流感病毒H1N1感染后宿主细胞MTH1基因表达的研究

目的 观察H1N1型流感病毒诱导的MDCK细胞抗氧化相关修复基因MTH1表达量的变化.方法 MDCK细胞培养后,H1N1型流感病毒感染0、1、3、6、12、24、48 h,在各时间点经RT-PCR反应检测细胞内MTH1基因的相对表达量.结果 甲型H1N1流感病毒感染后0、6、12 h,MTH1基因的表达量与正常对照组差异无统计学意义;感染后1、3 h MTH1基因的表达量显著高于正常对照组;感染后24、48 h表达量显著低于正常对照组.结论 H1N1流感病毒感染细胞的MTH1基因表达的增加,可能增加细胞对DNA氧化损伤的修复能力,在流感发生和防御机制中起到作用.     

甲型H1N1流感病毒致宿主细胞氧化与凋亡之间的关系研究

目的:观察甲型H1N1流感病毒诱导的犬肺(MDCK)细胞氧化与凋亡之间的关系.方法:MDCK细胞培养后,甲型H1N1流感病毒感染Oh、1h、3h、6h、12h、24h、48h,在各时间点进行检测:采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染料法检测细胞的凋亡率;丙二醛(MDA)法观察膜的氧化损伤程度.结果:(1)甲型H1N1流感病毒感染后0、1、3、6h组细胞凋亡率与正常对照组无显著性差异(P>0.05),感染后12、24、48h组的凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01);(2)实验各组MDA含量随着感染时间的延长呈下降趋势,0、1、3、6、 12h时MDA含量显著高于正常对照组(P<0.01),而24、48h时与正常对照组无显著性差异(P>0.05):(3)MDA含量与凋亡率呈高度的负相关,回归分析进一步证明二者间的相关关系.结论:甲型H1N1流感病毒感染对细胞造成的氧化损伤是极早期事件,可能是细胞凋亡的重要凶素.     

栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制作用

为探讨栀子苷对甲型H1N1病毒的抑制效应,进行了相关体内外实验研究。体外实验中采用MTT法判定栀子苷对MDCK细胞的毒性作用。以帕拉米韦为阳性对照药,根据MTT比色值,观察栀子苷对甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞的细胞病变效应(cytopathic effects,CPE),计算不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)及不同药物剂量干预下,栀子苷对甲型H1N1流感病毒的抑制效率;体内实验以甲型H1N1流感病毒感染ICR小鼠,建立甲型H1N1流感病毒小鼠肺炎模型,比较栀子苷不同剂量干预下,小鼠肺指数、肺组织病理学检查及小鼠存活率。实验结果显示,栀子苷的细胞毒性小,其TD₅₀大于1 040 μmol/L;栀子苷在预防、直接灭活及治疗给药方式下,对甲型H1N1流感病毒感染的MDCK细胞抗病毒EC₅₀分别为91.90、96.25和87.68 μmol/L,对CPE有明显抑制作用;栀子苷可显著降低甲型H1N1流感病毒感染小鼠的肺指数、减轻肺组织炎症损伤、降低小鼠死亡率、延长生存时间。实验结果表明,栀子苷在体外能有效抑制甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的CPE,在体内能有效保护甲型H1N1流感病毒对小鼠肺部的攻击作用,可能为流感病毒的防治提供一个新的选择。     

加味神术散雾化剂抗流感病毒的实验研究

目的探讨加味神术散雾化剂在体外对甲型H1N1流感病毒增殖的影响。方法以甲型H1N1流感病毒感染狗肾传代细胞（MDCK cell）为载体,观察加味神术散雾化剂不同药物浓度对流感病毒引起的细胞病变（CPE）的影响。采用Reed-Muench法计算流感病毒对MDCK细胞的半数细胞感染量(TCID50)。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）测定光密度（OD）值,计算不同药物对MDCK细胞的破坏率,通过Probit回归计算不同药物对MDCK细胞的最大无毒浓度（TC0）及半数中毒浓度(TC50)。计算不同药物对流感病毒增殖的抑制率,通过Probit回归计算半数抑制浓度(IC50)和治疗指数（TI）。结果甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的TCID50为10-8/0.1mL。加味神术散雾化剂对MDCK细胞的TC50为366.63μg/mL,TC0为31.25μg/mL;利巴韦林对MDCK细胞的TC50为109.85μg/mL,TC0为8.02μg/mL。加味神术散雾化剂对流感病毒直接抑制作用的IC50=9.79μg/mL,TI=37.45;对预防流感病毒感染的IC50=8.72μg/mL,TI=41.04;对治疗流感病毒感染的IC50=17.40μg/mL,TI=21.07。利巴韦林对预防流感病毒感染的IC50=84.30μg/mL,TI=1.30。结论加味神术散雾化剂可明显抑制甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞中的增殖,具有抗甲型H1N1流感病毒作用。     

Real-Time PCR与流感病毒分离关系研究

目的研究提高流感病毒分离率的方法。方法 Real-Time PCR检测500份流感监测病例,选择甲型流感H1N1、H3N2和乙型流感阳性及阴性样品各10份共计40份,分别接种MDCK细胞和鸡胚,用红血球凝集试验测定病毒滴度,以血凝抑制试验鉴定毒株型别。结果阳性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型8份、H3N2型7份、乙型流感8份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型0份、乙型流感5份。阴性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型3份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型2份、H3N2型0份。结论 MDCK细胞分离流感病毒时,Ct值已经在阴性范围之内的样品也应进行病毒分离,以提高病毒分离率;鸡胚分离流感病毒时,应选择MDCK细胞接毒一代且滴度达到1∶128的强毒株进行分离。     

清透邪热方对甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的 研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法 将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.02425mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）和白细胞介素-6（IL-6）表达,Toll样受体7（TLR7）及其下游髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB（NF-κB）mRNA和蛋白表达。结果 清透邪热方能够抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TNF-α、IP-10、IL-6的表达;其中清透邪热方0.02425mg/mL组降低H1N1病毒感染组TNF-α、IL-6显著（P＜0.01）;清透邪热方0.097mg/mL组降低IP-10显著（P＜0.01）。清透邪热方能够抑制H1N1流感病毒感染后Ana-1细胞后TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高;其中清透邪热方0.0485mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7 mRNA、MyD88 mRNA表达显著（P＜0.01）;清透邪热方0.02425mg/mL组抑制H1N1病毒感染组NF-κB mRNA表达显著（P＜0.01）;清透邪热方0.0485mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7蛋白表达升高显著（P＜0.01）,清透邪热方0.388mg/mL组抑制H1N1病毒感染组MyD88蛋白、NF-κB蛋白表达显著（P＜0.01）。结论 清透邪热方通过抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高,减少TNF-α、IP-10和IL-6表达,起到抗病毒作用。      

消毒剂对甲型H1N1病毒的杀灭效果测试

目的测试一种植物型消毒剂对甲型H1N1-CA7体外灭杀作用。方法采用悬液定量灭活法,2倍系列稀释的消毒剂与甲型H1N1病毒作用5min、10min和30min,以观察细胞病变作为判断指标确定各组的病毒感染滴度。计算消毒剂对甲型H1N1病毒的平均灭活对数值,确定消毒剂实验室消毒合格的浓度和作用时间。结果消毒剂作用于MDCK细胞的最大无毒浓度为1∶200。1∶2、1∶4和1∶8稀释的消毒剂与甲型H1N1病毒作用5min、10min和30min的平均灭活对数值4.00。结论消毒剂1∶2、1∶4、1∶8与病毒作用5min后可以100%杀灭甲型H1N1病毒。     

2009年海南省甲型H1N1流感病毒核酸检测结果

目的及时了解海南省2009年流感样病例及其密切接触者中甲型H1N1流感病毒感染情况。方法应用实时荧光定量PCR法对呼吸道鼻咽拭子标本中的流感病毒核酸进行定性检测。结果全年共检测哨点监测和爆发疫情标本1 148份,荧光定量PCR法检测结果：流感病毒A型核酸阳性为686份,B型核酸阳性为7份。流感样病例中流行型别以A型为主,占59.6%;A型中甲型H1N1流感病毒核酸阳性为500例,占72.9%（500/686）,其中学生占84.8%（424/500）。10月-11月份达到流行高峰。随机抽取30份核酸阳性标本进行核酸序列测定,27份为甲型H1N1流感病毒。结论 2009年海南省流感样病例中甲型H1N1流感病毒感染主要以学生为主,开展流感病毒核酸检测,有助于尽早了解流感样病例中流感病毒感染情况,为及时了解甲型H1N1流感疫情的动态变化以及制定科学有效的甲型H1N1流感防控策略提供可靠的实验室依据。     

MDCK、Vero和Hep-2细胞共培养分离甲型H1N1型流感病毒

目的用MDCK、Vero和Hep-2细胞共培养体系,分离甲型H1N1流感病毒,提高流感监测效率及缩短临床诊断周期。方法选取4株经国家流感中心复核鉴定、本实验室保存的甲型H1N1流感病毒,用病毒培养液1:2稀释后分别接种MDCK、Vero和Hep-2共培养细胞瓶和MDCK细胞瓶,每组设空白对照,用生理盐水代替接种。经35℃、5%CO2培养后记录甲型H1N1型流感病毒毒株在共培养细胞瓶和MDCK细胞瓶中的细胞病变效应(CPE)、血凝滴度和荧光定量PCR反应的CT值。结果培养后,2组接种流感病毒的细胞瓶均出现典型细胞病变,MDCK细胞瓶CPE略强于共培养细胞瓶,分离物-70℃冻融2次后检测血凝滴度,2组接种流感病毒的细胞瓶内分离物,血凝滴度均(1∶32;提取分离物核酸,荧光定量PCR检测,CT值均(20。结论用MD-CK、Vero和Hep-2细胞共培养体系可以分离流感病毒,同时还可分离鉴定其它呼吸道病毒。     

鱼腥草抗流感病毒诱导细胞凋亡的研究

目的 :探讨鱼腥草抑制甲3型流感病毒 (H3N2 )诱导细胞凋亡的作用。方法 :瑞氏染色法光镜下观察狗肾传代细胞 (Madin -Darbycaninekidney ,MDCK)细胞形态学变化并计算凋亡率 ;琼脂糖凝胶电泳比较在有无鱼腥草作用下的甲3型流感病毒作用后的细胞DNA条带差异。结果 :光镜观察表明病毒感染组MDCK细胞出现细胞凋亡所特有的形态学变化 ,且该组细胞凋亡的百分率显著高于其它组 (P <0 .0 1) ;被感染的MDCK细胞DNA琼脂糖电泳呈特征性“梯状条带”[1] ,而鱼腥草作用后的细胞则没有出现。结论 :鱼腥草具有抑制H3N2 诱导细胞凋亡的作用。     

胰岛素样因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)对鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的影响

目的研究IGF-1、IGFBP-1对血管生长的影响及相互调节作用.方法采用CAM技术在体研究IGF-1、IGFBP-1对鸡胚绒毛尿囊膜血管生长的影响.结果 IGF-1组一级、二级血管数比对照组明显增加,IGFBP-1组血管数无明显改变,二者混合组血管数增长受到抑制.结论 IGF-1具有显著的促血管生长的作用,而IGFBP-1能够部分抑制这个作用,但IGFBP-1本身对血管生长影响不明显.     

护理专业“1＋1＋1”式工学结合人才培养模式初探

为了推进我院护理专业教学改革,坚持以就业为导向,以服务为宗旨,以学生为主体,以能力为本位的办学思想,我院通过构建＂1＋1＋1＂式工学结合人才培养模式,与医院紧密联系,借以强化学生实践能力,有效整合社会资源,促进专业建设,培养面向临床一线的高素质、高技能型护理专门人才。     

甲型H1N1流感病毒研究进展

甲型H1N1流感病毒[Influenza A(H1N1)virus]是一种亚型流感病毒,也是人类最常见的流行性感冒病毒之一。自2009年3月美国和墨西哥发现疫情至2010年1月底,在全球已造成至少12 799人死     

建立BioID-质谱联用技术筛选细胞内的蛋白互作

目的 通过BioID-质谱联用建立一种新的蛋白相互作用的筛选系统;通过免疫共沉淀-Western blot验证YAP1相互作用的蛋白。 方法 构建BirA*-YAP1融合表达质粒;将质粒转染进293T细胞后,在细胞培养液中加入生物素,继续培养24小时后,提取细胞总蛋白。利用YAP1特异抗体,通过Western Blot检测BirA*-YAP1融合蛋白的表达;通过HRP-亲和素,检测细胞内蛋白被生物素标记的水平;通过亲和素磁珠,对细胞内生物素化的蛋白进行亲和纯化,并多次洗涤亲和素磁珠上非特异性结合的蛋白后,对亲和素磁珠纯化的蛋白进行溶解。取40 μg总蛋白进行SDS-PAGE凝胶电泳,通过蛋白银染试剂盒对PAGE凝胶中的蛋白进行染色,确定亲和素磁珠对生物素化蛋白的纯化效果。通过Label-free质谱法对生物素化的蛋白进行鉴定。针对鉴定得到的蛋白,通过Western Blot对生物素化的SMAD3进行验证。通过YAP1的免疫共沉淀,确定SMAD3能与YAP1相互作用。 结果 成功构建BirA*-YAP1融合表达质粒,该质粒在293T细胞中能够高效表达融合蛋白;在生物素存在的情况下,BirA*-YAP1融合蛋白能够利用生物素标记细胞内与BirA*-YAP1融合蛋白相互靠近的蛋白。在细胞裂解后,这些在细胞内被生物素标记的蛋白,能够被偶联亲和素的磁珠纯化,经过多次洗涤,能够富集生物素标记的蛋白。通过质谱鉴定,我们能够获得在细胞内与YAP1在空间上相互靠近的蛋白类型。通过免疫共沉淀-Western Blot技术,我们证明SMAD3能够与YAP1相互作用。 结论 Bio-ID-质谱联用的方法是一种用于蛋白互作筛选的简单、高效的技术,与后续的免疫共沉淀-Western Blot联合使用,可以成为一种新的蛋白互作研究体系。     

抗PD-1/PD-L1治疗在肿瘤治疗中的研究进展

 程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1, PD-1)和程序性死亡配体-1(programmed death-ligand 1, PD-L1)是一对免疫共抑制分子。以PD-1/PD-L1为靶点的药物重新激活了机体自身的抗肿瘤免疫并且在多种肿瘤中取得了良好而持久的疗效。然而,如何预测患者是否对治疗敏感及如何联合其他治疗提高抗PD-1/PD-L1治疗的反应率目前尚无定论。本文主要综述了PD-1/PD-L1通路的作用机制、抗PD-1/PD-L1治疗的研究进展,并探讨了预测抗PD-1/PD-L1疗效的生物标记物及联合免疫治疗的进展。     

甲型H1N1流感医学观察13例防控措施

目的 探索对甲型H1N1流感患者的密切接触者进行医学留观集中管理的防控措施.方法 本次防控工作结束后,回顾性总结对13例甲型H1N1流感患者的密切接触者进行医学留观处置过程、医务人员自身防护及存在缺陷.结果 通过这次应急实施甲型H1N1流感医学留观人员防控措施,使防控工作符合程序,防护操作规范、标准.结论 正确规范地实施消毒隔离措施和加强个人防护,是预防甲型H1N1流感发生医院感染的重要措施和医疗安全的基本保证.     

SP1调控PIWIL1基因启动子转录活性研究

目的 克隆转录因子SP1编码序列,构建真核表达质粒PCDNA3.1-SP1,并研究其对PIWIL1基因转录活性的影响。方法 RT-PCR法从正常人外周血总RNA中钓取SP1基因的编码序列,插入至真核表达载体PCNDA3.1（+）,酶切及测序鉴定重组质粒。Western blot法分别验证重组表达载体的在COS-7细胞中的表达效应。分别将活性最高的PIWIL1基因启动子报告基因截短体（即核心启动子区域）、活性最低的PIWIL1基因启动子报告基因截短体,与SP1重组质粒共转染COS-7细胞,利用Dual-Luciferase reporter assay system测定不同启动子活性区的PIWIL1基因转录活性的改变,同时应用光辉霉素A下调SP1的表达来进一步验证SP1对PIWIL1活性的影响。结果 酶切及测序鉴定结果显示SP1表达质粒构建成功,Western blot法结果表明重组SP1表达载体能有效表达于COS-7细胞,过表达SP1可明显提高PIWIL1不同活性区的启动子的活性（P<0.05）。结论 外源性SP1真核表达载体转染能有效表达于COS-7细胞,并对PIWIL1的转录活性起着上调的作用,提示SP1可能是PIWIL1转录活性的正调控元件之一。     

硬膜外注入1:1:1:1复合液剖腹产术后镇痛的临床观察

<正> 硬腺外吗啡镇痛效果确实可靠,但恶心,呕吐副作用发生率(PONV)高,氟哌啶可以抑制恶心,呕吐,但有嗜睡,头昏症状,硬膜外注射适量新斯的明可产生依赖性镇痛作用延长,增加吗啡镇痛效果,减少副作用,但有心动过缓的副作用,等量阿托品可拮抗。我们将吗啡、新斯的明、氟哌啶,阿托品联合应用观察其效果,报道如下。     

Neuregulin-1温度依赖性抑制小鼠海马脑片CA1区的长时程增强

目的 研究不同温度条件下Neuregulin-1(NRG1)对小鼠海马脑片CA1区突触传递和突触可塑性的影响.方法 制作成年小鼠离体海马脑片标本,采用细胞外微电极记录技术,记录小鼠海马脑片CA1区Schaffer侧枝诱发场兴奋性突触后电位(fEPSP),以及施高频强直刺激(HFS)诱导长时程增强(LTP).分别在室温(26±1)℃和生理温度(32±1)℃条件下,观察NRG1对fEPSP和LTP的影响.结果 (1)无论在室温或生理温度条件下,灌流NRG1前后fEPSP斜率的平均值无明显变化(P>0.05).(2)室温灌流NRG1组与室温正常对照组相比,强直刺激后fEPSP斜率的平均值无明显变化(p>0.05);与生理温度正常对照组相比,生理温度灌流NRG1组强直刺激后fEPSP斜率平均值降低有显著性意义(P<0.01).结论 NRG1温度依赖性抑制小鼠海马脑片CA1区的长时程增强.