实验感染的猕猴血清和粪便中HEV RNA动态变化研究

应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测实验感染ＨＥＶ猕猴急性期血清及粪便标本中ＨＥＶ ＲＮＡ，并与其血清ＡＬＴ异常和抗－ＨＥＶ ＩｇＧ阳转相比较，以了解猕猴感染ＨＥＶ后上述各项标志的动态变化规律。结果表明，ＨＥＶ ＲＮＡ血症多出现于ＡＬＴ升高之前，持续约１￣２周，当血清抗－ＨＥＶ ＩｇＧ阳转时ＨＥＶ ＲＮＡ即转为阴性；粪便ＨＥＶ ＲＮＡ可与病毒血症同时出现，但持续时间较病毒血症为长，于感染     

献血员庚型肝炎病毒感染对照研究

目的 了解职业献血员与义务献血员庚型肝炎病毒感染状况。方法 采用ＥＬＡ法检测抗－ＨＧＶ、ＰＣＰ法检测ＨＧＶ－ＲＮＡ。结果 检测职业血员１８０例血清标本中抗－ＨＧＶ阳性２１例，阳性率８．５７％，ＨＧＶＲＮＡ阳性１８例，阳性率占抗ＨＧＶ的８５．７％；义务献血员１１５例血清标本中抗－ＨＧＶ阳性３例，阳性率２．６％，ＨＧＶＲＮＡ阳性２例，阳性率占抗ＨＧＶ的６６．６６％。结论 义务献血可显著降低庚型肝炎病毒     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体，建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ，以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示，以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ，批内变异系数为３．４７％，批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中，有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

68例抗-HEV阳性患者血清ALT水平观察

６８例抗－ＨＥＶ阳性患者血清ＡＬＴ水平观察金玉崔续玲张颖刘连生（附属医院免疫室）检测了８００例住院病人血清中抗－ＨＥＶ－ＩｇＧ及抗－ＨＥＶ－ＩｇＭ，对其中６８例抗－ＨＥＶ阳性病人检测血清丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ），以期探讨戊型肝炎患者血清中特异性Ｉｇ...     

庚型肝炎病毒核酸及抗体的联合检测分析

为探讨ＨＧＶ－ＲＮＡ及抗－ＨＧＶ在庚型肝炎诊断中的临床意义。采用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ技术检测ＨＧＶ－ＲＮＡ,采用ＥＬＩＳＡ技术检测抗－ＨＧＶ。结果：１８４例肝炎中ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性率为２１．２％（３９／１８４）,抗－ＨＧＶ阳性ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性率为７０．６％（２４／３４）,抗－ＨＧＶ阴性ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性率为１０．０％（１５／１５０）,抗－ＨＧＶ阳性率为１８．５％（３４／１８４）,;ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性抗－ＨＧＶ阳性率为６１．５％（２４／３９）,ＨＧＶ－ＲＮＡ阴性抗－ＨＧＶ阳性率为６．９％（１０／１４５）。作认为：ＨＧＶ－ＲＮＡ及抗－ＨＧＶ的检测均具敏感性和特异性,联合检测可提高ＨＧＶ感染的检出率。     

广西肝癌高发区人群多种肝炎病染的流行病学研究

目的：对广西肝癌高发区健康人群及肝癌患者ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＨＧＶ感染状况及其与肝癌的关系进行血清流行病学研究。方法：采用ＥＬＩＳＡ方法检测调查对象血清中ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＣＶ、抗－ＨＥＶ、抗－ＨＧＶ,用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测肝癌患者血清中ＨＧＶ－ＲＮＡ;用成组病例－对照研究方法分析ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ及ＨＧＶ感染与肝癌的关系。结果：ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＥＶ、ＨＧＶ相应的肝炎病毒感染率,健康人群     

丙型肝炎患者唾液和尿HCV－RNA检测及其意义

采用套式聚合酶链反应检测丙肝患者血清，唾液和尿各５２份。结果血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性３９例，２３例分别在尿和唾液中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ；１３份血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性者中，尿和唾液均未检出ＨＣＶ－ＲＮＡ，有非常显著差异（Ｐ＝０．０００１）。血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者分ＡＬＴ正常组和异常组，尿和唾液ＨＣＶ－ＲＮＡ阳检率分别为１８％和７５％，亦有非常显著差异（Ｐ＝０．００１）。对照组１３例正常人血清、唾液和尿ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。表明丙肝患者尿和唾液中能否检出ＨＣＶ－ＲＮＡ与病毒血症及ＡＬＴ有关，提示丙肝患者的尿和唾液可能为ＨＣＶ感染的传播媒介。     

献血员血清抗－HCV－IgM检测及其意义

目的探讨献血员血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ与ＨＣＶ感染的关联性。方法献血员血清８３６份。以ＨＣＶ混合抗原包被聚苯乙烯反应板微孔,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人ＩｇＭ单克隆抗体为酶标抗体,建立ＥＬＩＳＡ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ。以第二代ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ,以ＰＣＲ检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ或抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ阳性样品中的ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果２－巯基乙醇破坏试验及ＨＣＶ抗原抑制试验结果显示,以所建立的ＥＬＩＡＳ检测到的为ＨＣＶ特异ＩｇＭ,批内变异系数为３．４７％,批间变异系数为７．０６％。８３６份献血员血清中,有２份抗－ＨＣＶ－ＩｇＧ阴性而抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性。结论本研究中建立的ＥＬＩＳＡ可较好地用于检测血清抗－ＨＣＶ－ＩｇＭ、献血员筛选及防止丙型肝炎传播。     

丙型肝炎病毒感染者血清ALT,抗—HCV及HCV—RNA关系的分析

对８９例丙型肝炎病毒感染者血清ＡＬＴ、抗－ＨＣＶ及ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测分析，结果表明：抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性检测的符合率为４８．３１％，抗－ＨＣＶ与ＨＣＶ－ＲＮＡ虽然有较好的相关性，但二者无平行关系，说明义气风发－ＨＣＶ仅在某些情况下能反映ＨＣＶ的复制状态，但不能代替ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测，２份ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性血清抗－ＨＣＶ阴性，说明ＨＣＶ－ＲＮＡ的检测早期诊断意义较抗－ＨＣＶ更大。ＡＬ     

输血后丙型肝炎患者庚型肝炎病毒感染的初步研究

为探讨输血后丙型肝炎患者合并庚型肝炎病毒感染的情况，以及合并感染是否加重肝损伤，本文采用逆转录聚合酶链反应方法（ＲＴ—ＰＣＲ），对２０例输血后丙型肝炎患者进行血清ＨＧＶ／ＧＢＶ－ＣＲＮＡ检测，结果合并ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ感染４例，占２０％；合并感染者ＡＬＴ升高程度与单纯ＨＣＶ感染者ＡＬＴ升高程度无差别，提示ＨＧＶ／ＧＢＶ－Ｃ不加重ＨＣＶ的肝损伤。     

重组戊型肝炎病毒抗原免疫恒河猴及其对病毒攻击的保护

目的：了解重组抗原免疫恒河猴的抗体应答情况及其对病毒攻击的保护作用。方法：利用大肠杆菌表达的戊型肝炎（HEV）病毒3个不同的片段,分别为Agl(ORF2 C端431aa)、Ag2(ORF2 C端128aa片段）、Ag3[ORF3 122aa与ORF2 6287－6404碱基编码的39aa片段以及C端128aa依次以（Gly)n短臂连接的嵌合抗原]免疫恒河猴,用ELISA方法检测IgG抗体水平,3周后达到较高水平应答时,用HEV阳性粪便样静脉注射进行攻击,经肝脏病理切片观察、血清IgG、丙氨酸转氨酶（ALT）水平测定及粪便排毒的RT－nPCR检测来评价抗原对病毒攻击的保护作用。结果：对照组3只猴中两只发现肝脏组织产生明显的病理性改变,而免疫了抗原的试验组12只猴正常;对照组均在攻毒后3－4周发生ALT异常,为正常值的10－20倍,而试验组有部分猴不同程度轻微的ALT异常,其余正常;试验组免疫抗原后IgG水平迅速上升,滴度可达1：12800;对照组粪便中病毒RNA的检出在攻毒后7－50d左右,而试验组7－21d内以低水平存在。结论：重组的抗原片段诱发机体产生针对HEV的抗体应签,能够抑制HEV感染引起的肝炎症状的产生。     

实验感染恒河猴建立庚型肝炎动物模型的研究

用庚型肝炎病毒(HGV)人工感染恒河猴建立庚型肝炎动物模型在我国尚属首例。该实验用了5只恒河猴(2其感染．1只传代．2只对照)。本实验采用：逆转录PCR法、间接ELISA法、酶速率法、肝组织光镜动态病理方法作为检测手段。其结果是：研究的2只猴都出现HGV-RNA、HGV-IgG阳性，持续时间50周以上。感染第10周肝组织出现急、慢性病毒性肝炎病变．并与人庚型肝炎病变基本相同，而血清转氨酶(ALT)变化不明显。用感染后第7周猴子的阳性血清传代感染另一只猴：用同样的检测方法、内容，其结果与供血清猴的变化特征相同。实践证明．实验感染恒河猴建立庚型肝炎动物模型的研究首次获得成功。     

HCV RNA含量与肝脏组织病理学损伤之间的关系

目的:探讨丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA含量和ALT浓度与肝脏组织病理学损伤之间的关系.方法:应用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测681例HCV感染患者血清HCV RNA,电化学发光分析技术检测HBsAg,ELISA检测抗HAV IgM、抗HCV IgG和抗HEV IgM,Bayer全自动生化分析仪检测ALT浓度.H-E染色,光学显微镜观察组织病理损伤程度.结果:681例血清标本中,HCV RNA和抗HCV抗体均阳性和均阴性者分别是150例和420例,HCV抗体阴性而HCV RNA阳性40例,HCV RNA阴性而HCV抗体阳性71例.在排除了甲型、乙型和戊型肝炎病毒感染后,190例HCVRNA阳性患者中,36例患者在HCV RNA检测前后7 d内,曾进行过肝脏组织病理学检测,轻度、中度和重度肝脏病理学损伤患者血清中,HCV RNA浓度及ALT浓度相差均不显著.结论:血清学标志物和病毒核酸都是监测HCV感染的重要指标.HCV RNA浓度、血清ALT浓度与肝脏病理损伤相关性不显著,HCV RNA水平不能反映肝脏病理损伤程度.     

血清戊型肝炎抗体检测的比较研究

目的评价戊型肝炎抗HEV E2 IgM、IgG酶联免疫试剂(捕获法)在戊型肝炎诊断中的意义。方法对226例肝病患者及50例健康体检者进行抗HEV E2 IgM、IgG检测,同时对226例患者进行上海科华抗HEV IgM、IgG试剂平行检测。结果抗HEV E2 IgM ELISA试剂在226例肝病患者中检出43例阳性,阳性率为19.0%。上海科华试剂在226例肝病患者中检出45例抗HEV-IgM阳性和/或抗HEV-IgG阳性,阳性率为19.9%,与抗HEV E2 IgM ELISA试剂检测结果相符,差异无统计学意义(P>0.05)。抗HEVE2IgM阴性、抗HEV IgG阳性的99例临床诊断考虑戊型肝炎既往感染病例中,上海科华试剂检出16例抗HEV IgG阳性,占16.2%。结论抗HEV E2 IgM ELISA试剂用于戊型肝炎急性感染的检测灵敏准确,是一个较好的HEV近期感染指标。万泰抗HEVIgG试剂在戊型肝炎既往感染的诊断上具有准确、敏感的优势。     

温州3044例献血者戊型肝炎病毒血症及基因分型的研究

目的了解温州市无偿献血者戊型肝炎病毒血症及基因分型的情况。方法对2008年2～10月浙江省温州市中心血站的无偿献血者进行整群抽样,检测抗HEV IgG以及IgM抗体,并对抗HEV IgM阳性的标本进行RT-PCR检测,经测序后分析其基因型及序列同源性。结果3044例无偿献血者中,HEV IgG阳性率为33.28%（1013/3044）,IgM阳性率为0.92%（28/3044）。对28例HEV IgM阳性标本进行PCR检测共发现3例核酸阳性,核酸总体阳性率为0.1%,其中2例为基因Ⅳ型感染,1例为基因Ⅰ型感染。结论无偿献血者中存在一定比例的HEV病毒携带者,有必要对现有血液筛查策略下输血途径传播戊肝的风险进行评估。     

戊型肝炎IgG抗体检测方法的建立

为建立一种简便、快速诊断戊型肝炎病毒血清抗体的检测方法,以基因工程HEVORF2区重组蛋白抗原和人工会成HEVORF3区合成多肽抗原混合作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的单克隆抗人IgG抗体为第二抗体,建立了间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中HEVIgG抗体技术。检测中国药品生物制品检定所《检测抗HEV抗体国家参考品》全套血清盘：特异性参比品30份,全部为阴性;阳性参比品10份,全部为阳性;精密性参比品,CV（n＝10）＜15％。17例非甲、乙、丙肝炎患者,黄殖出现后4个月内,HEVIgG抗体检出率为100％。普通人群HEVIgG抗体检出率为1％～2％。表明该方法检测HEVIgG抗体,特异性强、敏感性高、操作简便快速,适用于临床对戊型肝炎的诊断和流行病学调查。     

苦参素注射液联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎疗效分析

目的了解苦参素注射液和替比夫定联合治疗的效果。方法本文71例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组,治疗组34例,同时使用苦参素注射液和替比夫定12周,随后单用替比夫定40周;对照组37例,单用替比夫定52周。疗程中,定期检测ALT、HBeAg、抗HBe、HBV DNA,并做YMDD变异检测。结果全部患者完成1年治疗,治疗组与对照组血清转换率分别为41.2%(14/34)和21.6%(8/31),两组差异无显著性(P=0.08)。治疗组未发生YMDD变异,对照组有5例发生YMDD变异,治疗组血清ALT及HBV DNA基线水平与血清转换率明显相关(P=0.04),在ALT>2.0 ULN及血清HBVDNA>1.0×107拷贝/mL患者中,治疗组HBeAg/抗HBe血清转换率明显高于对照组(分别为52.0%和25.8%,P=0.04及63.2%和28.6%,P=0.03)。在肝组织HBV DNA表达水平较高的患者中,治疗组血清转换率高于对照组(分别为46.2%和9.5%,P=0.03)。结论苦参素与替比夫定联合治疗对于ALT中度以上升高,HBV DNA高水平复制疗效优于单用替比夫定。并对于延迟及减少YMDD变异相关性耐药有一定作用。     

干扰素α和恩替卡韦治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效的预测因素

目的探讨干扰素α和恩替卡韦（ETV）治疗e抗原（HBeAg）阳性慢性乙型肝炎（CHB）的48周临床疗效及其预测因素。方
法采用回顾性研究方法。共入组HBeAg阳性CHB患者129例,其中聚乙二醇化干扰素α-2a（PEG-IFNα-2a）组27例;普通干扰
素α（IFNα）组51 例;ETV组51 例。记录基线、12 周、24 周及48 周HBeAg定量、HBV DNA定量及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水
平。采用t检验、Wilcoxon秩和检验、F检验、Kruskal-Wallis H检验、χ2检验及受试者工作特征曲线（ROC）进行统计学分析。结
果治疗48 周时,PEG-IFNα-2a 组、IFNα组和ETV组HBV DNA检测不到率分别为55.6%、72.5%和84.3%,差异有统计学意义
（P<0.05）;PEG-IFNα-2a组、IFNα组和ETV组治疗48周时HBeAg血清转换率分别为33.3%、43.1%和11.8%,差异有统计学意义
（P<0.05）,但PEG-IFNα-2a组与IFNα组患者HBeAg血清学转换率无统计学差异（P>0.05）。PEG-IFNα-2a组和ETV组在治疗
48周时是否出现HBeAg血清学转换与基线时的年龄、性别、HBeAg、HBV DNA定量和ALT水平无关;IFNα组在治疗48周时是
否出现HBeAg血清学转换与基线HBeAg水平相关（P=0.048）,与基线时的年龄、性别、HBV DNA定量和ALT水平无关。依据
基线时的年龄、HBeAg、HBV DNA定量及ALT水平,12周和24周HBeAg、HBV DNA定量、ALT水平及HBeAg较基线的下降
率、24周HBeAg较12周的下降率获得的ROC曲线,在PEG-IFNα-2a治疗组,24周HBeAg较基线的下降大于97.81%（曲线下面
积（AUC）=0.827,P=0.006）,其48周时HBeAg血清学转换敏感性和特异性分别为0.778和0.889,阳性预测值和阴性预测值分别
为0.778和0.889;若24周HBeAg较12周下降大于42.75%（AUC=0.790,P=0.016）,其48周时HBeAg血清学转换敏感性和特异
性分别为0.889 和0.722,阳性预测值和阴性预测值分别为0.615 和0.929。结论治疗HBeAg 阳性慢性乙型肝炎48 周,
PEG-IFNα-2a和IFNα较ETV有更高的HBeAg血清学转换率,ETV较PEG-IFNα-2a和IFNα有更高的HBV DNA转阴率。24周
HBeAg较基线下降大于97.81%可作为PEG-IFNα-2a组患者48周HBeAg血清学转换的最佳预测因素。
     

聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效的影响因素分析

目的:观察聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)的疗效,探讨预测疗效的相关因素。方法:确诊并进行聚乙二醇干扰素α-2a治疗(180 ug,皮下注射,每周1次)的HBeAg阳性CHB患者,分为标准疗程组(48周)和延长疗程组(>48周)。观察治疗结束及治疗结束后随访24周后2组的HBsAg和HBeAg血清学转换、HBV DNA定量低于检测下限及ALT复常情况。结果:共81例患者纳入本研究,其中标准疗程组37例,延长疗程组44例,延长疗程组疗程52~92周(中位数72周)。2组患者在性别比例、年龄、基线ALT水平、HBeAg半定量、HBV DNA定量方面差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗结束及治疗结束随访24周后,延长疗程组HBeAg血清学转换率均明显高于标准疗程组(54.5%vs 29.7%,P=0.025;76.9%vs 52.9%,P=0.008)。经二元Logistic回归分析,年龄和24周HBeAg半定量为标准疗程治疗结束24周后HBeAg血清学转换的影响因子,其构建预测模型的受试者工作特征曲线下面积为0.872,最佳截断点-1.299,灵敏度100.0%,特异度66.7%。对2组患者进行COX多因素回归分析,疗程和年龄是治疗结束24周后HBeAg血清学转换的影响因子。结论:聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBeAg阳性CHB,年轻患者及延长疗程可在治疗结束24周后获得更高的HBeAg血清学转换率。标准疗程中患者年龄和24周HBeAg半定量对治疗结束24周的HBeAg血清学转换有一定的预测价值。     

用合成肽为抗原检测戊型肝炎病毒IgG和IgM抗体

选择并合成戊型肝炎病毒（ＨＥＶ），ＯＲＦ（阅读框架）－１、ＯＲＦ－２及ＯＲＦ－３中的４个肽段。其中合成肽（ＳＰＢ３６）可用于酶联免疫吸附法检测戊型肝炎病毒的ＩｇＧ及ＩｇＭ抗体。对１３４份肝炎患者血清分别以重组抗原及ＳＰＢ３６抗原检测戊肝抗体ＩｇＧ，相对符合率为８５．１％。对比检测戊肝抗体ＩｇＭ（４４份），相对符合率为８８．６％。合成肽因结构组成明确，不需要特殊纯化，特异性较高，用于检测抗体有其优点。