百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制

目的探索关节腔内注射百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制。方法选用新西兰大白兔构建动物模型,分为百里醌组、骨关节炎组和假手术组各20只,观察并记录实验大白兔6min内步行距离。术后9周处死动物取左膝关节标本进行大体组织学Gross评分,切片行苏木精-伊红（HE）染色、番红染色后进行组织病理学Mankin评分,采用RT-PCR检测3组大白兔关节软骨中基底金属蛋白酶-13（MMP-13）、基底金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）、聚集蛋白聚糖（Aggrecan）和2型胶原（CollagenⅡ）等靶基因表达水平。结果百里醌组大白兔的行走距离明显大于骨关节炎组（P＜0.05）;而Gross评分、Mankin评分均低于骨关节炎组（均P＜0.05）。与骨关节炎组比较,百里醌组MMP-13mRNA表达水平明显下降（P＜0.05）,TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡmRNA表达水平明显上升（均P＜0.05）。结论百里醌对兔骨关节炎模型的关节软骨具有保护作用,可以减少疼痛,延缓骨关节炎的进展。百里醌可能通过下调MMP-13mRNA表达,上调TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡmRNA表达的分子机制实现保护作用。     

热休克蛋白70对骨骼肌细胞纤维类型分化的影响

目的：探讨高表达热休克蛋白70（heat shock protein 70,Hsp70）对骨骼肌细胞（C2C12细胞）纤维类型分化的影响。方法：通过构建重组pTRE2 hyg-Hsp70质粒稳定转染C2 C12细胞系,建立Hsp70高表达的C2C12细胞系。经过诱导分化形成骨骼肌纤维,观察不同时间点（0、3、7 d）C2C12细胞的分化情况,并检测骨骼肌类型标志肌球蛋白重链（ myosin heavy chain ,MHC）的表达情况。结果：与对照组相比,高表达Hsp70的C2C12细胞系分化后的3、7 d,MHCⅠmRNA及蛋白的表达明显增高（P＜0．05）,而在分化后7 d,MHCⅡb mRNA及蛋白的表达明显下降（ P＜0．05）。结论：高表达Hsp70的骨骼肌细胞C2 C12可以诱导MHCⅠ的表达,促进骨骼肌细胞向Ⅰ型肌纤维转化。     

跌打通痹膏对兔膝骨关节炎关节软骨MMP-13、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的：观察跌打通痹膏对兔膝骨性关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、Ⅱ型胶原mRNA （COL-Ⅱ mRNA）表达的影响。方法选用65只新西兰兔随机分成正常对照组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组13只。模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组采用改良Hulth造模法,正常组、假手术组不予处理,模型组、跌打通痹膏组、骨痛贴组分别用胶带、跌打通痹膏、骨痛贴膏贴敷4周,观察治疗后各组实验兔关节软骨改变情况,并检测关节软骨中 MMP-13、COL-Ⅱ mRNA的表达。结果（1）组织学关节软骨评分：跌打通痹膏组评分较模型组低（P<0.05）。（2）MMP-13mRNA检测：模型组MMP-13表达较正常对照组显著提高（P<0.01),跌打通痹膏组MMP-13 mRNA表达较模型组降低（P<0.01)。（3）COL-ⅡmRNA检测：跌打通痹膏组COL-Ⅱ表达较模型组升高（P<0.01）。结论跌打通痹膏能通过降低Ⅱ型胶原降解,抑制MMP-13 mRNA表达,从而有效保护膝骨关节炎模型兔关节软骨,延缓关节软骨退变。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨活血通络法对膝骨关节炎小鼠细胞凋亡和相关蛋白水平表达的影响

目的 观察以活血通络为治法的骨痹合剂对膝骨关节炎（KOA）模型小鼠关节软骨细胞凋亡、Bcl-2相关凋亡启动子（Bad）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶3和9（Caspase-3和Caspase-9）、核转录因子-κB（NF-κB）的影响。方法 KOA小鼠模型由Hulth法制备,造模成功后分为3组,分别予骨痹合剂、氨糖美辛溶于等体积的蒸馏水和等体积生理盐水灌胃,每日2次,持续灌胃8周。苏木素-伊红染色观察关节软骨组织病理形态变化;免疫组化检测关节软骨组织Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR技术检测关节软骨组织Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB mRNA的表达。结果 生理盐水组中软骨表面可见缺损且软骨细胞数量明显减少,软骨表面粗糙;与生理盐水组比,骨痹合剂组和氨糖美辛组软骨组织有明显改善,软骨表面细微裂隙减少,软骨细胞数目增加。生理盐水组中软骨表面Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB蛋白mRNA均高表达;与生理盐水组比,骨痹合剂组Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB 蛋白和mRNA表达下降（P<0.05或P<0.01）。结论 骨痹合剂通过下调软骨组织表面Bad、Caspase-3、Caspase-9、NF-κB 蛋白和基因表达,从而有效延缓KOA小鼠关节软骨退变病理进程。     

短刺法对兔膝骨关节炎软骨细胞Sox9、VEGF和ColⅩ表达的影响

目的观察短刺法对兔膝骨关节炎（KOA）关节软骨细胞Y染色体的性别决定区域（Sox9）、血管内皮细胞生长因子 （VEGF）和Ⅹ型胶原（ColⅩ）表达的影响,探讨短刺治疗KOA的作用机制。方法40只新西兰兔利用随机对照表随机分为正常 组（N组）10只、造模组30只,对造模组行Hulth手术法复制膝骨关节炎模型,X线评估造模情况,造模成功后随机分为对照组（M 组）、短刺组（CN组）和普通针刺组（NTN组）,术后6周开始治疗,M组不予任何处理,CN组和NTN组取左膝关节单侧足三里、 内外膝眼、梁丘和阴陵泉穴,留针20 min,1次/d,一疗程5 d,共4个疗程,分别在治疗前和治疗结束后随机选取各组新西兰兔观 察其行为学改变;实验结束后观察软骨大体形态及组织学评分;Westem-Blot法检测Sox9和ColⅩ蛋白的表达;免疫组化检测 VEGF和ColⅩ蛋白的表达;RT-PCR检测Sox9和VEGFmRNA的表达。结果M、CN、NTN组在治疗前和治疗结束后兔行为学 及软骨大体观察发生明显改变;HE染色显示CN组和NTN组软骨组织损伤减轻,有修复趋势;N组、M组、CN组和NTN组软骨 Mankin评分差异均有统计学意义（P<0.01）;CN组和NTN组较M组Sox9蛋白和mRNA表达升高、VEFG蛋白和mRNA表达降 低、ColⅩ蛋白表达降低（P<0.01）;CN组和NTN组差异有统计学意义（P<0.01）。结论短刺法能有效治疗KOA,其作用机制可 能是提高软骨细胞Sox9 的含量,降低VEGF和ColⅩ的表达,抑制肥大细胞分化,从而维持软骨细胞的正常表型,使软骨得 到修复。     

软硬食性对生长早期小鼠颞下颌关节髁突软骨中Aggrecan与ADAMTS-5表达的影响

目的 探讨软硬食刺激对聚集蛋白聚糖Aggrecan和ADAMTS-5在生长发育期小鼠颞下颌关节髁突软骨中表达的影响。方法 20只3周龄小鼠随机分成硬食组和软食组,分别给予软食和硬食4周,通过HE染色,实时PCR 检测Aggrecan与ADAMTS-5 mRNA变化以及ADAMTS-5免疫组化检测ADAMTS-5阳性软骨细胞变化。结果 软食组髁突软骨厚度要比硬食组薄;软食组Aggrecan mRNA水平比硬食组降低;ADAMTS-5 mRNA水平及ADAMTS-5阳性软骨细胞软食组要高于硬食组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 软食刺激可能促进髁突软骨ADAMTS-5的基质降解功能,而硬食刺激可能增强髁突软骨基质Aggrecan的合成作用。     

骨形态发生蛋白-2、-3对胚胎小鼠椎间盘细胞的成软骨及成骨作用

目的探索成骨作用的骨形态发生蛋白-2（BMP-2）及抑制成骨作用的骨形态发生蛋白-3（BMP-3）对胚胎小鼠椎间盘细胞
的成软骨及成骨作用,为BMPs临床治疗椎间盘相关疾病提供实验依据。方法运用腺病毒介导的BMP-2和BMP-3在胚胎小
鼠椎间盘细胞中表达,RT-PCR检测Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、蛋白多糖（ACAN）、骨钙素（OC）、骨保护素（OPG）和
骨桥蛋白（OPN）成软骨及成骨相关指标mRNA水平的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨基质的表达,碱性磷酸酶（ALP) 读数及
ALP染色检测ALP的活性。结果BMP-2和BMP-3表达对于椎间盘纤维环（AF）细胞的成软骨和成骨均没有作用。对椎间盘
髓核（NP）细胞的软骨相关指标ColⅠ、ColⅡ、ACAN mRNA的表达同样没有影响,但可促进NP细胞的成骨,其中BMP-2 和
BMP-3均可促进OC mRNA的表达升高,而仅BMP-2可促进其OPG和OPN的mRNA表达升高。甲苯胺蓝染色证明BMP-2和
BMP-3对椎间盘细胞软骨基质分泌的影响并不显著。NP细胞在BMP-2和BMP-3腺病毒感染后ALP活性明显增强,在AF细
胞中则未观察到这种变化。结论BMP-2和BMP-3均可促进胚胎小鼠NP细胞的成骨作用,但对AF细胞的成骨及成软骨作用
及对NP细胞的成软骨作用没有影响。
     

独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠关节软骨基质的影响

目的观察独活寄生汤对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨基质的影响,探讨独活寄生汤治疗KOA的作用机制。方法 2月龄清洁级雄性SD大鼠80只,喂养1周后分为正常组20只和造模组60只。造模组分别在第1、4、7天右膝关节腔注射0.2 m L 4%木瓜蛋白酶。成功造模后,造模组分为模型组、治疗组和对照组各20只。正常组、模型组按照10 m L/（kg·d-1）的剂量灌服生理盐水;治疗组按照9.3 g/（kg·d-1）的剂量灌服独活寄生汤;对照组按照0.15 g/（kg·d-1）的剂量灌服奥泰灵。2周为1个疗程,共治疗4个疗程。每2个疗程后,处死一批动物,腹主动脉采血,ELISA法测定Ⅱ型胶原C端肽（CTXⅡ）和Ⅱ型胶原C前肽（CPⅡ）;取右侧胫骨平台于4%多聚甲醛中固定、包埋,甲苯胺蓝染色观察糖胺聚糖变化;Masson染色观察胶原变化。结果与正常组比较,模型组糖胺聚糖含量减少,Ⅱ型胶原表达降低,CTXⅡ显著升高（P<0.05）,CPⅡ显著降低（P<0.05）。治疗组治疗后,糖胺聚糖含量增加,Ⅱ型胶原表达增加,CTXⅡ含量降低（P<0.05）,CPⅡ含量升高（P<0.05）。结论独活寄生汤可通过抑制软骨基质主要成分丢失,有效减轻KOA大鼠关节软骨基质破坏。     

益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎关节软骨细胞胶原和基质金属蛋白酶mRNA表达的影响

目的：探讨益气化瘀补肾方对兔膝骨关节炎（KOA）模型软骨细胞Ⅱ型前胶原基因（Col2A1）、X型胶原基因（ColX）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）mRNA表达的影响。方法：36只新西兰兔随机分为假手术组、模型组和益气化瘀补肾方组,每组12只。模型组和益气化瘀补。肾方组家兔采用改良Hulth方法复制KOA模型,假手术组仅切开膝关节表面的皮肤。益气化瘀补肾方组家兔于造模4周后连续用药1个月。观察各组软骨病理形态学变化及Col2A1、ColX和MMP-13mRNA变化。结果：模型组关节软骨结构破坏较严重,而益气化瘀补肾方组家兔关节软骨退变较模型组明显减轻。益气化瘀补。肾方组家兔膝关节软骨Col2A1mRNA表达明显高于模型组（P〈0．01）,ColX、MMP-13mRNA表达明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）,但与假手术组比较仍有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：益气化瘀补肾方可通过促进软骨合成Col2A1和抑制MMP-13及ColX胶原以延缓KOA家兔关节软骨的退变。     

晚期骨关节炎患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF的表达

目的 研究低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在晚期骨关节炎（OA）患者关节软骨细胞中的表达,初步探讨HIF-1α在OA发病机制中的作用.方法 选取18例晚期膝骨关节炎（KOA）接受全膝关节置换术患者的膝关节软骨组织标本,根据取材部位分为KOA负重区组（磨损较重的股骨内髁）和KOA相对非负重区组（磨损较轻的股骨外髁）;另选取5例因股骨近端或股骨干肿瘤而截肢患者的正常膝关节软骨组织标本作为对照.HE和SaFRanin O染色下进行Mankin整体评分比较各组关节软骨组织退变程度;免疫组织化学染色检测关节软骨细胞HIF-1α和VEGF表达,比较各组HIF-1α和VEGF阳性细胞计数.结果 KOA负重区组Mankin整体评分为（12.36±0.84）,显著高于KOA相对非负重区组的（7.23±0.32）和对照组的（0.88±0.15）（P＜0.05）.免疫组织化学染色显示,KOA负重区组关节软骨细胞HIF-1α和VEGF阳性细胞计数分别为4.81±0.62和5.67±0.32,均显著高于KOA相对非负重区组和对照组（分别为2.37±0.68、4.87±0.33和0.78±0.14、2.02±0.45）（P＜0.05）.结论 晚期OA患者关节软骨细胞中HIF-1α和VEGF蛋白表达明显增加.提示上调靶基因VEGF表达是HIF-1α在OA发病中可能的调节机制.     

慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响

目的研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimula-tion with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响。方法以体外2%马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型。实验分3组:对照组、CsA组和KN93组。对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3 d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10+40 Hz,1.5 h/d,共2 d)处理。通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性。结果在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHCⅠ的mRNA及蛋白的表达。与分化对照组MHCⅠmRNA相对表达量(0.79±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC I型纤维的表达(与对照组比P<0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC I蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02)。对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93(0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P<0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P>0.05)。CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P<0.05),但仍显著低于正常水平(P<0.05)。结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHCⅠ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据。     

α2巨球蛋白抑制聚集素酶ADAMTS-4和5的表达

目的探讨α2巨球蛋白对聚集素酶ADAMTS-4和5表达以及聚集素分解的影响。方法利用ADAMTS-4／-5和不同浓度的α2巨球蛋白（0、10、20、30、50、80、120和180nmol／L）在37℃共孵育2h后加入聚集素,在样品37℃孵育30min后,利用Western blot检测聚集素浓度变化。结果在没有α2巨球蛋白作用下,聚集素的浓度最低,但随着α2巨球蛋白浓度的不断升高,聚集素的浓度也不断升高。结论α2巨球蛋白可能通过降低ADAMTS-4和ADAMTS-5活性而抑制聚集素的分解,推测其可作为治疗骨性关节炎（OA）疾病的一种良好蛋白因子。     

TWEAK及其受体Fn14在大鼠骨关节炎(OA)关节软骨和滑膜中的表达

目的 检测肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)及其受体成纤维细胞生长因子诱导因子14 (fibroblast growth factor inducible 14,Fn14) mRNA及蛋白在大鼠骨关节炎(osteoarthritis,OA)关节软骨和滑膜中的表达情况,初步了解TWEAK及其受体Fn14在OA发病中的作用.方法 42只大鼠中随机选取18只行膝关节前交叉韧带切断(anterior cruciate ligament transection,ACLT)制作OA模型作为实验组,另外18只接受手术但不切断前交叉韧带作为假手术组,剩余6只作为正常对照组.饲养至1、2、4周时,实验组及假手术组随机各取6只处死,6只正常对照组在第4周处死,采集所有动物关节软骨及滑膜组织,用实时定量PCR及Western blot分别检测TWEAK和Fn14在mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 术后第2和第4周实验组动物关节滑膜中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表达水平显著上调,与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);术后第2周实验组动物关节软骨中TWEAK及Fn14的mRNA及蛋白表水平与假手术组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TWEAK及其受体Fn14的mRNA及蛋白表达水平在大鼠OA关节软骨及滑膜组织中的表达显著增高,它们可能是参与OA的重要细胞诱导因子.     

凝血酶敏感激素蛋白酶4/5在骨性关节炎滑膜中的表达及意义

目的 研究凝血酶敏感激素蛋白酶4/5 ( ADAMTS4/5)在骨性关节炎( OA)滑膜组织及滑膜细胞中的表达及意义. 方法 取6例正常者滑膜组织和6 例OA患者滑膜组织,Western blot法检测标本中ADAMTS4/5 的表达,离体培养正常者滑膜细胞. 白介素-1β( IL-1β)刺激正常滑膜细胞,测定滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达量;IL-1RA( IL-1β阻滞剂)抑制IL-1β后,测定滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达量.结果 ADAMTS4/5 在OA患者滑膜组织中表达较正常者滑膜组织均显著增加;IL-1β刺激滑膜细胞后,ADAMTS4/5升高,IL-1RA可明显降低IL-1β诱导的滑膜细胞中ADAMTS4/5的表达. 结论 IL-1β可以按照剂量依赖方式正向调节ADAMTS4/5的表达;ADAMTS4/5 和IL-1β在OA病变机制中发挥重要的作用.     

骨关节炎患者关节软骨及滑膜中MMP-9、IL-6的表达

目的探讨骨关节炎中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、白介素6(IL-6)mRNA和蛋白的表达。方法采用免疫组织化学技术检测60例骨关节炎病例(OA组)及20例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6蛋白的表达水平;采用原位分子杂交技术检测30例OA及10例正常对照关节软骨及滑膜MMP-9、IL-6 mRNA的表达水平。结果 MMP-9 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的积分光密度(IOD)值均高于正常对照组[(8.38±2.29)vs(3.52±1.36),P<0.01;(9.18±3.58)vs(3.83±1.48),P<0.01],OA中二者的表达正相关性(r=0.924,P<0.01);IL-6 mRNA和蛋白在OA组阳性表达的IOD值均高于正常对照组[(8.74±3.62)vs(5.91±1.53),P<0.01;(8.96±3.57)vs(6.87±1.43),P<0.01],OA中二者的表达亦正相关(r=0.917,P<0.01);MMP-9 mRNA、IL-6 mRNA及相应蛋白在OA中的表达均正相关(原位杂交r=0.426,P<0.05;免疫组化r=0.444,P<0.01)。结论 MMP-9、IL-6在OA关节软骨与滑膜中呈高表达,二者对OA的发生发展可能起促进作用。     

强力霉素与透明质酸钠对兔骨关节炎的影响及其作用机制的研究

[目的]研究口服强力霉素(doxycycline,DOX)和关节腔内注射透明质酸钠(hyaluronic acid,HA)对兔骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨退变的影响及其作用机制。[方法]成年新西兰白兔25只随机分为DOX组、HA组、DOX+HA组、模型组和正常组,每组5只。除正常组外,所有动物均用切断双侧膝关节前、后交叉韧带的方法建立OA模型。术后第9周起,DOX组予DOX 40 mg/(kg.d)灌胃治疗,HA组予HA每周5 mg膝关节腔内注射,DOX+HA组予DOX 40 mg/(kg.d)灌胃+HA每周5 mg膝关节腔内注射,模型组和正常组不予任何治疗。第17周处死各组动物,对各组膝关节进行大体情况观察,行Pelletier JP评分,并用ELISA法检测关节负重区软骨细胞中β-连环蛋白(β-catenin)表达情况。[结果]模型组关节退变较正常组严重,β-连环蛋白的表达水平较正常组明显升高(P<0.01)。DOX组、HA组和DOX+HA组三组关节退变较模型组减轻,β-连环蛋白的表达水平也较其明显降低(P<0.01);DOX+HA组β-连环蛋白表达水平低于DOX组和HA组(P<0.01),但后两组间β-连环蛋白表达水平差异无显著性意义(P>0.05)。[结论]口服DOX和关节腔内注射HA均可通过抑制β-连环蛋白的生成来阻止OA病变进展,但两药联合使用效果更好。     

聚蛋白多糖酶和基质金属蛋白酶在不同期骨关节炎患者血清中的表达及其意义

目的  比较解整链蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)4、5和基质金属蛋白酶 (MMP) 1、3在骨关节炎（OA）患者早期和中晚期血清中的表达,并探讨其在OA患者不同时期的作用和早期诊断意义。方法  70例单关节OA患者按照MRI Recht分级标准分为早期OA组（44例）和中晚期OA组（26例）,同时设健康对照组（30例）。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-1和MMP-3在三组血清中的表达,以ELISA光密度（OD）值代表所测各项在血清中的表达水平。结果  早期OA组的ADAMTS-4表达水平高于中晚期OA组;ADAMTS-5、MMP-1和MMP-3在早期OA组的表达水平均低于中晚期OA组(P均<0.05)。而正常对照组血清中仅有少量聚蛋白多糖酶和MMP-1的表达。结论  聚蛋白多糖酶在OA早期和中晚期血清中均有高表达,MMP在OA中晚期血清中有高表达, ADAMTS-4有早期诊断意义。     

骨关节炎软骨细胞caveolin-1表达增高机制的探讨

目的 了解骨关节炎患者关节软骨内caveolin-1的表达情况,以及软骨降解因子自细胞介素(IL)-1β是否促进软骨细胞表达caveolin-1.方法 对8例骨关节炎患者膝关节软骨内caveolin-1基因表达的定量分析采用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),caveolin-1蛋白的表达采用免疫组化分析.选用12周龄的雄性SD大鼠20只,通过切断膝前交叉韧带和内侧副韧带制备骨关节炎模型,术后动态观察关节软骨的病理学变化和caveolin-1的表达情况.离体培养的骨关节炎软骨细胞内caveolin-1基因表达量分别采用RT-PCR和实时RT-PCR分析,caveolin-1蛋白表达量采用Western印迹分析.结果 与关节软骨轻微损害部位相比,8例骨关节炎患者中有6例患者的关节软骨严重损害部位内caveolin-1 mRNA表达增高约2倍,另外2例无明显差异.免疫组化分析显示,上述6例患者关节软骨严重损害部位内caveolin-1蛋白的表达也增高.随着术后时间延长,大鼠骨关节炎关节的软骨逐渐出现损害,且caveolin-1的表达也持续增高.IL-1β(10 ng/ml)可以上调培养的骨关节炎软骨细胞内caveolin-1基因和蛋白表达,并可持续至少48 h.结论 骨关节炎软骨损害程度与caveolin-1的表达水平具有相关性,IL-1β可以刺激软骨细胞表达caveolin-1.提示IL-1β可能通过诱导caveolin-1表达而促进骨关节炎进展.     

当归对大鼠肺纤维化间质成纤维细胞的干预作用

目的:观察浓当归对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化程度的影响及对肺间质成纤维细胞的影响。方法:45只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和当归组,经气管内灌注博来霉素后,当归组大鼠腹腔内注射浓当归注射液10 ml/(kg.d),空白组、模型组给予等量生理盐水处理,分别于第7,14和28天各处死5只大鼠。免疫组化法分析各组α-平滑肌动蛋白(-αSMA)、胶原蛋白Ⅰ(COL-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(COL-Ⅲ)表达水平,用原位杂交的方法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA水平。结果:当归组大鼠肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ沉积较模型组明显降低(P<0.05);当归组间质中-αSMA阳性表达水平较模型组明显减低(P<0.05),当归组大鼠肺组织CTGF mRNA水平较模型组降低(P<0.05)。结论:当归可能通过降低纤维化肺组织中CTGF mRNA水平,间接抑制成纤维细胞增殖、分化作用,减轻纤维化程度。