核糖体蛋白S9在多发性骨髓瘤中的表达及对其细胞生物学功能的影响

目的 明确核糖体蛋白S9(RPS9)在多发性骨髓瘤中的表达情况,并明确其对骨髓瘤细胞生物学特性的影响及相应机制。方法 选取10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON组)与30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞(CD138+组),实时荧光定量PCR检测RPS9在mRNA水平的表达,并选取3例CON与11例CD138+细胞,Western blot检测RPS9在蛋白水平的变化,同时选取GSE19784数据集,检测RPS9的表达与患者总体生存率、核因子-κB(NF-κB)、类泛素蛋白修饰分子(SUMO)、泛素通路之间的关系。随后构建RPS9-短发夹RNA(shRNA)敲低载体,使用流式细胞仪检测感染效率、实时荧光定量PCR与Western blot检测敲低效率后。RPMI8226分为CON与RPS9-shRNA组,使用膜联蛋白 V别藻青蛋白/ 碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡的变化、CCK8法检测细胞增殖的变化、PI染色法检测细胞周期的变化。并构建类泛素蛋白修饰分子特异蛋白酶1(SENP1)过表达载体,Western blot确定过表达效率后,检测RPS9抑制后SENP1表达的变化,并在RPS9-shRNA中转染SENP1过表达载体,Western blot检测CON、RPS9-shRNA、RPS9-shRNA-SENP1细胞中NF-κB通路P65、抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的变化,膜联蛋白V/PI双染法检测细胞凋亡的变化。结果 RPS9在10例健康志愿者骨髓单个核细胞(CON)以及30例多发性骨髓瘤患者骨髓CD138+细胞中相对表达量分别为1.00±0.12和5.45±0.71(t=4.291,P=0.0036),Western blot中大多数骨髓瘤CD138+细胞中RPS9呈现高表达,RPS9的高表达同时与患者髓外浸润相关,并在GSE19784数据集中与患者总体生存率相关。RPMI8226在感染CON与RPS9-shRNA慢病毒48 h后,流式细胞仪证实两组细胞感染效率均在90%以上,实时荧光定量PCR与Western blot证实RPS9在mRNA与蛋白水平的表达均受到抑制。RPMI8226 CON与RPS9-shRNA感染病毒48 h后,CON与RPS9-shRNA组细胞膜联蛋白 V 阳性细胞比例分别为3.47±0.37 和18.60±1.64,RPS9-shRNA组显著高于CON组(t=9.015,P=0.0008)。在增殖中,CON组与RPS9-shRNA组在72 h时增殖指数差异有统计学意义(t=6.846,P=0.0024)。而在细胞周期中,CON与RPS9-shRNA组在感染病毒48 h时,G2期细胞比例分别为(29.28±3.42)% 和(10.43±1.43)%,CON组显著高于RPS9-shRNA组,差异有统计学意义(t=9.329,P=0.0007)。RPS9的表达在GSE19784数据集中与SENP1正相关,并与IκBα编码基因NFKBIA呈负相关,Western blot进一步证实RPS9的敲低能够抑制SENP1的表达,并抑制NF-κB亚基P65、抑制因子IKBα的磷酸化,促进IKBα的表达,而SENP1的过表达不仅能够阻碍这一效应,也能够使RPS9诱导的凋亡减少。结论 RPS9在多发性骨髓瘤CD138+细胞中高表达,且与患者总体生存率、髓外浸润相关。RPS9的抑制能够促进骨髓瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制增殖。RPS9能够通过SENP1影响NF-κB通路的活化,并影响细胞的凋亡,提示SENP1可能为RPS9生物学效应的关键因素。     

葛根素通过miR-490/E3泛素连接酶抑制非小细胞肺癌细胞生长、侵袭和迁移

目的 研究葛根素抑制非小细胞肺癌细胞生长、侵袭和迁移的机制。方法 培养A549细胞,采用不同浓度的葛根素处理细胞。CCK-8法检测细胞增殖抑制率(IR);qRT-PCR法检测细胞中miR-490和E3泛素连接酶(DTL)mRNA的表达情况;构建miR-490过表达对照组、miR-490过表达模拟物组、miR-490沉默阴性对照组、miR-490沉默组,采用双荧光素酶报告分析miR-490和DTL的靶向关系。将20 μmol/L葛根素处理过的细胞分为对照组、葛根素组、葛根素+miR-490阴性对照组、葛根素+miR-490沉默模拟物组、葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组、葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组。Transwell法检测细胞迁移和侵袭。Western blot检测上皮细胞-间充质转化进程标志因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达。结果 随着葛根素浓度升高,细胞抑制率逐步升高,差异有统计学意义(F=105.375,P<0.001);且miR-490表达逐步升高(F=32.919,P<0.001),DTL表达逐步降低(F=116.120,P<0.001)。双荧光素酶报告分析显示,与miR-490过表达对照组相比,miR-490过表达模拟物组荧光素酶活性显著降低(t=7.762,P=0.016),miR-490 mRNA表达显著升高(t=13.319,P<0.001),DTL mRNA表达显著降低(t=7.415,P=0.002);与miR-490沉默阴性对照组相比,miR-490沉默组细胞中miR-490表达显著降低(t=9.523,P=0.001),DTL mRNA的表达显著升高(t=11.305,P<0.001)。Western blot检测结果显示,与miR-490过表达对照组相比,miR-490过表达模拟物组的DTL蛋白表达显著降低(t=7.953,P=0.001);与miR-490沉默阴性对照组相比,miR-490沉默组细胞中的DTL 蛋白表达显著升高(t=10.552,P<0.001)。经葛根素处理后,与对照组相比,葛根素组细胞miR-490表达显著升高(t=10.255,P=0.001),DTL mRNA表达显著降低(t=6.682,P=0.003);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞中miR-490表达显著降低(t=10.995,P<0.001),DTL mRNA表达显著升高(t=12.478,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞miR-490表达差异无统计学意义(t=1.081,P=0.341),DTL mRNA表达显著降低(t=14.321,P<0.001)。与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组DTL蛋白表达显著升高(t=11.423,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞的DTL蛋白表达显著降低(t=12.080,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组细胞增殖能力显著降低(F=129.27,P<0.001);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞增殖能力显著升高(F=75.12,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞增殖能力显著降低(F=52.59,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组细胞迁移能力显著降低(t=8.963,P=0.001);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞迁移能力显著升高(t=12.117,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞迁移能力显著降低(t=12.934,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组细胞侵袭能力显著降低(t=4.710,P=0.009);与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞侵袭能力显著升高(t=13.264,P<0.001);与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组细胞侵袭能力显著降低(t=13.476,P<0.001)。与对照组相比,葛根素组E-cadherin蛋白表达显著升高(t=7.137,P=0.002),N-cadherin(t=8.828,P=0.001)和Vimentin蛋白表达(t=6.594,P=0.003)显著降低;与葛根素+miR-490阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物组细胞中E-cadherin蛋白表达显著降低(t=12.376,P<0.001),N-cadherin(t=13.436,P<0.001)和Vimentin蛋白表达(t=11.467,P<0.001)显著升高;与葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL阴性对照组相比,葛根素+miR-490沉默模拟物+DTL沉默质粒组E-cadherin蛋白表达显著升高(t=13.081,P<0.001),N-cadherin(t=10.835,P<0.001)和Vimentin蛋白表达(t=11.862,P<0.001)显著降低。结论 葛根素可能是通过上调miR-490表达,降低其靶基因DTL的表达,抑制非小细胞肺癌的生长、侵袭和迁移。     

人参皂苷Rg3靶向Wnt/β-连环蛋白信号通路调控胃癌顺铂耐药性

目的 探讨人参皂苷Rg3联合顺铂(DDP)对DDP耐药细胞SGC-7901/DDP的抑制作用及其分子机制。方法 将SGC-7901/DDP细胞分为4组:对照组、人参皂苷Rg3(40 μg/ml)治疗组、DDP(1.40 μg/ml)治疗组及联合治疗组。采用MTT、EdU和平板克隆形成实验检测SGC-7901/DDP细胞增殖能力,流式细胞术和Hoechst 33342染色法检测SGC-7901/DDP细胞凋亡能力,Western blot检测凋亡相关标志物的表达,细胞划痕和Transwell实验检测SGC-7901/DDP细胞迁移能力,Western blot和免疫荧光染色检测上皮-间充质转化(EMT)和Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关标志物的表达水平。结果 与人参皂苷Rg3治疗组和DDP治疗组比较,联合治疗组显著抑制SGC-7901/DDP细胞的增殖(t=8.062,P=0.001;t=7.090,P=0.002)、克隆形成(t=8.062,P=0.001;t=6.144,P=0.004)和迁移能力(t=7.424,P=0.002;t=4.317,P=0.013),同时促进细胞的凋亡能力(t=5.530,P=0.031;t=6.036,P=0.026)。与人参皂苷Rg3治疗组和DDP治疗组比较,联合治疗组显著抑制EMT相关蛋白波形蛋白(t=24.450,P<0.001;t=14.750,P<0.001)、Snail(t=29.640,P<0.001;t=70.700,P<0.001)、Slug(t=89.230,P<0.001;t=87.360,P<0.001)、基质金属蛋白酶(MMP)2(t=84.540,P<0.001;t=67.120,P<0.001)、MMP9(t=19.010,P<0.001;t=10.890,P<0.001)及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt(t=35.480,P<0.001;t=14.670,P<0.001)、β-catenin(t=155.800,P<0.001;t=118.100,P<0.001)、C-myc(t=20.870,P<0.001;t=3.334,P=0.029)、细胞周期蛋白D1(t=5.007,P=0.008;t=8.347,P=0.001)的表达,同时显著上调上皮细胞相关蛋白E钙黏蛋白(t=36.450,P<0.001;t=33.810,P<0.001)和ZO-1(t=37.060,P<0.001;t=37.030,P<0.001)的表达。结论 人参皂苷Rg3通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,增强SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性。     

褪黑素对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射敏感性的影响

目的：检测褪黑素（MLT）联合放疗对人非小细胞肺癌（NSCLC） H1299细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT在调节H1299细胞辐射敏感性中的作用。方法：将H1299细胞分为对照组、MLT组、照射组及照射+MLT组,对照组H1299细胞不作任何处理,MLT组H1299细胞给予不同浓度（100和500 μmol·L^-1） MLT,照射组H1299细胞采用¹³⁷Cs γ射线进行一次性6 Gy照射,照射+MLT组H1299细胞给予100和500μmol·L^-1 MLT加6 Gy¹³⁷Cs γ射线。克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,流式细胞术检测照射后24和48 h各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞中核转录因子κB（NF-κB）蛋白的磷酸化水平。结果：克隆形成实验,与照射组比较,照射+MLT组H1299细胞克隆形成数明显减少（t=7.234,P<0.01）。流式细胞术,照射后24 h,与对照组比较,照射组和MLT组H1299细胞凋亡率明显升高（t=5.020,t=13.525,P<0.01）,与对照组比较,照射+MLT组H1299细胞凋亡率升高（t=12.884,P<0.01）;照射后48 h,照射+MLT组H1299细胞凋亡率与照射组比较差异无统计学意义（t=0.394,P>0.05）。蛋白免疫印迹法,照射+MLT组H1299细胞中NF-κB蛋白磷酸化水平低于照射组。结论：MLT联合放疗对人NSCLC H1299细胞有明显的抑瘤效应,提高了NSCLCH1299细胞的辐射敏感性。     

茶多酚对心力衰竭大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统和转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨茶多酚对心力衰竭大鼠肾素-血管紧张素-醛固酮系统和转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、卡托普利治疗组(PC组)和茶多酚治疗组(TP组)。Model组、PC组和TP组大鼠采用丝线结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,Sham组不进行结扎。超声心动图检测心功能,HE染色检测心肌病理变化,Masson染色检测心肌纤维化,免疫组织化学染色检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达,ELISA法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、肾素(PRA)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,Western blot检测TGF-β1、磷酸化Smad(p-Smad)2、Smad2、p-Smad3和Smad3蛋白表达。结果 与Sham组比较,Model组大鼠心肌细胞排列紊乱,有明显的炎性细胞浸润,心肌纤维化程度明显升高(t=9.748,P=0.001),Ⅰ型胶原(t=11.754,P=0.001)和Ⅲ型胶原(t=10.573,P=0.001)表达明显升高,而射血分数(t=13.174,P=0.002)和左心室短轴缩短率(t=11.853,P=0.001)则明显降低,AngⅡ(t=4.246,P=0.001)、ALD(t=5.385,P=0.004)、PRA(t=4.386,P=0.004)、IL-1β(t=4.393,P=0.001)、IL-6(t=6.375,P=0.002)和TNF-α(t=4.753,P=0.002)表达水平明显升高,TGF-β1(t=6.365,P=0.001)、p-Smad2/Smad2(t=13.755,P=0.001)和p-Smad3/Smad3(t=11.657,P=0.002)蛋白表达明显升高;与Model组比较,PC组和TP组大鼠心肌病理变化得到明显改善,左心室舒张末期内径(t=6.367,P=0.003;t=5.264,P=0.003)、左心室收缩末期内径(t=5.253,P=0.002;t=5.974,P=0.001)、心脏质量指数(t=5.012,P=0.007;t=4.953,P=0.005)、左心室质量指数(t=5.531,P=0.003;t=5.483,P=0.004)、心肌纤维化程度(t=6.734,P=0.001;t=5.362,P=0.001)均明显降低,Ⅰ型胶原(t=5.373,P=0.001;t=4.364,P=0.001)和Ⅲ型胶原(t=6.764,P=0.001;t=4.579,P=0.001)表达明显降低,而射血分数(t=11.264,P=0.002;t=10.356,P=0.001)和左心室短轴缩短率(t=8.246,P=0.002;t=7.824,P=0.001)表达水平则明显升高,AngⅡ(t=3.126,P=0.001;t=2.853,P=0.001)、ALD(t=3.854,P=0.004;t=3.164,P=0.004)、PRA(t=3.126,P=0.004;t=3.063,P=0.004)、IL-1β(t=2.964,P=0.001;t=2.765,P=0.001)、IL-6(t=4.865,P=0.002;t=4.275,P=0.002)和TNF-α(t=3.146,P=0.002;t=2.973,P=0.002)表达水平明显降低,TGF-β1(t=4.657,P=0.001;t=4.176,P=0.001)、p-Smad2/Smad2(t=9.687,P=0.001;t=6.753,P=0.001)和p-Smad3/Smad3(t=6.477,P=0.002;t=4.754,P=0.002)蛋白表达明显降低。结论 茶多酚通过抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统和TGF-β1/Smads通路的激活,在心力衰竭中发挥保护作用。     

8-烯丙基山竹醇在口腔鳞癌化学预防中的作用

目的 评估8-烯丙基山竹醇在口腔鳞癌化学预防中的作用。方法 培养人口腔鳞癌细胞系CAL27,以不同浓度的山竹醇和8-烯丙基山竹醇处理细胞,采用MTT实验、克隆形成实验、划痕实验及流式细胞术检测其对CAL27细胞生物学行为的影响。建立对二甲基苯并蒽(DMBA)诱导的地鼠颊囊异常增生模型,阴性对照为不做处理,阳性对照为左侧颊囊涂DMBA 3 周,实验组为涂DMBA 3 周后分别涂0.5、1.0 mmol/L 山竹醇或8-烯丙基山竹醇 2 周,实验结束后处死动物,取左侧颊囊进行组织病理学观察和BrdU免疫组织化学染色。结果 MTT实验结果显示,山竹醇和8-烯丙基山竹醇均可抑制CAL27细胞增殖,且呈一定浓度和时间依赖关系。药物作用72 h,8-烯丙基山竹醇的半数抑制浓度(IC50)为(13.13±2.55)μmol/L,明显低于山竹醇的(32.20±3.24)μmol/L(t=8.008,P=0.001);两种药物同种浓度作用效果相比,8-烯丙基山竹醇对细胞增殖的抑制作用明显强于山竹醇,以10(24 h:t=8.012,P=0.001;48 h:t=5.939,P=0.001;72 h:t=12.551,P=0.001)和20 μmol/L(24 h:t=8.887,P=0.001;48 h:t=9.324,P=0.002;72 h:t=5.361,P=0.002)浓度时差异最为显著。克隆形成实验结果显示,山竹醇和8-烯丙基山竹醇用药组20 μmol/L浓度时的克隆形成率分别为(44.1±0.4)%和(23.6±0.6)%,明显低于10 μmol/L浓度时(55.6±2.8)%(t=6.894,P=0.019)和(31.0±0.6)%(t=15.556,P=0.001);10(t=14.682,P=0.003)和20 μmol/L(t=51.514,P=0.001)浓度时8-烯丙基山竹醇对CAL27 细胞菌落形成的抑制作用明显强于山竹醇。划痕实验结果显示,用药12 h时,10和20 μmol/L山竹醇组的细胞相对迁移率分别为(16.00±4.55)%(t=3.139,P=0.026)和(3.00±3.16)%(t=6.608,P=0.001),明显低于阴性对照组的(30.33±7.64)%;10和20 μmol/L 8-烯丙基山竹醇组的细胞相对迁移率分别为(16.25±3.86)%(t=3.245,P=0.023)和(6.00±2.65)%(t=5.214,P=0.006),也均明显低于阴性对照组的(30.33±7.64)%。用药24 h时,10和20 μmol/L山竹醇组的细胞相对迁移率分别为(23.75±4.57)%(t=4.718,P=0.005)和(5.75±1.50)%(t=10.432,P=0.001),均明显低于阴性对照组的(45.33±7.64)%;10和20 μmol/L 8-烯丙基山竹醇组的细胞相对迁移率分别为(23.50±2.38)%(t=5.529,P=0.003)和(11.67±2.31)%(t=7.308,P=0.002),也均明显低于阴性对照组的(45.33±7.64)%。20 μmol/L浓度作用24 h时,山竹醇组的细胞相对迁移率明显低于8-烯丙基山竹醇(t=4.151,P=0.009)。凋亡实验结果显示,10 μmol/L时,山竹醇组的早期凋亡率为(5.00±0.10)%,明显高于阴性对照组的(1.57±0.21)%(F=70.950,P=0.001)。20 μmol/L时,山竹醇组的早期和晚期凋亡率分别为(5.90±0.78)%(t=39.384,P=0.001)和(9.73±1.67)%(t=10.101,P=0.001),均明显高于阴性对照组;8-烯丙基山竹醇组的早期凋亡率为(4.63±1.16)%,明显高于阴性对照组(t=4.511,P=0.041)。同种浓度作用效果相比较,8-烯丙基山竹醇对细胞凋亡的促进作用明显弱于山竹醇(10 μmol/L:t=5.982,P=0.004;20 μmol/L:t=8.578,P=0.001)。组织病理学观察结果显示,0.5 mmol/L 山竹醇处理组(t=2.546,P=0.031)、0.5 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=3.485,P=0.008)、1.0 mmol/L 山竹醇处理组(t=4.556,P=0.001)和1.0 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=5.393,P=0.001)地鼠的口腔黏膜上皮单纯增生面积均明显低于阳性对照组;0.5 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=2.130,P=0.046)、1.0 mmol/L 山竹醇处理组(t=3.434,P=0.010)和1.0 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=4.518,P=0.004)地鼠的口腔黏膜上皮异常增生面积也均明显低于阳性对照组,1.0 mmol/L 山竹醇处理组(t=2.793,P=0.023)和1.0 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=4.997,P=0.001)均明显低于0.5 mmol/L 山竹醇处理组。BrdU免疫组织化学染色结果显示,阴性对照组(t=7.563,P=0.001)、0.5 mmol/L 山竹醇处理组(t=2.862,P=0.029)、0.5 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=4.693,P=0.002)、1.0 mmol/L 山竹醇处理组(t=5.071,P=0.002)和1.0 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=5.133,P=0.001)地鼠的BrdU增殖指数均明显低于阳性对照组,0.5 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=3.724,P=0.007)、1.0 mmol/L 山竹醇处理组(t=7.000,P=0.001)和1.0 mmol/L 8-烯丙基山竹醇处理组(t=4.413,P=0.003)均明显低于0.5 mmol/L 山竹醇处理组。结论 8-烯丙基山竹醇可抑制人口腔鳞癌细胞CAL27的增殖和迁移,促进细胞凋亡;对DMBA诱导的地鼠口腔颊囊异常增生具有显著抑制作用,但作用效果与山竹醇存在一定差异。     

敲低造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白对胰腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(HPIP)对胰腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法 采用免疫组织化学染色方法检测胰腺癌组织及对应癌旁组织中HPIP的表达水平,小干扰RNA瞬时转染的方法敲低胰腺癌细胞中HPIP的表达水平,细胞计数试剂盒-8实验、克隆形成实验、流式细胞术检测敲低HPIP对细胞增殖、周期及凋亡的影响,免疫印迹法检测敲低HPIP对于cyclin D1、caspase 7和cleaved caspase 7表达水平的影响。结果 胰腺癌组织中HPIP的表达明显高于癌旁组织(Z=-2.060,P=0.039)。敲低HPIP表达水平后,在24 h起MIA PaCa-2和BxPC-3细胞的生长受到抑制(P均<0.05);MIA PaCa-2(t=4.706,P=0.009)和BxPC-3细胞(t=9.514,P=0.000)形成的阳性克隆数明显减少;MIA PaCa-2(t=7.642,P=0.001)及BxPC-3细胞(t=2.714,P=0.051)中S期细胞比例明显降低,G₀/G₁ 期细胞比例明显增加(t=3.244,P=0.031;t=6.095,P=0.003);MIA PaCa-2(t=24.58,P=0.000;t=29.43,P=0.000)和BxPC-3细胞(t=36.45,P=0.000;t=43.52,P=0.000)中的晚期凋亡率和总凋亡率均明显上升;MIA PaCa-2(t=6.705,P=0.002)和BxPC-3细胞(t=6.238,P=0.003)的cyclin D1表达水平明显下降,caspase 7表达水平变化无统计学意义(t=0.711,P=0.516;t=0.027,P=0.979),cleaved caspase 7表达水平明显上升(t=3.991,P=0.016;t=6.536,P=0.002)。结论 与癌旁组织相比,HPIP在胰腺癌中表达水平较高。敲低HPIP可导致胰腺癌细胞生长受到抑制,细胞周期由G₀/G₁期向S期转化受阻,并促进胰腺癌细胞凋亡。HPIP可能在胰腺癌中发挥癌基因作用。     

miR-145-5p靶向ARK5调控人上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨miR-145-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及可能涉及的分子机制。方法 实时定量PCR检测miR-145-5p在正常卵巢上皮细胞及卵巢癌细胞中的表达差异,CCK-8、流式细胞术检测过表达miR-145-5p对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。靶基因预测软件预测miR-145-5p的靶基因,生物信息学、Western blot、双荧光素酶基因验证报告实验、挽救实验等方法预测并验证miR-145-5p在卵巢癌细胞中发挥作用涉及的分子机制。结果 卵巢癌细胞中miR-145-5p的表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(t=4.345,P=0.049)。与对照组相比,过表达miR-145-5p的卵巢癌细胞增殖率明显降低(t=-15.790,P<0.001),凋亡率明显增加(t=5.433,P=0.032)。TargetScan软件在线预测及双荧光素酶基因验证报告实验结果表明,ARK5是miR-145-5p的直接靶基因(t=4.583,P=0.010)。ARK5过表达细胞的增殖率明显升高(t=27.290,P<0.001),凋亡率明显下降(t=-8.241,P=0.001)。过表达miR-145-5p可在mRNA(t=-12.824,P<0.001)及蛋白水平(t=-4.792,P=0.001)明显下调ARK5的表达。ARK5的挽救性表达显著抵消了miR-145-5p对细胞增殖的抑制(t=15.580,P=0.004)和促细胞凋亡(t=-12.470,P=0.006)的效果。结论 miR-145-5p可能是通过靶向抑制ARK5来抑制卵巢癌细胞增殖和促进细胞凋亡的。     

沉默miRNA210可能通过低氧诱导因子-血管内皮生长因子途径减轻心肌炎时心肌细胞的损伤

目的 研究miRNA210在脂多糖(LPS)诱导心肌炎时对大鼠原代心肌细胞的作用及其内在机制。方法 采用CCK8法检测正常或LPS诱导时miRNA210对大鼠原代心肌细胞活力的影响;ELISA法检测在LPS诱导前提下,miRNA210处理后肿瘤坏死因子(TNF)-α与白细胞介素(IL)-1β的分泌情况;流式细胞凋亡法检测各干预组前后大鼠原代心肌细胞的凋亡情况;Western blot法检测凋亡相关蛋白bcl-2、bax、caspase-3和低氧诱导因子1(HIF1)-血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果 CCK8检测结果显示,与对照组相比,miRNA210模拟物(t=0.000,P=1.000)和siRNA(t=0.686,P=0.500)干扰对大鼠原代心肌细胞的影响差异无统计学意义,LPS处理后大鼠原代心肌细胞的细胞活力明显降低(t=8.764,P<0.001);与LPS组相比,抑制miRNA210后大鼠原代心肌细胞活力明显升高(t=3.576, P=0.012)。ELISA检测结果显示,与对照组相比,LPS诱导后IL-1β(t=4.166, P=0.014)和TNF-α(t=6.309,P=0.003)表达显著上调;与LPS组相比,应用miRNA210模拟物后IL-1β(t=4.096, P=0.015)和TNF-α(t=4.424, P=0.011)表达显著升高,沉默miRNA210后IL-1β(t=4.287, P=0.012)和TNF-α(t=3.577, P=0.023)表达显著下调。流式细胞凋亡实验结果表明,与对照组相比,LPS诱导后的大鼠原代心肌细胞凋亡明显增加(t=32.780, P<0.001);与LPS组相比,应用miRNA210模拟物明显加重了LPS诱导的细胞凋亡(t=7.412, P=0.002),沉默miRNA210后的大鼠原代心肌细胞凋亡率明显降低(t=11.720,P<0.001)。Western blot检测结果表明,与对照组相比,LPS显著下调了bcl-2表达(t=8.346,P=0.001),上调了bax(t=12.890,P<0.001)和caspase-3的表达(t=4.331, P=0.012)。与LPS组相比,应用miRNA210模拟物后bcl-2(t=6.074,P=0.003)表达明显下降,bax(t=5.376,P=0.022)和caspase-3(t=5.859,P=0.004)表达明显升高;沉默miRNA210后bcl-2表达明显升高(t=3.873,P=0.017),bax(t=5.205,P=0.006)和caspase-3(t=2.800,P=0.040)表达明显下降。与对照组比,LPS组的HIF1(t=10.380,P=0.001)和VEGF(t=4.973, P=0.008)表达显著上调;与LPS组相比,应用miRNA210模拟物后的HIF1(t=8.952,P=0.001)和VEGF表达(t=11.203,P=0.001)显著上调,沉默miRNA210后的HIF1(t=3.893,P=0.017)和VEGF表达(t=3.181,P=0.033)显著降低。与LPS组相比,应用2ME后逆转miRNA210模拟物后的bax(t=4.899,P=0.008)、HIF1(t=2.833,P=0.047)及caspase-3(t=2.877,P=0.045)和VEGF表达(t=2.994,P=0.040)显著降低,bcl-2表达(t=3.392,P=0.017)显著升高。结论 沉默miRNA210可通过HIF1-VEGF介导的凋亡通路来减少LPS诱导的心肌细胞损伤。     

右美托咪定介导Wnt通路对七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍的影响

目的 探索右美托咪定(Dex)通过Wnt信号通路对七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍的影响。方法 出生7 d SD大鼠60只,分成5组:正常对照组(不做任何干预处理)、Dex处理组(腹腔注射 25 μg/kg的Dex)、七氟醚处理组(3%七氟醚处理4 h)、七氟醚+Dex处理组(25 μg/kg Dex注射后3%七氟醚吸入4 h)、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(Wnt抑制剂XAV393 及25 μg/kg Dex注射后3%七氟醚吸入4 h)。3周后Morris水迷宫检测大鼠认知功能;TdT介导的dUTP缺口末端标记实验(TUNEL)染色检测海马神经元细胞凋亡;神经核(NeuN)染色检测海马神经元存活;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达;荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹检测Wnt/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/β-链蛋白信号通路相关因子表达。结果 随着训练时间的延长,各组大鼠逃避潜伏期的时间逐渐缩短,与正常对照组相比,Dex处理组差异无统计学意义(t=0.304,P=0.768);七氟醚处理组(t=5.823,P=0.002)、七氟醚+Dex处理组(t=3.188,P=0.010)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=5.784,P=0.002)逃避潜伏期时间延长,差异有统计学意义。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组(t=3.646,P=0.005)逃避潜伏期时间减少,差异有统计学意义。与七氟醚+Dex处理组比较,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.296,P=0.008)逃避潜伏期时间增长,差异有统计学意义。各组穿越平台次数结果显示,与正常对照组相比,七氟醚处理组(t=5.179,P=0.004)、七氟醚+Dex处理组(t=2.309,P=0.043)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.871,P=0.003)穿越平台次数减少,差异有统计学意义;与七氟醚处理组比较,七氟醚+Dex处理组(t=3.296,P=0.008)穿越平台次数增加;与七氟醚+Dex处理组比较,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=2.361,P=0.041)穿越平台次数较少。与正常对照组相比,Dex处理组凋亡细胞数差异无统计学意义(t=1.920,P=0.127),七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组凋亡细胞数均有不同程度增加,其中七氟醚处理组增加16%(t=13.436,P=0.002),七氟醚+Dex处理组增加5%(t=7.752,P=0.001),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组增加11.5%(t=12.612,P=0.002)。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组细胞凋亡数降低11%(t=8.521,P=0.002),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组降低5.5%(t=3.123,P=0.036)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组细胞凋亡增加6.5%(t=6.250,P=0.003)。在0.15 mm²区域内,与正常对照组相比,Dex处理组(t=0.898,P=0.136)及七氟醚+Dex处理组(t=0.203,P=1.519)阳性细胞数差异无统计学意义,七氟醚处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞数均有不同程度减少,其中七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞数分别减少31(t=4.702,P=0.009)及26个(t=3.948,P=0.014)。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组阳性细胞数增加17个(t=3.415,P=0.018),七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组增加5个(P=0.001)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组阳性细胞减少12个(t=3.010,P=0.039)。蛋白质免疫印迹检测海马组织中凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶3、Bax、Bcl-2的灰度值,结果显示与正常对照组相比,Dex处理组差异无统计学意义(t=0.612,P=0.573;t=1.225, P=0.288;t=0.961,P=0.391),七氟醚处理组、七氟醚+Dex处理组及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Bax(t=13.440,P=0.002;t=8.520,P=0.001;t=13.320,P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=9.860,P=0.001;t=6.120,P=0.004;t=11.620,P=0.003)均表达上调,Bcl-2(t=7.671,P=0.002;t=2.880,P=0.045;t=6.280,P=0.003)表达下调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组Bax(t=8.130,P=0.001)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.120,P=0.002)均表达下调,Bcl-2(t=6.201,P=0.003)表达上调。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Bax(t=7.310,P=0.002)及半胱氨酸蛋白酶3(t=7.750,P=0.002)均表达上调,Bcl-2(t=4.206, P=0.013)表达下调。荧光定量PCR检测海马组织Wnt/β-链蛋白信号通路相关分子Wnt3a、GSK-3β、β-链蛋白mRNA的表达情况显示,与正常对照组相比,Dex处理组Wnt3a、GSK-3β及β-链蛋白(t=1.230,P=0.290;t=0.901,P=0.418;t=1.837,P=0.140)及七氟醚+Dex处理组Wnt3a、β-链蛋白(t=1.102,P=0.332;t=1.030,P=0.361)表达差异均无统计学意义,七氟醚处理组(t=5.790,P=0.004;t=7.130,P=0.002)、七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=7.130,P=0.002;t=5.500,P=0.005)中Wnt3a、β-链蛋白表达均下调,七氟醚处理组(t=4.800,P=0.009)、七氟醚+Dex处理组(t=2.940,P=0.045)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=3.100,P=0.042)GSK-3β表达上调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组Wnt3a(t=4.460,P=0.011)及β-链蛋白(t=6.390,P=0.003)均表达上调,GSK-3β(t=4.160,P=0.004)表达下调。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Wnt3a(t=5.730,P=0.005)及β-链蛋白(t=4.640,P=0.010)均表达下调,GSK-3β有表达上调趋势,但差异无统计学意义(t=3.240,P=0.117)。与正常对照组相比,Dex处理组(t=0.735,P=0.503;t=0.245,P=0.819)及七氟醚+Dex处理组(t=1.623,P=0.180;t=1.159,P=0.311)Wnt3a、β-链蛋白表达差异均无统计学意义,七氟醚处理组(t=7.280,P=0.002;t=5.640,P=0.005)与七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=7.240,P=0.002;t=4.970,P=0.008)表达下调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组Wnt3a(t=6.410,P=0.003)、β-链蛋白表达上调(t=4.640,P=0.015)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组Wnt3a(t=6.360,P=0.003)、β-链蛋白(t=4.640,P=0.016)表达下调。蛋白质免疫印迹检测P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β蛋白灰度值,结果显示与正常对照组相比,七氟醚处理组(t=11.280,P=0.002)、七氟醚+Dex处理组(t=7.080, P=0.002)及七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组(t=9.970,P=0.001)P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达均下调。与七氟醚处理组相比,七氟醚+Dex处理组P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达均上调(t=8.310,P<0.001)。与七氟醚+Dex处理组相比,七氟醚+Dex处理+Wnt抑制剂组P(ser9)-GSK-3β/GSK-3β表达下调(t=5.510,P=0.005)。结论 Dex可介导Wnt/GSK-3β/β-链蛋白信号通路,抑制七氟醚诱导的新生大鼠认知功能障碍。     

无水乙醇提高甲状腺良性实性结节射频消融治疗效率的前瞻性随机对照研究

目的 探讨射频消融(RFA)前向甲状腺良性实性结节内注射少量无水乙醇对提高RFA治疗效率的价值。方法 2016年12月至2018年2月,根据标准纳入98例(98个结节)病理确诊为良性的实性结节患者,采用随机数字表法将患者随机分为乙醇消融(EA)联合RFA组(EA+RFA组)和 RFA组,每组49例。在治疗前及治疗后1、3、6、12个月进行常规超声、超声造影及甲状腺功能检查,比较两组患者的一般情况、治疗时间、消融能量、消融功率、术后结节体积缩小率(VRR)、症状评分(SS)及外观评分(CS)、甲状腺功能水平和并发症发生率。结果 EA+RFA 组平均RFA时间[(441.30±243.31)s比(790.70±349.82)s;t=4.403, P=0.000]、平均消融能量[(3.92±2.01)kJ比(5.15±2.12)kJ;t=2.709, P=0.009]和平均消融功率[(6.07±1.44)W比(7.30±1.29)W;t=3.612, P=0.006]均显著低于RFA组。术后 3、6、12 个月,EA+RFA 组VRR分别为(57.73±11.07)%( t=-3.16, P<0.001)、(64.40±10.56)%( t=-5.45, P<0.001)、(77.29±8.48)%(t=-10.46, P<0.001),RFA组分别为(55.44±13.01)%(t=-1.76, P<0.001)、(65.28±11.33)%(t=-5.09, P<0.001)、(75.17±9.84)%(t=-8.93, P<0.001),均较术前明显缩小;EA+RFA 组和RFA 组间术后1(t=3.41, P=0.33)、3(t=2.05, P=0.21)、6(t=2.77, P=0.49)、12 个月(t=5.05, P=0.10)的VRR差异均无统计学意义。随访期间,超声造影检查未见结节复发。术后12个月,EA+RFA 组SS[(1.77±0.86)分比(5.54±2.15)分;t=9.63, P<0.001]和CS[(1.39±0.77)分比(3.32±0.61)分;t=10.09, P=0.004]均明显低于术前,RFA组SS[(1.63±1.04)分比(5.90±1.79)分;t=12.72, P<0.001]和CS[(1.64±0.83)分比(3.15±0.72)分;t=8.13, P=0.012]也均明显低于术前,EA+RFA 组的CSS明显低于RFA组[(0.93±0.55)分比(2.44±0.53)分;t=-11.70, P=0.007]。随访期间两组患者甲状腺功能水平较治疗前无明显变化,均未见严重并发症。结论 EA注射可有效提高甲状腺良性实性结节RFA治疗的效率,并在结节VRR、压迫症状和外观不适方面有显著疗效。     

盐酸羟考酮注射液用于术后患者静脉自控镇痛的回顾性分析

目的 评估盐酸羟考酮注射液用于术后患者静脉自控镇痛(PCIA)的镇痛效能及不良反应。方法 检索北京协和医院麻醉科术后镇痛记录系统,回顾性分析手术日期在2018年1月1日至6月30日期间的术后镇痛记录,对比使用盐酸羟考酮组、舒芬太尼组和吗啡组患者术后24、36、48 h镇痛药累计用量、静息状态及下床活动时的疼痛评分、相应曲线下面积(AUC)和术后48 h内不良反应。结果 术后36 h,羟考酮组患者的活动时疼痛评分为(2.2±2.4)分,明显低于舒芬太尼组的(3.4±2.1)分(t=0.305,P=0.0126)和吗啡组的(3.4±1.7)分(t=0.104,P=0.0277)。静息状态下,羟考酮组和吗啡组的AUC分别为29.00和27.00,低于舒芬太尼组的40.01;下床活动时,羟考酮组的AUC为63.17,低于吗啡组的80.93和舒芬太尼的82.00。术后24、36、48 h,舒芬太尼组患者等效吗啡累计量分别为(37.2±16.1)、(46.1±24.3)、(64.4±33.4)mg,明显高于羟考酮组的(20.4±14.8)(t=3.571,P=0.001)、(24.2±16.1)(t=4.630,P<0.0001)、(34.4±25.1)mg(t=6.409,P<0.0001)和吗啡组的(16.6±11.7)(t=4.233,P<0.0001)、(20.50±14.1)(t=5.250,P<0.0001)、(28.8±19.0)mg(t=7.354,P<0.0001);羟考酮组和吗啡组间差异均无统计学意义(P均>0.05)。羟考酮组出现恶心(χ ²=11.360,P=0.003)及提前终止镇痛患者的比例(χ ²=7.914,P=0.019)明显低于其他两组。结论 盐酸羟考酮注射液可用于术后PCIA,缓解多种手术的术后疼痛,其镇痛效能优于吗啡及舒芬太尼,恶心呕吐发生率低。     

血清褪黑素、谷胱甘肽与帕金森氧化应激的相关性

目的 探讨帕金森病(PD)患者血清中非酶类抗氧化物褪黑素、谷胱甘肽含量的变化及其与疾病严重程度、认知功能障碍、睡眠障碍的关系。方法 选取2017年9月至2018年2月住院PD患者50例,另选取年龄、性别相匹配的50例健康对照者。采用 H-Y(修正)分级量表对PD患者病情严重程度进行评估,采用蒙特利尔认知评估量表北京版对患者的认知功能进行评估,采用匹兹堡睡眠质量指数对患者的睡眠状况进行评估。使用酶联免疫吸附法检测血清褪黑素(MLT)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平,并对结果进行比较分析。结果 PD组血清MLT水平明显高于健康对照组[(84.12±6.58)pg/ml比(46.29±9.73)pg/ml,P=0.000];血清GSH水平明显低于健康对照组[(21.07±12.05)μmol/L比(77.73±39.90)μmol/L,P=0.000]。血清MLT水平与H-Y分级呈正相关(r=0.537,P=0.000),血清GSH水平与H-Y分级呈负相关(r=-0.596,P=0.000)。PD组患者血清MLT、GSH二者水平呈负相关(r=-0.842,P=0.000)。具有睡眠障碍PD患者的MLT水平明显高于无睡眠障碍组[(85.79±6.45)pg/ml比(78.84±3.54)pg/ml,P=0.001];PD有认知功能障碍组的GSH水平明显低于无认知功能障碍组[(17.47±10.67)μmol/L比(26.09±12.23)μmol/L,P=0.011]。结论 PD患者血清MLT水平较正常人升高,而GSH水平较正常人减低,二者均与PD严重程度相关,同时两项指标之间呈负相关。具有睡眠障碍的PD患者血清中MLT水平较高,合并认知功能障碍的患者GSH水平较低。     

可视喉镜下不同鼻孔入路对鼻插管的影响

目的 在可视喉镜下观察经不同鼻孔入路对鼻插管的影响。方法 采用随机数字表法将120例美国麻醉医师协会(ASA)分级Ⅰ级的颌面手术患者随机分为A组(左鼻孔入路)和B组(右鼻孔入路),每组60例。麻醉快速诱导后,采用Tosight视频喉镜完成经鼻插管,记录并比较两组导管一次通过鼻腔率、导管通过鼻腔时间、声门暴露时间、插管总时间、插管成功率和鼻腔出血情况。结果 A、B两组患者在导管入鼻一次成功率(84.7%比81.7%;χ ² =0.202,P=0.653)、导管通过鼻腔时间[(7.3±4.6)s比(7.5±4.1)s;t=-0.223,P=0.824]、声门暴露时间[(6.6±1.4)s比(6.7±1.4)s;t=-0.348,P=0.728] 和插管总时间[(35.1±9.2)s比(34.0±7.8)s;t=0.663,P=0.509]方面差异均无统计学意义。两组的置管一次成功率均为100%。A组有16例(27.1%)发生插管相关鼻出血,B组有17例(28.3%),差异也无统计学意义(χ ² =0.022,P=0.882)。结论 经不同鼻孔入路对鼻插管影响无差别。     

妊娠期子宫肌瘤的自然转归及其影响因素分析

目的 了解妊娠期子宫肌瘤自然转归的规律。方法 采用纵向研究的方法,选取首都医科大学附属北京朝阳医院2011年1月1日至2017年12月31日期间建档、孕期监护的妊娠合并子宫肌瘤孕妇499例,对其子宫肌瘤在不同妊娠时期的最大径进行分析。结果 499个入组病例中,子宫肌瘤最大径中孕期较早孕期有显著增长[(3.94±2.02) cm vs (3.05±1.69) cm,t=13.94, P＜0.001)],晚孕早期较中孕期亦有显著增长[(4.18±2.22) cm vs (4.02±2.23) cm,t=2.96,P=0.003],而晚孕晚期较晚孕早期则无显著变化[(3.91±2.15) cm vs (3.93±2.17) cm,t=-0.81,P=0.417]。子宫肌瘤最大径自早孕期至晚孕晚期有显著增长[(2.94±1.70) cm vs (3.86±2.01) cm,t=-13.43,P＜0.001]。175例数据完整的患者中,不同初始最大径的子宫肌瘤孕期肌瘤变化的规律及幅度大致相同,其变化幅度与早孕期子宫肌瘤最大径、孕妇年龄、孕次、产次、肌瘤部位及数目均无关(P＞0.05)。子宫肌瘤整个孕期的最大径有38.3%出现在中孕期,33.1%在晚孕早期,21.1%在晚孕晚期,仅7.4%出现在早孕期。兼顾敏感度和特异度的情况下,当早孕期子宫肌瘤最大径超过4 cm时,对孕期子宫肌瘤将会显著增大(＞3 cm)的预测效果最好,敏感度为83.33%,特异度为76.07%。结论 妊娠期子宫肌瘤在早孕至中孕期有显著增长且增幅最大,至晚孕早期增幅明显放缓,至晚孕晚期大部分肌瘤较前缩小,不同初始最大径的子宫肌瘤表现出大致相似的变化规律。     

子宫内膜异位症患者核转录因子-κB及细胞间粘附分子-1的表达

目的 检测核转录因子(NF-κB)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在子宫内膜异位症(内异症)中的表达,探讨其在内异症发病中的作用。方法 采用免疫组化SP法分别检测NF-κB及ICAM-1在35例正常子宫内膜、48例内异症患者的在位内膜及76例内异症患者的异位内膜中的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果 ①NF-κB和ICAM-1主要表达于三组内膜的腺上皮细胞,在正常子宫内膜表达最弱,而在异位内膜的表达最强(P<0.001);②NF-κB和ICAM-1在正常子宫内膜、在位内膜及异位内膜中的表达呈正相关,相关系数分别为r=0.688、r=0.773及r=0.777(P<0.01)。结论 NF-κB和ICAM-1在内异症在位内膜和异位内膜的高表达及二者之间的正相关性提示其在内异症发生发展过程中起重要的作用。     

IL-17A对成骨细胞系MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响及其作用机制

目的 检测IL-17A对MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响,并探讨其作用机制。方法 采用小鼠重组细胞因子IL-17A作用于MC3T3-E1细胞,通过Real-time PCR和ELISA分别检测MMP-2及MMP-9在mRNA水平及蛋白水平上的表达情况;通过免疫荧光和Western Blot检测NF-κB的磷酸化水平的变化,并通过使用NF-κB阻断剂检测其在MMP-9表达中的影响。结果 IL-17A在mRNA水平及蛋白水平上均上调MMP-9的表达(P＜0.01),然而对MMP-2的表达无明显影响;IL-17A促进转录因子NF-κB的磷酸化水平(P＜0.01);阻断NFκB的活性可减弱IL-17A对MMP-9的上调作用(P＜0.05);IL-17A对MC3T3-E1细胞中TIMP-1及TIMP-2的表达没有影响。结论 IL-17A可以通过激活NF-κB促进MC3T3-E1细胞分泌MMP-9。