进展期胃癌患者O~6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶蛋白表达与预后的关系

目的 O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methylt ransferase,MGMT)是修复烷化剂对DNA损伤的关键酶,同时也是烷化剂类抗肿瘤药物耐药的主要因素之一。p53蛋白是p53抑癌基因的蛋白产物,其基因突变与肿瘤的发生、发展密切相关。文中探讨了MGMT蛋白在进展期胃癌患者肿瘤组织中的表达与临床病理参数及预后的关系,以及MGMT蛋白与p53蛋白在进展期胃癌组织中表达的相关性及对预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测158例进展期胃癌切除标本中MGMT的表达水平,并分析其与胃癌临床病理特征及联合分析MGMT蛋白表达和临床检测指标p53蛋白表达与患者预后的关系。结果进展期胃癌组织中MGMT蛋白的阳性率为76.58%(121/158)。MGMT蛋白表达情况与患者的肿瘤部位及大小、肿瘤分期、分化程度、神经是否侵犯、脉管是否存在癌栓均无相关性(P>0.05)。Spearman相关系数分析显示MGMT与p53的表达呈负相关:r=-0.2534,P=0.0023。COX回归多因素分析显示MGMT(相对危险度:1.339,P=0.1363)和p53(相对危险度:1.174,P=0.4082)不能作为生存时间的独立预测指标。MGMT(+)、p53(-)组的总生存期显著长于MGMT(+)、p53(-)组,差异有统计学意义(P<0.05)。p53(+)、MGMT低表达组的总生存期要显著高于p53(+)、MGMT高表达组(P<0.05)。结论 MGMT蛋白的表达缺失及p53蛋白的表达增强可能共同参与了胃癌的发展过程,联合分析MGMT和p53蛋白的表达情况对于进展期胃癌患者的预后评估可能具有一定的参考价值;而MGMT蛋白低表达相较高表达时的总生存期略长可能存在其他影响因素。     

弗式不完全佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤模型方法的改进

目的改进弗式不完全佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤模型的建立方法。方法 20只C57BL/6小鼠中的16只按照小鼠体重随机分为两组,分别采取d1、d15(实验Ⅰ组)和d1、d8、d15(实验Ⅱ组)模式每次腹腔注射弗氏不完全佐剂与PBS以1:1体积比配制的乳悬液0.2ml。首次注射后约3个月,脱颈处死小鼠,观察小鼠腹腔内诱导形成的白色肿瘤样组织的生长部位,用游标卡尺记录大小,随后对其进行病理组织学观察,并通过免疫组化表达淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)来进一步证实为淋巴管瘤。另外4只小鼠分别作为两组的对照组(对照Ⅰ组和对照Ⅱ组)按照与实验组对应的注射模式腹腔注射0.2 ml PBS缓冲液。结果实验Ⅰ组、实验Ⅱ组小鼠腹腔内成瘤率均为100%。实验Ⅰ组每只小鼠腹腔成瘤总体积(227.82±124.87)mm3,明显小于实验Ⅱ组的(365.38±78.74)mm3(P<0.05)。实验Ⅰ组、实验Ⅱ组的肿瘤样组织均经HE染色后光学显微镜下观察,及免疫组化均强阳性的表达LYVE-1,证实为淋巴管瘤。对照Ⅰ组、对照Ⅱ组4只小鼠腹腔均未见任何新生物生成。结论利用C57BL/6小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂,以d1、d8、d1...     

竞争性等位基因特异性荧光探针聚合酶链法检测肺腺癌组织 EGFR 基因突变

目的：探讨竞争性等位基因特异性荧光探针聚合酶链（castPCR）法检测初治肺腺癌组织表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的应用价值,及 EGFR 突变状态与患者临床生物学行为的相关性。方法：收集2010年10月至2014年12月南京鼓楼医院103例初治肺腺癌组织标本及患者的临床病理资料。使用 castPCR 法检测 EGFR 基因突变（外显子19 del 2235-2249和 del 2236-2250、外显子20 T790M、外显子21 L858R）。结果：103例肺腺癌患者肿瘤组织中共有54例检出了存在至少一个位点的 EGFR 基因突变（突变率52.43%）,其中敏感突变（外显子19和/或外显子21）45人（43.69%）,外显子20突变11人（10.68%）。同时发现部分患者存在敏感突变与敏感突变、敏感突变与耐药突变共存的现象,其中外显子19和20共突变2人,外显子19和21共突变4人,外显子20和21共突变1人。结论：通过对103例肺腺癌患者肿瘤组织 EGFR 基因突变状态的检测,初步论证了 castPCR 法在肺癌 EGFR 驱动突变检测方面的临床可行性。     

顺铂温敏纳米颗粒的制备及其评价

目的构建顺铂温敏纳米颗粒,表征其相关性质及不同温度下对肿瘤细胞生长抑制率。方法采用自由基共聚及开环聚合法合成聚N异丙基丙烯酰胺丙烯酰胺D,L丙交酯,在水溶液中自发形成胶束结构包裹顺铂,测定其分子量分布、粒径、包封率、载药量、温敏特性及肿瘤细胞生长抑制率。结果空白载体粒径为(83.3±4.3)nm,包药后载体粒径(133.4±17.8)nm,比包药前增加了大约50nm。载药量为3.8%,包封率为35%。载药颗粒在单纯化疗时细胞抑制作用较小,加热后抑制作用明显增加(P<0.01),与游离药物相近(P>0.05)。结论顺铂温敏纳米颗粒具有较好的温度控释特性,为热靶向治疗提供了良好的载体。     

独活醇提物及其单体蛇床子素体外抗肿瘤活性的实验研究

目的：探讨独活醇提物及其单体蛇床子素在体外对人胃癌细胞株MKN-45、BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7及人结肠癌细胞株LOVO生长的影响.方法：将不同浓度中药独活醇提物及其单体蛇床子素作用于人胃癌细胞株MKN-45、BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7及人结肠癌细胞株LOVO,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定独活醇提物及其单体蛇床子素对5株肿瘤细胞的增殖抑制率.结果：蛇床子素浓度在3.75μg/ml-120 μg/ml之间对MKN-45、BGC-823、A549、MCF-7及LOVO均有明显的抑制作用,且呈剂量-效应关系,IC50值分别为43.299μg/ml、56.790μg/ml、37.444 μg/ml、38.397μg/ml、36.231 μg/ml;相同条件下,独活醇提物对5株肿瘤细胞的抑制作用都较弱.结论：蛇床子素在体外能够抑制MKN-45、BGC-823、A549、MCF-7和LOVO的增殖,且LOVO细胞对蛇床子素最敏感,蛇床子素对5株肿瘤细胞的抑制作用均强于独活醇提物,说明蛇床子素有可能是独活醇提物中抗肿瘤作用的主要成分.     

中药独活及其单体蛇床子素体外抗血管生成的实验研究

目的：探讨独活醇提物及其单体蛇床子素对体外血管生成的抑制作用及其可能的机制.方法：采用MTT法观察中药独活醇提物及蛇床子素对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell.HUVEC）和人肠癌LoVo细胞增殖的影响,Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验以及流式细胞术,观察并比较独活醇提物及蛇床子素对HUVEC迁移、小管形成、凋亡及周期的影响.结果：3.75-30μg/ml的独活醇提物及蛇床子素作用48h时对HUVEC的细胞增殖抑制率分别在5.16％-10.15％和22.64％-65.56％之间,对LoVo细胞增殖抑制率分别在2.86％-7.29％和5.15％-24.39％之间.体外小管及小管迁移实验显示,3.75-30μg/ml的蛇床子素作用24h时HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整.3.75-30μg/ml的独活醇提物和蛇床子素处理12h对HUVEC迁移抑制率分别在-2.16％至8.00％和13.70％至63.04％之间.3.75-30μg/ml的独活醇提物和蛇床子素诱导HUVEC细胞凋亡率分别在6.1％-14.4％和18.8％-89.5％之间.独活醇提物和蛇床子素作用HUVEC 24h后,使内皮细胞周期主要阻滞在G0-G1期,蛇床子素对细胞周期影响强于独活醇提物.结论：蛇床子素在体外抑制血管生成作用强于独活醇提物,说明蛇床子素可能是独活醇提物中发挥抗血管生成作用的主要成分,其作用机制可能与抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,阻滞HUVEC细胞周期有关.     

新型顺铂纳米微球的体内外抗肿瘤作用的研究

目的全面考察实验室前期自行合成的mPEG—PCL两嵌段高分子，并采用双乳化法将其用于负载顺铂，评价该纳米微球的体内外抗肿瘤活性。方法通过开环聚合法，制备mPEG—PCL两嵌段聚合物以及末端带有羟基的PCL作为载体，采用优化的w／o／w双乳化扩散／挥发法，制备负载顺铂的纳米微球。采用MTT法，评价该纳米微球在体外对于消化系肿瘤细胞株BGC823、HepG2、H22的抗肿瘤活性，并与顺铂裸药相比较。在BGC823及102细胞株上验证空白微球的毒性。在ICR小鼠皮下接种H22肿瘤模型，采用瘤体内注射，验证纳米微球的抗肿瘤活性和副作用，并与顺铂裸药比较。结果通过开环聚合法合成mPEG—PCL两嵌段聚合物以及末端带有羟基的PCL，测定分子量和设计分子量相近。载药微球粒径（370.3±2．5）nm。顺铂的载药效率为77．4％，载药量为4．72％。体外释放实验显示，载药微球具有缓释特征。载药微球对于体外培养的肿瘤细胞系的抗肿瘤和顺铂裸药相似。空白微球对于肿瘤细胞BGC823及人肝细胞株L02均无明显毒性。在体内实验中，载药微球对于肿瘤生长的抑制作用优于顺铂裸药，且呈现更好的剂量依赖性，当给药剂量从2．5mg／kg增加到5mg／kg时，抑瘤率提高，而顺铂裸药的抑瘤率并不因剂量的增加而提高。当顺铂裸药的给药剂量从2．5mg／kg增加到5mg／kg时，小鼠的体重增长明显减缓，而顺铂微球的剂量增加时，小鼠的体重变化并不受到明显影响。结论采用mPEG—PCL为载体，双乳化法合成的顺铂纳米微球，具有稳定及缓释的性质，在体外实验中，其抗肿瘤活性略低于裸药，和纳米微球的缓释特性有关。在体内实验中，载药微球的抗肿瘤活性优于顺铂裸药，且副作用小，因此动物能够耐受更大给药剂量。空白微球在体内外实验中均无明显毒性，说明载体应用安全。认为，mPEG—PCL顺铂微球作为顺铂的载体，具有良好的应用价值。     

常用14种抗肿瘤中药体外抑瘤效果比较

目的:比较14种常用抗肿瘤中药的体外抑瘤效果。方法:采用四甲基偶氮唑兰(MTT)法分别测定了14种常用抗肿瘤中药的水提液、醇提液对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖反应的影响。结果:该14种中药中有10味体外对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖均有阳性抑制作用;且该10味中药醇提液体外对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖抑制作用优于水提液;有2味中药醇提浸膏对人胃癌细胞株AGS、人胃癌细胞株BGC-823体外增殖抑制作用均为强阳性;而其余2味中药对2株细胞抑制率为阴性。结论:14种中药中10味体外对胃癌细胞抑制率大于50%,但提取工艺对抑瘤效果存在较大影响,应尽量采用醇提工艺提取。     

重楼总皂苷提取分离及其对人胃癌细胞BGC823的抑制作用

目的：初步探索重楼总皂苷的提取分离方法,并通过比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌细胞BGC823生长抑制作用评价重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用价值。方法：采用热回流提取法得到重楼醇提物,再经大孔吸附树脂分离得到重楼总皂苷。采用噻唑蓝染色法（MTT法）和集落形成实验,比较重楼总皂苷与重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ对人胃癌BGC823细胞增殖和集落形成的影响。结果：重楼总皂苷、重楼醇提物、重楼皂苷Ⅰ作用于人胃癌BGC823细胞48h的半数抑制浓度（IC50）分别为（8.63±0.30）、（2.61±0.03）、（1.97±0.01）μg/mL。在3.13、6.25、12.5μg/mL浓度下重楼醇提物组集落形成抑制率为30.84%、53.27%、100%,而重楼总皂苷组在各浓度范围内均无集落形成。结论：重楼总皂苷对人胃癌BGC823细胞生长抑制作用显著优于重楼醇提物,稍弱于重楼皂苷Ⅰ,但二者IC50数值接近且均较低,从而肯定重楼总皂苷提取分离工艺和临床应用潜能。