Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂MS-275对间充质干细胞C3H/10T1/2成脂分化的影响

目的探讨Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)MS-275对间充质干细胞(mesen-chymal stem cells,MSCs)成脂分化的影响。方法利用噻唑蓝(MTT)和碘化乙啶(PI)染色结合流式细胞术(FCM)分别检测不同浓度MS-275对C3H/10T1/2细胞活性和细胞周期的影响;油红O染色分析MS-275对C3H/10T1/2细胞成脂分化能力的影响;同时应用实时定量PCR(real-time PCR)检测MS-275对成脂分化标志物:脂结合蛋白(aP2)、围脂素(perilipin)、脂联素(Adipoq),以及成脂分化关键转录因子:过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA转录水平的影响。结果随着MS-275浓度升高,其对C3H/10T1/2细胞的抑制率也随着增高,IC50约为8μmol/L(P<0.05);流式结果表明,MS-275将C3H/10T1/2细胞周期阻滞在G0/G1期;0.5μmol/L的MS-275明显减少C3H/10T1/2细胞的脂滴积累;同时成脂分化标志物aP2、perilipin、Adipoq及成脂关键转录因子PPAR-γ2的转录水平也显著降低(P<0.05)。结论 MS-275减弱了间充质干细胞成脂分化的能力,表明抑制Ⅰ型HDACs的活性可部分抑制MSCs向成脂分化。     

杜仲诱导大鼠bMSCs分化早期成骨/成脂相关基因表达变化

目的：观察杜仲醇提取物诱导骨髓间充质干细胞（bMSCs）分化早期成骨/成脂相关基因表达变化。方法：培养大鼠bMSCs,用杜仲醇提取物分别诱导bMSCs 8 h,1、3、7 d,采用荧光定量PCR（RT-qFCR）的方法检测成骨相关基因Id4、Runx2、ALP和成脂相关基因PPARγ、Adipoq、aP2的表达变化。结果：Id4诱导3 d后表达略有上调;Runx2基本无变化;ALP诱导7 d后显著升高;PPARγ和aP2诱导3 d达最高峰,然后下调;Adipoq诱导7 d显著上调。结论：杜仲对bMSCs的成骨/成脂分化具有双重调节作用,提示杜仲醇提取物中既含有促成骨分化,也含有促成脂分化的成分。     

小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2的多向分化潜能研究

目的 建立小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2细胞成肌、成脂、成内皮、成神经元分化的细胞实验模型.方法 用化学诱导剂5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2细胞成肌、成脂,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合诱导C3H/10T1/2细胞成内皮,bFGF、β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)、DMSO诱导C3H/10T1/2细胞成神经元细胞分化.诱导期间应用细胞形态学观察、油红"O"染色、免疫细胞化学染色检测内皮细胞表面标志CD31和神经元特异性烯醇化酶(oeuron-specific enolase,NSE)对分化细胞进行鉴定.结果 5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2 10 d后细胞变长,17 d后可见明显肌管形成,15 d少量细胞出现脂滴,25 d油红"O"染色见细胞质大量红色脂滴;VEGF和bFGF诱导5 d后细胞呈现"鹅卵石"样形态,8 d后阳性表达CD31;bFGF、β-巯基乙醇和DMSO联合诱导3 d后细胞胞体收缩,突起变长,15 d NSE染色阳性.结论 C3H/10T1/2细胞具有多向分化的潜能,可用作研究间充质干细胞生物学特性的模型.     

非甾体类消炎药双氯芬酸抑制间充质干细胞向肌腱细胞增殖分化的研究

目的 探讨NSAIDs对间充质干细胞向肌腱细胞增殖分化过程的影响。方法体外建立鼠间充质干细胞系C3H10T1/2的肌腱细胞分化模型;CCK-8比色法分别检测双氯芬酸(diclofenac,DF)对间充质干细胞增殖的影响;用生长分化因子-7(growth differentiation factor,GDF-7)诱导鼠间充质干细胞系C3H10T1/2分化为肌腱细胞;PCR检测间充质干细胞分化过程中肌腱细胞相关基因(腱调蛋白、胶原蛋白)的表达。PCR分别检测DF对间充质干细胞分化过程中相关基因[腱调蛋白、脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(aP2)]表达的影响。结果成功建立鼠间充质干细胞系C3H10T1/2的肌腱细胞分化模型;DF高浓度时明显抑制间充质干细胞增殖(24 h:t=2.357,3.524,P0.05。72h:t=3.217,3.592,P0.05);GDF-7成功诱导鼠间充质干细胞系C3H10T1/2分化为肌腱细胞,肌腱细胞相关基因表达明显增加(腱调蛋白:t=124.107,P0.05;Ⅰ型胶原蛋白α_1:t=38.107,P0.05);DF对间充质干细胞分化过程中抑制了肌腱基因的表达(DF:腱调蛋白:t=31.758,P0.05),增强了脂肪相关基因的表达[(DF:脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(aP2):t=97.735,P0.05)]。结论高浓度时DF抑制间充质干细胞增殖,改变间充质干细胞分化方向,不利于肌腱细胞再生修复。     

淡豆豉异黄酮通过影响Sox2对C3H10T1/2细胞增殖和分化的影响

目的探讨淡豆豉异黄酮通过影响Sox2对C3H10T1/2细胞增殖和分化的影响。方法选取间充质干细胞株C3H10T1/2为研究对象,不同浓度淡豆豉异黄酮(0、10、100、1 000μg/L)处理C3H10T1/2细胞,并同步联合成骨诱导液诱导成骨细胞分化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测C3H10T1/2细胞增殖情况,采用碱性磷酸酶(ALP)活性实验鉴定C3H10T1/2细胞成骨分化情况,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法及蛋白印迹法检测C3H10T1/2细胞中Sox2 m RNA及蛋白表达情况。构建p EGFP-N1-Sox2过表达载体,利用脂质体2000向C3H10T1/2细胞转染重组质粒,分析Sox2过表达对C3H10T1/2细胞增殖和成骨分化的影响。结果 MTT检测结果可见,10、100、1 000μg/L淡豆豉异黄酮可明显抑制C3H10T1/2细胞增殖,且呈现一定时间、剂量依赖性(P0.05);10、100、1 000μg/L淡豆豉异黄酮可明显促进C3H10T1/2细胞成骨分化,且呈一定剂量依赖性(P0.05);10、100、1 000μg/L淡豆豉异黄酮可明显抑制C3H10T1/2细胞中Sox2 m RNA及蛋白表达,且呈一定剂量依赖性(P0.05);Sox2过表达可明显促进C3H10T1/2细胞增殖,抑制成骨细胞分化。结论淡豆豉异黄酮可能是通过下调Sox2表达,发挥抑制C3H10T1/2细胞增殖,促进成骨细胞分化作用。     

Dkk1对骨形态发生蛋白9诱导间充质干细胞成骨分化的影响

目的：探讨经典Wnt信号通路胞外拮抗因子Dkk1对骨形态发生蛋白9（bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）成骨分化的影响。方法：以C3H10T1/2为目的细胞,通过重组腺病毒介导BMP9过表达,联用重组腺病毒Dkk1抑制经典Wnt信号通路。检测各处理组碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性变化、钙盐沉积、骨钙素（osteocalcin,OC）、骨桥素（osteopontin,OPN）变化;体内异位成骨实验分析Dkk1对BMP9诱导MSCs成骨分化的影响。结果：BMP9可诱导C3H10T1/2细胞成骨分化;Dkk1显著降低BMP9诱导的C3H10T1/2细胞ALP活性（F=1 467.21,P=0.000）、钙盐沉积、OC（F=32.95,P=0.000）和OPN（F=127.23,P=0.000）蛋白表达;异位成骨模型中Dkk1抑制BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化和骨块成熟。结论：Wnt信号通路胞外拮抗因子Dkk1可降低BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化,BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化可能需要经典的Wnt信号通路参与。     

γ射线联合2450MHz电磁辐射对C3H10T1/2细胞生长和恶性转化的影响

目的:观察γ射线和2450 MHz电磁联合辐射对C3H10T1/2小鼠胚芽细胞增殖能力、恶性转化、细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:将C3H10T1/2细胞按电磁辐射强度随机分为对照组(0mW/m2)、电磁辐射低剂量组(15mW/m2)、中剂量组(30mW/m2)和高剂量组(50mW/m2),联合组同时给予6Gy的γ射线照射。检测C3H10T1/2小鼠胚芽细胞转化、细胞周期和凋亡情况;用免疫组化和图像分析技术检测细胞Bax蛋白表达。结果:与对照组相比,单纯电磁辐射处理的细胞存活率和细胞转化未发生改变,γ射线与高剂量电磁辐射联合组存在恶性转化。γ射线组和复合组于辐射后3hS期细胞显著减少,G0/G1期细胞比例明显升高,电磁辐射组细胞凋亡率轻度增高,而γ射线组和复合组则升高较为显著,且复合组引起细胞的凋亡率升高较单纯γ射线组更明显,照射后Bax表达增强。结论:γ射线与电磁辐射复合照射后C3H10T1/2细胞发生恶性转化、细胞周期和凋亡,2450MHz电磁辐射可进一步加强γ射线对细胞恶性转化、细胞周期及凋亡的诱导作用。Bax在γ射线和2450MHZ电磁联合辐射导致C3H10T1/2细胞发生凋亡且较单纯组加重方面起重要作用。     

2型糖尿病患者脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力的实验研究

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者与健康者脂肪间充质干细胞(ADSCs)成脂肪分化能力.方法 取T2DM患者与健康者脂肪组织,分离培养出ADSCs.取第3代细胞接种,比较两组细胞细胞表型及生长速度的差异.加入成脂肪诱导液,观察两组细胞成脂肪分化情况,于第14天加入油红O对细胞进行染色并观察,用异丙醇对油红O进行萃取并比较两组细胞吸光度值,通过实时荧光定量(PCR)法比较两组细胞成脂肪分化14 d时PPAR-γ、C/EBP-α和C/EBP-β的表达水平.结果 T2DM患者和健康者ADSCs在细胞表型及生长速度方面比较差异无统计学意义(P＞0.05),成脂肪诱导分化14 d时T2DM患者ADSCs油红O吸光度值明显高于健康者ADSCs,T2DM患者ADSCs PPAR-γ、C/EBP-a、C/EBP-β表达水平明显高于健康者ADSCs.结论 T2DM患者ADSCs成脂肪分化能力明显高于健康者,其可能是T2DM患者容易并发肥胖的原因之一.     

叶酸对人脂肪间充质干细胞成脂分化的影响

目的 探讨叶酸对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)成脂分化过程的影响及机制.方法 以正常叶酸(Control)和无叶酸(FD)成脂诱导液对hADSCs细胞进行成脂诱导,不同时间分别采用油红O染色观察细胞内脂滴生成情况;采用SYBR Green实时荧光定量RT-PCR方法检测成脂分化相关转录调控基因PPARγ和C/EBPα的表达;采用蛋白质印迹法检测PPARγ蛋白的表达.结果 与正常叶酸组相比,无叶酸组脂滴数量明显减少;两组细胞成脂分化相关转录调控基因PPARγ和C/EBPα mRNA表达无明显差异;PPARγ蛋白表达明显低于正常叶酸组.结论 叶酸可通过上调PPARγ的表达而促进hADSCs细胞成脂分化.     

白藜芦醇增加脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制探讨

目的 探讨白藜芦醇增加脂肪细胞3T3-L1中脂联素表达的作用机制.方法 设立空白对照组、白藜芦醇组、肿瘤坏死因子(TNF-α)组及白藜芦醇+TNF-α组.用白藜芦醇、TNF-α或者二者联合处理3T3-L1脂肪细胞.用酶联免疫吸附法测定脂联素水平;实时定量PCR测定脂联素和过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR-γ)mRNA水平;用PPAR-γ转录因子试剂盒测定PPAR-γ活性.结果 与空白对照组比较,白藜芦醇组中PPAR-γ及脂联素mRNA在3T3-L1脂肪细胞中的表达增加(P＜0.05);TNF-α组中脂联素mRNA表达及释放减少(P＜0.05).与TNF-α组比较,白藜芦醇+TNF-α组中脂联素mRNA的表达及分泌增加(P＜0.05);白藜芦醇拮抗TNF-α对分化3T3-L1脂肪细胞中PPAR-γ mRNA表达及活性抑制(P＜0.05).结论 白藜芦醇能够通过调节PPAR-γ的转录活性继而拮抗TNF-α诱导下调3T3-L1脂肪细胞中脂联素的表达及分泌.     

BMP9对C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化的影响

目的:研究骨形态形成蛋白9(Bone morphogenetic proteins 9,BMP9)在C3H10T1/2干细胞向心肌细胞分化过程中的影响.方法:以高滴度(2.67 ml/L)pAdEasy-BMP9重组腺病毒质粒转染C3H10T1/2干细胞,1周后应用RT-PCR方法及激光共聚焦方法分别检测C3H10T1/2干细胞中心肌特异转录因子及特异性蛋白的表达变化.2周后应用电子显微镜观察细胞超微结构的改变.结果:C3H10T1/2干细胞经pAdEasy-BMI9重组腺病毒质粒诱导1周后,细胞体积明显变大,排布走向趋于一致,细胞间连接紧密,折光性增强;细胞中开始出现心肌特异性转录因子NKx 2.5、GATA-4、MEF2C及心肌特异性表达蛋白连接蛋白43(Connex-in43,Cx43)和心肌特异性肌钙蛋白T(Cardiac isoform ofTropnin T,cTnT)的表达;出现心肌特异性超微结构肌丝和闰盘结论:BMP9可影响体外培养的C3H10T1/2干细胞定向分化为心肌样细胞.     

CCN家族在Wnt3a抑制多潜能干细胞C3H10T1/2细胞脂肪分化中的作用

目的:探究CCN家族在Wnt3a抑制鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2细胞脂肪分化过程中的作用,为干预肥胖提供新思路。方法:用激素混合物(IDM)诱导多潜能干细胞C3H10T1/2向脂肪细胞分化,观察Wnt3a对脂肪分化的抑制作用及脂肪细胞分化过程CCN家族的作用。实时定量RT-PCR分析CCN家族和PPARγ基因表达,用油红O染色观察脂肪分化程度,免疫荧光观察脂肪分化过程中细胞间基质的变化。结果:Wnt3a抑制由IDM诱导的脂肪细胞分化。分子水平上,Wnt3a显著抑制脂肪分化关键因子PPARγ的基因和蛋白表达;而IDM诱导CCN家族,尤其是CCN5基因表达的丧失,可部分被Wnt3a所逆转。结论:Wnt3a抑制C3H10T1/2的脂肪分化,至少部分归结于其对由IDM诱导的CCN家族,尤其是CCN5表达丧失的逆转。     

联合表达BMP2和Sox9促进体外培养间充质干细胞成软骨分化

目的探讨联合表达骨形态发生蛋白2（BMP2）和Sox9对间充质干细胞（MSCs）成软骨分化的影响,为构建组织工程软骨
提供实验依据。方法以小鼠胚胎骨髓MSCs（C3H10T1/2）为种子细胞,重组腺病毒BMP2诱导其分化,联用重组腺病毒Sox9
过表达Sox9信号,重组腺病毒GFP作为对照。Real-Time PCR检测成软骨标志物Ⅱ型胶原（Col2a1）、蛋白聚糖（Aggrecan）、X
型胶原（Col10a1）表达变化;Alcian blue染色了解细胞基质糖胺聚糖合成情况;免疫组化和Western blotting检测Col2a1合成情
况。结果BMP2 能诱导C3H10T1/2 细胞成软骨分化,当与Sox9 联合作用时,Sox9 可促进BMP2 诱导的（Col2a1、Aggrecan、
Col10a1）基因表达上调;促进细胞基质糖胺聚糖、Col2a1蛋白合成。结论BMP2与Sox9联合作用可以促进体外培养MSCs成
软骨分化,可能为组织工程软骨提供新的方法。
     

白藜芦醇对C3H10T1/2间质干细胞成骨分化及CXCL12、EGFR和CCL2基因表达的影响

目的 探讨白藜芦醇对C3H10T1/2细胞成骨分化的作用及CXCL12、EGFR和CCL2基因表达的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度白藜芦醇对C3H10T1/2细胞增殖影响,碱性磷酸酶染色鉴定早期成骨分化,实时荧光定量PCR法检测CXCL12、EGFR和CCL2基因的表达。结果 白藜芦醇在20μmol/L浓度对C3H10T1/2细胞增殖没有影响(P>0.05),随着浓度增加,40、80、100μmol/L的白藜芦醇明显抑制细胞增殖(P<0.05)。20μmol/L白藜芦醇能增强重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)诱导C3H10T1/2的碱性磷酸酶染色。白藜芦醇对C3H10T1/2细胞CXCL12、EGFR、CCL2基因表达没有明显影响(P>0.05)。结论 白藜芦醇能促进rhBMP-2诱导成骨分化。促成骨分化作用可能不是通过调控CXCL12、EGFR和CCL2基因的表达来实现。     

四甲氧基二苯乙烯抑制多潜能干细胞C3H10T1/2的脂肪分化

目的探讨不同浓度CYP1B1抑制剂TMS（2,3’,4,5’,-四甲氧基二苯乙烯）对于C3H10T1/2多潜能干细胞脂肪分化及相关
基因表达的影响。方法体外培养C3H10T1/2细胞株至完全融合后,接触抑制2 d,用激素刺激混合物（IDM）（10 μg/ml胰岛素,
2 μmol/L地塞米松和0.5 mmol/L 3-异丁基1-甲基黄磦呤）诱导分化,同时加入不同浓度TMS（0,1.0,2.0、4.0 μg/ml）。观察各组
细胞分化程度,脂肪分化关键转录核因子——过氧化物酶体增殖物活化受体（PPARγ）及其下游靶基因CD36、脂肪酸结合蛋白4
（FABP4）的的表达状况。结果油红和TG含量测定结果显示,CYP1B1选择性抑制剂TMS可剂量依赖地抑制IDM诱导的多潜
能干细胞C3H10T1/2向脂肪细胞分化;这一作用源于TMS抑制转录核因子PPARγ的转录和蛋白表达以及下游靶基因CD36与
FABP4表达。结论TMS抑制由IDM诱导的多潜能干细胞C3H10T1/2向脂肪细胞分化。
     

硫酸软硫骨素对3T3-L1细胞增殖和分化的影响

目的 研究硫酸软骨素对3T3-L1前脂肪细胞增殖及分化的影响,并对其机制进行初步探讨.方法 噻唑蓝法观察0、5、10、25、50、100、200 mg/L浓度的硫酸软骨素对3T3-L1细胞增殖能力的影响;3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,实验组加入硫酸软骨素干预,诱导分化第8天油红O染色观察脂肪细胞分化程度;荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4) mRNA表达水平;Western blot检测脂肪细胞分化过程中PPARγ、C/EBPα和Smad3蛋白表达.结果 硫酸软骨素对3T3-L1细胞的促增殖作用呈剂量和时间相关性,其中25 mg/L的硫酸软骨素作用24 h后对3T3-L1细胞的促增殖作用最大.硫酸软骨素能够抑制3T3-L1细胞成脂分化,减少脂滴聚集.并且硫酸软骨素能够下调PPARγ、C/EBPα和FABP4 mRNA,抑制PPARγ和C/EBPα、上调Smad3蛋白表达水平.结论 在适当浓度范围内硫酸软骨素具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过激活Smad3、下调PPARγ和C/EBPα抑制成脂.     

BMP2诱导C3H10T1／2细胞成软骨分化的分子机制研究

目的：探讨骨形态发生蛋白2（BMP2）诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1／2向成软骨分化的可能分子机制。方法：20μg／mLBMP2诱导C3H10TI／2细胞0,4h,1,3,6,10,13,15d后,RT—PCR检测BMP信号通路中关键分子BMPRI,BMPRII,Smadl／5／8的表达,Westernblot检测smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT—PCR检测成软骨标志基因aggrecan,Col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平,同时用Alcine Blue染色,观测C3H10T1／2细胞成软骨分化情况。结果：经BMP2诱导后,C3H10T1／2细胞表现出成软骨分化,smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成软骨标志基因col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平都有增加。与未诱导组相比,Col2a1,FGFR3,Sox9在3d的表达与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,FGFR3,Sox9在6d的表达与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：在一定培养条件下,BMP2具有诱导C3H10T1／2细胞成软骨分化能力。     

C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的表达及调控

[目的]在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨miR-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示miR-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础.[方法]选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2％FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2％FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组.分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色.[结果]与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P＜0.05).成软骨分化关键启动因子SOX-9及相关基因aggrecan,collagen Ⅱ,Collagen Xa1的表达均在2周时显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).通过互联网生物信息学预测CCND1可能是miR-19a的靶基因;在成软骨分化过程中,miR-19a表达逐渐上升(P＜0.05),而CCND1的表达与对照组相比逐渐下降(P＜0.05).甲苯胺蓝染色pellet细胞微球呈蓝紫色,细胞核呈深蓝色,诱导组中细胞外基质含量明显增多.[结论]在C3H10T1/2成软骨分化过程中,miR-19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降低,分化能力得到增强;且miR-19a参与该分化调控过程.     

PAQR9对棕色脂肪产热及UCP1表达的影响

目的 初步探究孕激素和脂联素受体家族成员9（progestin and adipoQ receptor family member 9,PAQR9）对棕色脂肪产热及解偶联蛋白1（uncoupling protein 1,UCP1）表达的影响。方法 选取C57BL/6J小鼠的白色脂肪组织（white adipose tissue,WAT）、棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）及前棕色脂肪细胞系DE2-3和间充质干细胞C3H10T1/2细胞系进行研究。实时荧光定量PCR技术检测不同条件下PAQR9及UCP1的mRNA水平,蛋白免疫印迹法检测UCP1的蛋白质水平。实时荧光定量PCR技术和油红O染色法检测脂肪细胞的成脂分化情况。结果 C57BL/6J小鼠BAT中PAQR9的mRNA水平显著高于WAT。冷刺激诱导下,BAT和腹股沟皮下WAT中PAQR9的mRNA水平显著升高。DE2-3细胞诱导分化成熟即第6天时,PAQR9的mRNA水平显著高表达。在DE2-3细胞中过表达PAQR9,UCP1的mRNA水平显著上调,细胞耗氧量显著增加,而DE2-3细胞成脂分化功能无显著性差异。在DE2-3细胞中敲低PAQR9,UCP1的mRNA水平显著下调。在C3H10T1/2细胞第4~6天脂肪细胞分化成熟时,PAQR9的mRNA水平显著上调,在敲低PAQR9后UCP1蛋白质水平下调,而C3H10T1/2细胞成脂分化功能无显著性差异。结论 PAQR9能够促进棕色脂肪细胞产热,调控产热基因UCP1的表达。     

新型非病毒纳米基因载体PEI-β-CyD对软骨细胞和骨髓间充质干细胞转染有效性评估

目的评估新型非病毒纳米基因载体聚乙烯亚胺-β-环糊精(PEI-β-CyD)对软骨细胞系C5.18和骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2转染的有效性。方法体外培养软骨细胞系C5.18和骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2,MTT法观察并比较PEI-β-CyD和相对分子质量为25 000的聚乙烯亚胺(PEI25KDa)对C5.18细胞和C3H10T1/2细胞的细胞毒性。在不同的N/P(载体有效氮含量/外源基因有效磷含量)复合条件下,利用PEI-β-CyD和PEI25KDa分别转染C5.18细胞和C3H10T1/2细胞,倒置荧光显微镜结合流式细胞仪分析转染效率。结果 PEI-β-CyD对C5.18细胞和C3H10T1/2细胞的细胞毒性均小于PEI25KDa。PEI-β-CyD与PEI25KDa对C5.18细胞的转染效率比较,差异无统计学意义(P>0.05);PEI-β-CyD对C3H10T1/2细胞的转染效率显著高于PEI25KDa(P<0.05)。结论 PEI-β-CyD对于软骨细胞系C5.18及骨髓间充质干细胞系C3H10T1/2是一种低毒有效的非病毒纳米基因载体,在软骨组织工程和细胞治疗研究及应用领域具有良好...