Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的 观察瘦素（leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法 培养人成骨细胞,并观察其形态及功能变化。采用MTT比色法检测不同浓度的Leptin对人成骨细胞增殖的影响,同时观察不同浓度Letptin条件下骨钙素浓度的变化,并用细胞总蛋白较正。结果 体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性,培养液中加入β-甘油磷酸及L－抗坏血酸后钙茜素红染色阳性,在加入不同浓度Leptin后1、2、3天,人成骨细胞增殖无显著变化。Leptin可刺激骨钙素分泌,呈浓度依赖性（P＜0．05）,但无时间依赖性（P＞0．05）。结论 Leptin对人成骨细胞增殖无影响,但可刺激人成骨细胞功能。     

柠檬酸化硫酸钙对鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的:观察柠檬酸化硫酸钙对成骨细胞功能的影响,探讨该材料作为骨移植替代材料的可行性。方法:采用体外培养成骨细胞的方法,观察材料浸提液对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌能力的影响。结果:在100%浓度柠檬酸化硫酸钙浸提液中培养的成骨细胞增殖相对缓慢(但相对增殖率>90%),其细胞核内嗜银蛋白颗粒染色分析与对照组无显著性差异(P>0.05),其分泌骨钙素、碱性磷酸酶能力显著高于对照组(P<0.01)。结论:柠檬酸化硫酸钙对成骨细胞不具有细胞毒性作用,随着硫酸钙的溶解,在材料植入部位的局部形成高钙环境,这有利于成骨细胞的增殖和分化促进新骨的形成。     

补肾健骨汤对成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响

目的考察补肾健骨汤体外对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶、骨钙素合成的影响.方法采用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,取第3代为实验模型,用常规计数法每日同时间检测成骨细胞增殖情况,连续7 d,观察补肾健骨汤提取液及载药血清对成骨细胞增殖的影响;以酶免法测定培养第5天细胞内骨钙素的含量.结果补肾健骨汤提取液及载药血清对体外培养的成骨细胞增殖均有显著的促进作用,其中提取液的作用在0～100 μg/mL浓度范围内呈剂量依赖性;提取液与载药血清均提高细胞内碱性磷酸酶和骨钙素含量,与空白对照组比较均有显著差异(P＜0.05).结论补肾健骨汤体外对成骨细胞的增殖及碱性磷酸酶、骨钙素的合成具有促进作用.     

胎兔颅骨成骨细胞克隆筛选及鉴定

目的 筛选胎兔颅骨细胞原代培养中的细胞克隆,建立成骨细胞株。方法 从胎兔颅骨组织中分离培养颅肌细胞,有此基础上,运用有限稀释法行克隆传代筛选,建立成骨细胞株,并用酶组化、免疫组化及染色体染色等方法予以鉴定。结果 原代培养的颅骨细胞来源复杂,形态多样;克隆传代筛选的细胞株,细胞形态单一,碱性磷酸酶组化染色呈强阳性,骨形态发生蛋白免疫组化染色呈强阳性,钙红染色显示具有成骨能力;染色体数目形态保持相对稳     

Leptin对人成骨细胞增殖和功能的影响

目的　观察瘦素 (leptin)对人成骨细胞增殖和功能的影响。方法　培养人成骨细胞 ,并观察其形态及功能变化。采用 MTT比色法检测不同浓度的 L eptin对人成骨细胞增殖的影响 ,同时观察不同浓度 L eptin条件下骨钙素浓度的变化 ,并用细胞总蛋白较正。结果　体外培养的人成骨细胞大多呈长梭型 ,碱性磷酸酶组织化学染色、骨钙素免疫荧光组织化学染色阳性、培养液中加入 β-甘油磷酸及 L-抗坏血酸后钙茜素红染色阳性。在加入不同浓度 L eptin后第 1、2、3天 ,人成骨细胞增殖无显著变化。L eptin可刺激骨钙素分泌 ,呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ,但无时间依赖性 (P>0 .0 5 )。结论　 L eptin对人成骨细胞增殖无影响 ,但可刺激人成骨细胞功能。     

骨髓基质细胞体外培养的生物学特性和成骨能力初步鉴定

目的体外分离培养狗的骨髓基质细胞（BMSCs），诱导其向成骨细胞分化，初步鉴定其成骨潜能和生物学特性。方法抽取毕格犬髂骨骨髓体外分离培养获得BMSCs，DMEM、新生牛血清培养基进行原代培养，部分传代细胞以含10mmol／L地塞米松、50μg／ml抗坏血酸和10mmol／L β-甘油磷酸钠的矿化培养液诱导其向成骨细胞增殖分化。倒置相差显微镜进行细胞形态学和细胞生长增殖观察，VonKossa法染色检测体外矿化结节形成，细胞碱性磷酸酶染色检测BMSCs的成骨活性。结果体外分离培养的BMSCs经条件培养基诱导后表现出明显的成骨活性，体外矿化（骨样）结节的Von Kossa染色阳性；传代BMSCs碱性磷酸酶染色阳性。结论体外分离培养的BMSCs中含有骨源性前体细胞．传代细胞具有较强的成骨潜能。     

葛根素调控骨代谢的体外实验研究

目的：探讨中药葛根对骨形成和骨吸收的调控作用。方法：鼠颅盖骨机械法体外分离培养获得成骨细胞（osteoblast，OB）；新生兔长干骨机械分离法获得破骨细胞（osteoclast，OC）。实验组培养液为10％（体积分数）胎牛血清 αMEM培养液 不同（质量）浓度的葛根素，对照组不加葛根素。分别用四甲基偶氮唑盐（MTT）和碱性磷酸酶（ALP）法检测OB的增殖和分化状态；抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察OC形态变化，图像分析体外骨吸收陷窝面积，原子分光光度计法测定OC培养液上清液中Ca^2 含量。结果：中药葛根素对大鼠OB的增殖无明显的刺激作用，但能够促进OB合成分泌ALP。同时，造成体外培养的OC空泡性变，骨吸收陷窝面积减少和培养液上清液中Ca^2 含量的下降。结论：葛根通过抑制骨吸收，刺激骨形成来调控骨代谢，其中抑制骨吸收的效果较强。     

骨巨细胞瘤中成纤维样基质细胞体外钙化能力的研究

目的：探讨骨巨细胞瘤的组织来源。方法：体外培养。Ｇｏｍｏｒｉ法碱性磷酸酶染色,生化检测细胞培养上清液中的碱性磷酸酶含量。免疫组织化学染色检测骨钙素在成纤维样基质细胞中的表达。使用含Ｂ甘油磷酸钠和ＣａＣｌ２的培养液,观察成纤维样基质细胞体外钙化能力。结果：成纤维样基质细胞中碱性磷酸酶和骨钙素呈阳性表达,在体外具有钙化能力。在细胞培养上清液中有碱性磷酸酶。结论：骨巨细胞瘤中的成纤维样基质细胞具有某些成骨细胞的特点,为进一步探讨其组织来源提供了实验依据。     

氟化钠对成骨细胞增殖及分化影响的实验研究

观察不同剂量氟化钠(NaF)对大鼠成骨细胞增殖分化的影响。成骨细胞经酶消化法从新生24hSprague-Dawlev(SD)种乳鼠头盖骨分离得到。在10-7mol／L～5×10-4mol／LNaF中培养。用MTT测定细胞增殖,并经生化法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)及放免法测定培养液中骨钙素含量反映细胞分化。结果表明NaF对成骨细胞增殖率的影响呈双向调节,表现为小剂量NaF(10-mol／L,10-6mol／L,10-5mol／L)刺激细胞增殖,其提高增殖率分别达到11．3％、10．9％、10.6％,(P<0.05),大剂量反之,与对照组相比,10-4mol／L及5×10-4mol／LNaF降低细胞增殖率为9．6％与9．7％。细胞分化对NaF的反应表现为多样性。ALP活性的改变基本与细胞增殖率的变化相同,即小剂量刺激,大剂量抑制。然而骨钙素分泌的改变则呈单向作用,各浓度NaF均刺激细胞骨钙素分泌,其中5×10-4mo1／L组骨钙素水平最高达67.14％(P<o.05)。NaF对大鼠颅骨成骨细胞增殖的影响呈双向调节,但对细胞分化的作用成多样性。     

β2肾上腺素受体阻滞剂对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响

目的:研究β2肾上腺素受体阻滞剂对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响.方法:将不同浓度的β2肾上腺素受体阻滞剂(ICI118551)加入含雌激素(17β-E2)培养的第2代大鼠成骨细胞中,分别于培养3、6、9、12天时,使用PNPP法和放免方法检测成骨细胞培养基中的碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素含量,并用MTT法检测成骨细胞的增殖率.结果:ICI118551可提高雌激素刺激成骨细胞培养上清中碱性磷酸酶浓度促进细胞增殖,尤其当其浓度为10-5及10-6mol/L时,但对成骨细胞培养上清中骨钙素水平的影响不显著.结论:β2肾上腺素受体阻滞剂能够显著促进雌激素刺激大鼠成骨细胞的释放和增殖作用.     

大鼠成骨细胞的原代培养与鉴定

目的:针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,建立一种理想的原代培养成骨细胞的方法,为骨替代材料的研究提供成骨细胞。方法:本实验用新生1~2d大鼠颅盖骨,采用多次酶消化法进行细胞体外培养。倒置显微镜观察细胞形态,并对其碱性磷酸酶(ALP)活性及矿化能力进行鉴定。结果:所培养细胞具有体内成骨细胞的生物学行为。结论:本实验原代培养成骨细胞的方法切实可行,为体外研究提供了一种客观而有效的实验手段。     

淫羊藿对小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响

目的:观察淫羊藿提取液对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、功能及凋亡的影响.方法:利用序列酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞,用组织化学和免疫组化染色进行细胞鉴定.用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测淫羊藿对成骨细胞增殖的影响,通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性反映淫羊藿对细胞功能的作用.建立地塞米松诱导的成骨细胞凋亡体系,并利用流式细胞仪观察淫羊藿对这一凋亡体系的影响.结果:分离和获得的大量单一多角形细胞,经碱性磷酸酶组织化学染色呈强阳性,经Ⅰ型胶原、骨桥蛋白、骨涎蛋白免疫组化染色呈阳性,证实获得的细胞为成骨细胞.淫羊藿提取液不影响成骨细胞的增殖,但可以显著提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性,其中相当于生药1 g/L组的作用最明显.100 nmol/L和1 000 nmol/L地塞米松可以显著增加成骨细胞凋亡率,但同时加入相当于生药1 g/L的淫羊藿提取液,并不引起细胞凋亡率的明显变化.结论:淫羊藿对成骨细胞的增殖和凋亡没有明显作用,但却显著增加了成骨细胞碱性磷酸酶的活性.淫羊藿防治骨质疏松症的重要机制之一可能是促进成骨细胞的成骨功能.     

冲击波对体外培养的鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的：探讨冲击波对体外培养的鼠成骨细胞的增殖及分化能力的影响。方法：将原代培养的成骨细胞随机分成冲击波组和对照组,用不同能量（5、10、15、20 kV）冲击波处理后接种于96孔培养板,根据细胞存活率和增殖情况确定最佳的冲击波能量值。将传4代成骨细胞用冲击波处理后,用CCK-8法、细胞分泌碱性磷酸酶试剂盒、茜素红染色对两组细胞增殖及分化进行测定。结果：冲击波处理体外原代培养成骨细胞的最佳能量值为10 kV（500次）,CCK-8法检测显示,冲击波组细胞增殖速度快于对照组（P〈0.001）,细胞分泌碱性磷酸酶高于对照组（P〈0.001）,茜素红染色显示,冲击波组矿化结节面积明显大于对照组（P〈0.001）。结论：最佳能量冲击波可促进成骨细胞的增殖与分化。     

木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3 T3-E1增殖、分化、矿化和Wnt通路的影响

目的:探讨木犀草素对小鼠体外培养前成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化及Wnt通路的影响.方法:在体外培养的MC3T3-E1s培养基中加入木犀草素0.25~8.00μmol/L培养12、24和48 h,以洛伐他汀0.04μmol/L作为阳性对照,采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞内ALP的活性;茜素红S染色法检测细胞矿化能力;采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ⅰ型胶原、骨钙素、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(Lrp5)、β-连环素、护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达水平.结果:木犀草素可以剂量依赖性和时间依赖性地促进成骨细胞MC3T3-E1增殖(P<0.05~P<0.01);木犀草素(2.00、4.00和8.00μmol/L)可以剂量依赖性地促进MC3T3-E1成骨细胞ALP活性,增强MC3T3-E1成骨细胞矿化能力并上调MC3T3-E1成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、Lrp5、β-连环素和护骨素/细胞核因子κB受体活化因子配体mRNA表达.结论:木犀草素2.00、4.00和8.00μmol/L可以促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化与矿化及Wnt通路中Lrp5和β-连环素mRNA的表达.     

蛇床子素对新生大鼠颅盖骨成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子素（ｏｓｔｈｌｅ）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;改良Ｇｏｍｏｒｉ钙钴法染色鉴定,＾３Ｈ－胸腺嘧啶和＾３Ｈ－脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ＡＬＰ）活性;并以抗骨质疏松症药物依普黄酮（ｉｐｒｉｆｌａｖｏｎｅ,ＩＰ）作为阳性对照药物。结果：蛇床子素对新生大鼠颅盖骨成骨细胞的增殖、ＡＬＰ的活性和胶原合成都有促进作用。其对成骨细胞的增殖作用比ＩＰ强,但对胶原合成的促进作用弱于ＩＰ。结论：蛇床子素通过增加成骨细胞数量、促进细胞胶原蛋白及ＡＬＰ的合成而促进成骨作用。     

改良植块法培养原代成骨细胞

目的:应用改良植块法体外培养大鼠颅骨成骨细胞.方法:将1～3天的新生SD大鼠的颅骨剪碎、接种于培养瓶底,当成骨细胞从组织块中爬出、融合成单层,消化收集成骨细胞,组织块则继续进行培养.将分批次得到的成骨细胞进行MTT,ALP活性以及钙结节计数分析.结果:利用该方法连续分次培养出的成骨细胞.经形态学及ALP鉴定符合成骨细胞的生物学特性,MTT,ALP活性以及钙结节计数无统计学差异.结论:连续植块法培养成骨细胞,操作简便,成功率高,能持续提供细胞,满足实验需求.     

骨髓基质细胞体外培养的生物学特性和成骨能力初步鉴定

OBJECTIVE: To induce the differentiation of bone marrow stromall cells (BMSCs) isolated from Beagles into osteoblasts in vitro and identify the osteogenic potential and bioactivity of the BMSCs. METHODS: Primary cultured BMSCs isolated from Beagles were subcultured in mineralization medium to induce their differentiation into osteoblasts, whose morphological characteristics and proliferation status were observed by phase-contrast microscope. The osteogenic activity of the cells was evaluated with von Kossa staining of the mineralized nodules and determination of the alkaline phosphatase activity. RESULT: BMSCs cultured in vitro showed obvious osteogenic capacity in DMEM. Von Kossa staining of the mineralized nodules and alkaline phosphatase detection of the passaged cells both yielded positive results. CONCLUSION: BMSCs cultured in vitro contain osteogenic precursor cells, and the passaged cells possess osteogenic potential.     

氧化钛生物陶瓷骨细胞相容性研究

目的:观察氧化钛生物陶瓷材料的骨细胞相容性。方法:选用Wistar乳鼠颅顶骨成骨细胞, 将体外原代分离培养成骨细胞接种于材料表面,分别观察7、14、21及28 d时细胞在材料表面的形态变化和增殖情况, 并且对各时期细胞的碱性磷酸酶活性进行检测。结果:各时期材料表面附着的成骨细胞数与对照组间差异无显著性（P>0.05）,成骨细胞能正常粘附、伸展、增殖,碱性磷酸酶活性逐渐增加。 结论：氧化钛生物陶瓷材料具有良好的细胞相容性。     

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清，并与空白组对照，分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用，可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。