肾组织粘附分子及树突状细胞与IgA肾病小管间质病变的关系

目的:观察粘附分子P-选择素与树突状细胞(DC)在IgA肾病(IgAN)患者肾组织中的表达与分布,探讨P-选择素及DC与肾小管间质病变以及肾功能损害的关系.方法:选择经肾活检和临床资料确诊的IgAN患者45例,根据小管间质病变程度分为3组:轻度组29例,中度组10例,重度组6例;10例正常人肾组织作为对照.采用免疫组化法观察IgAN患者肾组织中P-选择素表达;免疫双标记染色与荧光图像分析法,观察CD1a CD80 DC在肾组织中的分布,并探讨DC与患者肾小管间质病变及肾功能损害的关系.结果:①P-选择素在正常肾组织中基本不表达,在IgAN肾组织中以肾小管上皮细胞为主广泛高表达,重度组肾小管间质表达明显强于轻、中度组,且与肾小管间质病变程度轻重显著相关.②正常人肾组织中基本未见CD1a CD80 DC分布,IgAN肾组织中以肾小管间质为主分布明显增多;其在患者肾小管间质的分布于重度组明显高于轻、中度组,亦与肾小管间质病变程度及血肌酐显著相关.此外,CD1a CD80 DC在患者肾小管间质分布与P-选择素表达明显相关.结论:P-选择素尤其DC可能参与了IgAN肾小管间质病变的免疫病理损伤机制,且推测DC肾炎组织迁移聚集可能与P-选择素介导有关.     

拮抗血管紧张素Ⅱ对5/6肾切除大鼠肾小管间质血小板反应蛋白1表达的影响

目的：观察血小板反应蛋白1（TSP1）在大鼠纤维化肾组织中的表达，以及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对肾小管上皮细胞表达TSP1的影响。方法：建立5／6肾切除SD大鼠模型，设假手术组，手术组，氨氯地平组。缬沙坦组，雷米普利组。术后定时检测血压，分别于成模后0、4、12周取材，检测血肌酐、尿素氮、24h尿蛋白定量并计算Ccr。采用Masson染色观察肾小管间质纤维化（TIF）的程度；通过免疫组化观察TSP1、转化生长因子1（TGF-β1）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）在各组大鼠肾组织中表达及分布；采用免疫荧光共染技术观察TSP1／TGF-β1两者共区域表达随病变进展的变化；抽提肾皮质组织总RNA，RT—PCR法检测TSP1、TGF-β1和FN mRNA转录水平的表达。体外实验，以1 μM AngⅡ刺激人肾小管上皮细胞（HK-2）24h，10μM氯沙坦（Losartan）进行干预，分别采用RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测TSP1、TGF-β1、FN mRNA转录水平和蛋白表达的改变，ELISA法检测培养基中活性和总TGF-β1的含量。结果：①正常大鼠肾小管间质基本无TSP1分布；而在5／6肾次全切大鼠的肾小管间质区内，小管上皮细胞、肌成纤维细胞和浸润的单核／巨噬细胞均能表达TSP1，12周手术组TSP1蛋白表达水平较假手术组上调近5倍：且较之0周和4周手术组亦明显增加（均P〈0．01），12周手术组TSP1mRNA和蛋白表达水平较假手术组分别上调1．94倍和5倍（均P〈0．05）；②TSP1表达增加与Ccr减退呈负相关（r=-0．472，P〈0．01）；12周手术组大鼠肾组织TIF程度以及TGF-β1、FN的表达较假手术组均明显上调（均P〈0．05），并与TSP1表达增加呈正相关；③缬沙坦／雷米普利处理组TSP1表达也上调，但程度明显低于手术组和氨氯地平组（均P〈0．05），而二组之间无差别；④AngⅡ能明显上调HK-2细胞TSP1、TGF—β1和FN mRNA转录水平和蛋白表达，而氯沙坦能抑制TSP1和TGF—β1的mRNA转录和蛋白合成，下调培养上清液中活性和总TGF-β1的含量。结论：肾小管间质病变的进展过程中，AngⅡ能使TSP1表达上调，其改变程度与肾功能损害密切相关；血管紧张素转换酶抑制剂／血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂能减少TSPl和TGF—β1在纤维化肾组织中的表达，从而进一步对细胞外基质的沉积进行调节。     

荧光图像分析法检测树突状细胞在人类肾炎肾组织分布及应用价值

通过对荧光双标记染色样本的图像分析，探讨树突状细胞(DC)在肾炎患肾组织中的分布定位及临床意义。方法：选择经肾活检和临床资料确诊的不同类型肾炎患133例。采用免疫荧光双标记染色与低照度荧光图像分析检测方法，观察DC在肾炎患肾组织中分布与改变、结果：肾炎患肾组织中DC分布的面积、数量及密度均明显增多。从分布特点来看，DC以肾小管间质为主，分布于肾小管、肾间质和肾血管，而肾小球基本未见分布，此外，DC在肾小管间质分布程度随肾炎肾小管间质病变程度加重而明显增加，两呈正相关。结论：DC可能参与肾脏疾病的免疫病理机制，并与肾小管间质病变密切相关。     

树突状细胞在肾小管间质炎症病变中的作用及抗黏附干预调节的研究

目的 探讨树突状细胞(DC)在肾小管间质炎症损伤中的作用，以及抗P-选择素功能域单抗(PsL-EGFmAb)对DC浸润及体外成熟与功能的干预调节。 方法 (1)建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型。分别采用免疫组化和免疫双染与图像分析，观察P-选择素及CD1a+CD80+DC在肾组织表达和分布变化。(2)从脐血CD34+造血干细胞中诱导扩增DC，并于成熟过程中采用流式细胞仪分析细胞表面分子表达；RT-PCR检测细胞NF-κB P50、P65 mRNA表达；混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC对T细胞刺激能力；以及ELISA测定MLR上清液IL-12 p70分泌含量。 结果 (1)与假手术组比较，UUO大鼠从第1天起，随着P-选择素以肾小管上皮细胞为主的小管间质表达，CD1a+CD80+DC以肾间质为主浸润；至第7天P-选择素上调且CD1a+CD80+DC显著聚集，两者明显相关且与肾小管间质病变程度显著相关。经PsL-EGFmAb处理后，大鼠肾组织P-选择素表达下调，CD1a+CD80+DC浸润减少，且肾小管间质损害程度减轻。(2)经TNF-α刺激炎性状态下，培养人DC成熟过程中基本不表达或低表达P-选择素，但持续高表达与P-选择素同属C型凝集素的DC-SIGN。经PsL-EGFmAb处理后，可明显抑制DC-SIGN及细胞内NF-κB基因表达，并相应抑制DC黏附共刺激分子表达、IL-12分泌及刺激T细胞增殖能力。 结论 DC也是肾小管间质炎症病变启动因素，针对P-选择素功能域的单抗对其浸润具抑制作用。此外，该单抗对人DC成熟与功能有调节效应，提示与抑制作为DC模式识别及黏附受体的DC-SIGN有关，并可能通过影响NF-κB途径起作用。     

树突状细胞在大鼠单侧输尿管梗阻后肾组织中的分布与作用

目的探讨粘附分子P-选择素与树突状细胞(DC)在大鼠单侧输尿管梗阻后肾组织中的表达和分布,以及抗P-选择素单抗的抗粘附凋抑作用.方法建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,随机将大鼠分为手术组和抗P-选择素单抗治疗组各18只,按不同梗阻时间(1、3、7 d)再分为3组,另设假手术组(n=6)作为对照.分别采用免疫组化LSAB法和免疫双染与荧光图像分析法,观察P-选择素及DC在肾组织中表达和分布变化.结果大鼠UUO第l d起即见P-选择素以肾小管上皮细胞为主在肾小管间质中表达上调,伴随CDl a+CD80+DC在以肾间质为主部位的浸润;第3dP-选择素明显表达,且CDla+CD80+DC显著增多;至第7 d P-选择素表达遂下调,而CDla+CD80+DC在肾间质分布聚集达峰,出现了明显的肾小管间质病理损伤.经抗P-选择素单抗处理后,大鼠肾组织P-选择素表达受到抑制,CDla+CD80+DC分布聚集减少,且肾小管间质病理损伤减轻.结论提示树突状细胞参与了肾小管间质纤维化早期病理损伤过程,其肾组织迁移聚集可能与P-选择素早期介导有关,抗P-选择素单抗对此具有抗粘附调抑和肾脏保护作用.     

淋巴细胞协同刺激分子与肾脏病

抗原特异性T细胞活化需要两个不同的信号.除第一信号,即来自抗原肽-MHC(major histocom-paibility complex,主要组织相容性复合体)分子组成的复合物与TCR(T cell receptor,T细胞受体)的相互作用;尚需协同刺激的第二信号,即来自抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APC)表面表达的协同刺激分子.已证明协同刺激信号可促进T细胞生长、分化和细胞因子产生,以及为防止T细胞发生凋亡而提供生存信号.缺乏这些协同信号将可导致淋巴细胞失活、无能或无反应性,甚至凋亡.由此提示通过控制协同刺激信号可以成为增强或终止抗原依赖T细胞活化及免疫反应的一个重要手段[1].有关协同刺激分子研究已取得长足进展,与肾脏疾病关系也已引起人们重视.本文就协同刺激分子及其与肾脏疾病的研究进展,作一综述.     

P-选择素与树突状细胞在IgA肾病肾小管间质病变中变化的临床意义

IgA肾病病理改变中广泛存在或伴随着肾小管间质损害 ,黏附分子介导的炎细胞浸润是肾小管间质免疫炎症反应重要前提。树突状细胞 (DC)是功能最强的专职抗原递呈细胞 ,其炎症组织迁移依赖于黏附分子P 、E 选择素介导。为此我们探讨了IgA肾病患者肾组织中P 选择素表达和DC分布变化 ,以及与肾小管间质病变之间的关系。选择经肾活检和临床资料确诊的4 5例IgA肾病患者 ,其中男 2 5例 ,女 2 0例 ,平均年龄 (4 5 .4± 1.5 )岁。根据肾小管间质病变程度分为 3组 :轻度组 2 9例 ,中度组 10例 ,重度组 6例 ;10例正常人肾组织为对照。用免疫组化法…     

Clara细胞分泌蛋白检测对急性肾小管坏死诊断的意义

目的：探讨Clara细胞分泌蛋白（CCSP）检测在诊断急性肾小管坏死（ATN）中的意义，以提高ATN的早期诊断率。方法：选取4例ATN患者肾活检组织，以原发性慢性肾小球肾炎[膜性肾病（MN）／微小病变（MCD）n=4]患者的肾脏及4例正常肾组织作为对照，应用免疫组化和免疫荧光方法检测肾脏组织的CCSP表达。选择10例ATN、10例原发性慢性肾小球炎（MN／MCD）和15例正常对照，采用ELISA法测定其血、尿CC16浓度。结果：免疫组化和免疫荧光结果显示,ATN组、MN／MCD组及正常对照组，肾小球中均无CCSP表达，肾小管上皮细胞有CCSP表达。而其中ATN患者则因肾小管受损，其肾小管上皮细胞CCSP表达较另2组下降。ATN患者起病期与肾功能恢复期间尿CC16差异有统计学意义[（1624．45±1119．11）ng／mL比（472．60±289．36）ng／mL，P〈0．01]。尿CC16浓度在ATN起病期显著增高，与正常对照组、MN／MCD组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：检测肾组织中CCSP有助于判断患者的肾小管功能．特别是近端肾小管受损情况：尿CC16浓度测定可作为急性肾小管损伤的指标，且与受检者肾组织中CCSP表达相吻合。     

树突状细胞与肾小管间质纤维化

树突状细胞(dendriticcell,DC)是一组形态、结构和功能异质性并体内广泛分布的专职抗原呈递细胞,能刺激初始T细胞启动早期免疫应答,调节T细胞和B细胞应答,在免疫应答反应及免疫耐受的诱导调节中起重要作用。近年众多研究证实,DC及其生物学功能与炎症性疾病、自身免疫性疾病、移植排斥及肿瘤等密切相关,而通过调节DC功能来调控免疫应答,已显示出对上述疾病的防治效果。DC作为免疫监视的“哨兵”细胞,可从外周血迁移到肾脏组织,呈递外来和自身抗原于T细胞,其启动的免疫机制可能参与了肾脏疾病的发生和发展,然而迄今尚不清楚。本文就其目…     

树突状细胞在肾切除大鼠肾组织中分布及缬沙坦对其作用的影响

目的探讨树突状细胞(DC)在肾切除大鼠肾小管间质中的分布与作用及缬沙坦对DC作用的影响.方法建立慢性肾衰5/6肾切除大鼠模型,随机分为正常组(n=18)、假手术组(n=18)、模型组(n=18)和缬沙坦治疗组(n=18).分别于建模1、4、12周,采用免疫双染和荧光图像分析法观察CD1a+CD80+DC在各组大鼠肾组织中的分布变化;免疫组化法观察P-选择素和各纤维化相关指标在肾组织中的表达;Masson染色评定各组肾小管间质纤维化(TIF)程度.结果模型组CD1a+CD80+DC主要分布于肾小管、肾间质和肾血管,以肾间质最为明显;其分布数量于12周较1周、4周明显增多,且与慢性肾功能减退呈正相关;12周时,P-选择素和各纤维化相关指标以肾小管间质为主表达和TIF程度明显增加,并与CD1a+CD80+DC分布数量呈正相关;经缬沙坦治疗后,CD1a+CD80+DC分布减少,P-选择素和各纤维化相关指标表达下降,TIF程度减轻及肾功能改善.结论DC可能启动或参与了肾小管间质纤维化形成,并与肾功能损害程度密切相关,缬沙坦对此具有明显的抑制和肾脏保护作用.