c-myc基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的关联性分析

目的：研究辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤c-myc基因表达的变化,为阐明辐射致癌机制提供理论依据。方法：采用X射线（剂量率0.287 Gy?min-1,总剂量7 Gy）照射BALB/c小鼠,建立小鼠胸腺淋巴瘤模型,6个月后处死小鼠,取辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤和正常胸腺,分别提取总RNA、合成cDNA和提取总蛋白,采用实时定量PCR方法和Western blotting方法分别检测辐射诱发胸腺淋巴瘤和正常胸腺组织c-myc基因mRNA和蛋白表达。结果：经实时定量PCR检测,胸腺淋巴瘤和正常胸腺组织c-myc基因mRNA相对表达量分别为9.16±4.66和1.16±0.54,两组比较差异有显著性（P<0.01）;Western blotting检测结果显示,胸腺淋巴瘤c-myc基因蛋白表达较正常胸腺组织明显增高。结论：c-myc基因与辐射诱发
小鼠胸腺淋巴瘤有关联,可能是辐射致癌的易感基因。     

p73在γ射线诱发小鼠淋巴细胞白血病中的表达

目的:观察p73基因在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病小鼠胸腺和骨髓组织细胞中的表达变化, 探讨p73在辐射致癌中的作用.方法:用γ射线照射BALB/c小鼠诱发白血病,建立辐射致癌动物模型;分别应用Western印迹和原位杂交(ISH)技术,从蛋白水平和mRNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中p73基因的表达情况;运用免疫沉淀技术(IP)检测 P73蛋白的磷酸化水平;RT-PCR/DNA测序技术检测基因突变和变异体的表达.结果:辐射后癌变组胸腺/骨髓中的P7 3蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05);而对照组和辐射未癌变组之间蛋白水平无明显差异(P>0.05).原位杂交(ISH)结果显示癌变组织中p73阳性反应和阳性率均明显高于对照组.在癌变组织中发现P73磷酸化水平明显升高(P<0.05).RT-PCR发现在癌变组中有p73变异体γ、δ过表达以及N末端缺失的突变体(DTA-p73)表达.结论:p73可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程,作用机制可能与变异体过表达及高磷酸化状态所致的活性改变有关.     

辐射诱发胸腺淋巴瘤Kras基因的表达及其启动子甲基化

目的： 研究辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Kras基因mRNA和蛋白表达的变化,并检测其启动子CpG岛甲基化状态,探讨辐射致癌的发生机制。方法：采用X射线照射30只BALB/c小鼠,建立胸腺淋巴瘤动物模型,取胸腺淋巴瘤和正常胸腺组织,分别提取总mRNA、合成cDNA和总蛋白,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blotting法分别检测Kras基因mRNA和蛋白表达水平,采用硫化测序PCR (BSP)法检测Kras基因启动子CpG岛甲基化状态。 结果：RT-PCR法检测,胸腺淋巴瘤Kras基因mRNA相对表达水平明显高于正常胸腺组织（P<0.01）;Western blotting法检测,胸腺淋巴瘤Kras基因蛋白表达水平高于正常胸腺组织近1.41倍;BSP法检测,正常胸腺组织Kras基因启动子有4个CpG位点发生甲基化,而辐射诱发胸腺瘤Kras基因启动子有1个CpG位点发生甲基化,呈去甲基化状态。结论：电离辐射可能通过Kras基因启动子去甲基化而引起Kras基因mRNA和蛋白表达水平改变,进而导致肿瘤的发生,其可能是辐射致癌的发生机制之一。     

鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因表达和免疫功能的影响

目的：观察鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因的表达和免疫功能的影响,探讨其在辐射致癌过程中的作用。方法：将90只近交系BALB/c小鼠随机分成对照组、照射组和照射给药组,每组30只。照射组和照射给药组小鼠采用X射线照射,建立胸腺淋巴瘤动物模型,照射后给予照射给药组小鼠喂饲含鹿角脱盘超微粉的鼠粮。6个月后,取全血和胸腺,采用RT-PCR和Western blotting法分别检测胸腺淋巴瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平;采用ELISA法检测血清免疫球蛋白（IgG、IgA和IgM）水平,应用SOD试剂盒检测血清中SOD活性。结果：照射组和照射给药组小鼠胸腺瘤发生率分别为53.33%（16/30）和36.67%（11/30）;照射组小鼠胸腺瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平较对照组小鼠正常胸腺组织均明显升高（P<0.05）,而照射给药组小鼠胸腺瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平均低于照射组（P<0.05）;照射组小鼠血清中IgG、IgA和IgM水平均低于对照组（P<0.05）,而照射给药组小鼠血清中IgG、IgM和血红蛋白水平及SOD活性均高于照射组（P<0.05）。结论：电离辐射激活Notch2基因和蛋白的高表达及降低小鼠免疫功能可能是辐射诱发胸腺淋巴瘤的发生机制之一;鹿角脱盘可通过抑制Notch2基因和蛋白的表达及提高小鼠免疫功能而降低辐射致癌的发生率,起到抑制肿瘤的作用。     

γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病中MDM2的表达研究

目的:观察MDM2在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病组织细胞中的表达变化,探讨MDM2在辐射致癌中的作用及可能的分子机制.方法:用γ射线照射BALB/c小鼠诱发白血病发生,建立辐射致癌动物模型;分别应用Western印迹分析和原位杂交(ISH)技术,从蛋白水平和mRNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中MDM2的表达情况;运用免疫沉淀技术检测MDM2蛋白的磷酸化水平;PCR-SSCP及银染技术用于检测基因突变.结果:癌变组和辐射未癌变组胸腺细胞/骨髓细胞MDM 2蛋白表达水平都高于对照组(P＜0.05);而癌变组和辐射未癌变组之间MDM2蛋白水平无明显差异.在γ射线照射后早期辐射组骨髓MDM 2蛋白表达水平也明显高于对照组.ISH结果显示:癌变组织中MDM2阳性反应和阳性率均明显高于对照组.在癌变组组织中发现有MDM2磷酸化比其他组都明显升高(P＜0.05).辐射组和对照组均未检测到基因突变.结论:MDM 2可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程,作用机制可能与过表达及高磷酸化所致活性增强有关.MDM2的基因突变在辐射致小鼠白血病发生中不起主要作用.     

~(60)Coγ射线照射对脆性组氨酸三联体基因表达的影响

目的：研究脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad，FHIT)基因在电离辐射损伤和辐射致癌早期过程中的作用。方法：将40只BALB／c小鼠随机分成对照组和1．8、3．6、5．4、7．2Gy照射组共5组，每组8只动物。照射后1个月用乙醚麻醉小鼠，心脏抽血，再解剖取胸腺及骨髓细胞，抽提其总RNA。采用巢式RT—PCR方法及PCR产物直接测序法检测FHIT基因的表达情况。结果：对照组血液、胸腺及骨髓均未出现异常FHIT转录本的表达，不同剂量照射组中血液、胸腺及骨髓均有部分样品出现相对分子质量较小的异常FHIT转录本的表达。测序证实异常转录本缺失2个或2个以上的FHIT外显子。结论：电离辐射可引起FHIT基因的缺失，提示其可能参与辐射损伤和辐射致癌的早期过程。     

60Co-γ照射后早期小鼠肝组织基因表达谱

目的：以基因芯片技术研究辐射后小鼠肝脏的基因表达谱，从分子水平探讨辐射引起小鼠肝脏损伤的机制。方法：采用小鼠基因表达谱芯片（4096个基因）对^60Co-γ照射后48h小鼠肝组织基因表达谱进行研究。RT-PCR验证基因芯片结果。结杲：与正常小鼠相比，辐射后小鼠肝组织有124条基因差异表达，78条下调，46条上调。其中57条基因的功能已知，这些差异表达的基因按功能可分为6类：DNA修复和应激蛋白，细胞骨架，离子通道和转运蛋白，信号转导，免疫蛋白，代谢调控，其中下调基因主要为细胞骨架基因，而上调基因主要为细胞周期调控蛋白和转录因子。RT-PCR结果表明，Hspa5、Rasa3、Nqol基因的表达和芯片结果一致。结论：辐射造成的肝损伤具有多靶点、多层次及多通路的特点。     

IRM-2及其亲本小鼠mRNA差异显示分析

目的利用mRNA差异显示技术分析IRM-2在辐射抗性产生过程中是否有辐射抗性基因或抗性相关基因的表达。方法提取IRM-2小鼠及其亲本615、ICR／JCL小鼠脾细胞总RNA，进行DDRT—PCR，挑选差异表达片段并进行再扩增。结果PCR扩增产物经电泳后，有6条表达差异的带型出现，所有差异表达片段均获得了再扩增。结论某些特异基因的表达参与到了ELM-2小鼠辐射抗性产生这一过程中，推测可能是辐射抗性基因或抗性相关基因。     

γ射线诱发的白血病小鼠肿瘤细胞中SHP-1 mRNA变化的研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1 mRNA在γ射线体外诱发的白血病小鼠肿瘤细胞中的变化情况，为进一步从细胞信号转导途径入手研究辐射致癌的分子机制奠定一定的基础。方法 实验分为癌变组、未癌变组及对照组，应用荧光定量PCR法分别检测各组胸腺及骨髓细胞中SHP-1 mRNA的含量变化情况。结果 癌变组胸腺细胞中SHP-1 mRNA的含量与未癌变组及对照组比无明显差异，而骨髓细胞中SHP-1 mRNA的含量明显高于对照组。结论 在γ射线诱发的白血病小鼠，胸腺细胞SHP-1 mRNA表达无明显变化，但存在SHP-1的翻译异常，表现为翻译增强现象，骨髓细胞中SHP-1 mRNA的表达明显增强。     

PTEN基因表达对辐射诱发小鼠胸腺瘤细胞生物学行为的影响

目的:检测辐射诱发的胸腺瘤组织中第10染色体PTEN的表达,观察外源PTEN基因导入辐射诱发小鼠胸腺瘤细胞体外增殖能力及体内成瘤作用的影响,探讨PTEN与辐射诱发肿瘤的可能作用机制.方法:采用SP免疫组织化学法和Western印迹比较辐射诱发的小鼠胸腺瘤组织和正常小鼠胸腺组织中PTEN、γ-H2AX和Rad51蛋白的表达.RT-PCR技术检测胸腺瘤组织和正常胸腺组织中PTEN基因的缺失情况.利用基因转染技术将外源性PTEN转入小鼠胸腺瘤细胞中,观察其对小鼠胸腺瘤组织细胞体外增殖能力和体内成瘤作用的影响.结果:辐射诱发的小鼠胸腺瘤组织中PTEN蛋白表达阳性率为22.73%(5/22),显著低于正常胸腺瘤组织的阳性率(P＜0.01);Western印迹结果显示胸腺瘤组织中PTEN表达水平明显低于正常组织(P＜0.01);RT-PCR检测发现在肿瘤组织中存在高频率PTEN缺失.外源性PTEN表达后胸腺瘤细胞生长速度显著降低,而且细胞致瘤能力明显下降(P＜0.01).辐射诱发的胸腺瘤细胞γ-H2AX水平明显高于正常组织,而Rad51蛋白水平明显低于正常组织(P＜0.01).结论:PTEN表达缺失可能通过影响Rad51途径的DNA断裂修复通路,导致辐射诱发胸腺瘤的发生;外源PTEN的导入可以抑制胸腺瘤细胞的体外增殖能力及体内成瘤作用,有望成为辐射诱发肿瘤防治的新靶点.     

小鼠载脂蛋白E基因的组织表达谱分析

目的：探讨小鼠载脂蛋白E（apoE）基因的组织表达特点。方法：提取小鼠的肝、脑和心等17个组织的RNA,采用RT—PCR的方法对apoE基因在上述组织中的表达进行研究。结果：apoE基因在肝组织表达最强,其次是脊髓和脑,肺、肾、心、脾、胸腺、小肠、胃、膀胱、血液、肾上腺、子宫、胰腺和主动脉也有不同程度的表达,但在腹肌中几乎不表达。结论：小鼠的apoE基因组织表达谱与人的apoE基因组织表达谱有较高的一致性,与猪的相比差异也不大。     

SHP-1蛋白在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1蛋白在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化特点.方法:建立γ射线体外诱发BALB/c小鼠白血病模型.实验分为癌变组、未癌变组及对照组,从各组小鼠获取胸腺细胞,应用Western印迹、免疫沉淀法及生物化学方法检测各组胸腺细胞SHP-1蛋白质的表达、酪氨酸磷酸化水平及酶活性.结果:癌变组SHP-1蛋白的表达明显高于对照组及未癌变组(P＜0.01),但各组SHP-1的酪氨酸磷酸化水平及酶催化活性差异不显著(P＞0.05),且其酪氨酸磷酸化水平与酶活性间存在明显相关性.结论:在γ射线诱发的白血病小鼠的胸腺细胞中,SHP-1蛋白表达明显升高,但可能存在酪氨酸磷酸化障碍,导致其活性降低,即表现出SHP-1蛋白表达与其活性分离现象,提示辐射致癌中SHP-1蛋白可能存在功能障碍.     

γ线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中SHP-2表达及功能的研究

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2的表达及其功能在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化情况,为进一步从细胞信号转导途径入手研究辐射致癌的分子机制奠定基础.方法BALB/c小鼠336只分为癌变组、未癌变组及对照组,应用Western blot、免疫沉淀法及生物化学方法检测各组SHP-2蛋白质的表达、酪氨酸磷酸化水平及酶活性.结果癌变组SHP-2蛋白的表达、酪氨酸磷酸化水平及酶催化活性间存在明显相关性,均明显高于对照组及未癌变组(P＜0.01).结论在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中,SHP-2蛋白的表达及其功能均明显增强,可能与γ射线诱发小鼠白血病的发生密切相关.     

醋酸铅对胸腺细胞凋亡及p53基因表达的影响

目的探讨醋酸铅诱导小鼠胸腺细胞凋亡及对p53基因表达的影响。方法以3种不同浓度的醋酸铅灌胃饲养小鼠46d后，取胸腺组织，用琼脂糖凝胶电泳法检测胸腺细胞凋亡情况，双抗体夹心ELISA检测胸腺组织中p53的表达情况。结果铅处理组小鼠胸腺细胞有被降解的凋亡带，并且降解条带的量随着染铅剂量的增加而增加；小鼠胸腺细胞p53表达量均高于对照组，并且表达量随着染铅剂量增加而升高。结论醋酸铅可能诱发小鼠胸腺细胞凋亡；醋酸铅可以促进胸腺细胞中p53基因的表达，提示p53可能作为调控因子通过调节Bcl-2和Bax基因的表达参与铅对胸腺损害的毒性过程，高表达的p53启动凋亡过程，诱导细胞凋亡。     

Fas、Bcl-2在γ射线体外诱发的白血病小鼠骨髓细胞中的表达

目的 :观察 Fas、Bcl- 2在 γ射线体外诱发的急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓细胞中表达情况 ,以探讨辐射致癌的机制。方法 :采用 4次 1.75 Gyγ射线全身照射 BAL B/ c小鼠诱发白血病模型 ,通过流式细胞仪对照射后白血病组、未癌变组及对照组小鼠骨髓细胞中 Fas、Bcl- 2的表达进行检测 ;应用抗 Fas抗体诱导细胞凋亡 ,进一步观察 Fas、Bcl- 2的表达对骨髓细胞凋亡的影响。 结果 :白血病小鼠骨髓细胞 Fas表达较未癌变组及对照组明显下降 (P<0 .0 1) ,而 Bcl- 2的表达明显增强 (P<0 .0 1) ;白血病小鼠骨髓细胞明显耐受抗 Fas抗体诱导的细胞凋亡。 结论 :Fas低表达、Bcl- 2高表达导致了细胞凋亡受到抑制 ,这可能是辐射引起小鼠急性淋巴细胞白血病的机制之一。     

用cDNA表达阵谱分析大鼠骨髓基质干细胞诱导分化软骨细胞过程中细胞外基质基因表达

目的：从基因水平了解转化生长因子-β(TGF—β)和地塞米松(DEX)在诱导大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化过程中细胞外基质(ECM)作用的分子机制。方法：应用TGF—β和DEX诱导大鼠BMSCs到软骨细胞系，从分化的软骨细胞中提取、纯化mRNA，逆转录合成cDNA，荧光标记后与大鼠BioStarR-20型芯片杂交，扫描后筛选出差异表达的ECM基因。结果：在2242个基因中，共发现与ECM相关的差异表达基因15条，其中8条差异表达明显，包括前胶原XⅡα1和前胶原Ⅱα1基因各1条，蛋白多糖aggrecan 1、核心蛋白聚糖和biglycan基因各1条，粘连糖蛋白及相关基因纤维连接蛋白1、fibromodulin和Chondromodulin-1(ChM-1)各1条。结论：TGF—β和DEX可有效诱导大鼠BMSCs到软骨细胞系的分化培养，其作用机制涉及到多个ECM基因。     

小鼠胸腺增龄相关性基因的差异表达及其克隆

目的 小鼠胸腺增龄相关性基因差异表达研究及其克隆。方法 利用DDRT－PCR技术对1月龄和10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行分析,获得差异表达片段（ESTs)。进一步作Northern印迹分析并进行核苷酸测序。选取其中一个EST为探针,从小鼠胸腺cDNA文库中克隆基因。结果 对1月龄和10月龄小鼠胸腺mRNA差异表达进行DDRT－PCR分析,发现小鼠胸腺基因存在增龄相关性的表达差异,某些基因在1或10月龄胸腺内有选择性表达,某些基因仅有表达量的变化。共获得108个差异表达的ESTs,其中31个呈Northern印迹阳性,全部测序。经同源性分析,有14个ESTs与已知基因有较高的同源性,17个ESTs为新的cDNA片段。选取其中1个在1月龄鼠胸腺水平表达的EST,从小鼠胸腺cDNA文库中克隆到1个与小鼠的LAF1转酮醇酶高度同源的1480bp片段。结论 小鼠胸腺内存在增龄性基因表达差异。据此差异所获得的胸腺差异表达基因可能参与胸腺衰老与萎缩过程。     

辐射抗性小鼠与其亲代差异基因的表达序列标签

目的寻找IRM-2小鼠体内存在的与辐射抗性相关的基因。方法提取IRM-2小鼠和其亲代小鼠脾细胞总RNA,利用mRNA差异显示技术挑选差异表达片段,对每一条差异带进行特异PCR扩增、克隆和测序。结果获得IRM-2小鼠独有而亲代小鼠均无的cDNA差异带75条,经测序获得52条差异cDNA序列。与GenBank基因库同源性比较,得到21条与小鼠已知基因不同源的表达序列标签（EST）。结论21条EST提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因,为进一步分离和鉴定辐射抗性相关基因奠定了基础。     

甲状旁腺素在胸腺的表达及血钙对其表达的调节

目的:为了证实PTH基因在胸腺的表达,明确PTH蛋白在胸腺组织的定位以及胸腺来源的PTH是否受到血钙水平改变的调节.方法:使用RT-PCR、real-time PCR和免疫组织化学的方法比较分析同窝2周龄PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)和野生型(WT)小鼠以及1-α羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]和野生型(WT)小鼠的甲状旁腺和胸腺的PTH表达差异.结果:PTH-/-小鼠的甲状旁腺和胸腺无PTH表达:同窝WT小鼠甲状旁腺和胸腺均有PTH表达,但胸腺表达水平较甲状旁腺低.PTH在胸腺上皮细胞表达,而不在胸腺淋巴细胞表达.1α(OH)ase-/-小鼠表现为低钙血症.与正常血钙的WT小鼠相比,PTH基因和蛋白的表达水平在1α(OH)ase-/-小鼠胸腺组织中均明显升高.结论:胸腺组织不仅是产生PTH的辅助器官,而且其PTH表达也受到血钙水平的调节.     

nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达

目的 探讨nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中的表达.方法 给小鼠经尾静脉注射粒单核细胞白血病细胞株WEHI-3,同时选取正常小鼠作为对照组,取发病小鼠以及正常小鼠的骨髓,采取qRT-PCR的方法检测nm23-M1基因的表达情况,分析其与白血病发生及发展的关系.结果 粒单细胞白血病小鼠骨髓细胞中nm23-M1基因的相对表达量是正常对照组中的24倍,两组之间有显著性差异（P＜0.05）.结论 nm23-M1基因在小鼠粒单核细胞白血病中高表达,并且与外周血白细胞数、骨髓原始细胞数以及脏器白血病侵袭情况相关,而与白血病小鼠的性别、年龄无关.