嗅鞘细胞移植促进大鼠坐骨神经的再生

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠坐骨神经再生的作用.方法:30只SD大鼠随机分为OECs组和对照组,每组15只; 切除3 mm右侧坐骨神经并用预先充填可吸收明胶的硅胶管套接修复,OECs组和对照组硅胶管内分别给予体外培养纯化的OECs和生理盐水; 术后4、8和12周分别行电生理和组织学检查.结果:术后4、8和12周,OECs组和对照组修复神经均有不同程度再生,OECs组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅度、有髓神经纤维数目和直径均明显高于对照组(P<0.05).结论:外源性OECs移植能明显促进大鼠坐骨神经再生.     

NT-3基因修饰的嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经修复及功能恢复的影响

目的 探讨神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠神经修复及运动功能恢复的促进作用.方法 构建Lewis大鼠EAE模型,采用完全随机化法分为对照组、OECs组及OECs-NT-3组,每组20只,分别将生理盐水、OECs、OECs-NT-3移植入大鼠侧脑室内,每日进行神经功能缺损评分(NDS)评估大鼠肢体功能恢复情况,应用免疫组织化学检测及辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪技术对EAE神经纤维修复进行形态学观察.结果 细胞移植后,OECs-NT-3组大鼠神经功能评分明显低于OECs组,差异有统计学意义(P＜0.05);第28天,大鼠体内OECs-NT-3存活数量较多,可向病灶远端扩散、迁徙;OECs-NT-3组单位面积内的神经纤维数目[第28天,(38.8±3.4)个]明显高于OECs组[第28天,(32.5±2.8)个](P＜0.05);OECs-NT-3组HRP标记的神经元数目多于OECs组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 NT-3基因修饰的OECs可在EAE大鼠体内存活、迁移,并可促进神经纤维再生,减轻皮质神经元的逆行性损伤,改善EAE大鼠的运动功能.     

大鼠嗅鞘细胞移植对脊髓横断损伤的修复作用

目的观察嗅鞘细胞（OECs）移植后在体内的存活情况和对脊髓横断伤的修复作用。方法4月龄SD大鼠,体质量250g左右。显露T9段脊髓,完全横行切断脊髓。A组（20只）在损伤远近端注射由成年SD大鼠嗅球分离、培养、纯化的OECs,B组（20只）在相同位置注射DMEM培养液,C组（10只）单纯做T9节段的椎板减压。术后观察动物脊髓功能恢复情况,每2周测定1次后肢运动功能（BBB评分法）,共12周。术后3个月取损伤段及其临近脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗NF和p75免疫组化染色。利用p75免疫组化染色来观察OECs在体内存活情况。结果手术后4周开始有运动功能恢复,在各个时间段BBB运动功能得分A组均显著高于B组（均P〈0.001）。A、B组都有神经纤维进入损伤区,在损伤近端,神经纤维数量A组显著多于B组（P〈0.001）,但都显著少于相应节段的C组（P〈0.001）。经过p75免疫组化的OECs存在于脊髓损伤段周围,最远可到距离损伤区边缘1.0cm处。脊髓损伤再生神经纤维的数量与运动功能恢复成正相关（P〈0.01）。结论OECs移植具有明显促进脊髓横断伤神经纤维再生和功能恢复的作用。     

嗅神经鞘细胞移植治疗实验性脊髓损伤的研究

目的:观察移植体外培养的嗅神经鞘细胞(OEC)对大鼠脊髓左半侧横断伤的治疗作用。方法:将应用改良Nash法培养的OECs移植到成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,8周后分别采用改良Tarlov法运动学功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)顺行示踪、透射电镜观察、P75免疫组织化学染色及HE染色等方法,观察动物的运动功能、脊髓再生的轴突和髓鞘、OEC的存活和脊髓损伤程度。结果:8周时治疗组运动学功能评分高于对照组(P<0.05);治疗组再生轴突穿越损伤区,对照组则无再生轴突穿越;超微结构显示治疗组轴突数量多于对照组,且髓鞘的完整性强于对照组,OEC表现为星形胶质细胞样和雪旺氏细胞样两种,包绕轴突髓鞘;免疫组化染色显示移植后8周OECs仍然存活,在损伤区均匀、散在分布;损伤后8周脊髓损伤区有胶质瘢痕及空洞形成。结论:移植的嗅神经鞘细胞可促进大鼠运动功能的恢复、脊髓轴突的再生和髓鞘的重塑。     

神经干细胞与嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与嗅鞘细胞（OECs）移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响．方法SD大鼠行T11脊髓全横断术后，随机分为NSCs移植组、OECs移植组、联合移植组和对照组．术后将取自绿色荧光蛋白（GFP）转基因胚胎小鼠海马和新生小鼠嗅球的、经培养鉴定后的NSCs和OECs，以明胶海绵做载体分别或联合移植到各移植组动物脊髓损伤处，对照组不移植细胞，用BBB评分法评价1～8周大鼠后肢运动功能恢复的程度．8周后移植各组动物行左心室主动脉内4％多聚甲醛灌注，取横断处上下各约1mL脊髓，连续冰冻切片（片厚20tam），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，确定NSCs及OECs的存活情况．结果NSCs及OECs细胞在移植脊髓损伤后能存活，并向周围迁移；术后3和4周末，NSCs组、OECs组和联合移植组大鼠运动功能均较对照组有明显改善（P〈0．05）；且3周时，联合移植组和OECs组比NSCs组后肢运动功能变化显著（P〈0．05）；而联合移植组和OECs组比较后肢运动功能未见显著差别（P〉0．05）．绪论NSCs、OECs和联合移植在早期均可促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复；OECs组、联合移植组效果均优于NSCs组；联合移植对大鼠运动功能恢复在早期没有显现最佳作用．     

嗅粘膜源性嗅鞘细胞移植联合NGF对脊髓损伤的修复

目的：探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells， OECs）移植联合神经生长因子(nerve growth factor， NGF)修复脊髓急性损伤的可行性和疗效，并观察二者的协同作用。方法：自成年Wistar大鼠嗅粘膜取材，采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制纯化相结合的方法培养纯化嗅鞘细胞。建立大鼠脊髓半切模型，并随机分成对照组（A组），OECs组（B组）和OECs＋NGF组（C组），在不同时段进行肢体活动的BBB评分。8周后取脊髓标本进行组织学检查，评价对脊髓损伤的修复作用。结果：B组和C组2周后BBB评分高于A组（P＜0.05），C组自4周后明显优于A组和B组（P＜0.01）。组织学检查表明，C组可明显促进轴突再生。结论:OECs联合NGF具有良好的脊髓损伤修复作用，且二者具有明显的协同作用。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4的影响

目的：探索大鼠嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injurySCI）后水通道蛋白-4（AQP-4）和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠150只,随机分为正常组（50只）、模型组（50只）、OECs移植组（50只）,模型组和OECs移植组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,造模成功后,其中OECs移植组在损伤处移植嗅鞘细胞,模型组移植DF-12培养液。于术后1、3、7、14、21、28 d进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后3~28 d,OECs移植组的BBB评分较模型对照组明显提高,术后第1天,模型组和OECs移植组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但OECs移植组低于模型组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与模型组比较,OECs移植组AQP-4表达也较低（P〈0.01）。结论：OECs移植使脊髓损伤后AQPa表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性损伤,保存残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。     

NTFs基因修饰的人胚OECs植入促进大鼠SCI神经再生及功能恢复的研究

目的探讨神经营养因子（NTF）基因修饰嗅鞘细胞（OECs）移植促进大鼠脊髓损伤后神经再生及功能恢复。方法SD大鼠制备成脊髓损伤动物模型。随机分为损伤对照组（A组）、OECs移植组（B组）和OECs神经营养因子基因修饰后移植组（C组）。治疗后2、4、6周,每组动物分别进行联合行为评分（GBS）、运动诱发电位（MEP）、感觉诱发电位（SEP）检查、双下肢功能测定（爬坡试验）,评价脊髓损伤功能恢复情况。结果随时间的延长,B组GBS、MEP、SEP及下肢功能明显改善。与其它组相比较,差异有显著性,P〈0.05。结论NTF基因修饰后移植在脊髓损伤区,能促进神经再生及功能恢复。     

嗅鞘细胞移植治疗帕金森病动物模型的相关研究

目的 利用大鼠同种异体嗅鞘细胞移植的方式对帕金森病模型大鼠进行治疗,初步探究在PD模型大鼠脑内移植嗅鞘细胞能否成为治疗帕金森病的一种有效手段。方法 提取和培养原代OECs,利用6-OHDA两点注射法建立帕金森病动物模型,通过APO诱导方式验证模型及检测治疗效果,通过HE染色进行大鼠黑质细胞形态学观察,利用抗TH荧光染色细胞计数对比治疗前后TH阳性神经元表达情况差异。结果 从嗅鞘细胞移植后的第4周开始,PD模型的行为学诱导旋转圈数明显减少。HE染色结果示:PD模型大鼠毁损侧的黑质致密部的神经元变性明显,且TH阳性神经元数量降低,经OECs治疗后的帕金森大鼠的患侧黑质部位神经元变性改善,且TH阳性神经元含量明显增高。结论 嗅鞘细胞能够改善帕金森模型大鼠的行为学变化。嗅鞘细胞能够提高帕金森模型大鼠患侧黑质部位多巴胺神经元含量。     

bFGF对弥漫性轴突损伤大鼠病理及免疫组化改变的影响

目的研究弥漫性轴突损伤(DAI)大鼠病理及免疫组化改变以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其影响。方法采用重物撞击法致伤大鼠。bFGF治疗组(n=60)大鼠硬膜下及皮层下注射bFGF,另设正常对照组(n=20)和致伤对照组(n=60)。光镜和电镜下观察病理改变;免疫组化检测脑源性神经营养因子(BDNF)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果大鼠DAI后,桥脑基底部、胼胝体区及大脑半球白质呈现典型病理改变,并有GFAP、GAP-43及BDNF表达升高。bFGF治疗组病理改变较轻。bFGF能促进BDNF和GAP-43表达,抑制GFAP表达。结论大鼠DAI后,局灶应用bFGF能促进脑组织再生,加速功能恢复,但其长期疗效尚不确定。     

脊髓内移植纤维蛋白胶包裹嗅粘膜固有层促进损伤轴突再生

目的：将富含嗅神经鞘细胞的大鼠嗅粘膜固有层(OLP)碎片裹以纤维蛋白胶(FG)，移植到脊髓全横断断端间隙内，观察对脊髓两断端连接及轴突再生的影响。方法：成年雄性SD大鼠24只，全横断胸10节段脊髓。分别于脊髓断端间隙内移植OLP(OLP组)、FG包裹的OLP(FG-OLP组)或等量的FG(FG组)，每组6只；另6只仅行脊髓横切（单纯全切组）。10wk后处死动物，取材观察四组大鼠脊髓断端的连接情况。再取损伤区2cm范围脊髓节段，行冰冻水平切片，免疫组化ABC法染色，观察神经丝（NF）和生长相关蛋白－43(GAP－43）免疫组化染色阳性神经纤维的分布与形态，同时行NF和GAP－43的免疫荧光双标染色，激光共聚焦显微镜下观察两者的相互关系及形态异同。结果：单纯全切组和OLP组脊髓两断端连接较差;FG组和FG－OLP组断端连接较好，少有空洞。单纯全切组和FG组损伤区可见少量NF及GAP－43免疫组化染色阳性纤维，分布弥散，纤维细小，排列方向凌乱。OLP组可见较多NF及GAP－43免疫组化染色阳性纤维，但未见跨越脊髓横切部位；而FG－OLP组损伤区内有大量NF及GAP－43免疫组化染色阳性纤维，并跨越脊髓横切部位。NF和GAP－43免疫荧光双标结果显示，二者在损伤区的分布相同。结论：脊髓断端间隙内移植FG包裹的OLP碎片可促进脊髓两断端的连接及轴突的再生。     

早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马GAP-43表达的影响

目的 探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, HIBI)新生大鼠海马生长相关蛋白(Growth-associated protein-43, GAP-43)表达的影响.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBI模型,随机分为干预组和非干预组,假手术大鼠作为对照组.干预组大鼠于HIBI后第2天开始丰富环境干预,分别于术后第3、7、14、21、28天取各组大鼠脑组织进行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,观察不同时间点各组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达的差异.结果 非干预组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达强于对照组(P＜0.01),干预组海马GAP-43表达于术后第14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05),GAP-43mRNA表达于术后第7、14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05). 结论 早期丰富环境干预可以增强HIBI新生大鼠海马GAP-43及其mRNA的表达,提示GAP-43表达的增多可能参与了丰富环境影响HIBI新生大鼠损伤修复的机制.     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后GAP-43 mRNA表达影响

目的探讨肌苷对脑缺血再灌注后中枢神经再生的作用。方法线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为治疗组和对照组,每组再随机分为缺血1.5 h再灌注2 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d1、4 d组(n=4),另取4只作假手术组。应用BEDERSON等神经功能评分法评定神经功能,原位杂交技术检测脑缺血再灌注后各时间点脑组织生长相关蛋白基因(GAP-43 mRNA)的表达。结果对照组于再灌注2 h~7 d、治疗组于再灌注12 h~7 d,GAP-43 mRNA表达与假手术组比较明显增多(t=2.70~29.84,P<0.05),治疗组与对照组比较GAP-43mRNA表达于再灌注2 h一过性下降,12 h和7 d明显增高(t=1.97~7.41,P<0.05);治疗组与对照组比较神经功能恢复于再灌注7 d有显著性差异(t=2.31,P<0.05)。结论肌苷可促进大鼠脑缺血再灌注后神经功能恢复,其作用机制可能是通过调节与神经轴突再生有关的GAP-43 mRNA表达而实现的。     

GAP-43 Expression and Pathological Changes of Temporal Infarction in Rats and Effects of Batroxobin

To study the changes of the expression of growth-associated protein-43 (GAP-43) and pathology in temporal infarction of rats photochemically induced and the effects of batroxobin. METHODS: Immunohistochemical technique and hematoxylin-eosin stain was used to show the changes of the expression of GAP-43 and pathology. RESULTS: In infarction group, GAP-43 expression was markedly increased on the infarction and surrounding tissues at 24 h cerebral infarction. The expression reached peak level at 72 h after cerebral infarction and was decreased at 7 d after cerebral infarction. However, in batroxobin-treated group, GAP-43 expression was increased and the pathological changes were much slight as compared with infarction group. CONCLUSION: The expression of GAP-43 increases in infarction of temporal neocortex and batroxobin promotes the expression of GAP-43 and ameliorates the pathological changes in infarction of temporal neocortex.     

不同剂量托吡酯对癫大鼠海马组织中NCAM和GAP- 43 mRNA表达的影响

目的 研究不同剂量托吡酯(TPM)干预下,大鼠海马组织中神经细胞黏附分子(NCAM)和生长相关蛋白- 43(GAP- 43)mRNA的表达变化.方法 将48只大鼠随机分成正常对照组、海人酸(KA)组、10 mg/kg TPM组、40 mg/kg TPM组、100 mg/kg TPM组和400 mg/kg TPM组,每组8只;建立不同剂量的TPM干预癫大鼠模型.观察大鼠行为学改变;通过Real-time PCR测定各组大鼠海马组织中NCAM和GAP- 43的mRNA表达.结果 KA组大鼠海马NCAM及GAP- 43的mRNA表达水平明显高于正常对照组(P<0.01),10 mg/kg TPM组和40 mg/kg TPM组与KA组的差异无统计学意义,100 mg/kg TPM组和400 mg/kg TPM组明显低于KA组(P<0.01),其中400 mg/kg TPM组明显低于100 mg/kg TPM组(P<0.01).结论 KA诱导癫大鼠海马NCAM和GAP- 43 mRNA表达上调,较大剂量TPM能够抑制NCAM和GAP- 43 mRNA的表达,且抑制作用与TPM剂量有关.     

Schwann cells transplantation promoted and the repair of brain stem injury in rats

Objective To explore the possibility of Schwann cells transplantation to promote the repair of injured brain stem reticular structure in rats. Methods Schwann cells originated from sciatic nerves of 1 to 2-day-old rats were expanded and labelled by BrdU in vitro, transplanted into rat brain stem reticular structure that was pre-injured by electric needle stimulus, lmmunohistochemistry and myelin-staining were used to investigate the expression of BrdU, GAP-43 and new myelination respectively. Results BrdU positive cells could be identified for up to 8 months and their number increased by about 23%, which mainly migrated toward injured ipsilateral cortex. The GAP-43 expression reached its peak in 1 month after transplantation and was significantly higher than that in the control group. New myelination could be seen in destructed brain stem areas. Conelusion The transplantation of Schwann cells can promote the restoration of injured brain stem reticular structure.     

嗅鞘细胞促进脊髓损伤轴突再生机制的实验研究

目的探讨体外培养嗅鞘细胞的生物学特性与嗅鞘细胞促脊髓半横断大鼠轴突再生作用的关系。方法用改良的Nash法培养嗅鞘细胞,进行长时间连续观察,将鉴定后的细胞移植于成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,在4周时取材,应用p75、NF200和GAP43免疫组化染色等方法判断轴突再生情况。结果体外细胞培养观察发现嗅鞘细胞生长由散在分布逐渐趋向集中,并具有一定的规律性。移植术后4周,p75染色显示移植的嗅鞘细胞仍然存活,主要分布在损伤区周围,且p75阳性嗅鞘细胞呈条索状分布,与GAP43阳性着色神经纤维有共同分布区域。NF200和GAP43阳性神经纤维末端向嗅鞘细胞分布区偏转,而对照组并未见上述现象。结论嗅鞘细胞这种特有的生长方式在体内、外表现一致,与该细胞促进轴突再生的作用相关。     

超声联合磁共振诊断胎儿胼胝体发育不全的影像学特征分析

目的将核磁共振以及超声应用在胎儿的胼胝体发育不全筛选诊断中,分析其诊断效果和影像学特征。方法以2011年1月至2015年1月间,30例经本院超声、MRI检查后诊断为胼胝体发育不全的胎儿为对象,对全部患者的病历资料进行回顾分析,按照检查方法的不同进行组别划分,将单纯接受超声检查的15例胼胝体发育不全胎儿划分到对照组,将接受超声联合核磁共振检查的15例胼胝体发育不全胎儿划分至实验组;将两组胼胝体发育不全胎儿的检查诊断结果和随访结果相比较,对比两种检查方法的诊断准确率。同时对胎儿胼胝体发育不全的超声影像以及核磁共振影像进行分析。结果实验组胼胝体发育不全胎儿中,10例为胼胝体完全缺如,5例为胼胝体部分缺如。实验组的超声联合核磁共振诊断准确率为93.3%(14/15)。对照组胼胝体发育不全胎儿中,9例为胼胝体完全缺如,6例为胼胝体部分缺如。对照组的超声诊断准确率为86.7%(13/15)。可见实验组的诊断准确率要显著高于对照组,且组间差异P0.05。结论在产前对胎儿进行超声检查以及核磁共振检查,能够有效提高胎儿胼胝体发育不全的筛选诊断率,对胎儿胼胝体发育不全的临床诊断有着非常重要的意义。     

视网膜神经节细胞轴突再生相关神经胶质酸性蛋白和生长相关蛋白-43基因研究

目的 探索视神经移植后,再生的视网膜神经节细胞中基因表达的变化.方法 将39只Listed Hooded大鼠分为正常对照组、神经截断组和截断+移植组.采用外周神经缝接模型,用免疫组化技术检测GFAP、GAP-43在各组不同时期表达的变化.通过采用RT-PCR技术检测大鼠视网膜中13个基因的mRNA浓度的变化,使用ANOVA进行统计比较.结果 视网膜切片显示了神经截断组GFAP有明显的表达上调;截断+移植组的GFAP表达下调,GAP-43在不同时点在GCL出现不同程度的表达上调.Real-time PCR结果,5d后,视网膜中的GFAP、GAP-43表达在截断组和截断+移植组与对照组相比有显著的增加.在其后的时点,GAP-43的表达在两个实验组都比对照组有显著降低.结论 再生的视网膜可能调节GFAP合成.再生的RGCs表达GAP-43.GAP-43上调的结果为神经再生提供了依据.