蒙药哈它各其-7散对压疮创面愈合作用的实验研究

目的：探讨蒙药哈它各其-7散对压疮大鼠相关炎性因子IL-1、IL-6及hs-CRP含量的影响。方法：将大鼠随机分为4个组,分别为假手术组,模型组,哈它各其-7组和云南白药组。除假手术组外,其余各组造模成功后,连续14于创面处经皮给药,分别在给药后第1、3、7、14天测量创面面积。末次给药后取创面皮肤组织进行HE染色,并采取腹主动脉血测量其IL-1、IL-6、hs-CRP含量。结果：与模型组比较,哈它各其-7组显著缩小创面面积,并降低压疮大鼠血清中的IL-1、IL-6、hs-CRP水平。结论：蒙药哈它各其散能促进压疮创面的愈合,这可能与抗炎作用相关。     

pEGFP-HPV16E6/E7表达载体的构建及转染角朊细胞的瞬时表达

目的：构建ｐＥＧＦＰ－ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７表达载体,观察其在角朊细胞中的瞬时。方法：基因重组技术,基因转染技术。结论 ｐＥＧＦＰ－ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７表达载体便于观察,转染细胞中ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７－ＧＦＰ融合蛋白的表达民政部及蛋白定位,适用于对ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７分子生物学特性及致瘤机理的研究。     

大鼠颌下腺血管内皮生长因子cDNA的转移及表达

目的：探讨以颌下腺为靶器官,进行血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因治疗后,颌下腺中ＶＥＧＦ含量变化。方法：构建了ＶＥＧＦ基因表达的真核细胞表达载体,以阳离子脂质体为介质,向大鼠颌下腺转染外源性的ＶＥＧＦ基因,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术观察ＶＥＧＦ基因的表达,ＥＬＩＳＡ方法检测颌下腺中ＶＥＧＦ的含量变化。结果：转ｐＢＫＣＭＶ－ＶＥＧＦ１２１基因后第１天,大鼠颌下腺内ＶＥＧＦ的表达及涎液中ＶＥＧＦ的含量即开始     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺内血管内皮生长因子表达的变化

为了解低氧对肺内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因表达的影响及ＶＥＧＦ在肺动脉闹压发生中的作用，以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型，采用Ｅｌｉｓａ检测大鼠肺动脉血血清ＶＥＧＦ的含量改变，以体外转录并用ＤＩＧ－ＵＴＰ标记的ＶＥＧＦ ｃＲＮＡ探针进行肺组织原位杂交，检测大鼠肺内ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ表达的变化。结果发现：低氧３周后，大鼠形成明显的肺动脉高压；大鼠肺动脉血血清中ＶＥＧＦ含量在低氧３周组为４２０．     

Ⅰ,Ⅱ期乳腺癌切除范围及VEGF,nm23—H1表达的初步探讨

目的：初步探讨Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌切除范围及ＶＥＧＦ、ｎｍ２３－Ｈ１在乳腺癌及癌旁组织中的表达。方法：应用免疫组化方法对３２例乳腺癌及癌旁组织中ＶＥＧＦ和ｎｍ２３－Ｈ１表达进行测定并同时测定乳腺癌组织的浸润距离。结果：３２例乳腺癌肿瘤组织ＶＥＧＦ的过表达率为２０／３２（６２．５％）,ｎｍ２３－Ｈ１的低表达率为１４／３２（４３．８％）?而在距肿瘤２ｃｍ的癌旁组织中,６例癌变组织ＶＥＧＦ的过表达率为３／６,     

腺病毒介导神经生长因子对遗传性视网膜变性RCS大鼠？…

目的：探讨先天性视网膜变性病因以及对其进行基因治疗的可行性。方法：ＴＵＮＥＬ法对ＲＣＳ大鼠视细胞的丧失进行研究;构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒ｐＨｄＥ１ＣＭＶ－ＮＧＦ,经与ｐＪＭ１７在２９３细胞中同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒ＡｄＥ１ＣＭＶ－ＮＧＦ。琼旨糖覆盖法测定滴度。ＡｄＥ１ＣＭＶ－ＮＧＦ和ＡｄＥ１ＣＭＶ－ＬａｃＺ转导培养视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌ ｐｉｇｍｅｎｔ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕ     

血管内皮生长因子在脑星形细胞瘤中的表达及其临床意义

脑星形细胞瘤往往伴有血管增生,血管增生程度与其预后密切相关。血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎ－ｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）被认为是促内皮细胞有丝分裂和血管增生的重要血管生长因子之一。为探索ＶＥＧＦ蛋白表达与星形细胞瘤病理分级和临床预后的关系,采用免疫组织化学方法,结合临床随访,对１０７例脑星形细胞瘤瘤组织和２５例正常脑组织中ＶＥＧＦ蛋白表达水平进行定性和定量检测分析。结果显示：①正常脑组织ＶＥＧＦ表达极低,星形细胞瘤瘤组织ＶＥＧＦ表达明显增高（Ｐ＜０．００５）;②脑星形细胞瘤ＶＥＧＦ表达随其病理分级增加而增高（Ｐ＜０．０１）;③星形细胞瘤ＶＥＧＦ表达愈高的病人,其临床６月、１年、２年存活率愈低。因而,ＶＥＧＦ表达与脑星形细胞瘤病理分级和临床预后密切相关。ＶＥＧＦ表达水平的检测可能对判断脑星形细胞瘤病理分级及预后有重要的临床应用价值     

脑溢安对大鼠脑出血后神经生长因子和白细胞介素—1β表达 …

目的：观察脑出血后神经生长因子（ＮＧＦ）和白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）的表达及中药制剂脑溢安的干预作用。方法：用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型,通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交与ＥＬＩＳＡ方法检测出血后脑内ＮＧＦ与ＩＬ－１βｍＲＮＡ及其蛋白的表达与含量。结果：大鼠脑出血后第１ｄＮＧＦ与ＩＬ－１βｍＲＮＡ表达增加,第２ｄＮＧＦｍＲＮＡ下降至正常组水平,第４ｄ、７ｄ低于正常组水平;ＩＬ－１βｍＲ     

慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺内血管内皮生长因子表达的变化

为了解低氧对肺内血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因表达的影响及ＶＥＧＦ在肺动脉高压发生中的作用，以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型，采用Ｅｌｉｓａ法检测大鼠肺动脉血血清ＶＥＧＦ的含量改变，以体外转录并用ＤＩＧ－ＵＴＰ标记的ＶＥＧＦｃＲＮＡ探针进行肺组织原位杂交，检测大鼠肺内ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达的变化。结果发现：低氧３周后，大鼠形成明显的肺动脉高压；大鼠肺动脉血血清中ＶＥＧＦ含量在低氧３周组为４２０．３±７３．１ｐｇ／ｍｌ，明显高于对照组的３２２．２±５８．１ｐｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０１）；原位杂交显示，低氧大鼠肺小动脉管壁出现明显的ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达，说明低氧在引起肺动脉高压的同时可刺激肺小动脉管壁，使ＶＥＧＦｍＲＮＡ表达增强，导致ＶＥＧＦ的合成和分泌增加，后者可能在低氧性肺动脉高压发生过程中起一定的作用。     

大鼠心肌缺血的血管内皮生长因子基因治疗

目的：应用血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ, ＶＥＧＦ） 基因治疗心肌缺血。方法：雄性Ｗｉｓｔａｒ 大鼠２０ 只,结扎冠状动脉前降支造成心肌梗死模型。心脏多点注射构建的ｐｃＤ２／ＶＥＧＦ真核表达质粒。应用逆转录聚合酶链反应,ＶＥＧＦ免疫组织化学染色,心肌碱性磷酸酶染色及血管计数等方法检测ＶＥＧＦ 基因在缺血心肌中的表达及生物学作用。结果：转移ＶＥＧＦ基因后在大鼠缺血心肌中有ＶＥＧＦｍＲＮＡ 高表达, ＶＥＧＦ 免疫组化染色可见ＶＥＧＦ蛋白表达水平升高。心肌碱性磷酸酶染色显示,转移ＶＥＧＦ基因能够促进缺血心肌新生血管的形成。结论：ＶＥＧＦ基因能够在大鼠缺血心肌中获得表达,并发挥其促进新血管形成的作用。为ＶＥＧＦ 基因治疗心肌缺血奠定基础。     

HIV-2env(gp120)基因在大肠杆菌中的表达

ＨＩＶ－２Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）是病毒粒子吸附靶细胞膜上ＣＤ４受体的关键蛋白，ｇｐ１２０与ＣＤ４受体结合过程是ＨＩＶ感染机体的第一步。本文应用ＤＮＡ重组技术将ＨＩＶ－２ｅｎｖ（ｇｐ１２０）基因克隆到ｐＥＴ１７ｂ的Ｔ７启动子下游ＥｃｏＲＶ位点，构建成ｐＥＴ１７ｂ－ｇｐ１２０重组质粒，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示在３５０００（Ｍｒ）处有一特异蛋白带，表达量占菌体总蛋白的５．８％。蛋白印迹试验分析此蛋白能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。ＨＩＶ－２ｅｎｖ基因在大肠杆菌中的表达成功，为ＨＩＶ诊断试剂和疫苗的研究提供有益资料。     

血管内皮细胞生长因子在哺乳动物细胞的表达

目的：本实验试图构建具有生物学活性的ＶＥＧＦ真核表达载体,为ＶＥＧＦ基因治疗提供载体。方法：将已获得的ｈＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ克隆到ＧＳＴ融合表达载体,构建原核表达质粒,转染大肠杆菌ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导表达,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定表达产物。在此基础上构建真核表达载体ｐｃＤＮＡ３ ／ｈＶＥＧＦ１６５,脂质体介导转染ＣＨＯ－Ｋ１细胞,Ｇ－４１８筛选,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ,Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ分别检测其在细胞内的转录和表达情况,３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测表达蛋白的活性。结果：实验组的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ出现特异性条带,而对照组在相应部位未出现条带。实验组的大鼠心肌血管内皮细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显高于对照组（Ｐ＜ ０．００１）。结论：本实验所构建的ＶＥＧＦ真核表达质粒能够在真核细胞内获得表达,其表达产物具有血管内皮细胞增殖刺激活性。     

血管内皮生长因子与乙型肝炎的关系

目的：研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与乙型肝炎（乙肝）的关系。方法：对２１０例乙肝患者肝活检组织及４０例ＣＣｌ４实验大鼠不同时期肝组织,用 ＶＥＧＦ ｍＡｂ进行免疫组织化学（免疫组化）染色;同时,对其中 ７５例乙肝患者用ＥＩＡ法定量检测其血清 ＶＥＧＦ含量。结果：在 ＣＣｌ４大鼠实验早、中期（２～５周）,肝组织炎症反应显著,变性肝细胞 ＶＥＧＦ阳性表达;晚期（８～１２周）ＶＥＧＦ阳性肝细胞较少。在急性乙肝,ＶＥＧＦ呈弥散性强阳性表达,血清ＶＥＧＦ含量极显著升高（Ｐ＜０．００１）;在慢性乙肝及肝硬变（ＬＣ）,ＶＥＧＦ散在表达,以扩张肝窦的内皮细胞及周围肝细胞较显著,其血清ＶＥＧＦ含量并无升高,至ＬＣ反而下降（Ｐ＜０．０１）。结论：ＶＥＧＦ与乙肝的发病阶段、肝细胞再生、肝组织病变程度等密切相关,其在肝内血管改建中担当一重要角色。     

血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及其与P53蛋白的关系

目的：探讨血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌Ｐ５３蛋白在乳腺癌中的表达之间的关系，以及它们与乳腺癌临床病理特征间的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测８８例乳腺癌，１０例正常乳腺组织以及１０例乳腺良性肿瘤手术标本的ＶＥＧＦ和Ｐ５３蛋白的表达。结果：在８８例乳腺癌病例中，有淋巴结转移的ＶＥＧＦ阳性表达率（９４．２９％）明显高于无淋巴结转移的ＶＥＧＦ阳性表达率（４９．０６％）（Ｐ〈０．００１），ＶＥＧＦ阳性表达率与乳腺癌肿瘤大小无关系（Ｐ〉０．１）。Ｐ５３蛋白表达与乳腺癌淋巴结状况（Ｐ〉０．１）无关系。在ＶＥＧＦ表达阳性患者的Ｐ５３蛋白表达阳性率（４５．７６％）明显高于ＶＥＧＦ表达阴性患者Ｐ５３蛋白表达阳性率１７．２４％（Ｐ     

脑星形细胞瘤微血管密度和血管内皮生长因子表达的意义

目的：探讨脑星形细胞瘤组织中微血管密度（ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌ ｄｅｎｓｉｔｙ,ＭＶＤ）和血管内皮生长因子（ｖａｓｃｒｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）的表达及其临床病理意义。方法：采用免疫组化Ｓ－Ｐ法对８３例不同分化的脑星莆细胞瘤组织进行ＭＶＤ和ＶＥＧＦ检测。结果：ＶＥＧＦ在Ⅰ、Ⅱ级、Ⅲ－Ⅳ级星形细胞瘤阳性表达率分别为１９．１％、４８．６％、７４．１％,阳性率     

人乳头瘤病毒6b型重组减毒沙门菌的构建及表达

目的：构建ＨＰＶ６ｂ　Ｌ１Ｅ７嵌合基因重组减毒沙门菌，为进一步粘膜免疫奠定基础。方法：用ＰＣＲ方法扩增获得ＨＰＶ６ｂ　的　Ｌ１Ｅ７　嵌合基因片段，ＴＡ　克隆后，再将Ｌ１－Ｅ７　基因克隆入ｐＴＥＴｎｉｒ１５　沙门菌表达质粒。用电转化法将重组表达质粒导入鼠伤寒减毒沙门菌Ｓ．ＢＲＤ５０９（△ａｒｏＡ，△ａｒｏＣ）中，厌氧诱导其表达，蛋白样品做ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　凝胶电泳　和ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ分析。结果：用ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ双酶切重组表达质粒ｐＴＥＴｎｉｒ１５６ｂＬ１Ｅ７可释放２３８９ｂｐ和１５５４ｂｐ两片段，结果与预计相符。ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ结果显示，重组沙门菌在约５６ＫＤ处有明显特异蛋白条带，而对照菌则无。结论：该重组沙门菌能特异地表达ＨＰＶ６ｂ　Ｌ１－Ｅ７　融合蛋白，人乳头瘤病毒ＨＰＶ６ｂ　Ｌ１－Ｅ７重组减毒沙门菌构建成功。     

HIV—2env（gp120）基因在大肠杆菌中的表达

ＨＩＶ－２Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）是病毒粒子吸附靶细胞膜上ＣＤ４受体的关键蛋白，ｇｐ１２０与ＣＤ４受体结合过程是ＨＩＶ感染机体的第一步。本文应用ＤＮＡ重组技术将ＨＩＶ－２ｅｎｖ（ｇｐ１２０）基因克隆到ｐＥＴ１７ｂ的Ｔ７启动子下游ＣｃｏＲＶ位点，构建成ｐＥＴ１７ｂ－ｇｐ１２０重组质粒，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示在３５００（Ｍｒ）处有一特异蛋白带，表达量占菌体总蛋白的     

血管内皮细胞生长因子与高原肺水肿发病的关系

目的 探讨血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）表达变化在高原肺水肿发病、高原习服－适应中的意义。方法 培养大鼠肺动脉血管内皮细胞,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法和酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）方法分别观察低氧（体积分数为１％的Ｏ２）细胞及培养液中ＶＥＧＦ表达变化;将大鼠分为５组,分别模拟不同海拔高度、不同时间进行间断低氧习服,每天４ｈ,间断低氧习服后的大鼠再进行急性低氧（８０００ｍ,４ｈ）。用免疫组织化学及ＲＮＡ狭缝杂交方法测定急性低氧和低氧习服不同时间、不同海拔高度大鼠肺组织ＶＥＧＦ变化,并对肺组织切片进行初步病理分析;采用ＥＬＬＳＡ方法测定大鼠、高原移居者及高原肺水肿患者治疗前后血浆中ＶＥＧＦ水平。结果 低氧时大鼠肺动脉血管内皮细胞ＶＥＧＦ表达水平明显升高（Ｐ〉０．０１）;低氧大鼠（包括急性低氧组及间断低氧习服组）血头及肺组     

绿色荧光蛋白GFP在转化细胞和肿瘤细胞中的表达

目的：在肿瘤基因治疗研究中建立一个用绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）为标记基因的合适条件。方法用带有ＧＦＰ突变体的质粒转染到表达细胞,观察ＧＦＰ瞬时表达的情况：１．直接测定ＧＦＰ在ＣＯＳ－７细胞中的表达并观察表达的稳定性;２比较不同启动子驱动的ｐｃＤＮＡ３－ＥＧＦＰ和ｐＳＶＫ３－Ｓ６５Ｔ两种质粒在不同肿瘤细胞中的转染效率;３用ＬａｃＺ基因与ＧＦＰ基因共转染     

人VEGFcDNA的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

利用ＰＣＲ技术从人胎肝扩增并克隆人ＶＥＧＦ（血管内皮生长因子）的ｃＤＮＡ，构建其天然蛋白高效表达载体ｐＫＰＬ－３ｂ－ＶＥＧＦ，利用这一载体在大肠杆菌中获得人ＶＥＧＦ蛋白的高效表达，表达产物占细菌总蛋白的３０％以上。