荧光纳米颗粒NaYF4:Yb,Er作为显像介质的生物相容性

目的 检测上转频荧光纳米颗粒的生物学体内、外相容性,证实其作为显像介质的生物安全性。方法 将培育后的小鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）、胚胎成纤维细胞（NIH/3T3）及成肌细胞（C2C12）分别与不同浓度（0、10、50、100、200 μg/mL）的NaYF4:Yb,Er共孵育,采用MTT法检测细胞的增殖活性,并测定C2C12成肌细胞形成肌管细胞的功能。将NaYF4:Yb,Er纳米颗粒DMEM混悬液注射入C57BL/6小鼠,行小鼠肝肾功能测定;并对重要脏器行HE组织学染色,检测小鼠的体内毒性。结果 MTT法细胞毒性检测显示,NaYF4:Yb,Er纳米颗粒对NIH/3T3和C2C12的毒性呈剂量与孵育时间正相关性（NIH/3T3：r=0.974,P<0.05;C2C12：r=0.996,P<0.05）;而对BMSC的毒性并没有表现出剂量与孵育时间具有相关性（r=-0.218,P>0.05）。NaYF4:Yb,Er纳米颗粒孵育48 h后,对C2C12成肌细胞形成肌管细胞功能未见明显影响。小鼠被注射NaYF4:Yb,Er纳米颗粒DMEM混悬液2、4周后,肝肾功能及重要脏器均未见明显损伤。结论 NaYF4:Yb,Er纳米颗粒作为具有强荧光强度的显影介质,在体内、外显影需求浓度下对细胞毒性及全身各重要器官的损伤均在安全范围内,是一种优秀的生物成像显影介质。     

双色上转换纳米荧光探针在套细胞 淋巴瘤细胞靶向成像中的应用

目的 构建上转换纳米靶向探针，并探究其在特异性标记套细胞淋巴瘤细胞株中的应用价值，为 体内套细胞淋巴瘤的靶向诊断提供理论依据和指导。方法 采用H2O2 对NaYF4 ：Er3+ 和NaYF4 ：Yb3+，Tm3+ 上 转换纳米粒子表面进行氧化处理，使该粒子由最初的疏水性转变为亲水性；在NHS、EDC 的作用下，亲水性 的NaYF4 ：Er3+ 上转换纳米粒子与CD20 单克隆抗体共价结合，NaYF4 ：Yb3+，Tm3+ 上转换纳米粒子与CD5 单 克隆抗体共价结合；CD20 抗体-NaYF4 ：Er3+ 纳米粒子轭合物和CD5 抗体-NaYF4 ：Yb3+，Tm3+ 纳米粒子轭合 物的混合悬液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h ；CD20 抗体-NaYF4 ：Er3+ 纳米粒子轭合物和NaYF4 ： Yb3+，Tm3+ 纳米粒子的混合悬液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h ；NaYF4 ：Er3+ 纳米粒子和CD5 抗体 -NaYF4 ：Yb3+，Tm3+ 纳米粒子轭合物的混合悬液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h ；未偶联有任何抗体 的NaYF4 ：Er3+ 和NaYF4 ：Yb3+，Tm3+ 上转换纳米粒子的混合液与套细胞淋巴瘤细胞株室温下孵育2 h ；使用配 备有980 nm 近红外激光的尼康Eclipse Ti-S 倒置荧光显微镜对各组细胞进行上转换成像，观察细胞表面上转 换荧光的强度。结果 实验组细胞表面释放出蓝、绿双色的上转换纳米荧光，但通过观察3 组对照实验，细胞表 面却仅分别释放出单一的绿色荧光、蓝色荧光以及未见任何荧光。结论 上转换纳米粒子与CD20 或CD5 抗体 成功共价偶联，可以对套细胞淋巴瘤细胞株进行特异性标记、成像。     

基于TMT蛋白质组学探讨黄精多糖对顺铂诱导C2C12细胞肌管萎缩的作用机制

目的 基于串联质量标签(TMT)标记的定量蛋白质组学研究黄精多糖改善顺铂诱导小鼠成肌细胞(C2C12细胞)肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓,探讨黄精多糖的作用机制。方法 将C2C12细胞培养至肌管,分为4组：正常组、顺铂组、黄精多糖组、顺铂+黄精多糖组。按如下方法处理。正常组：不含血清的高糖DMEM培养基;顺铂组：不含血清的高糖DMEM培养基+50μmol/L顺铂;黄精多糖组：不含血清的高糖DMEM培养基+0.200 mg/L黄精多糖;顺铂+黄精多糖组：不含血清的高糖DMEM培养基+50μmol/L顺铂+0.200 mg/L黄精多糖。各组均避光培养24 h。CCK8法检测C2C12细胞活力,免疫荧光法检测肌管直径和细胞融合指数,TMT蛋白质组学表征黄精多糖改善顺铂致C2C12细胞肌管萎缩的蛋白质代谢轮廓。结果 CCK8法结果显示,黄精多糖可促进C2C12细胞活力,顺铂致C2C12肌管萎缩的造模浓度为50μmol/L,黄精多糖的给药质量浓度为0.200 mg/L。免疫荧光法结果显示,与顺铂组比较,顺铂+黄精多糖组萎缩肌管的直径和融合指数升高(P<0.01)。蛋白质组学结果显示,以磷酸泛酰-...     

生物标记用NaYF4∶Yb3+,Er3+荧光探针的紫外上转换发光

目的:开发980 nm激发紫外上转换发光的纳米粒子.方法:采用热解法合成NaYF4∶Yb3+,Er3+;通过TEM、XRD和荧光光谱等方法对样品进行形貌、结构和发光性能的表征,研究紫外上转换发光性能.结果:NaYF4∶Yb3+,Er3+纳米材料可产生波长为321、380和410 nm的紫外上转换发光.结论:980 nm二极管激光器可激发NaYF4:Yb3+,Er3+纳米粒子产生紫外上转换发光.     

NaYF4和NaGdF4对稀土掺杂纳米粒子上转换发光性能的影响

目的：探索基质成分对上转换发光性能的影响。方法采用热解法合成NaYF4：Yb3＋,Er3＋和NaGdF4：Yb3＋, Er3＋;通过TEM、XRD和荧光光谱等方法表征样品的形貌、结构和发光性能;研究NaYF4和NaGdF4基质对稀土掺杂纳米粒子上转换发光性能的影响。结果 NaYF4作为基质材料时的上转换发光要优于NaGdF4。结论 NaYF4：Yb3＋,Er3＋纳米粒子能实现高效上转换发光,并可作为纳米荧光标记物应用于医学诊断。     

C26结肠癌细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养体系诱导C2C12细胞肌管萎缩及甘草多糖的保护作用

目的:基于C26结肠癌细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养体系,构建C2C12细胞肌管萎缩模型,利用该模型研究甘草多糖对肌管的保护作用及机制。方法:构建C26细胞和RAW264.7细胞共培养体系,分别制备单一细胞和共培养细胞的条件培养液。加入诱导分化液使C2C12成肌细胞形成肌管。(1)将已分化的C2C12细胞分为对照组、C26模型组、RAW264.7模型组、共培养模型组。各组分别给予相应的条件培养液,孵育48 h, HE染色观察肌管形态,并测定肌管直径。(2)将已分化的C2C12细胞分为对照组及甘草多糖不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5 mg/ml)组,分别给予相应浓度的甘草多糖,孵育48 h后,测定细胞活力。(3)将已分化的C2C12细胞分为对照组、C26模型组、C26+甘草多糖组。除对照组外,其他各组均给予C26结肠癌细胞条件培养液;同时,甘草多糖干预组分别给予0.5、1、2 mg/ml甘草多糖。孵育48 h后,HE染色观察肌管形态,并测定肌管直径。(4)将已分化的C2C12细胞分为对照组、共培养模型组、共培养+甘草多糖组。除对照组外,其他各组均给予共培养细胞条件培养液;同时,甘草多糖干预组分别给予0.5、1、2 mg/ml甘草多糖。孵育48 h后,HE染色观察肌管形态,并测定肌管直径。(5)不同的条件培养液或共培养条件培养液与甘草多糖(2 mg/ml)协同干预后,Western blot检测信号传导与转录激活因子3(STAT3)蛋白表达及磷酸化水平。结果:(1)3种条件培养液均可诱导肌管直径减小(P0.01),且共培养模型组的相对肌管直径较C26模型组显著降低(P0.05)。(2)≤2.5 mg/ml甘草多糖对细胞活力无明显影响。(3)与C26模型组相比,C26+甘草多糖(0.5、1和2 mg/ml)组细胞的相对肌管直径显著升高(P0.01)。(4)与共培养模型组相比,共培养+甘草多糖(0.5、1和2 mg/ml)组细胞的相对肌管直径显著升高(P0.01)。(5)3种条件培养液干预后均可诱导C2C12肌管细胞STAT3磷酸化水平升高,且共培养模型组的p-STAT3/STAT3蛋白表达比值明显高于C26模型组(P0.01)。与共培养模型组相比,共培养+甘草多糖(2 mg/ml)组p-STAT3/STAT3蛋白表达比值显著下调(P0.01)。结论:甘草多糖可能通过抑制STAT3信号通路减轻C26结肠癌细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养体系诱导的肌管萎缩。     

MicroRNA-125b介导棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗

目的:探讨microRNA-125b(miR125-b)在棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗中的作用与机制。方法:C2C12成肌细胞常规方法分化为C2C12肌管细胞;棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗;定量RT-PCR检测mRNA表达;免疫印迹检测蛋白表达。结果:①棕榈酸诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗,伴有mTOR信号通路的激活;②抑制mTOR信号通路可显著降低棕榈酸对C2C12肌管细胞胰岛素抵抗的影响;③棕榈酸可显著增加miR-125b的表达,mTOR抑制剂可显著降低棕榈酸对miR-125b表达的影响;④miR-125b模拟剂可诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗,而miRNA-125b抑制剂可显著减轻棕榈酸诱导的C2C12肌管细胞胰岛素抵抗。结论:棕榈酸经mTOR/miR-125b信号通路诱导C2C12肌管细胞胰岛素抵抗。     

Wnt/β-catenin信号通路及骨髓间充质干细胞源性外泌体在温和灸联合骨髓间充质干细胞移植促进大鼠肛门括约肌修复中的作用*

目的 基于前期研究证实温和灸联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC）移植可协同促进大鼠损伤肛门括约肌结构和功能修复的基础,探索协同修复效果是涉及Wnt/β-catenin通路,及BMSC源性外泌体对C212成肌细胞的影响。方法 将16只SD大鼠随机等分4组,所有大鼠均采用Zutshi大鼠肛门括约肌复合体损伤模型,造模成功后分别采用温和灸30 min、BMSC移植及生理盐水治疗,连续14 d。治疗结束后剥离肛门括约肌后采用q PCR和Western blot检测组间Wnt4、Wnt5a、Wnt5b蛋白表达差异。将BMSC源性外泌体与小鼠成肌细胞C2C12共培养后采用EDU及CCK8检测BMSC外泌体对C2C12细胞增殖作用,探索不同浓度外泌体对BMSC增殖的差异。流式细胞术检测BMSC源性外泌体对C2C12细胞周期的影响。结果 免疫印迹和qPCR分析结果提示温和灸联合BMSC移植可促进Wnt4、Wnt5A、Wnt5B高表达。CCK8结果显示BMSC源性外泌体可促进C2C12细胞的增殖,在浓度为25 μg/mL时疗效最佳。共培养结果显示BMSC源性外泌体可抑制Cleaved Caspase3和BAX表达,并显著上调BCL2表达。结论 温和灸联合BMSC移植可促进Wnt4、Wnt5A、Wnt5B高表达,BMSC源性外泌体可调控成肌细胞C2C12的细胞周期从而促进增殖并抑制凋亡,推测温和灸联合BMSC移植可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进对大鼠损伤肛门括约肌的修复作用。     

C2C12成肌细胞体外诱导分化为肌管的实验

 摘 要： 【目的】 观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞C 2C 12向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用，探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】 将C 2C 12成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖DMEM培养基培养，收集细胞，在相差显微镜下观察形态变化，并通过免疫细胞化学（Imminocytochemistry，ICC）及RT-PCR方法分别检测肌性相关基因表达的改变。【结果】 ①20 mL/L和50 mL/L的马血清均能促使C 2C 12细胞形成肌小管，20 mL/L浓度马血清诱导效率最好（第7天时肌小管形成率分别为31．4％ ± 2．1％和19．0％ ± 1．6％，P<0．001）。②20 mL/L马血清诱导3～4 d开始有肌管形成，之后肌管越来越多，到8～9 d达高峰（第9天40．2％ ± 1．3％），往后细胞逐渐衰老死亡。③20 mL/L马血清诱导C 2C 12细胞向成熟肌细胞分化过程中，肌相关蛋白分子表达发生变化：结蛋白（desmin）、成肌分化抗原（MyoD）、生肌素（myogenin）和肌球蛋白（myosin）等表达逐渐增强（未刺激时分别约为49．6％ ± 1．1％、23．4％ ± 1．1％、4．8％ ± 1．6％和2．6％ ± 1．5％；第6天时分别提高为80．4％ ± 1．8％、85．4％ ± 1．1％、22．2％ ± 1．1％和26．0％ ± 1．6％；P<0．001）；desmin、MyoD和myogenin相应的mRNA分子也可以通过RT-PCR检测到。【结论】 ①低浓度的马血清能够有效刺激C 2C 12成肌细胞向成熟细胞分化，以20 mL/L浓度效果最好；②C 2C 12细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板；③肌分化发育过程比较复杂，许多因素都可能起影响，研究设计要尽量标准化。     

重组腺辅助病毒载体的制备、纯化及其介导的基因转移

目的 :探讨一种制备、纯化重组腺辅助病毒 (r AAV)载体的有效方法。方法 :以质粒 PDG和含有人 apo AIc DNA的AAV载体共转染 2 93T细胞 ,继以 Iodixanol密度梯度离心结合肝素亲和层析法分离、纯化 ,斑点杂交鉴定 r AAV病毒颗粒数 ;并以含人 apo AIc DNA的 r AAV感染 C2 C12细胞。结果 :r AAV颗粒数为 7× 10 1 0 / ml;r AAV成功介导了人 apo AIc DNA在 C2 C12细胞中的表达并持续了 30天 ,在分化为肌管细胞后仍有此表达能力。结论 :本实验采取的制备、纯化 r AAV的方法简便、高效 ,r AAV成功介导 apo AI基因在肌源性细胞 C2 C12中的表达。     

不同浓度的维生素C对C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察不同浓度的维生素C（VitC）对体外培养的骨骼肌成肌细胞（C2C12）增殖、凋亡的影响。方法：取体外培养的C2C12细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,离心重悬,调整细胞密度,按200 μL/孔接种,常规培养,待细胞融合率达80%且未出现细胞分化时,将细胞分6组：阴性对照组（C2C12 细胞中加入单纯无血清培养基）、H2O2组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基）和VitC 1,2,3,4组（C2C12 细胞中加入含500 μmol/L H2O2的无血清培养基的基础上,分别加入不同浓度的VitC：10,20,60,100 mg/L）。分别在干预0,6,24,36,48,72 h后采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测各组C2C12细胞的增殖。在干预36 h后采用Annexin V-PI双染法检测各组C2C12细胞凋亡率。结果：在干预36和72 h时,各浓度的VitC组的吸光度（OD）值均较H2O2组显著升高（P＜0.001）,其中以VitC 4组升高最为显著,而且VitC 4组在干预36 h时的吸光度值高于阴性对照组（P＜0.05）;在干预36 h时,VitC 2,3和4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于H2O2组;VitC 2和3组的C2C12成肌细胞凋亡率高于阴性对照组,而VitC 4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：VitC能够有效抑制H2O2诱导的C2C12成肌细胞的凋亡,高浓度的VitC可能在干预36 h时对C2C12成肌细胞有促增殖的作用。     

法舒地尔阻断ROCK1触发C2C12成肌细胞呼吸功能异常介导的肌肉萎缩

目的 明确法舒地尔(fasudil)能否阻断Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)激活导致的C2C12成肌细胞呼吸功能异常介导的肌肉萎缩.方法 体外培养C2C12成肌细胞,给予2％的马血清诱导分化为成熟肌小管细胞.然后根据给予不同处理将其分成4组:Ad-GFP组,仅感染GFP腺病毒载体;Ad-RCCK1组,感染ROCK1腺病毒载体诱导细胞过表达ROCK1;Ad-GFPF组,感染GFP腺病毒载体,并给予10μmol/L法舒地尔刺激;Ad-ROCK1F组,感染ROCK1腺病毒载体诱导细胞过表达ROCK1,并给予10 μmol/L法舒地尔刺激.通过Seahorse能量代谢分析仪评估不同刺激条件下C2C12成肌细胞的细胞耗氧率(OCR)及胞外酸化率(ECAR),以明确ROCK1过表达和法舒地尔刺激对C2C12成肌细胞呼吸功能的影响.采用MitoTracker(R)红色荧光探针测定线粒体裂变情况.用蛋白质印迹法检测ROCK1、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)及其磷酸化蛋白p-Drp1、肌肉萎缩相关蛋白E3泛素连接酶肌肉环指蛋白1(MuRF1)和肌肉萎缩F-box(MAFbx,又称Atrogin1)的表达.结果 Seahorse分析结果显示,与AdGFP组比较,Ad-ROCK1组C2C12成肌细胞OCR及ECAR明显增加,细胞的基础呼吸、最大呼吸及偶联ATP产生所需的呼吸增加,差异均有统计学意义(P＜o.01);MitoTracker(R)荧光探针结果显示Ad-ROCK1组细胞线粒体裂变增加,线粒体大小频数分布左移.Ad-ROCK1F组C2C12成肌细胞OCR和ECAR较Ad-ROCK1组明显减少(P＜0.05),基础呼吸和最大呼吸也降低(P＜0.05).Ad-ROCK1F组p-Drp1/Drp1比例、ROCK1、MuRF1和Atrogin1的表达均较Ad-ROCK1组减少(P＜0.05).结论 法舒地尔作为ROCK1的抑制剂,可阻断体外培养C2C12成肌细胞ROCK1过表达导致的细胞呼吸异常,并减少线粒体动力相关蛋白的活性和肌肉萎缩相关蛋白的表达.     

不同浓度的维生素C对C_2C_（12）成肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察不同浓度的维生素C（VitC）对体外培养的骨骼肌成肌细胞（C2C12）增殖、凋亡的影响。方法：取体外培养的C2C12细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,离心重悬,调整细胞密度,按200μL/孔接种,常规培养,待细胞融合率达80%且未出现细胞分化时,将细胞分6组：阴性对照组（C2C12细胞中加入单纯无血清培养基）、H2O2组（C2C12细胞中加入含500μmol/L H2O2的无血清培养基）和VitC 1,2,3,4组（C2C12细胞中加入含500μmol/L H2O2的无血清培养基的基础上,分别加入不同浓度的VitC：10,20,60,100 mg/L）。分别在干预0,6,24,36,48,72 h后采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测各组C2C12细胞的增殖。在干预36 h后采用Annexin V-PI双染法检测各组C2C12细胞凋亡率。结果：在干预36和72 h时,各浓度的VitC组的吸光度（OD）值均较H2O2组显著升高（P〈0.001）,其中以VitC 4组升高最为显著,而且VitC 4组在干预36 h时的吸光度值高于阴性对照组（P〈0.05）;在干预36 h时,VitC 2,3和4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于H2O2组;VitC 2和3组的C2C12成肌细胞凋亡率高于阴性对照组,而VitC 4组的C2C12成肌细胞凋亡率明显低于阴性对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：VitC能够有效抑制H2O2诱导的C2C12成肌细胞的凋亡,高浓度的VitC可能在干预36 h时对CC成肌细胞有促增殖的作用。     

高剂量葡萄糖对小鼠肌管细胞自噬表达的影响

目的：探讨高剂量葡萄糖对肌管细胞自噬表达的影响。方法：使用分化培养基诱导小鼠成肌细胞分化成肌管细胞,分正常剂量（5.5 mmol/L）和高剂量（17 mmol/L和30 mmol/L）葡萄糖浓度的3组培养基培养肌管细胞,于6、12、24、36、48、60、72 h后分别收集细胞,检测自噬相关蛋白和mRNA表达量,并用串联荧光标记LC3（mRFP-GFP-LC3）慢病毒转染小鼠成肌细胞,动态监测自噬流。结果：高剂量葡萄糖条件下肌管细胞自噬表达存在2个阶段,30 mmol/L组培养24 h自噬表达下降,LC3和Beclin-1蛋白表达水平比5.5 mmol/L组低（P＜0.05）;而在30 mmol/L葡萄糖条件下培养48、60和72 h后自噬水平增强,LC3和Beclin-1的基因表达均明显升高（P＜0.05）。肌管细胞GFP和RFP荧光斑点的定位与数量分析也证明30 mmol/L葡萄糖浓度的培养基培养48、60和72 h后可显著增加自噬体和自噬溶酶体的合成。结论：高剂量葡萄糖对肌管细胞自噬表达有重要影响,不同时间自噬表达存在差异,长期高血糖状态可诱导自噬过度活化。     

Producing and secreting human factor IX with high efficiency by murine primary and C2C12 muscle cells carrying human factor IX gene

Inthelastdecade,exvivoapproachesusingmyoblastsasthetargetcellsforapotentiallydurablegenetherapymethodhavebeenextensivelytested[l~6].Skeletalmyoblastshaveseveralattrac-tivepropertiesastargetcellsforsomaticcellgenetherapy.Firstly,skeletalmusclehasalargetissuemassthatoccupiesabout4O%ofthebodyvolume.Secondly,myoblastscanbeeasilyisolated,cul-tured,transfectedwithvariousapproachesandim-plantedbackintothemuscle.Thirdly,myoblastscarryingtransgenecannotonlyefficientlyfusewiththeexistingmyofibersuponin…     

Expression of Lecithin: Cholesterol Acyltransferase and/or apoA-I Mediated by Recombinant Adeno-associated Virus in Myogenic Cell

Ａｓａｋｅｙｐａｒｔｉｃｉｐａｎｔｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｒｅｖｅｒｓｅｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ (ＲＣＴ)ａｎｄｐｌａｙｉｎｇａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＨＤＬａｎｄｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ     

睾酮对胰岛素敏感细胞胰岛素受体底物1和葡萄糖转运载体4表达的影响

目的探讨雄激素对胰岛素敏感性影响的可能的分子机制。方法诱导3T3-L1前脂肪细胞系和C2C12成肌细胞系分别分化为3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞,然后对这两种细胞分别以10-9mol/L睾酮处理4、8、12、24及48h,并以不同浓度(10-12~10-5mol/L)的睾酮处理24h,用Western印迹的方法检测两种细胞在以两种方法处理后胰岛素受体底物1(IRS-1)和葡萄糖转运载体4(GLUT4)表达的变化。结果随着10-9mol/L浓度的睾酮处理时间的延长,IRS-1和GLUT4在两种细胞的表达逐渐增加,IRS-1于12h达峰后下降。3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中12h峰值分别是0h对照的(1·42±0·42)倍和(1·53±0·14)倍,均P<0·05;GLUT4于24h达峰后表达下降[3T3-L1脂肪细胞及C2C12骨骼肌细胞中24h峰值分别是0h的(3·22±0·10)倍和(5·17±1·06)倍,均P<0·05]。当睾酮处理浓度从10-12mol/L逐渐增加时,IRS-1在两种细胞的表达逐渐增加,于10-9mol/L达峰值后表达逐渐下降[在3T3-L1脂肪细胞和C2C12骨骼肌细胞,10-9mol/L睾酮处理后的峰值较空白对照分别增加(4·23±0·27)倍和(3·16±0·15)倍,均P<0·05]。GLUT4在C2C12骨骼肌细胞的表达随着睾酮浓度的升高有增加的趋势[经10-7mol/L睾酮处理后的表达量是空白对照的(2·99±0·15)倍,P<0·05,于10-7mol/L后增加趋势不明显。在3T3-L1脂肪细胞中,GLUT4的表达于10-11mol/L达峰值[较空白对照增加(2·58±0·02)倍,P<0·05],然后随着睾酮浓度的升高表达下降。结论睾酮影响胰岛素信号转导分子的表达存在剂量和时间上的双向作用。     

不同活性的survivin基因启动子片段的克隆及鉴定

目的 检测survivin在成体干细胞等细胞中的表达差异,克隆并比较3种不同片段长度survivin启动子的活性.方法 取成纤维母细胞10T1/2、成肌母细胞C2C12、真皮多能干细胞DMSC、人骨髓间充质干细胞BMSC、结肠腺癌细胞HT29、人胚肾母细胞293FT进行培养.用RT-PCR和免疫细胞化学染色检测survivin在成体干细胞和肿瘤细胞中的表达;用基因组DNA PCR和分子克隆等方法,构建不同长度的survivin基因启动子驱动荧光素酶报告基因表达的载体,经脂质体转染293FT细胞,测定相对荧光素酶活性以反映启动子活性.结果 survivin基因在正常成体干细胞中低表达,在成肌母细胞中中度表达,在结肠腺癌细胞HT29中高表达.克隆了不同片段长度的survivin基因启动子,并连接到荧光素酶cDNA 上游.在293FT细胞中,987 bp和160 bp的 survivin基因启动子活性高于270 bp的survivin启动子的活性.结论 survivin基因启动子由于肿瘤特异性和泛肿瘤表达的特点,可通过载体构建应用于监控和治疗移植后干细胞的恶性转化.用高活性survivin基因启动子构建的载体可能会提高其在监控和治疗中的效果.     

重组逆转录病毒介导的人载脂蛋白AI基因在肌源细胞中的表达

目的 探索一种安全有效的载脂蛋白ＡＩ基因表达系统。方法 构建含人载脂蛋白ＡＩ ｃＤＮＡ的双顺反子逆转录病毒载体ｐＬＡＥＮ,用其转化小鼠原代肌母细胞及肌源性细胞Ｃ２Ｃ１２,ＥＬＩＳＡ法检测细胞液中人载脂蛋白ＡＩ的含量。结果 转化后的小鼠原代肌母细胞及Ｃ２Ｃ１２细胞在分化为肌管细胞后均获得异源表达人载脂蛋白ＡＩ的能力;而且经Ｇ４１８筛选也获得稳定转化的Ｃ２Ｃ１２细胞株,３０天后仍保持有效表达人载脂蛋白