氮杂-2-脱氧胞苷干预人瘢痕疙瘩成纤维细胞后,TGF-β1mRNA表达降低(P=0.003),Smad7mRNA回升(P=0.000),FCM显示瘢痕疙瘩成纤维细胞停滞于G0/G1期比例增加(P=0.000)并且细胞凋亡率增加(P=0.047),而正常皮肤成纤维细胞组无明显变化(P均>0.05)。结论:甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷可影响瘢痕疙瘩形成相关因子的表达并且可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及促进其凋亡,而对正常皮肤的成纤维细胞无明显影响。瘢痕疙瘩的发病可能与相关基因甲基化有关,5-氮杂-2-脱氧胞苷可能成为瘢痕疙瘩治疗的新选择。     

periostin在人瘢痕成纤维细胞中的表达及氢化可的松对其表达的影响

目的:通过检测periostin在人过度增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及其对氢化可的松作用的反应,探讨periostin在瘢痕形成中的作用.方法:采用组织块培养法体外培养原代成纤维细胞,以RT-PCR及免疫细胞化学技术分别检测24例人瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中periostin的mRNA和蛋白的表达,氢化可的松(0.1g /L)的作用时间为96h.结果:periostin的mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞(1.645±0.549)和增生性瘢痕成纤维细胞(1.084±0.396)中的表达均高于正常皮肤成纤维细胞(0.274±0.215;P<0.05),两者分别增加83%和75%.氢化可的松作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞中和增生性瘢痕成纤维细胞中periostin的mRNA表达量分别减少32%和47%,两者与氢化可的松作用前相比差异均有统计学意义.Periostin蛋白主要分布在成纤维细胞核周围的胞浆中,它在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中的表达(分别为91.815±0.961和70.166±2.250)高于在正常皮肤成纤维细胞中的表达(41.011±1.576,P<0.01),两者分别增加55%和42%.结果:periostin在过度增生性瘢痕成纤维细胞中的表达增高,氢化可的松可能抑制其基因的表达;periostin可能影响过度增生性瘢痕成纤维细胞的功能,它可能是一种瘢痕相关基因.     

泛素特异性蛋白酶4对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨泛素特异性蛋白酶4(USP4)对增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖的影响.方法 体外培养人HS成纤维细胞(HSFB),并取第4代细胞用于试验.利用Vialinin A(USP4抑制剂)干预HS成纤维细胞,Western blot检测干预细胞中不同时间段(0、12、24、48 h)USP4、TβRI及Smad7蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测Vialinin A对HS成纤维细胞增殖的影响,分为试验组和对照组(不作干预).结果 Vialinin A作用后,随着时间推移,HSFB中的USP4蛋白表达逐渐减低,TβRI的蛋白也逐渐减低,在作用12 h后明显降低(P<0.05);Smad7的蛋白表达则逐渐升高(P<0.05).Vialinin A同一浓度作用后,随着时间推移,HSFB增殖活性逐渐受到抑制,试验组与对照组同一时间段比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 USP4可能通过调控TGF-β/Smad信号通路影响瘢痕细胞增殖,抑制其表达可使HS成纤维细胞增殖减慢.     

A型肉毒素预防人瘢痕成纤维细胞增生机制的初步研究

目的 探究不同浓度A型肉毒素(BTX-A)对瘢痕成纤维细胞的影响,初步阐释BTX-A治疗瘢痕及预防术后瘢痕增生的相关分子作用机制.方法 选取人瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的B T X-A(0.01、0.10、1.00 U/L及10.00 U/L)作用24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞黏附及骨架变化,并采用MTT及流式技术检测其增殖、凋亡及周期变化,同时采用实时荧光定量PCR(qRCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)方法 ,探究TGF-β、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2及MMP-9基因及蛋白的表达变化.结果 随着BTX-A剂量的升高,其细胞黏附数量及骨架荧光强度逐渐减弱;细胞增殖能力减弱且主要阻断在细胞G0/G1期;此外其凋亡也随着BTX-A剂量增大而逐渐增强.qPCR及Western blot结果显示,随着BTX-A剂量增大,MMP-1及MMP-2基因及蛋白均呈现高表达,而TGF-β及MMP-9呈现出低表达.结论 BTX-A通过阻断瘢痕细胞G0/G1期抑制其增殖,同时提高MMP-1及MMP-2的表达来减轻瘢痕形成,对瘢痕的治疗起着积极的作用.     

增生性瘢痕成纤维细胞P物质表达的研究

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^-7mol／L）加入培养液中刺激成纤维细胞，分别于刺激前和刺激后1、3、6、12、24h采用RT—PCR检测细胞内SP基因的表达情况，ELISA检测培养液中SP浓度。正常皮肤对照组及瘢痕对照组除不应用SP外，余处理均相同。结果未受SP刺激时，人增生性瘢痕及正常皮肤体外培养的成纤维细胞均能分泌一定浓度的SP，两者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。SP刺激后，正常皮肤体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达均在1～3h内达到高峰，随后迅速下降，24h后仍高于其正常水平；而增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达在3～6h内达到高峰，随后缓慢下降，24h后仍高于其正常水平。两种成纤维细胞SP的分泌差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性SP可诱使成纤维细胞内SP的分泌增加，而增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞SP的分泌情况有明显差异。     

抑癌基因p27对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的：探讨抑癌基因p27对增生性瘢痕的作用。方法：取体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞（HTsFb），将构建的pcDNA3-p27真核表达质粒体外转染HTsFb，经G418筛选获得稳定性表达的细胞克隆，用MTT和^3H-TdR掺入法观察抑癌基因p27对HTsFb增殖及DNA合成的影响。结果：抑癌基因p27对HTsFb增殖及DNA合成均有显著抑制作用。结论：抑癌基因p27可能通过抑制成纤维细胞增殖及DNA合成抑制瘢痕增生。     

积雪草苷对烫伤创面成纤维细胞及结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨积雪草苷对烫伤创面成纤维细胞及结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法将30只SD大鼠按随机数字表法进行分组,选取6只大鼠不予烫伤,其余进行烫伤建模,采用积雪草苷和凡士林对烫伤创面组织进行同体对照研究,HE染色评估成纤维细胞变化,免疫组织化学法检测CTGF蛋白表达情况,并用透射电镜观察成纤维细胞微观结构改变。结果积雪草苷治疗组大鼠伤后第14天创面CTGF含量高于对照组（P〈0．05）,伤后第21天创面CTGF含量低于对照组（P〈0.05）。成纤维细胞HE染色的大体形态及电镜观察呈现双相动态变化。结论积雪草苷可能对成纤维细胞增殖及CTGF表达存在双相调节作用,对促进创面少瘢痕愈合有一定作用。     

川芎嗪抑制瘢痕成纤维细胞增殖及胶原的合成

目的：研究川芎唪治疗增生性瘢痕的机制。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞进行体外培养,通过ＭＴＴ法检测成纤维细胞细胞的增殖生,用羟脯氨酸（ＨＰ）比色法测定细胞胶中成含量。结果：ＭＴＴ法显示川芎嗪增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,可以减少成纤维细胞的胶原合成使细胞形态学发生改变。结论;川芎唪可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成。     

PPAR-γ在增生性瘢痕中的表达及意义

目的探讨核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)在正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及其意义。方法原代细胞培养正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,应用实时定量聚合酶链式反应技术(real-time Q-PCR)检测细胞中PPAR-γm RNA的表达;Western blotting技术检测细胞中PPAR-γ蛋白的表达。结果 Real-time Q-PCR结果显示PPAR-γmRNA在正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞中均有表达,正常皮肤成纤维细胞中PPAR-γmRNA的表达量明显高于增生性瘢痕成纤维细胞中PPAR-γmRNA的表达量,两者之间的差异有显著性意义(P<0.05);Western blotting结果显示PPAR-γ蛋白在正常皮肤成纤维细胞和增生性瘢痕成纤维细胞中均有表达,增生性瘢痕成纤维细胞中PPAR-γ蛋白明显低于正常皮肤成纤维细胞,两者之间的差异有显著性意义(P<0.05)。结论 PPAR-γ在增生性瘢痕成纤维细胞中表达下降,提示其可能参与了增生性瘢痕的形成过程,调控PPAR-γ有望成为治疗增生性瘢痕的新靶点。     

积雪草苷通过Vimentin/NLRP3通路诱导鼻咽癌细胞凋亡研究

目的研究积雪草苷对人鼻咽癌CNE-2细胞生长、凋亡及凋亡通路的影响。方法体外培养CNE-2细胞,将不同浓度的积雪草苷作用于CNE-2细胞,MTT和CCK-8法检测积雪草苷对细胞生长的影响;流式细胞术检测对细胞凋亡的影响;Western blotting检测Vimentin、NLRP3、Bcl-2和Caspase-3表达;ELISA法检测TNF-α和IL-1β含量。结果MTT和CCK-8结果显示,积雪草苷可浓度依赖性地抑制CNE-2细胞的生长;流式细胞仪检测结果显示,积雪草苷可浓度依赖性地促进CNE-2细胞凋亡;Western blotting结果显示,积雪草苷促进Caspase-3蛋白的表达,抑制Vimentin、NLRP3和Bcl-2的表达;ELISA法结果显示,积雪草苷可浓度依赖性地降低TNF-α和IL-1β含量。结论积雪草苷可显著促进人鼻咽癌细胞株CNE-2细胞凋亡,其机制可能与下调Vimentin,NLRP3蛋白的表达来实现的。