CD23单克隆抗体的研制及其鉴定

目的：制备高度特异性和高纯度的抗ＣＤ２３单克隆抗体（ＣＤ２３ＭｃＡｂ）。方法：用ＥＢＶ感染的人Ｂ淋巴细胞（ＲＰＭＩ－８８６６）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,采用杂交瘤技术,细胞ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ等方法制备、纯化和鉴定了ＣＤ２３ＭｃＡｂ。结果：筛选出了强分泌抗Ｂ细胞膜ＣＤ２３分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（２Ｂ６）。结论：该单抗对Ｍｒ４５×１０３的ＣＤ２３分子反应具有高度特异性。     

抗肺炎衣原体种特异性单抗制备及初步鉴定

以纯化的肺炎衣原体ＡＴＣＣＶＲ１３１０原体兔疫８周龄雄性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，并于第１４天加强免疫，第２４天将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合。杂交瘤细胞进行细胞与克隆的直接选择，在淘汰与沙眼衣原体Ｌ１、Ｌ２、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ鹦鹉热衣原体ＥＡＥ以及未感染的ＢＧＭＫ细胞有交叉反应的克隆后，最终获得２株分泌抗肺炎衣原体种特异性单克隆抗体（ＭＡｂ９）杂交瘤（Ｐ１７Ｃ２和Ｐ３３Ｃ），其免疫球蛋白类型均为ＩｇＧ２ａ。Ｗｅｓｔｅｍ印迹发现两株ＭＡｂｓ均与三个种的衣原体主要外膜蛋白反应，但ｍｉｃｒｏ－ＩＦ显示它们系肺炎衣原体种特异性单抗其腹水ＭＡｂｓ滴度＞１：２５６００。     

一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制

目的 研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法 采用重组人促红细胞生存素（ｒｈＥＰＯ）为抗原,常规免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,经细胞融合、ＥＬＩＳＡ筛选、有妻稀释亚克隆获得抗人ＥＰＯ杂交瘤,以免疫印迹和快速Ｉｇ亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果 经筛选获得１株稳定分泌的抗ｒｈＥＰＯ单抗的杂交瘤细胞株（１Ｄ１）。亚型鉴定为ＩｇＧ２ｂ,轻链为ｋ链,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析证实该单抗为ｒｈＥＰＯ特异性识别。结论 成功获得１株可分泌特异性识别ｒｈＥＰＯ的单克隆抗体的杂交瘤。     

抗弓形虫主要表膜P30抗原单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗弓形虫主要表膜Ｐ３０抗原单克隆抗体（Ｍｃ－Ａｂ）半进行鉴定,为弓形虫病的诊断、抗原的提纯及亚单位疫苗的研制等提供可靠依据。方法 用ＲＨ株弓形虫速殖子膜抗原为免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,筛选出能够稳定分泌高滴度抗Ｐ３０抗原ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株,并测定Ｍｃ－Ａｂ免疫球蛋白亚类和单抗效价,用ＩＦＡＴ进行单抗识别的抗原定们,并通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅ     

一组抗HCV核壳蛋白的单克隆抗体的制备及鉴定

目的 获取ＨＣＶ核壳蛋白抗原结构新的信息。方法 以基因重组的ＨＣＶ核壳蛋白区抗原免疫Ｂａｉｂ／ｃ小鼠,利用小鼠杂交瘤技术。结果 建立了４２株分泌抗ＨＣＶ区单克隆抗体（单抗）的杂交瘤细胞株。其抗体类别均为ＩｇＧ。经免疫印迹提示本组单抗与ＨＣＶ核壳蛋白有反应。结论 ＩＦＡ（免疫荧光）证实本组单抗能识别天然ＨＣＶ核壳蛋白抗原决定簇。     

抗小鼠Ⅱ—2R单克隆抗体的制备及初步应用

目的：制备抗小鼠白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体。方法：利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株，并用细胞ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结果：得到３株分泌抗小鼠Ⅱ－２ＲＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，其中８Ｃ８对ＣｏｎＡ刺激淋转有抑制作用，且ｓＩＬ－２Ｒ可抑制８Ｃ８与ＩＬ－２Ｒα一细胞的结合。结论：８Ｃ８是抗小鼠ＩＬ－２Ｒ抗体。     

一株抗人胆管癌相关抗原杂交瘤细胞株的建立及鉴定

目的 建立能分泌与人胆管癌组织特异结合的高效价抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 用２的人胆管癌细胞系Ｓｋ－ＣＨＡ－１免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后，获取免疫小鼠的脾细胞。与小鼠骨髓瘤ＳＰ２／０融合，ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法筛选细胞晤后生成的杂交瘤细胞株。结果 ＥＬＩＳＡ方法及免疫荧光染色法共筛选出５株能持续稳定分泌抗人胆管癌相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其中２Ｆ４Ｅ８杂交瘤细胞株     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备和鉴定

以自由合成的黄曲霉毒素Ｂ１－人血清白蛋白（ＡＦＴＢ１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ１单克隆抗体（ＡＦＴＢ１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为１Ｂ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱产生含特异性抗体的腹水。     

抗hAR—N段McAb的制备及其在免疫组化检测中的应用

目的：自行研制抗人雄激素受体（ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＡＲ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,以期达到可替代国外ＡＲ多克隆抗体。方法：采用人雄激素受体合成肽（ｈＡＲ－Ｎ）交联钥孔戚血蓝素（ＫＬＨ）为抗原,免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,经用Ｄｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ杂交瘤技术成功地获得４株能稳定分泌抗ｈＡＲ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株５５,１４１,２０７,２５７。结果：对４５例前列腺癌组织石蜡切     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体制备及其对病毒抗原特性的…

用肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）免疫Ｌｏｕ／ｃ大鼠脾细胞与ＩＲ９８３Ｆ骨髓瘤细胞融合，获得１１株能分泌特异性体的杂交瘤细胞系。用放射免疫沉淀、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ及免疫酶技术等对这一组大鼠单克隆抗体（单抗）进行了特性鉴定和病毒抗原性分析。发现１１株单抗中，９株为抗核壳蛋白（ＮＰ）特异性，２株为抗Ｇ２糖蛋白。大多数抗ＮＰ单抗无中和活性及血凝抑制（ＨＩ）活性，但有２株例外，具有一定程度的     

凋亡相关蛋白TFAR19在TF-1细胞凋亡中出现细胞核转位

目的：探讨凋亡相关分子TFAR19 在TF-1细胞凋亡过程中的表达及定位。方法：以TFAR19的单克隆抗体为工具,采用荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜、流式细胞仪等研究手段,观察细胞凋亡过程中TFAR19分子的表达水平和细胞内定位,分析其与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)以及细胞核DNA片段化的关系。结果：TFAR19蛋白在撤除GM-CSF的TF-1细胞中表达水平显著增高,伴有明显的核转位现象,且早于PS外翻和细胞DNA片段化。结论：TFAR19蛋白的核转位是细胞凋亡更早期发生的事件之一, 这一新发现为进一步探讨TFAR19蛋白的生物学效应,以及对细胞凋亡的多方位研究提供了新的线索和思路。     

重组人3型腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗人3型腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体并对单抗进行鉴定.方法 用纯化的重组六邻体蛋白免疫BALB/c小鼠.取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经ELISA间接法筛选和克隆化培养,获得4株分泌抗腺病毒六邻体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得单抗.使用ELISA、Western blot和中和实验等方法鉴定单抗的敏感性、特异性以及中和活性.结果 ELISA和免疫印迹结果表明这4株单抗与腺病毒六邻体蛋白可以特异性结合.而且,4C6株单抗具有中和活性.结论 获得了4个单抗为腺病毒六邻体蛋白的单克隆抗体,可用于3型腺病毒的早期诊断和药物治疗的研究.     

C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备

目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a（＋）中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a（＋）-Dectin-2和pET28a（＋）-Dectin-3,并在E.coli BL21（DE3）中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示：单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。     

鼠抗SARS病毒X4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备SARS病毒X4蛋白的单克隆抗体,探讨X4蛋白的结构和功能,以及临床应用的价值.方法:以重组SARS病毒X4蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗SARS病毒X4蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法鉴定其特性.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗X4蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为8A5,8H6和4A2.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG2a.通过ELISA, Western blot等方法的鉴定,抗X4蛋白的单克隆抗体能与X4蛋白发生特异性反应.免疫荧光实验的结果表明,X4蛋白的单克隆抗体能与SARS-病毒感染的Vero E6 细胞发生特异性结合.结论:获得了特异性识别SARS病毒X4蛋白的单克隆抗体,为SARS病毒X4蛋白的生物学功能研究奠定了基础.     

日本血吸虫重组蛋白SjGST的表达纯化及单克隆抗体的制备和特性鉴定

目的：获取高纯度的日本血吸虫重组GST蛋白（rSjGST）,并制备单克隆抗体。方法：纯化rSjGST后,以其作为抗原,免疫Balb/c雌鼠,并用杂交瘤技术制备抗rSjGST的单克隆抗体,以ELISA方法测定抗体的效价,以蛋白质免疫印迹法测定抗体的特异性。结果：纯化出大量的高纯度rSjGST,并且筛选出能够稳定分泌抗rSjGST单抗的杂交瘤细胞株3C12。用试剂盒检测出单抗的亚型为IgG1。结论：依靠大肠埃希菌表达系统,高效表达出rSjGST,成功制备单克隆抗体,为血吸虫病免疫诊断提供了研究基础。     

Establishment of anti-thyrotropin monoclonal antibody hybridoma cell lines with extract of human pituitary gland

Theproductionofanti--humanthyroid--stimulatinghormone(anti--hTSH)monoclonalantibody(McAb)isofgreatimportanceinbothmedicalresearchandclinicaldiagnosis.Howeveritwasnoeasyjobproducinganti--hTSHMcAbswithhighspecificityasseveralglycoproteinhormones,includinghumanfollicle--stimulatinghormone(hFSH),humanluteinizinghormone(hLH),humanchorionicgonadotropin(hCG)andhTSH,containthesameasubunit.Inspiteofthis,Josephine['],RidgwayetalLZjhaveobtainedMcAbwithhighspecificityandaffinitybyusingpurehTSHa…     

人降钙素原的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的: 原核表达人降钙素原（procalcitonin,PCT）重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法: 将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）融合,筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次。将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体,经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化。结果： SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量约14 kDa处有一明显条带,与目的蛋白大小相符。蛋白质印迹法和胶体金法证明该可溶性蛋白为PCT。采用细胞融合技术成功筛选出7株阳性杂交瘤细胞,将其命名为B3,C4,C7,E9,F8,F10,G2。选B3和C4细胞株通过体内诱生法制备单克隆抗体,经纯化后纯度可达95%以上。间接ELISA法检测B3、C4抗体效价均可达10⁷,亲和常数分别为5.06×10⁸,7.3×10⁸。结论： 获得高纯度的PCT重组蛋白及其单克隆抗体,为PCT检测试剂盒的进一步研究提供了支持。     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。     

鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)蛋白的单克隆抗体,探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,混合后免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为MC9和2C9,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域(CMTM7_163-175),可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry, ICC).2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域(CMTM7_19-44),该单抗只能用于Western blot分析.初步的功能研究提示,CMTM7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体,为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.     

特异性SARS-CoV N蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位初步分析

目的：用分段表达纯化的SARS冠状病毒（SARS-CoV）的核衣壳蛋白（nucleocapsid N蛋白）制备针对该蛋白不同区域抗原表位的高特异性单克隆抗体（McAb），初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。方法：用分段表达纯化的SARS～CoV的N蛋白（分别记为N1蛋白、N2蛋白）分别免疫Balb／c小鼠制备McAb，通过检测其亚类、效价及相对亲和力鉴定McAb的生物学特性，以Western blot鉴定单克隆抗体特异性，并对McAb结合表位进行初步分析。结果：筛选出7株抗SARS-CoV N1蛋白及2株抗SARS-CovN2蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定6株为IgG1，2株为IgG2b，1株为IgG3，腹水效价10^5以上；亲和常数达10^8以上。Western blot证实所获的单克隆抗体可与SARS-CoVN蛋白发生特异性反应。ELISA相加实验结果显示2株N1 McAb识别相同的抗原表位，其余均识别不同的抗原表位。结论：通过分段表达纯化的SARS-CoVN蛋白而制备的特异性针对SARS-CoV N蛋白不同区域抗原表位的单克隆抗体中，N1单抗识别N蛋白N端（1-549bp），N2单抗识别N蛋白C端（496～1269bp），可初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。