喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

目的 比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响。方法 应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法，比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响。结果 单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用；当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成；当归和续断能上调BMP-2和IGF-ImRNA的表达。结论 单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能。     

接骨中药对培养成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

目的:为比较常用接骨单味中药对体外培养成骨细胞的作用.方法:应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察常用接骨单味中药对体外培养成骨细胞的增殖、ALP表达及矿化结节形成的影响. 结果:这8个单味中药对早期增殖期的成骨细胞除当归外均无明显的促增殖和分化的作用;而当归组和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成.结论:单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖及分化的功能.     

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

目的比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响.方法应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法,比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响.结果单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用;当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成;当归和续断能上调BMP-2和IGF-Ⅰ mRNA的表达.结论单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能.     

补肾中药对人成骨细胞钙离子摄取和钙化能力的影响

目的研究补肾中药对人成骨细胞增殖、分化、钙摄取和矿化能力的影响。方法用酶消化法从成人髂骨松质骨,分离人成骨细胞,以细胞形态学、碱性磷酸酶染色和体外成骨能力的检测鉴定成骨细胞。在成骨细胞培养液内分别加入含有高、中、低不同浓度的补肾中药鼠血清,以正常鼠血清作为对照。培养30min后,进行成骨细胞胞内钙离子变化的检测;培养3d后,用流式细胞仪检测成骨细胞增殖、分化情况;培养28d后,进行Von-Kossa染色,观察成骨细胞钙化结节的形成情况。结果与对照组相比,培养30min后,高、中、低3种浓度的补肾中药血清均能提高成骨细胞钙离子摄取能力;培养3d后,中药组处于增殖期的成骨细胞明显升高,和对照组相比具有明显的统计学差异。培养28d后,中药组成骨细胞钙化结节形成的数量也相对增多,其中,高浓度补肾中药血清处理组的钙化结节的数量与对照组相比有明显增加(P<0.05)。结论补肾中药血清能提高成骨细胞钙离子摄取能力,刺激成骨细胞增殖分化,增加成骨细胞钙化结节的形成。     

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法 取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果 加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论 补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。      

补肾中药骨灵片对人成骨细胞功能和p38活化原蛋白激酶通路的影响

目的探讨含补肾中药骨灵片大鼠血清对人成骨细胞功能和对p38活化原蛋白激酶通路的影响。方法取人髂骨松质骨，采用改良胰酶一胶原酶消化法分离培养人成骨细胞；根据血清药理学的方法制备不同浓度（低、中、高剂量）的骨灵片血清，并以生理盐水处理的大鼠血清为阴性对照，将制备好的血清加入第二代的人成骨细胞培养液中培养。采用Western—blot及Real timeRT—PCR的方法观察各组成骨细胞护骨素和护骨素配体基因表达和磷酸化p38含量，用MTT法测定各组成骨细胞增殖率。利用茜素红染色法测定矿化结节形成的数量。结果含骨灵片（低、中、高剂量）药液血清处理的大鼠血清均能上调成骨细胞护骨素基因表达。下调护骨素配体基因表达，刺激成骨细胞的增殖，增加矿化结节形成的数量，刺激p38磷酸化。结论补肾中药骨灵片可能通过p38活化原蛋白激酶通路调控护骨素以及护骨素配体的表达，促进成骨细胞增殖以及矿化结节形成，抑制骨破坏。维持骨平衡。     

大鼠脑内成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究大鼠脑组织固有成分对体外培养的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响，探讨合并脑外伤骨折愈合加快的可能原因。方法提取大鼠全脑、灰质、白质、垂体、肌肉、肝脏、大鼠血清等．制成匀浆提取液．体外培养大鼠成骨细胞．与空白培养液作对照观察大鼠各组织提取液对成骨细胞增殖、分化和矿化的作用。结果对成骨细胞增殖的影响：脑内灰质和白质成分较其他提取液显著促进成骨细胞增殖（P〈0．01）。其中灰质成分最为明显；对成骨细胞分化的影响：灰质，白质，血清成分对成骨细胞ALP活性的影响明显较其它各组高（P〈0．01），其中灰质成分为最高（P〈0．01）；对成骨细胞矿化的影响：肌肉组轻度抑制成骨细胞矿化结节形成（P〈0．05），其他各组无显著性差别。结论大鼠脑组织中灰质和白质能显著促进成骨细胞增殖和分化．尤以灰质为最强，但并不能明显促进成骨细胞矿化。脑外伤后脑组织内固有成分释放入血可能和合并脑外伤的骨折愈合加速有一定关系。     

麦胚提取物对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的影响

目的　探讨麦胚提取物对骨质疏松症的防治作用。方法　体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,然后用噻唑蓝 (MTT)法测定麦胚提取物对体外培养成骨细胞的增殖作用 ,氨基安替比林测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,茜素红染色方法 (ARS)研究对成骨细胞矿化的影响。结果　 0 10 g·L-1的麦胚提取物可以促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖和分化作用 ,0 5 0g·L-1促使成骨细胞矿化结节的形成。结论　麦胚提取物可以提高成骨细胞的增殖和分化 ,并有促进矿化的功能     

补肾中药诱导骨髓基质干细胞成骨分化的动物实验研究

目的通过动物实验于体外条件下观察补肾中药对大鼠骨髓基质干细胞增殖分化的影响。方法将不同浓度的补肾中药方剂与骨髓基质干细胞体外共同培养,测定细胞增殖功能,检测成骨细胞增殖与分化指标(包括碱性磷酸酶、矿化结节)。结果与空白组比较,浓度100 mg/L、200 mg/L的补肾中药在不同时间段均可提高骨髓基质干细胞增殖率(P<0.05);与空白组比较,浓度20 mg/L、40 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的补肾中药可使ALP活性增强、矿化结节数量增多(P<0.05)。结论较高浓度的补肾中药能促进骨髓基质干细胞的成骨潜能。     

Effects of kidney-tonifying Chinese herbal drugs on human osteoblast Ca2+ intake and mineralization in vitro]

OBJECTIVE: To study the effects of kidney-tonifying Chinese herbal drugs on Ca2+ intake and mineralization of human osteoblasts in vitro. METHODS: Human osteoblasts were isolated from the iliac trabecular bone followed by purification and culture at 37 degrees Celsius with 5% CO2. The cells were identified by cell morphology, calcium nodule formation and alkaline phosphatase (ALP) activity assay. The third passage of the cultured osteoblasts were treated with 10% scrum from rat fed with the decoction of the kidney-tonifying Chinese herbal drugs of different concentrations for 30 min, 3 d and 28 d, respectively. The cells treated with 10% rat serum without the drugs served as the control. Flow cytometry was used to observe the changes in cell proliferation and intracellular Ca2+ concentration, and von Kossa staining employed for quantification of the mineral nodules. RESULTS: The osteoblasts obtained were positive for ALP staining and could form calcium nodules in vitro. Flow cytometry showed that the drugs at different concentrations all increased Ca2+ influx, as compared with the control cells. The drugs also increased the relative proliferation index of the osteoblasts, and high concentration of the drugs resulted in greater number of the mineral nodules in the osteoblasts (P<0.05). CONCLUSION: The kidney-tonifying Chinese herbal drugs may increase Ca2+ influx and stimulate proliferation and differentiation of adult osteoblasts in vitro.     

骨灵片通过p38 MAPK信号通路影响成骨细胞功能的机制

目的 探讨骨灵片促进成骨细胞增殖、矿化以及基因表达的细胞信号通路.方法 用含有骨灵片的大鼠血清、p38MAPK抑制剂SB203580作用人成骨细胞MG-63,测定各组成骨细胞增殖率、矿化结节数量.采用Western-blotting及Real time RT-PCR方法观察各组成骨细胞护骨素(OPG)、护骨素配体(RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)基因表达和磷酸化p38含量.结果 经含骨灵片药液的大鼠血清作用后,MG-63细胞的增殖和矿化结节形成数明显增加,OPG基因表达增加,RANKL基因表达减少,OPG/RANKL比值显著增加,M-CSF有下降趋势,但没有显著性差异,同时刺激p38磷酸化.结论 骨灵片可能通过p38MAPK通路促进成骨细胞增殖以及矿化结节形成,调控OPG、RANKL以及M-CSF的表达,达到治疗骨质疏松症的作用.     

雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞生物学功能的影响及护骨素表达的调控

OBJECTIVE: To study the effect of raloxifene and estradiol on the biological function and osteoprotegerin expression of osteoblasts in vitro. METHODS: Different doses of raloxifene and estradiol were added into the medium of the second generation osteoblasts from the shull of newborn SD rats. The proliferation, differentiation, mineralization and osteoprotegerin expression of the osteoblasts in different groups were observed. RESULTS: Raloxifene had no significant effects on stimulating the proliferation, the expression of osteoprotegerin and the formation of mineral nodes of the cultured osteoblasts (the trial vs the control, P>0.05). However, raloxifene can significantly improve the alkaline phosphatase activity of the cultured osteoblasts (the trial vs the control, P<0.05). Estradiol significantly increased the proliferation of osteoblasts, and differentiation, mineralization, expression of osteoprotegerin (P<0.01 vs the control). CONCLUSION: The effects of raloxifene and estradiol on the cultured osteoblasts are different, which implied their different mechanisms in inducing osteoporosis.     

丹参对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的：了解丹参对SD大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法：取新生的SD大鼠头盖骨，胶原酶法培养成骨细胞，用MTT法来测定不同浓度丹参对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的促细胞增殖作用；采用碱性磷酸（ALP）活性观察上述药物的促细胞分化作用。结果：0．05％、0．10％、0．15％的丹参可促进成骨细胞增殖率提高（P〈0．05）；不同浓度丹参可使碱性磷酸酶（ALP）活性增强（P〈0．05）。结论：丹参具有促进成骨细胞增殖及分化的作用。     

补肾复方胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响

目的：观察补肾复方胶囊含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。方法：从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞进行培养,取第三代大鼠成骨细胞,分别予以5%、10%、20%浓度的含药血清和10%对照血清培养,测定成骨细胞的增殖率、碱性磷酸酶活性、骨钙素含量、矿化结节数目。结果：与对照组比较,除3d、6d的低浓度组外,其它各组、各时间点均可增加成骨细胞增殖,差异有统计学意义（P〈0.05或0.01）;除低浓度组培养24 h外,各浓度给药组培养24 h、48 h、72 h后,碱性磷酸酶分泌均呈不同程度增加（P〈0.05或0.01）;各浓度均可增加骨钙素的分泌（P〈0.05或0.01）,尤以高剂量组为显著（P值均〈0.01）;中、高浓度可以显著促进矿化结节形成,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：补肾复方胶囊含药血清在体外可以促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,为其治疗骨质疏松提供实验依据。     

饲补肾中药大鼠血清对成骨细胞-破骨细胞共育系中破骨细胞功能的影响

目的探讨喂饲补肾中药大鼠血清在成骨细胞-破骨细胞培养体系中对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法取SD大鼠的胎鼠颅骨与四肢骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,利用共育系使二者生活在同一环境中,施加高、中、低剂量的饲补肾中药大鼠血清,并与对照组及单独培养的破骨细胞进行比较,酶动力学法测定培养上清中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)的活性,利用甲苯胺蓝对骨吸收陷窝染色并在Leica Quantimet 500图像分析仪下测定骨吸收陷窝的面积和数目。结果共育系中对TRACP活力的抑制及骨陷窝面积与数目的减少以中剂量组作用最为明显(与对照组比较P<0.01),单独培养3个剂量组与对照组比较均有显著性差异(P<0.05),以中剂量组作用最为明显(P<0.01)。结论饲补肾中药大鼠血清可以抑制共育系中破骨细胞的骨吸收功能。     

健骨胶囊含药血清对体外培养成骨细胞增殖和分化作用的影响

[目的]观察健骨胶囊含药血清对体外培养新生大鼠成骨细胞增殖和分化的干预作用。[方法]三天给药法制备健骨胶囊含药血清;酶消化法由新生大鼠头盖骨体外分离和培养成骨细胞,应用MTT法测定增殖率及PNPP法测定ALP活性,来评价健骨胶囊对成骨细胞的增殖和分化的作用。[结果]健骨胶囊能提高体外成骨细胞的增殖率、提高ALP活性。[结论]健骨胶囊含药血清对成骨细胞体外增殖与分化具有刺激作用,为健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症提供血清药理学依据。     

雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞生物学功能的影响及护骨素表达的调控

目的 比较雌二醇与雷洛昔芬对体外培养成骨细胞的生物学作用及对护骨素(OPG)表达的影响。方法 在新生SD大鼠头颅骨第二代成骨细胞培养液中加入不同浓度的雷洛昔芬,并设立雌二醇阳性对照及空白血清对照组;分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能;半定量RT-PCR测定成骨细胞中OPG基因的表达。结果 体外培养成骨细胞在加入不同剂量的雷洛昔芬后,细胞增殖率(A₅₇₀)、OPG蛋白表达与空白对照组相比均无明显差异(P>0.05);但碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节数明显升高,与空白对照组相比差异显著(P<0.05,P<0.01),且与雷洛昔芬浓度呈量效关系;雌二醇对成骨细胞的A₅₇₀值、ALP活性、矿化结节数量、OPG表达等的影响和对照组相比均有显著差异(P<0.01)。结论 雌二醇对体外成骨细胞生物学功能的影响非常显著,并可上调OPG蛋白表达及表达量;雷洛昔芬对体外成骨细胞分化矿化均有影响,但对增殖影响不显著;对OPG表达也无明显影响。此结果提示雷洛昔芬影响骨代谢可能不通过OPG代谢途径,它对体外成骨细胞的作用机制与雌二醇不完全相同。