利用PCR-SSCP技术检测中国汉族人PKD2基因的突变

目的:检测中国汉族人Ⅱ型多囊肾病基因PKD2的突变.方法:筛选临床确诊的26个中国汉族家系中31例常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)患者,提取外周血白细胞DNA,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP),取异常条带标本进行核苷酸序列测定,判别PKD2外显子突变位置及类型.结果:以20例健康志愿者为对照,从31例患者中成功检测出2种突变.1种为无义突变,系PKD2外显子13的第2407位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶,形成1个终止密码子;另1种为错义突变,系PKD2外显子4的第964位碱基由胞嘧啶置换为胸腺嘧啶,使编码氨基酸由精氨酸变为色氨酸.结论:本研究建立了PCR-SSCP直接检测我国汉族人PKD2突变方法,检测出2种基因突变,为今后开展ADPKD患者囊肿前诊断提供了实验基础.     

X性连锁少汗性外胚叶发育不良一家系的基因诊断

目的利用直接测序法对一中国汉族人X性连锁少汗性外胚叶发育不良家系进行基因诊断。方法采用聚合酶链反应扩增该家系中两名临床诊断为X性连锁少汗性外胚叶发育不良的患者、患者父母以及100例健康对照者ED1基因的8个外显子,进行DNA直接测序。结果两名患者ED1基因的第9外显子第1045位的碱基鸟嘌呤G被腺嘌呤A替代,患者母亲同一位置碱基呈现G～A杂峰,患者父亲和100例无关健康对照均未见此改变。结论错义突变c.1045A〉G是导致该X性连锁少汗性外胚叶发育不良家系临床表型的主要原因。     

遗传性对称性色素异常症一家系基因突变分析

目的 研究发现一家系遗传性对称性色素异常症的致病基因突变情况.方法 收集临床患者家系成员血样并抽提基因组DNA,通过PCR及突变检测致病基因的方法,分析基因的突变位点.结果 该家系患者DSRAD基因12号外显子发生基因突变,表现为第2887位G缺失.结论 该遗传性对称性色素异常症家系患者中存在致病基因突变,表现为碱基缺失.     

痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症一家系的基因突变检测

目的研究一中国汉族人痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症家系的基因突变。方法采用聚合酶链反应及直接测序的方法对家系中11例患者进行COL7A1基因突变检测,以家系中的16例健康者和100例无亲缘关系的正常人作对照。结果该家系11名患者的COL7A1基因的87号外显子第6859位碱基鸟嘌呤G被腺嘌呤A替代,家系中健康对照及无亲缘关系的正常人均未发现该突变。结论甘氨酸替代突变c.6859G>A(p.G2287R)引起该痒疹样营养不良型大疱性表皮松解症家系发病。     

胃癌家系人群hMLH1基因点突变的分析

[目的 ]研究我国北方地区胃癌高发人群hMLH1基因突变情况。 [方法 ]取 4个胃癌家系非肿瘤人群 94份和对照人群的 10 0份外周血 ,提取DNA ,聚合酶链反应扩增hMLH1基因的第 8和第 12外显子 ,用毛细管电泳测定外显子的单链构象多态性 ,进而对电泳峰形异常者进行测序。 [结果 ]胃癌家系非肿瘤人群 94例标本中 ,hMLH1基因突变 2 2例 ,突变率 2 3% ,其中第 8外显子突变12例 ,第 12外显子突变 10例 ;10 0例对照标本突变 4例 ,突变率 4 % ,其中第 8外显子突变 2例 ,第12外显子突变 2例。胃癌家系人群hMLH1基因突变率明显高于对照人群 ,且突变的碱基与遗传性非息肉性结肠癌发生突变的碱基位置相同。[结论 ]我国北方地区胃癌高发人群可能有着与HNPCC相似的错配修复基因突变。     

Reis-Bücklers一家系的TGFBI基因突变筛查

目的 对临床诊断为RBCD角膜营养不良的一家系进行TGFBI基因突变筛查,确定患者的病因.方法 采集家系中所有人的血样,提取基因组DNA,然后采用聚合酶链反应及直接测序的方法 ,TGFBI基因的所有外显子进行突变检测,以家系中正常人及100例无亲缘关系的正常志愿者DNA样本作为对照.结果 发现患者的TGFBI基因4号外显子的第371位碱基G→T,导致该基因编码的蛋白质的第124位氨基酸Arg变为Leu.家系中正常人及100名正常对照样本均未发生该突变.结论 错义突变R 124 L是导致患者该临床表型的主要病因.     

肌萎缩侧索硬化症家系铜锌超氧化物歧化酶基因突变位点的检测

目的：检测一个具有特殊临床表型的肌萎缩侧索硬化症（ALS）家系的铜、锌超氧化物歧化酶（SOD1）基因突变位点,同时比较单链构象多态性（SSCP）和变性高效液相色谱法（DHPLC）的实用价值.方法：采用SOD1基因的5对引物对部分家系成员基因组DNA进行PCR扩增,分别采用SSCP和DHPLC分析各外显子的多态性,异常样本进行DNA直接测序.结果：①两种方法均发现家系成员Ⅱ5、Ⅲ1、Ⅲ3、Ⅲ13、Ⅲ20、Ⅳ1、Ⅳ20的第2外显子和家系成员Ⅲ1、Ⅲ11、Ⅲ20第5外显子存在突变,直接测序证实第2外显子编码区和第5外显子非编码区均插入了一个碱基A.②DHPLC还发现家系成员Ⅲ1的第4外显子有杂合子色谱,直接测序证实其第4外显子存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变.结论：①该家系SOD1基因第2、4、5外显子均存在突变,第2外显子的突变可能是引起该家系发病的原因.②DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷、可靠的手段.     

肿瘤抑癌基因PTEN在骨及软组织肿瘤中的突变

目的：探讨肿瘤抑癌基因PTEN在骨及软组织肿瘤发生中的作用。方法：应用聚合酶链反应（PCR）分析骨及软组织肿瘤患者110例肿瘤标本,3个肿瘤细胞系PTEN基因第4-9外显子有无纯合性缺失。应用单链构象多态性分析（SSCP）及基因测序技术观察有无基因突变。对照为瘤旁正常组织。结果：PTEN基因第4-9外显子经扩增后均有产物,无基因纯合性缺失改变。SSCP分析未发现变异带,无基因突变。但外显子8表现出两种不同带型,该基因存在多态性,6例肿瘤在内含子8距拼接部32bp处存在两种不同碱基,基因型为g/t。结论：在DNA水平肿瘤抑癌基因PTEN在骨及软组织肿瘤的发生中不起作用;该基因在国人中存在多态性。     

遗传性对称性色素异常症一个家系DSRAD基因突变分析

目的:通过对一遗传性对称性色素异常症家系的致病基因DSRAD进行检测,以期寻找到新的致病突变.方法:采用RT-PCR方法从人外周血中获得DSRAD基因cDNA,然后克隆至pTA2 vector,经阳性克隆筛选后进行基因序列测定,通过BLAST程序网上比对找出可能突变位点,再采用单链构象多态性技术进行新突变验证.结果:对该家系DSRAD基因测序发现患者存在碱基替换A1167G(Q389Q),由于编码的氨基酸未改变,均为谷氨酰胺,为一种同义突变.经单链构象多态性分析证明该突变只存在于该家系患者,不存在于家系健康人和100名无亲缘关系对照者.结论:该同义突变可能导致患者皮肤色素异常改变,其具体的机制尚需进一步研究.     

冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶基因突变的研究

目的: 研究中国人冠心病并高同型半胱氨酸血症患者甲硫氨酸合成酶(MS)基因突变的情况.方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)以及DNA测序技术,检测60例患者MS基因中与结构和功能密切相关的10个外显子的点突变情况.结果:除已知的31外显子区3个SNP位点比较常见外,还发现了1个新的点突变,3 869位为A/G杂合子(A→G的错义突变可使1 195位氨基酸由异亮氨酸变为缬氨酸),此患者的血浆同型半胱氨酸血水平明显高于正常,为30.93 μmol·L-1.此外发现32内含子1个新的G/T多态性.结论:MS某种基因突变可能是影响MS酶功能及高同型半胱氨酸血症的原因之一.     

遗传性共济失调线粒体DNA11778、8344点突变的研究

目的：探索线粒体DNA点突变与遗传性共济失调的关系。方法;采用聚合酶链反应（PcR）扩增临床确诊为遗传性共济失调的26例患者和35例健康对照组外周血白细胞的线粒体DNA,并对PCR产物进行单链构象多态性（SSCP）分析。结果：所有对象均未检测到点突变。结论：遗传性共济失调的发生、发展可能与该区域点突变无关。     

遗传性痉挛性共济失调——附1家族4代9例报告

[目的 ]探讨遗传性痉挛性共济失调的家族生育的危害 .[方法 ]对一家族 4代系谱进行分析 .[结果 ]遗传性痉挛性共济失调为常染色体显性遗传性疾病 .[结论 ]遗传性痉挛性共济失调的家族成员应采取节育措施     

载脂蛋白H基因多态性与脑卒中的相关性研究

目的　探讨载脂蛋白H(apoH)基因多态性与长沙地区汉族人脑卒中的关系。方法　采用PCR 单链构象多态技术和DNA序列测定法检测长沙地区汉族 2 6 0例脑卒中患者、2 0个脑卒中家系成员和 10 0例健康对照者的apoH基因 3号外显子的多态性。结果　长沙地区汉族人apoH基因 3号外显子存在G341A(Ser88Asn)多态 ,在脑出血 (CH)组 ,G341A (Ser88Asn)多态A等位基因频率(0 12 7)明显高于对照组 (0 0 5 5 ) (P <0 0 5 )。有高血压的CH组A等位基因频率 (0 15 1)明显高于对照组 (0 0 5 5 )及无高血压的CH组 (0 0 78) (P <0 0 5 ) ,而后两者比较无统计学意义 (P >0 0 5 )。有家族史的CH患者A等位基因频率 (0 15 0 )明显高于对照组 (0 0 5 5 ) (P <0 0 5 ) ,以CH为主的家系中患病组与未患病组A等位基因 (0 16 0 ,0 12 8)频率均明显高于对照组 (0 0 5 5 ) (P <0 0 5 )。apoH基因G341A(Ser88Asn)多态性与脑梗死无关。结论　G341A(Ser88Asn)多态A等位基因可能是长沙地区汉族人CH ,特别是高血压性CH及有家族史的CH患者的遗传危险因素。     

Study of Mutation in Tyrosine Protein Kinase of Insulin Receptor Gene in Patients with Polycystic Ovarian Syndrome

Objective To explore the molecular mechanism of insulin resistance in the patients with polycystic ovarian syndrome (PCOS ) Methods Polymerase chain reaction, silver staining-single strand conformation polymorphism(PCR-SSCP ) and DNA direct sequencing were used to detect the mutation of insulin receptor (INSR) gene in exon 17～21 with the abdominal wall adipose tissue from 31 patients with PCOS (PCOS Group) and 30 patients with pure hysteromyoma in reproductive lift (Control Group).Results Twenty-two variant SSCP patterns in exon 17 of INSR gene were detected.Direct sequence analysis of exon 17showed that homozygous nonsense mutation was two alleles single nucleotide polymorphism (SNP) at the codon 1058 ( CAC→CAT). Exons 18～21 were not detected with any significantly mutation. The INSR gene His^1058C→T substitution collecting rate and insulin resistance were significantly higher in the PCOS group than in the control group (P=0. 0293, P＜0. 05, P＜0. 01).Conclusion It is suggested that the SNP in codon 1058 of the INSR gene might be related with the insulin resistance in PCOS patients, which has hereditary tendency.And the missense mutation,nonsense mutation and frameshi ft mutation at exons 18～21 in tyrosine protein kinase region of INSR gene for PCOS patients were not frequently observed.     

聚合酶链反应-单链构象多态性分析在家族性高胆固醇血症研究中的应用

目的：探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism，PCR－SSCP）在家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia,FH)研究中的应用价值。方法：提取FH患者外周血基因组DNA，进行PCR－SSCP及DNA序列分析。结果：对1家2例临床诊断为FH的患儿及其父母从基因水平明确了诊断。LDL受体基因突变是位于第6外显子的移框突变，结论：PCR－SSCCP可以从基因水平对FH患者明确诊断，并可对先证者家族系成员早期诊断，以便提供咨询和指导。     

继发孔房间隔缺损一家系CSX/NKX2.5基因突变研究

目的研究一个继发孔房间隔缺损（ASD）家系同源框转录因子基因CSX／NKX2.5的突变情况。方法收集一个单纯继发孔房间隔缺损家系的临床资料,采用聚合酶链反应及直接测序法对该家系内成员进行CSX／NKX2.5基因突变检测,同时对126名家系外健康对照者的该位点进行单链构象多态性（SSCP）分析。结果该家系中4例ASD患者均存在CSX／NKX2.5基因的3个杂合突变,且3者均为谷氨酸转换为赖氨酸（GAG-AAG）：G270A（Glu32Lys）,G378A（Glu68Lys）和G390A（Glu72Lys）。而在家系内非患者及正常对照者中均未发现该3者突变。结论在中国人一单纯继发孔房间隔缺损家系中发现的CSX／NKX2.5突变,可能是导致此家系房间隔缺损的重要原因。     

白假丝酵母菌基因型和假丝酵母菌群分布与外阴阴道假丝酵母菌病严重程度的相关性分析(英文)

探讨致病假丝酵母菌菌群分布以及白假丝酵母菌基因型与外阴阴道假丝酵母菌病症状严重程度的关系。方法我们对2009年9月~2010年10月在我院就诊的,以及生活习惯、饮食、既往用药及工作环境相似的急性VVC患者,利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析技术(PCR-SSCP)对其阴道来源的假丝酵母菌进行分子水平的菌种鉴定,结合SSCP和基因扫描(GeneScan)对白假丝酵母菌CAI区进行多态性分析确定其基因型,对VVC的严重程度进行临床症状体征的评分。结果从获得的198份标本中分离白假丝酵母菌140株(70.7%);58株非白假丝酵母菌(29.3%)。198名患者中重度VVC 95人,轻中度VVC 103人。白假丝酵母菌在重度VVC和轻中度VVC患者中所占比列分别为62.1%和76.6%(P=0.011)。140株C.albican共检出38种CAI基因型且集中分布于少数几种,其中基因型30-45(44株,31.43%)和32-46(23株,16.43%)最常见,其次为基因型30-46(4株,2.86%)和32-47(9株,6.42%)。以上4种优势基因型菌株在重度VVC和轻中度VVC患者中的分布差异有统计学意义(77.9%vs 42.0%,P<0.001)。结论白假丝酵母菌仍然是VVC的主要致病菌,但非白假丝酵母菌与白假丝酵母菌相比更容易引起重度VVC,白假丝酵母菌的基因型与VVC严重程度有关。     

PCR-SSCP技术在Anderson Fabry病诊断中的应用

目的：探讨聚合酶链反应 单链构像多态性分析对于筛选Anderson Fabry病患者的应用价值。方法:对52例肥厚型心肌病患者GLA基因的7个外显子行聚合酶链反应，其扩增产物行单链构像多态性分析。对有条带异常者的所有产物行测序分析，并测定其α 半乳糖苷酶A活性。对确诊的患者，以同样的方法筛选其家系成员。结果：1例患者的第一外显子的第1170位碱基由G突变为A。其α 半乳糖苷酶A活性明显低下，证实为该病患者。该突变使5′端非蛋白质编码区序列发生改变，通过影响mRNA的翻译过程而导致该病。结论：聚合酶链反应-单链构像多态性分析可作为Anderson Fabry病的有效筛选手段。     

中国孤立性心房颤动肺静脉肌袖发育基因垂体同型框2的突变筛查及相应临床特征

目的对孤立性心房颤动(AF)患者进行垂体同型框2(PITX2)基因的突变扫描,并分析突变患者的相应临床特点。方法对160例孤立性AF患者和200名健康者的PITX2基因进行突变扫描。采用聚合酶链反应(PCR)扩增PITX2基因,通过单链构象多态性技术筛查突变,对发现异常的个体采用双脱氧核苷链末端合成终止法进行直接测序。采用Sequence scanner v 1.0软件分析测序图。结果在2例永久性AF患者中发现位于内含子区域的新改变g.766C>A、位于5’UTR区域的新改变g.8310C>T(c.-150C>T)。这两例携带者对药物及电复律治疗的反应较差,接受环肺静脉消融手术后,随访1年未再复发。200名健康者中未发现此改变。结论首次在中国孤立性AF患者中发现影响肺静脉肌袖发育基因PITX2的非编码区改变,其可能为我们进一步理解肺静脉肌袖在AF的发病过程中的作用提供新的启示。