通脉益肾方拮抗肾间质纤维化的作用机制

目的观察通脉益肾方对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及肾小管上皮细胞表型转化的影响,探讨其拮抗肾间质纤维化的作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为假手术组、模型组、通脉益肾方组和缬沙坦组。通脉益肾方组、缬沙坦组分别给予通脉益肾方1.5 g/(kg.g)和缬沙坦10 mg/(kg.d)灌胃治疗,假手术组及模型组给予等量的生理盐水。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)、肾小管上皮细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,做相关性分析;采用HE及天狼星红染色观察各组大鼠肾脏的病理改变。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中ADM蛋白表达较假手术组明显降低(P<0.05),通脉益肾方组、缬沙坦组的ADM的蛋白含量及表达均高于模型组(P<0.05),但两治疗组之间无显著性差异。模型及各治疗组α-SMA的蛋白表达较假手术组明显升高(P<0.05),通脉益肾方组、缬沙坦组的表达均低于模型组(P<0.05),但两治疗组之间无显著性差异。ADM与α-SMA的表达呈明显负相关。结论通脉益肾方可能通过上调间质纤维化大鼠肾脏ADM的表达、抑制肾小管上皮细胞的表型转化起到拮抗肾间质纤维化的作用。     

扶正化瘀方对大鼠中毒性肾间质纤维化的作用

目的:观察扶正化瘀方对大鼠中毒性肾间质纤维化的作用.方法:Wistar大鼠40只,分为正常组、模型组、扶正化瘀方药物组.采用二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射4周和含汞等重金属的饲料喂饲造模8周,制备大鼠肝纤维化-肾间质纤维化模型.药物组以扶正化瘀方自第5周起灌胃,1次/d,共4周.肾组织HE染色及六胺银(periodic acidsilvermetheramine,PASM)染色,观察肾组织炎症与胶原纤维沉积变化;试剂盒方法检测血清尿素氮与肌酐含量,观察肾功能变化;盐酸水解法测定肾组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量,观察胶原生成变化.结果:模型大鼠肾小管上皮细胞浊肿、坏死与脱落,炎性细胞浸润;肾间质增宽,大量胶原沉积;肾小管基底膜增厚,出现皱褶;血清尿素氮与肌酐含量上升,肾组织Hyp含量显著增加.扶正化瘀方药物组明显减轻模型大鼠肾小管炎症坏死与肾间质胶原沉积,减轻肾组织Hyp含量,降低异常增高的血清尿素氮与肌酐水平.结论:DMN腹腔注射与汞等重金属饲料口服可造成大鼠肾间质纤维化,扶正化瘀方可明显改善大鼠肾功能,有抗肾间质纤维化的作用.     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质病理损害的作用

目的观察黄芪（AM）对单侧输尿管梗阻（UUO）所致大鼠肾小管间质病理损害的影响，初步探讨黄芪拮抗纤维化的作用机制。方法48只SD大鼠随机分为假手术（Sham）、UUO组和UUO＋黄芪治疗组（AM）、UUO＋氯沙坦治疗组（ARB）。在造模后7、14天处死动物，观察HE染色、Masson染色和PAS染色肾脏病理改变，并对肾小管间质损害进行半定量评定分析。结果与假手术组相比，UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重，肾小管损伤程度、肾间质相对面积和肾小管萎缩程度评分均明显增高，黄芪干预后各时间点上述指标明显改善，与ARB作用相似。结论黄芪能有效抑制肾小管间质病理损害，减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化。     

鳖甲煎丸对肾间质纤维化模型大鼠肾脏的保护作用

目的观察鳖甲煎丸对肾间质纤维化实验大鼠肾脏的保护作用并探讨其作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾梗阻模型,将其随机分为缬沙坦组、鳖甲煎丸组与模型组,并设假手术组。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)在蛋白及基因水平的表达,并测定其在肾组织中蛋白含量。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中肾上腺髓质素组织蛋白含量、蛋白表达以及mRNA的基因表达较假手术组明显降低,鳖甲煎丸组、缬沙坦组的含量及表达均高于模型组(P<0.05?,但两组之间比较无显著性差异。结论鳖甲煎丸能够明显上调肾间质纤维化大鼠肾脏ADM的蛋白及mRNA的表达,对肾脏起到保护作用。     

丹参酚酸B对肾纤维化大鼠肾组织MMP-2表达的影响

目的：探讨丹参酚酸B（SA-B）对肾间质纤维化大鼠的作用及机制。方法：36只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和SA—B治疗组。单侧输尿管结扎术（UUO）建立肾间质纤维化模型。造模的同时SA—B治疗组灌喂SA—B水溶液（12．5mg／kg）。第14、21天处死大鼠,观察肾功能的变化,HE和PASM染色光镜下观察肾组织的病理变化,用盐酸水解法检测肾组织中羟脯氨酸的含量,Westernblot法检测肾组织基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白抑制剂-2（TIMP-2）蛋白表达,明胶酶谱观察MMP-2活性。结果：与假手术组比较,模型组大鼠血肌酐、尿素氮和羟脯氨酸的含量均有明显上升;肾小球正常,肾间质增宽,间质内有大量的炎性细胞和间质细胞出现,肾小管扩张较明显,后期可见到部分。肾小管萎缩,肾小管的基底膜明显增厚;肾组织的MMP-2蛋白、活性和TIMP-2蛋白水平均高于同期假手术组。SA—B干预后,血肌酐、尿素氮和羟脯氨酸的含量明显降低;上述病理改变明显轻于模型组,。肾组织的MMP-2蛋白、活性水平和TIMP-2蛋白表达明显减少。结论：SA—B可抑制肾组织MMP-2和TIMP-2的蛋白表达,从而改善UUO大鼠的肾间质纤维化和肾功能。     

血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠SnoN和Ski表达的影响

目的：探讨血府逐瘀胶囊对单侧输尿管梗阻所致大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、血府逐瘀胶囊治疗组，采用单侧输尿管结扎术（UUO）建立大鼠肾间质纤维化模型。术后21d取各组大鼠肾组织HE染色及六胺银染色（PASM），观察肾组织病理变化；检测大鼠血肌酐和尿素氮含量，观察肾功能变化；放射免疫法检测肾组织中Ⅲ型前胶原含量，观察肾纤维化程度；Western blot检测肾组织中核转录共抑制因子SnoN与Ski蛋白表达水平，观察TGF—β1／Smad信号转导通路中逆向调控信号分子表达水平的变化。结摹：与假手术组比较，模型组大鼠肾小管基底膜明显增厚，部分肾小管上皮细胞变性，肾小管萎缩，管腔显著扩张，。肾间质明显增宽；血肌酐与尿素氮含量以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量显著增加：SnoN、Ski蛋白表达显著减少。血府逐瘀胶囊治疗组大鼠梗阻侧肾组织的病理变化明显改善，血肌酐与尿素氮水平以及肾组织中Ⅲ型前胶原含量明显降低，SnoN蛋白表达水平显著增加，而Ski蛋白表达没有改变。结论：血府逐瘀胶囊可通过恢复SnoN蛋白表达水平，抑制TGF—β1，靶基因的活化，从而改善UUO大鼠的。肾功能和肾间质纤维化程度。     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激的变化

目的采用单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化大鼠模型，观察UUO后肾脏病理和肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量及各氧化应激指标的改变，探讨氧化应激在肾间质纤维化中的作用。方法 成年健康Wistar大鼠24只，随机分为两组（n=12）：模型组（UUO组）大鼠麻醉后打开腹腔分离左侧输尿管，并于靠近肾盂段行左输尿管结扎；假手术组（Sham组）仅分离输尿管，不行结扎。两组大鼠于手术后10d处死取左侧肾脏，HE和Masson染色观察大鼠肾脏常规病理；以化学比色法测定梗阻侧肾组织匀浆中羟脯氨酸（Hyp）的含量、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）的含量。组间比较采用单因素方差分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果 大鼠行单侧输尿管结扎10d后，梗阻侧肾脏肿大、肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，部分肾小管腔内有蛋白或细胞管型，间质趋向纤维化。与Sham组相比，UUO组梗阻侧肾脏病理改变明显，且肾组织中Hyp和MDA含量增加（P〈0．01），T—AOC含量和T—SOD活性下降（P〈0．01）。相关分析显示肾组织中Hyp和MDA含量与Masson染色中胶原沉积成正相关，（r1=0.69，r2=0.66，P〈0．01）；肾组织中T—SOD活性和T—AOC含量与Masson染色中胶原沉积成负相关，（r3=-0．57，P〈0．05，r4=-0．59，P〈0．01）。结论 单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激参与肾间质纤维化的形成。     

安体舒通和缬沙坦对UUO大鼠肾脏的抗氧化保护作用

目的 探讨醛固酮受体拮抗剂安体舒通和血管紧张素Ⅱ-1型受体拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的抗氧化保护作用.方法 Wistar大鼠行左侧输尿管结扎术,分为UUO模型组(n=11),安体舒通治疗组(US,n=12),缬沙坦治疗组(UV,n=11)和安体舒通+缬沙坦治疗组(USV,n=10),同时设假手术对照组(n=7).术后第14天处死各组大鼠,进行HE和Masson染色,观察肾脏病理变化;比色法测定肾组织羟脯氨酸(HYP),丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 UUO组与其它组大鼠比较,肾组织HYP和MDA含量明显升高,SOD含量显著下降,肾脏病理改变加重,肾组织α-SMA的表达显著增加(P<0.05);各用药组与UUO组大鼠比较,肾组织HYP和MDA含量明显降低,SOD含量升高,肾间质纤维化显著减轻,肾组织α-SMA的表达显著减少(P<0.05).结论 安体舒通联合缬沙坦能减少单侧输尿管梗阻肾组织脂质过氧化物的产生,增加抗氧化酶的含量,从而显著改善UUO大鼠氧化应激所致的肾间质纤维化.     

树突状细胞在肾切除大鼠肾组织中分布及缬沙坦对其作用的影响

目的探讨树突状细胞(DC)在肾切除大鼠肾小管间质中的分布与作用及缬沙坦对DC作用的影响.方法建立慢性肾衰5/6肾切除大鼠模型,随机分为正常组(n=18)、假手术组(n=18)、模型组(n=18)和缬沙坦治疗组(n=18).分别于建模1、4、12周,采用免疫双染和荧光图像分析法观察CD1a+CD80+DC在各组大鼠肾组织中的分布变化;免疫组化法观察P-选择素和各纤维化相关指标在肾组织中的表达;Masson染色评定各组肾小管间质纤维化(TIF)程度.结果模型组CD1a+CD80+DC主要分布于肾小管、肾间质和肾血管,以肾间质最为明显;其分布数量于12周较1周、4周明显增多,且与慢性肾功能减退呈正相关;12周时,P-选择素和各纤维化相关指标以肾小管间质为主表达和TIF程度明显增加,并与CD1a+CD80+DC分布数量呈正相关;经缬沙坦治疗后,CD1a+CD80+DC分布减少,P-选择素和各纤维化相关指标表达下降,TIF程度减轻及肾功能改善.结论DC可能启动或参与了肾小管间质纤维化形成,并与肾功能损害程度密切相关,缬沙坦对此具有明显的抑制和肾脏保护作用.     

树突状细胞在肾切除大鼠肾组织中分布及缬沙坦对其作用的影响

目的 探讨树突状细胞(DC)在肾切除大鼠肾小管间质中的分布与作用及缬沙坦对DC作用的影响。方法 建立慢性肾衰5／6肾切除大鼠模型，随机分为正常组(n=18)、假手术组(n=18)、模型组(n=18)和缬沙坦治疗组(n=18)。分别于建模1、4、12周，采用免疫双染和荧光图像分析法观察CD1a^ CD80^ DC在各组大鼠肾组织中的分布变化；免疫组化法观察P-选择素和各纤维化相关指标在肾组织中的表达；Masson染色评定各组肾小管间质纤维化(TIF)程度。结果 模型组CD1a^ CD80^ DC主要分布于肾小管、肾间质和肾血管，以肾间质最为明显；其分布数量于12周较1周、4周明显增多，且与慢性肾功能减退呈正相关；12周时，P-选择素和各纤维化相关指标以肾小管间质为主表达和TIF程度明显增加，并与CD1a^ CD80^ DC分布数量呈正相关；经缬沙坦治疗后，CD1a^ CD80^ DC分布减少，P-选择素和各纤维化相关指标表达下降，TIF程度减轻及肾功能改善。结论 DC可能启动或参与了肾小管间质纤维化形成，并与肾功能损害程度密切相关，缬沙坦对此具有明显的抑制和肾脏保护作用：     

Effect of Yishen Huayu Fang on kidney tissue E-cadherin expression in unilateral ureter ligation in rats

OBJECTIVE:To observe E-calcium sticky protein(E-cadherin) expression in kidney tissues in a rat model of unilateral ureter ligation and the effect of Yishen Huayu Fang(formula of tonifying the kidney and dissolving accumulated blood stasis) on the expression.METHODS:A total of 150 clean grade male rats were randomly divided into a control group,model group,low-dose Yishen Huayu Fang group(low-dose group),high-dose Yishen Huayu Fang group(high-dose group),and Lotensin group.A renal fibrosis model was established with unilateral ureteral obstruction(UUO).Pathological changes of rat renal tissue were observed with light microscopy on days 3,7,14,21,and 28 after UUO.Changes in kidney tissue E-cadherin expression were observed with immunohistochemistry.RESULTS:Three days after modeling,kidney edema appeared followed by gradual inflammatory cell infiltration,and part of the small tubules disappeared while the renal cortex thinned.Meanwhile,the E-cadherin expression level dropped,which was negatively correlated with the obstruction time.After intervention,E-cadherin expression was increased in all treatment groups(P<0.01 or P<0.05),while there were no significant differences between the high-dose and Lotensin groups.CONCLUSION:Yishen Huayu Fang delays the renal fibrosis process by promoting E-cadherin expression in renal tissues and reducing extracellular matrix deposition.     

益肾降浊冲剂对慢性肾功能衰竭大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察益肾降浊冲剂对慢性肾衰(CRF)大鼠肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响,探讨其延缓CRF进展的作用机制。方法采用单侧肾切除加阿霉素重复注射建立慢性肾衰大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、缬沙坦、益肾降浊冲剂治疗组。治疗组分别予缬沙坦、益肾降浊冲剂灌胃8周,Masson染色观察肾小管间质胶原沉积的程度,免疫组化检测肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA的表达。结果模型组残肾肾小管出现萎缩、扩张、胶原染色阳性面积明显高于假手术组,TGF-β1、α-SMA的表达明显上调(P<0.01);缬沙坦组、益肾降浊冲剂组胶原染色阳性面积及TGF-β1、α-SMA的表达量均明显低于模型组(P<0.01);益肾降浊冲剂组胶原染色阳性面积减少及TGF-β1、α-SMA的表达量均明显低于缬沙坦组(P<0.05)。结论益肾降浊冲剂能通过抑制CRF残肾小管上皮细胞TGF-β1的表达、进而抑制EMT及胶原的沉积,作用优于缬沙坦。     

引经药物介导三七抗肾间质纤维化及肾靶向作用研究

目的观察三七和引经药物介导的三七复方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化及肾靶向作用的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为5组:UUO组、假手术(SOR)组、三七(RN)组、引经药物介导的三七复方(CRN)组和氯沙坦(ARB)组。每组纳入18只进行检测。HE、Masson和PAS染色观察肾间质病理学改变;化学比色法测定肾组织匀浆中羟脯氨酸的含量;Real-time PCR从mRNA水平观察α-SMA、collagenⅠ和fibronectin的表达。采用Western blot、免疫组化技术观察α-SMA蛋白的表达。结果 UUO组呈进行性肾间质纤维化改变,包括小管的萎缩、扩张、炎细胞浸润、肾间质胶原的沉积以及α-SMA、collagenⅠ、fibronectin mRNA水平的升高(P<0.05)。偏相关分析显示α-SMA的表达与肾小管损伤指数呈正相关(r=0.55;P<0.05)。RN组、CRN组、ARB组与UUO组比较均不同程度地减轻了胶原在肾间质的沉积,改善了肾脏病理损害,抑制了肾小管间质α-SMA的表达(P<0.05),且CRN作用强于RN(P<0.05)。结论三七和引经药物介导的三七复方对UUO所致的大鼠肾间质纤维化的形成均有抑制作用,且CRN作用强于RN。引经药物介导的三七复方对肾间质纤维化更具靶向治疗作用。     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

益肾活血方对UUO大鼠肾脏HIF-1α、PDGF-B、ICAM-1及VCAM-1表达的影响

目的：观察益。肾活血方对单侧输尿管结扎（UUO）大鼠中低氧诱导因子（HIF-1α）、血小板源性生长因子（PDGF—BB）、细胞间黏附因子1（ICAM．1）以及血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达的影响。方法：实验采用UUO大鼠造成肾纤维化动物模型,并以益肾活血方、氯沙坦灌胃治疗。分别在术后第7天、第14天、第21天采集肾脏标本,运用免疫组化法检测HIF—-1α、PDGF—BB、ICAM-1、VCAM-1在肾脏中的表达。结果：假手术组大鼠各时间点内,肾组织HIF-1仅、PDGF—BB、ICAM-1、VCAM．1蛋白表达均在正常范围内;模型组大鼠随时间延长,肾组织HIF—-1α、PDGF-BB、VCAM-1蛋白表达逐渐增加,给药组大鼠肾组织HIF-1α、PDGF—BB、ICAM-1、VCAM-1蛋白的表达有所降低（P〈0．01或P〈0．05）,益肾活血方组降低优于氯沙坦组。结论：益肾活血方能明显改善。肾纤维化过程中的内源性低氧状态、减轻大鼠肾间质的炎症反应,从而达到延缓肾间质纤维进展的作用。     

肾炎康复片对梗阻性肾病大鼠肾脏金属蛋白酶1组织抑制剂和细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨肾炎康复片对单侧输尿管梗阻大鼠检测金属蛋白酶1组织抑制剂（tissue inhibitor of metallo-proteinase-1,TIMP-1）和细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）的作用。方法将雄性SD大鼠60只随机分为3组：假手术组（SOR,n=20）、模型组（UUO,n=20）和肾炎康复片组（SYKFT,n=20）。从术前24小时开始,肾炎康复片组按照成人每公斤体质量2倍的剂量灌胃,余组予以同等体积生理盐水灌胃,连续14d。于术后3、7、14d分别随机处死各组大鼠,取左肾组织,Masson染色观察肾间质病理学改变,化学比色法测定肾组织匀浆中羟脯氨酸的含量,采用蛋白质印迹法TIMP-1和ICAM-1的表达情况。结果模型组肾脏呈进行性肾间质纤维化及肾间质胶原沉积的改变（P〈0.05）。肾炎康复片组在不同程度上减轻了单侧输尿管梗阻大鼠肾间质胶原的沉积和肾脏病理损害,抑制了TIMP-1的表达（P〈0.05）。但肾炎康复片对ICAM-1的作用不明显。结论肾炎康复片对单侧输尿管梗阻所致的大鼠肾脏纤维化的形成有一定的改善作用,其机制可能与抑制TIMP-1的表达有关。     

CD47在单侧输尿管梗阻大鼠模型中调控血管生成的作用研究

目的 探讨整合素相关蛋白CD47在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中对血管调控的作用.方法 将SD大鼠随机分为2组：UUO组50只和假手术组（SOR） 25只.UUO组随机选取10只分别于术后3、7、14、21和28天处死,;SOR组随机选取5只于按相同时间点处死.行HE染色观察肾间质病理学改变;免疫组化技术观察CD34、VEGF、TSP-1、CD47的表达.结果 UUO组呈进行性肾间质纤维化改变,包括小管的萎缩、扩张、炎细胞浸润以及CD34、VEGF表达下降（P＜0.05）;肾小管损伤评分、TSP-1、CD47的表达水平升高（P＜0.05）.相关分析显示CD47的表达与CD34的表达呈负相关（r=-0.925,P＜0.01）,与VEGF表达也呈负相关（r=-0.946,P＜0.01）.结论 CD47与其配体TSP-1结合,可能通过调控内皮细胞VEGF信号的传导,参与UUO大鼠模型RIF过程中血管病变的发生发展.