不同基原大黄指纹图谱、多成分定量结合多元统计分析的质量评价研究

  目的   建立3种基原大黄(掌叶大黄、药用大黄、唐古特大黄)指纹图谱和多成分含量测定方法。   方法   采用UPLC法同时测定51批大黄指纹图谱及14个化学成分含量,并通过指纹图谱相似度分析、聚类分析、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)对不同基原大黄药材进行全面质量评价。   结果   建立了3种基原大黄的指纹图谱,确定了18个共有峰,并指认了14个化学成分;相似度评价结果显示,3种基原大黄相似度存在一定差异,但部分药用大黄与掌叶大黄相似度较高,聚类分析与相似度评价结果一致。通过PCA提取了4个主成分,累积方差贡献率达85.823%;PLS-DA可用于大黄的基原识别,并筛选出6个差异性成分。   结论  建立的方法简便、可靠,为不同基原大黄药材的质量控制和鉴别提供可靠的分析方法。      

均值化邓氏关联度计算法对不同给药剂量的瓜蒌滴丸谱效关系的影响

目的探讨均值化邓氏关联度计算方法对瓜蒌滴丸抗凝血作用谱效关系的影响,为后续采用灰关联方法进行谱效关系研究提供参考和借鉴。方法采用高效液相色谱法(HPLC)建立10批瓜蒌滴丸的HPLC指纹图谱。选取320只小鼠,随机分为32组(1个空白组、1个阳性对照组、30个瓜蒌滴丸组),每组10只小鼠。空白组给予纯水,阳性对照组给予复方丹参滴丸(给药剂量为:0. 123 g/kg),瓜蒌滴丸组给予10批瓜蒌滴丸,每批3个剂量(0. 475 g/kg、4. 75 g/kg、9. 50 g/kg)共30组,每天灌胃1次,给药7 d。7日后摘眼球取血测定小鼠活化部分凝血活酶时间(APTT)值。采用邓氏关联度法等7种不同灰关联度计算方法研究瓜蒌滴丸HPLC指纹图谱与3种给药剂量的小鼠APTT的谱效关系,并对邓氏关联度计算方法进行改进,建立均值化邓氏关联度计算方法,同时观察其对瓜蒌滴丸抗凝血作用谱效关系的影响。结果邓氏关联度计算方法所得谱效关系与瓜蒌滴丸已知成分药效相符,但不能体现不同给药剂量间的量效关系;绝对关联度等其他6种方法无法准确反映谱效关系;均值化邓氏关联度计算方法所得谱效关系前10位为:19(腺苷)> 9> 7> 13(鸟苷)> 2(尿嘧啶)> 1> 5(次黄嘌呤)> 4> 29> 6,且呈量效关系,这与瓜蒌滴丸已知成分药效相符。结论邓氏关联度等7种不同灰关联度法用于瓜蒌滴丸谱效关系分析还有待进一步改进和完善。均值化邓氏关联度计算方法可用于不同给药剂量瓜蒌滴丸的谱效关系分析。     

不同产地半夏指纹图谱的建立及化学模式识别研究

[目的] 建立半夏药材超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱,结合化学模式识别筛选差异性标志成分。[方法] 采用ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 mm×100 mm,1.8 μm）,流动相为0.1%磷酸水-乙腈,梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,进样体积为10 μL,柱温为32 °C,检测波长为260 nm。采用相似度评价和化学模式识别相结合的方法对其进行分析。[结果] 在18批半夏UPLC指纹图谱中指认出15个共有峰,其中16批样品相似度均大于0.877,其余2批分别为0.606、0.778。聚类分析结果显示不同产地的半夏分为两大类,主成分分析和聚类分析结果一致,采用正交偏最小二乘-判别分析筛选出6个差异性标志成分,通过对照品指认出3个成分（胞苷、次黄嘌呤、鸟苷）。[结论] 建立的指纹图谱方法稳定、可靠、重复性好,结合化学模式识别,可为半夏质量评价提供参考。     

高效液相色谱法测定瓜蒌薤白滴丸中乙酸乙酯部位槲皮素的含量及特征图谱

目的:建立测定瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位槲皮素含量的高效液相色谱(HPLC)分析方法,并在此基础上建立乙酸乙酯部位的特征图谱。方法:通过HPLC-PDAD联用建立瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位特征图谱,测定槲皮素的含量;利用均值和中位数建立共有模式,采用相关系数和夹角余弦计算瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位与共有模式间的相似程度。结果:槲皮素在0.10².00μg范围内线性关系良好,回归方程为:y=9 812.2x+2 433.5,相关系数r=0.999 8,平均回收率为98.8%,RSD(%)=5.52%,13个批次瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位槲皮素的平均含量为0.014%,RSD(%)=10.2%。建立了瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位HPLC特征图谱,取共有峰的均值和中位数,利用相关系数法计算平均相似度,分别为0.888 4和0.873 9;利用夹角余弦法计算相似度,分别为0.921 7和0.913 1。结论:瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位中槲皮素的含量测定方法的重复性及稳定性较好,同时建立了瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位特征图谱,可用于瓜蒌薤白滴丸乙酸乙酯部位的质量评价。     

清心解瘀方标准汤剂多指标成分含量测定及UPLC指纹图谱研究

  目的  制备18批清心解瘀方标准汤剂,对其物质基准进行研究。   方法  以标准汤剂丹酚酸B、阿魏酸、总生物碱和黄芪甲苷的含量、转移率,出膏率、含油量、指纹图谱相似度等为评价指标,建立清心解瘀方标准汤剂相关表征参数允许范围。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)进行指纹图谱分析,采用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对指纹图谱共有峰进行评价。   结果  共确定了18个共有峰,共有峰相似度均大于0.90。18批样品聚为2类,结合相似度结果,分析可能与不同产地饮片配伍有关。根据OPLS-DA VIP值结合载荷图,共筛选出3个影响批间样品质量的色谱峰,依次为丹酚酸B(14号峰)、盐酸黄连碱(10号峰)和阿魏酸(7号峰)。为减小批间样品的质量差异,保证制剂质量的一致性,在后续制剂生产中应尽量选择同一道地产区药材。   结论  清心解瘀方标准汤剂制备方法稳定,多指标含量测定方法简便、快捷,指纹图谱方法稳定、相似度高,可为该方后续制剂质量控制提供参考。      

不同配伍比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌的化学指纹特征相似性研究

目的 研究不同配伍比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌的化学指纹图谱的相似性,为瓜蒌皮与瓜蒌子的合理配伍比例提供理论依据.方法 采用高效液相色谱法建立30:70、35:65、40:60、45:55、50:50、55:45共6种比例的瓜蒌皮-瓜蒌子及瓜蒌的化学指纹图谱及其共有模式,比较不同配伍比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌化学指纹图谱共有模式间的相似度.结果上述6种比例的瓜蒌皮-瓜蒌子与瓜蒌的化学指纹图谱共有模式间的相似度分别为0.8808±0.0407、0.8930±0.0236、0.8995±0.0195、0.9033±0.0190、0.9363±0.0082和0.8904±0.0144,其中瓜蒌皮-瓜蒌子比例为50:50时相似度最高.各组与瓜蒌皮-瓜蒌子50:50组比较,差异有统计学意义(P<0.05或0.01).结论 采用指纹图谱技术确定了瓜蒌皮-瓜蒌子的最佳配伍比例,为瓜蒌皮-瓜蒌子的合理配伍提供了理论依据.     

复智散HPLC-UV/ELSD指纹图谱的研究

目的 建立中药复智散提取物HPLC-UV/ELSD指纹图谱.方法 采用HPLC-UV/ELSD串联检测技术,应用AlltechC18(5 μm,4.6mm×250 mm)色谱柱;流动相为乙腈(A)-0.1%乙酸水溶液(B),线性梯度时间洗脱程序(A)为:0,12%;25,20%;30,20%;75,30%;105,40%;120,80%;130,12%;流速:1.0ml/min;柱温:30℃;检测波长:335 nm;飘移管温度80℃;氮气压力25 psi.运用指纹图谱相似度评价软件,对12批复智散提取物指纹图谱进行相似度计算.结果 建立中药复智散提取物指纹图谱并鉴定其5种主要成分;对UV与ELSD图谱互补性进行分析;12批复智散提取物指纹图谱相似度良好.结论 该指纹图谱能同时反映复智散复方中主要化学组分特征,一次进样,可全面、稳定、有效地进行复方中药复智散的质量监督与评价.     

知母HPLC-UVD-ELSD指纹图谱的建立与多特征成分含量测定的质控方法研究

目的?建立知母指纹图谱结合多特征成分含量测定的HPLC-UVD-ELSD分析方法,并应用于多批次市售药材的质量控制。方法?采用UltimateTMXB-C₁₈色谱柱（4.6?mm×250?mm,4.5?μm）,检测波长258?nm,ELSD漂移管温度65?℃,载气流速1.0?L/min,建立知母指纹图谱与主含黄酮及皂苷类成分含量测定的HPLC-UVD-ELSD分析方法,运用相似度软件结合化学计量学分析对多批次药材进行质量评价并同时完成多特征成分的含量测定。结果?建立了高效、快捷的知母HPLC-UVD-ELSD指纹图谱与多特征成分含量测定的方法;18批市售药材的指纹图谱相似度在0.786~0.999,并指认了10个色谱峰。化学计量学结果表明造成18批药材差异较大的成分为新芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷BⅢ;进而建立了同时测定新芒果苷、芒果苷、知母皂苷N、知母皂苷BⅡ和知母皂苷BⅢ 5个成分含量的方法,结果表明知母中主含知母皂苷BⅡ。结论?建立的指纹图谱结合多特征成分含量测定的HPLC-UVD-ELSD分析方法,更全面而准确地描述了知母药材化学成分整体轮廓与各类特征成分含量贡献,为提升市售知母药材的质量控制方法奠定了基础。      

参附滴丸中皂苷类成分的HPLC指纹图谱研究

【目的】建立参附滴丸、中间体浸膏中皂苷类成分的HPLC指纹图谱,为科学评价和有效控制参附滴丸的质量提供分析方法。[方法]采用HypersilBDSC18柱（250mm×4．6mm,5μm）色谱柱,柱温25℃,流动相为乙睛、水,梯度洗脱,流速1．0mL·min^-1,检测波长203nm,对参附滴丸、中间体浸膏中皂苷类成分分别进行指纹图谱测定,并比较分析两者之间的相似度及相关性。[结果]初步建立了10批参附滴丸和中间体浸膏中皂苷类成分的HPLC指纹图谱,其中滴丸确定了11个共有峰,而中间体浸膏则16个共有峰,中间体浸膏比滴丸多出5个共有峰,精密度和重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％,指纹图谱相似度均在O．9以上。[结论]所建立的HPLC指纹图谱方法具有较好的重复性,为参附滴丸的质量评价提供了有效的分析方法。     

大黄药材HPLC指纹图谱的化学模式识别

目的通过指纹图谱的相似度比较和化学模式识别,确定TY719注射液原料大黄的产地,并建立指纹图谱共有模式。方法应用中南大学梁逸曾教授的中药指纹图谱相似度计算软件,对不同产地的掌叶大黄药材的HPLC指纹图谱进行相似度比较和主成分分析。结果有4个样品有明显的差异性,主成分分析进一步证明了相似度比较的结果。而后对同一产地多批药材进行相似度比较和主成分分析,确立了大黄指纹图谱共有模式的方法,筛选出建立指纹图谱共有模式的10批大黄的药材。结论该方法简便,灵敏,可操作性强,为控制TY719注射液原料药材质量提供了有效的手段。可作为TY719注射液质量控制标准的判断方法。      

Fisher成分分析法用于瓜蒌及其炮制品的化学指纹特征相似性的研究

目的：应用Fisher成分分析法（FCA）对瓜蒌及其炮制品的类别进行分析。方法采用HPLC-PDAD建立瓜蒌及其炮制品的指纹图谱,以槲皮素为内参峰进行数字化处理,得到瓜蒌及其炮制品的标准指纹图谱。以FCA提取瓜蒌及其炮制品标准指纹图谱中的化学信息,进行质量模式分类,并与标准指纹图谱及主成分分类模式进行对比。结果 FCA能准确地将瓜蒌及其炮制品分为2类。结论采用FCA成分分析法可提取指纹图谱中隐含的化学信息,进行准确的类别分析。     

闽产蔓荆子高效液相色谱指纹图谱

目的 建立闽产蔓荆子高效液相色谱(HPLC)的指纹图谱,为蔓荆子质量控制提供依据. 方法 采用HPLC法测定12批福建不同地区蔓荆子的指纹图谱,并用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对其进行分析. 结果在选定的色谱条件下,确定15个色谱峰构成闽产蔓荆子指纹图谱的特征峰,相似度大于0.85. 结论高效液相色谱指纹图...     

冯了性风湿跌打药酒HPLC指纹图谱研究

目的 建立冯了性风湿跌打药酒的指纹图谱检测方法.方法 采用HPLC法建立冯了性风湿跌打药酒的指纹图谱,并以处方中用量较大的丁公藤、麻黄、桂枝、枳壳、陈皮的指标成分为参照物峰进行对比研究.采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2004A)软件进行指纹图谱分析.结果 以东莨菪苷、东莨菪内酯、绿原酸、盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、桂皮醛、新橙皮苷、柚皮苷为参照物峰,确定了冯了性风湿跌打药酒的HPLC指纹图谱,共确定了15个共有峰,10批次药酒的色谱图与对照指纹图谱的相似度均大于0.9.结论 该方法具有良好的精密度、稳定性和重复性,可作为冯了性风湿跌打药酒质量控制的评价方法.     

不同产地不同品系瓜蒌皮中多类型资源性化学成分分析与品质评价研究

目的?分析不同产地不同品系瓜蒌皮中多类型资源性成分差异,为其资源化利用提供数据支撑。方法?采用UPLC-MS/MS方法对8个产地9个品系22个批次瓜蒌皮中的糖类、核苷类、氨基酸类、黄酮类、三萜类等39种化学成分含量进行分析,利用主成分分析（PCA）法对瓜蒌皮产地及品系差异进行综合评价。结果?瓜蒌皮中果糖、葡萄糖的平均含量分别为14.78%、8.14%;检测出10种核苷类、18种游离氨基酸类成分,核苷类成分平均总量为0.57?mg/g,游离氨基酸类成分平均总量为37.71?mg/g;检测出黄酮类成分6种、三萜类成分3种,平均总量分别为0.58、0.01?mg/g。PCA结果表明,基于39种化学成分分析结果,不同产地不同品系瓜蒌皮品质存在明显差异。河北石家庄产“皖蒌7号”瓜蒌皮综合得分最高,河北产区与其他产区的瓜蒌皮差异明显,主要差异成分为药效成分氨基酸类和木犀草苷。结论?不同产地不同品系瓜蒌皮所含资源性成分种类基本一致,但从整体上分析评价,各类型资源性成分含量差异较大,传统药用瓜蒌产区所产部分品系瓜蒌皮中资源性成分总量及药效成分含量相比其他产区较高,研究结果可为瓜蒌皮临床用药选择和不同产地不同品系瓜蒌皮的综合利用提供参考。      

钩藤总生物碱有效部位质量控制研究

目的：建立钩藤总生物碱有效部位质量控制方法。方法：采用酸性染料染色法测定钩藤总生物碱的含量．采用高效液相色谱法测定有效部位中钩藤碱的含量,采用高效液相色谱法建立钩藤总生物碱有效部位的指纹图谱。结果：钩藤总生物碱的含量均在50％1-2上,钩藤碱在5．75-92μg／mL之间线性关系良好,平均回收率为98．82％,通过指纹图谱相似度评价,不同批次的钩藤总生物碱有效部位的化学成分存在差异。结论：本研究建立的质量控制方法可有效控制钩藤总生物碱有效部位的质量。     

清金益气方物质基准HPLC指纹图谱的建立

[目的] 建立清金益气方物质基准的高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱,为清金益气方物质基准质量标准的建立及清金益气方现代制剂的研究提供相关依据。[方法] 文章采用HPLC建立清金益气方物质基准指纹图谱,并对10批清金益气方物质基准指纹图谱进行了峰归属和相似度评价。采用主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）进行分析,进一步评价多批次物质基准间的质量差异。[结果] 根据10批样品的指纹图谱,确定了13个共有峰,共有峰之间的分离程度较好。此外,10批清金益气方指纹图谱的相似度均大于0.90,满足指纹相似度评价的基本要求,能够为整体评价清金益气方物质基准质量提供参考根据;对比对照品,指认出7个成分;通过化学模式识别将10批样品分为两类,并找出导致分类差异的4个主成分。分析发现导致10批差异分析的成分主要归属于黄芩和马鞭草,因此要严格控制黄芩和马鞭草的质量以保证物质基准质量稳定性[结论] 建立了稳定可行的清金益气方物质基准指纹图谱方法,全面地反映清金益气方物质基准的化学成分信息;结合化学模式识别进行评价,使研究更加全面科学,为后续研究提供参考。