左金丸醇提物抑制幽门螺旋杆菌感染人胃癌细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的研究左金丸醇提物对幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞生长及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以不同浓度(7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500μg/mL)的左金丸醇提物分别作用于幽门螺旋杆菌感染的人胃癌MKN45细胞,24、48、72h后用Western blot法检测不同浓度的左金丸醇提物作用于幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞时凋亡相关蛋白Bax、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的表达情况。结果幽门螺旋杆菌感染MKN45细胞组、左金丸醇提物低剂量(40μg/mL)组、左金丸醇提物高剂量(180μ/mL)组凋亡细胞百分比分别为:(0.28±0.105)%、(3.27±0.702)%、(7.7±0.721)%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率呈剂量依赖性;Western blot检测结果显示,左金丸醇提物低、高剂量作用幽门螺旋杆菌感染MKN45细胞24h后,PARP蛋白(89×103)、Bax蛋白表达明显增强,凋亡率上升,并呈现剂量依赖性。结论左金丸醇提物能抑制幽门螺旋杆菌感染人胃癌MKN45细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。调控凋亡相关基因Bax、PARP的表达可能是其诱导幽门螺旋杆菌感染的人胃癌MKN45细胞凋亡的分子机制之一。     

不同温郁金提取物抑制胃癌细胞SGC-7901增殖和诱导凋亡的实验研究

目的研究不同温郁金提取物对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,及其抑瘤作用与凋亡之间的关系.方法制备温郁金水提物、石油醚提取物(醚提物)和乙醇提取物(醇提物),采用MTT法,测定3种提取物作用下的细胞增殖率.应用HE染色、电镜及流式细胞仪分析技术,观察温郁金作用下肿瘤细胞凋亡的形态学改变及凋亡率.结果温郁金水提物、醚提物和醇提物对胃癌细胞的生长有抑制作用,体外最大抑制率分别达到34.4%、49.4%和73.1%.细胞形态学检查见典型的凋亡改变.流式细胞仪测得典型的凋亡峰.结论温郁金水提物、醚提物和醇提物对人胃癌SGC-7901细胞生长有抑制作用,且醚提物和醇提物的抑瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关.     

叶下珠复方Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡作用

目的探讨叶下珠复方Ⅱ号（CPUⅡ）对体外培养的人肝癌细胞Hep劬增殖和凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）,比较不同浓度的叶下珠复方在不同作用时间对体外培养的HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞术（FCM）结合AnnexinV—FITC,PI荧光双染法观察CPUⅡ诱导24h后人肝癌Hep晚细胞的凋亡率。结果MTT结果显示,人肝癌HepG2细胞经叶下珠复方Ⅱ号处理一定时间后,增殖比率明显下降,2．60mg／ml以上的叶下珠Ⅱ号对人肝癌HepG2细胞株的增殖有抑制作用（P〈0．01;48hP〈0．05）,且呈一定的量效关系;FCM结果显示,随着叶下珠复方Ⅱ号浓度的增加（2．6、26．0、130．0mg／ml）,细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论叶下珠复方Ⅱ号能够抑制人肝癌HepG2细胞生长和增殖,诱导人肝癌Hep岛细胞凋亡,呈明显的量效关系。     

PDCD5和TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨PDCD5及TRAIL对胃癌细胞株MKN28体外诱导凋亡的作用及机制。方法培养,MTT法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期．AO／EB染色进行观察凋亡细胞？结果TRAIL可明显抑制MKN28细胞增殖,并可诱导凋亡。PDCD5对MKN28细胞抑制增殖、诱导凋亡作用不明显。PDCD5、TRAIL联合应用对MKN28细胞有显著的抑制增殖、诱导凋亡作用。两者具有协同作用。结论TRAIL对MKN28细胞株有一定程度的凋亡诱导作用。PDCD5对MKN28细胞的凋亡作用不明显。TRAIL联合PDCD5可以高效诱导MKN28细胞凋亡。     

迷迭香醇提取物对肺腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的 研究迷迭香醇提取物 (RE) 对人肺腺癌细胞株 (AGZY) 增殖的影响及其机制.方法 采用改良MTT法、集落形成试验检测 RE 对 AGZY 生长增殖的影响;采用流式细胞术检测 RE 对 AGZY 细胞增殖周期的影响.结果 RE 为12.5、25、50 μg/mL和100μg/mL浓度作用5 d对AGZY的抑制率分别为47%、35%、86%和98%,半数抑制浓度IC50为17.8μg/mL;RE为25μg/mL作用AGZY 15 d,细胞集落形成明显减少,与溶媒对照比较差异有高度显著性;RE在50 μg/mL浓度作用细胞5 d,流式细胞仪检测到凋亡峰,100μg/mL有明显的凋亡峰出现.结论 RE体外明显抑制人肺腺癌细胞株(AGZY)的生长增殖,其财细胞增殖周期的阻滞可能是其抑制细胞增殖的机制之一.     

八宝丹抑制胃癌细胞增殖与诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨八宝丹（BBD）对人胃癌细胞增殖与凋亡的影响。方法体外培养胃癌细胞AGS和MGC-803,采用不同浓度的BBD（0、0.25、0.5、0.75、1 mg/m L）进行干预,MTT法检测细胞活力,计算BBD对细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞生长密度;台盼蓝染色法检测细胞数量;细胞集落形成实验检测细胞集落形成能力;Hoechst染色检测细胞凋亡。结果 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的细胞活力,抑制细胞增殖,使细胞密度下降,减少细胞数量,抑制细胞集落形成能力,诱导细胞凋亡。结论 BBD可显著抑制胃癌细胞AGS和MGC-803的增殖及诱导细胞凋亡。     

大黄素联合5-氟尿嘧啶对人胃癌细胞MKN45增殖抑制及诱导凋亡

目的研究大黄素联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人胃癌细胞MKN45增殖及诱导凋亡的作用。方法不同浓度大黄素单用或与5-Fu联合作用于人胃癌MKN45细胞,甲氮唑蓝法观察对MKN45的生长抑制作用;荧光染色法、流式细胞仪分析MKN45的凋亡。结果10、20μg／mL大黄素分别与5-Fu联用对人胃癌MKN45细胞有明显的生长抑制作用,其抑制作用呈时间及浓度依赖性（P〈0．05）;流式细胞仪分析大黄素联合5-Fu能浓度依赖性诱导MKN45细胞凋亡和G2／M期阻滞,大黄素与5-Fu联用细胞凋亡率与5-Fu单用组相比差异有统计学意义（P〈0．051;吖啶橙染色观察联合作用组细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光、新月型改变、核固缩或片段化及凋亡小体的形成。结论大黄素联合5-Fu可显著增强诱导人胃癌MKN45细胞凋亡的作用。     

白英水提物对胃癌细胞凋亡与Notch1信号通路的影响

目的：观察白英水提物对胃癌SGC-7901细胞凋亡及Notch1基因表达的影响。方法：常规法制备白英水提物,实验分正常对照组、白英处理组。白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5、25mg/mL和50mg/mL。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,半定量RT-PCR和免疫化学分析细胞中Notch1、caspase-9基因表达。结果：与正常对照组比较,白英处理组SGC-7901细胞增殖有显著性下降,细胞凋亡显著性增多（P〈0.05）,Notch1基因表达呈显著性的下降（P〈0.05）、caspase-9基因表达有明显的上调（P〈0.05）,并随白英浓度增加而加强。结论：白英水提物能下调人胃癌SGC-7901细胞中Notch1信号蛋白表达和促进细胞凋亡,这可能是其发挥抗癌作用的重要机制之一。     

安博立酸对人胃癌细胞系SGC-7901增殖抑制作用研究

目的:观察安博立酸(Ambrolic acid,AmbA)对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响,初步探讨AmbA对胃癌的体外抗肿瘤活性.方法:将AmbA作用于SGC-7901细胞株,MTT法测定AmbA对SGC-7901细胞增殖的抑制率;光学显微镜观察AmbA作用引起的细胞形态变化;流式细胞仪检测AmbA作用后细胞凋亡情况及进行细胞周期分析.结果:MTT实验结果表明,AmbA对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间及浓度依赖性;流式细胞仪检测分析表明.AmbA可使细胞阻滞于S期,其作用呈剂量依赖性.结论:AmbA对SGC-7901人胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用的主要途径可能是使细胞阻滞于S期并诱导细胞凋亡.     

黄荆子乙酸乙酯提取物对HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制人急性髓性白血病HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。方法:体外培养HL-60细胞和人外周血单核细胞(PBMC),MTT法测定细胞增殖;软琼脂培养集落形成法检测细胞生长;PI染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果:EVn-50对HL-60细胞增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性;而对PBMC的增殖活性影响小。EVn-50对HL-60细胞集落形成有抑制效应,呈浓度依赖性。EVn-50有效诱导HL-60细胞凋亡。结论:EVn-50具有抑制HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。     

四川叶下珠与广西叶下珠的质量比较研究

目的：收集四川产和广西产的叶下珠,分析比较2个不同产地叶下珠药材的质量,以便为叶下珠药材的选取提供参考。方法：采用水分测定法、灰分测定法、丙酮溶性浸出物测定法、薄层色谱法及HPLC法,综合分析评价四川和广西两个不同产地叶下珠药材质量间的差异。结果：四川产的叶下珠水分、浸出物、总灰分和酸不溶性灰分的含量分别为11.50%-12.82%、22.05%-22.22%、9.09%-9.58%和1.93%-2.15%;而广西产的叶下珠水分、浸出物、总灰分和酸不溶性灰分的含量分别为10.86%-12.19%、16.41%-17.27%、10.86%-11.03%和2.91%-3.03%,丙酮溶性浸出物含量较四川叶下珠的低,而灰分含量较四川叶下珠的高;薄层鉴别专属性强,重现性好;采用HPLC测定没食子酸的含量,在0.027-0.178μg范围内线性关系良好,r=0.9991,平均回收率98.99%,RSD=0.81%。结论：四川产和广西产的叶下珠药材质量有所差异。     

叶下珠对人肝癌细胞影响的研究

为研究叶下珠对人肝癌细胞SMMC7721的影响,采用噻唑蓝(MTT)还原法和氚标胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法观察叶下珠提取物对人肝癌细胞SMMC7721细胞活性及DNA合成的影响。结果发现,经叶下珠提取物处理后,SMMC7721活力明显减弱,~3H-TdR掺入率明显降低,DNA合成抑制率与药物剂量呈线性关系。结论:叶下珠具有杀伤人肝癌细胞SMMC7721和抑制其增殖作用。     

复方虎杖方体内外抗乙肝病毒的活性评价

  目的   研究复方虎杖方体内外抗乙肝病毒作用。   方法   体外实验采用CCK-8染色法检测复方虎杖方水提物、醇提物对HepG2.2.15细胞株的抗增殖活性,采用化学发光微粒子免疫检测法测定HBsAg、HBeAg含量,采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量;体内实验采用血清斑点杂交法(Dot blot)测定给药5、10 d后及停药3 d后鸭血清中的DHBV-DNA含量。   结果   体外结果显示,复方虎杖方水提物、醇提物能有效抑制HepG2.2.15细胞增殖活性,IC₅₀分别为51.28 mg/mL和46.78 mg/mL;复方虎杖方能有效抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg,具有明显的剂量依赖关系,醇提物对HBeAg分泌的抑制作用明显强于水提物;复方虎杖方醇提物能有效抑制HepG2.2.15细胞HBV-DNA复制,但水提物效果不明显。体内结果显示,复方虎杖方能有效抑制鸭血清中DHBV-DNA复制,且能显著抑制停药后的病毒反跳。   结论   复方虎杖方体内和体外均有一定的抗乙肝病毒作用,研究为该方的开发应用奠定了基础。      

叶下珠复方Ⅱ号对HSC—T6增殖及TIMP—lmRNA表达的影响

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对肝星状细胞（HSC～T6）增殖及基质金属蛋白酶抑制因子mRNA（TIMP—lmRNA）表达的影响，探讨叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化效果和作用机理。方法体外培养HSC—T6，随机分为对照组和叶下珠复方Ⅱ号5．00、2．50和1．25mg／ml组。加药后用MTT法检测各组HSC—T6增殖变化，且采用RT—PCR方法测定各组HSC—T6的TIMP—lmRNA表达。结果叶下珠复方Ⅱ号各剂量组药物对HSC—T6的增殖有明显的抑制作用，且TIMP—lmRNA表达都低于正常对照组。结论叶下珠复方Ⅱ号能押制HSC—T6增殖和TIMP—lmRNA表达，从而减弱TIMP—l对基质金属蛋白酶的抑制作用，促进ECM的降解，这可能是叶下珠复方Ⅱ号抗肝纤维化的作用机制之一。     

叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用

[目的]研究叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用。[方法]观察药物对三种大小鼠动物肝炎模型，体外抗谷丙转氨酶及对肝药酶的影响。[结果]表明叶下珠醇提物能明显对抗四氯化碳(CCL4)、硫代乙酰胺(TAA)和D-氨基半乳糖(D-GN)引起的小鼠或大鼠谷丙转氨酶(ALT)升高；对正常小鼠的ALT水平，无论体内或体外试验均无影响；能显缩短戊巴比妥钠引起的小鼠睡眠时间。[结论]叶下珠醇提物对肝损伤的保护作用机理是多方面的；叶下珠醇提物有诱导肝药酶活性的能力，这可能是叶下珠保肝作用的重要原因。     

Anti-cancer effects of Phyllanthus urinaria and relevant mechanisms

Phyllanthus urinaria (P. urinaria), a widely used herbal medicine, has been reported to possess various biological activities. This report aimed to characterize the whole P. urinaria plant, present the anticancer effects of P. urinaria both in vivo and in vitro, and explore relevant mechanisms. The water extract of P. urinaria not only significantly reduces the cell viability of various cancer cell lines from different origins but also suppresses tumor development in C57BL/6J mice after implantation of Lewis lung carcinoma (LCC) cells. The anticancer activity of P. urinaria extract is mainly due to induced apoptosis of cancer cells as demonstrated by DNA fragmentation and increased caspase-3 activity through both intrinsic and extrinsic pathways. The decrease in viability with P. urinaria treatment might be partially associated with down-regulation of telomerase activation and induction of the apoptotic process. In addition, P. urinaria also exhibits anti-angiogenic activity that is mediated, at least in part, by suppression of matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) secretion and inhibition of MMP-2 activity through zinc chelation.     

miR-149-5P调控β-catenin/MMP2/E-cadherin介导胃癌BGC-823和MKN28的细胞迁移

目的 观察miR-149-5P对胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移的影响。方法 采用qRT-PCR方法检测miR-149-5P在胃粘膜上皮细胞(GES-1)与BGC-823和MKN28细胞中的表达。分别转染miR-149-5P mimics、NC、inhibitor和inhibitor-NC,采用qRT-PCR方法验证转染效率,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达或抑制miR-149-5P后胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移能力。采用Western Blot检测转染miR-149-5P mimics或inhibitor后BGC-823和MKN28细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白表达水平。结果 qRT-PCR实验结果显示:与GES-1相比,miR-149-5P在BGC-823和MKN28细胞中表达显著降低;转染mimics后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平显著升高,而转染inhibitor后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平下降。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示:转染mimics后可以抑制BGC-823和MKN28细胞迁移,而转染inhibitor后,可以促进BGC-823细胞迁移,MKN28细胞并无明显变化。Western Blot实验结果显示:在BGC-823和MKN28细胞中过表达miR-149-5P可上调E-cadherin的蛋白表达,抑制β-catenin和MMP2蛋白表达,而抑制miR-149-5P的表达可下调E-cadherin的蛋白表达,促进BGC-823细胞中β-catenin和MMP2蛋白表达,但转染inhibitor后MKN28细胞中E-cadherin、β-catenin和MMP2蛋白表达水平并无明显变化。结论 miR-149-5P可以抑制胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移。     

高侵袭力人胃癌细胞亚系MKN-28s的建立

目的以穿透人工基底膜的能力大小为依据筛选具有体外高侵袭能力的胃癌细胞亚系。方法用体外培养法收集扩增能侵袭穿透人工基底膜的胃癌细胞亚系;比较母亚两系的侵袭能力;流式细胞术检测母亚两系细胞周期;免疫组织化学SP法观察母亚两系细胞Flt-4蛋白表达情况。结果从母系MKN-28中成功筛选出高侵袭力胃癌细胞亚系MKN-28S;显微镜下细胞计数示亚系侵袭至膜背面的数量较母系明显增多（P〈0.05）,细胞侵袭力增强;亚系中Flt-4蛋白表达同母系相比显著增高;亚系增殖指数（PI）高于母系。结论MKN-28S细胞较MKN-28细胞具有更强体外侵袭力和增殖能力。