三氧化二砷对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞的作用

目的:研究三氧化二砷(AS2O3)在体外对人骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用细胞形态学、MTT法、DNA凝胶电泳、RT-PCR、诱导分化检测、流式细胞术等多参数分析.结果:①低浓度AS2O3(0.05～0.25 μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用,细胞培养2周后,细胞阳性表面抗原CD38、CD7、CD10、HLA-DR表达明显下降(P<0.05),粒系分化抗原CD11b无明显表达增多(P>0.05).②AS2O3 1.0～20.0 μmol/L对MUTZ-1细胞有凋亡作用,且呈浓度依赖(r=-0.999,P<0.05).bcl-2 mRNA随AS2O3浓度增加表达明显下调(P<0.05),bcl-2/bax比例明显下降(P<0.05).结论:0.05～0.25 μmol/L AS2O3对MUTZ-1细胞可能具有部分分化作用;1.0～20.0 μmol/L AS2O3主要通过诱导凋亡使MUTZ-1细胞死亡.     

三氧化二砷对HL-60细胞生长的影响

目的：观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对HL－60细胞生长的作用。方法：采用瑞氏染色油镜观察细胞形态；四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法观察As2O3对HL－60细胞的生长抑制作用。结果：瑞氏染色显示低浓度的As2O3（0.1μmol/L,1.0μmol/L）诱导后，细胞呈现部分分化现象，而高浓度的As2O3（5．0μmol/L）诱导后细胞呈现凋亡特征，As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长，第1天半数抑制率（IC50）约为20．0μmol/L，第2天、第3天IC50均约为5．0μmol/L。结论：As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长；低浓度者可诱导HL－60细胞部分分化，高浓度者可诱导其凋亡。     

三氧化二砷联合偏钒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)联合偏钒酸钠(NaVO3)对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测不同浓度的As2O3、NaVO3单药或联合(1×10-8 mol/L NaVO3联合5×10-3 mol/LAs2O3)对HL-60细胞的生长抑制作用;琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察不同处理组中细胞核的变化;以AnnexinV/PI双染色流式细胞术检测5×10-3mol/L As2O3、1×10-8 mol/L NaVO3单药或联合对HL-60细胞凋亡的影响.结果 MTT结果显示As2O3能抑制HL-60细胞的增殖,并呈剂量和时间效应;低浓度的NaVO3促进细胞增殖,高浓度(≥1×10-8 mol/L)的NaVO3抑制细胞的生长;两药联合抑制作用强于对应浓度单药抑制作用(P＜0.05).HL-60细胞经As2 O3和较高浓度(≥1×10-8 mol/L)的NaVO3处理24 h后均可见到DNA梯形条带.Hoechst 33258染色结果发现HL-60细胞经As2O3和较高浓度(1×10-9 mol/L NaVO3)的NaVO3处理24 h后可见细胞核呈现核浓缩现象.流式细胞术结果显示5×10-3 mol/L As2O3和1×10-8 mol/LNaVO3联合作用于HL-60细胞所诱导的早期凋亡细胞显著多于单独用药(P＜0.05).结论 As2O3及浓度大于1×10-8 mol/L NaVO3均可有效地抑制体外白血病细胞HL-60的增殖并诱导细胞凋亡,两药联合对于抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡具有加强作用.     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及其对bcl-2基因和bax蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导胃癌细胞凋亡及其对bcl-2基因、bax蛋白表达的影响。方法分别以0μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L浓度的As2O3作用于胃癌SGC-7901细胞24 h、48 h和72 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法检测各组吸光度值、细胞生长抑制率,采用流式细胞仪(FCM)检测bcl-2基因和bax蛋白的表达情况。结果随着As2O3浓度的增高及作用时间的延长,MTT吸光度值逐渐降低,1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L组分别与0μmol/L组比较,不同作用时间MTT吸光度值比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。1μmol/L的As2O3对细胞增殖抑制作用较小,随着As2O3浓度的增高及作用时间的延长,细胞增殖抑制率相应增加,2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L组分别与1μmol/L组比较,不同作用时间细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度的As2O3作用于SGC-7901细胞后,bcl-2基因呈低表达,bax蛋白呈高表达,bcl-2/bax比值降低且呈剂量依赖性,不同浓度As2O3组与对照组bcl-2基因、bax蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3对胃癌细胞的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与下调bcl-2基因表达,上调bax蛋白表达从而诱导胃癌细胞的凋亡有关。     

三氧化二砷对人胃癌MKN45细胞凋亡的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人胃癌细胞的生物学效应及其作用机制。方法胃癌细胞经As2O3处理后,用台盼蓝方法检测As2O3的IC50,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、DNA电泳检测细胞凋亡。结果As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制胃癌细胞生长,其IC50为(11.05±0.25)μmol/L。经1～10μmol/LAs2O3处理胃癌细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带。结论As2O3在体外可诱导胃癌细胞的凋亡,这是其对胃癌细胞产生生物学效应的基础。     

三氧化二砷对人肺癌A549细胞凋亡及耐药基因表达影响的实验研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人肺癌细胞株的诱导凋亡作用及对耐药基因LRP表达的影响。方法:选用人肺腺癌A549细胞株,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人肺癌细胞株抑制及诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测LRPmRNA的表达。结果:As2O3对人肺癌A549细胞具有抑制作用,其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1.0μmol/L、3.0μmol/L的As2O3可下调LRP mRNA的表达。结论:As2O3具有抑制肿瘤细胞生长及诱导细胞凋亡作用,其机制与下调LRPmRNA表达有密切关系。     

As2O3对ALL Caspase-3原代细胞的作用及作用机制的研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对急性淋巴细胞白血病(ALL)原代白血病细胞的作用及作用机制,为As2O3在急性淋巴细胞白血病中的应用提供实验依据.方法 采用MTT法检测As2O3对ALL原代白血病细胞生长的抑制作用;结果As2O3浓度为1.0-10.0μmol/L的As2O3可以明显抑制ALL原代白血病细胞的生长,并呈时间与浓度依赖性.结论 As2O3可诱导ALL原代细胞凋亡; As2O3通过激活Caspase-3诱导ALL原代细胞凋亡.     

砷剂对乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADR 细胞生长抑制作用的比较研究

目的:探讨As2O3对人乳腺癌MCF-7细胞和多药耐药MCF-7/ADR细胞生长抑制作用的差异.方法:采用MTI还原法、光镜、电镜和流式细胞术等方法检测As2O3对MCF-7和MCF-7/ADR细胞的生长抑制作用和诱导凋亡的情况.结果:As2O3对MCF-7和MCF-7/ADR细胞均有生长抑制作用,并呈时间剂量依赖关系,96h的IC50值分别为3μmol/L和12.8μmol/L,形态学检测显示其抑制作用主要源于凋亡;在相同作用时间及浓度下,As2O3对MCF-7细胞的抑制率显著高于MCF-7/ADR细胞,起效时间亦早于后者.结论:As2O3能诱导乳腺癌MCF-7和MCF-7/ADR细胞凋亡;MCF-7/ADR细胞虽对As2O3表现耐药,但耐药倍数较低(4.27).     

As2O3引起LoVo细胞内钙离子浓度增高及意义

目的　观察LoVo细胞株经As2 O3 作用后细胞内钙离子浓度的改变并探讨其意义。方法　应用流式细胞仪观察亚二倍体细胞峰并检测LoVo细胞内的钙离子浓度。应用光镜、电镜观察As2 O3 对LoVo细胞生长的抑制作用、凋亡细胞形态和线粒体形态。结果　①As2 O3 引起细胞内Ca2 +浓度升高 (P <0 .0 1) ,呈剂量依赖关系 (P<0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 .0 μmol/L组Ca2 +浓度最高 ;②在各时间段 ,对照组的Ca2 +浓度无变化 (P >0 .0 5 ) ,而经As2 O3 作用后Ca2 +浓度出现变化 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,在 2 0min时Ca2 +浓度均已增高 ,10h时增高最明显 ,至 2 4h ,0 .5 μmol/LCa2 +浓度回复到 2 0min时的水平 ,1.0和 2 .0 μmol/L组则低于 2 0min时的浓度 ;③As2 O3 抑制LoVo细胞生长 ;④LoVo细胞经As2 O3 作用后在光镜、电镜下出现细胞凋亡的形态学改变 ,并见线粒体肿大、嵴破坏或消失。流式细胞仪检测发现高浓度组凋亡细胞数高于对照组和低浓度组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。结论　As2 O3 作用于LoVo细胞引起细胞内钙离子浓度增高 ,可能通过引起线粒体功能的改变而诱导细胞凋亡。     

顺铂、三氧化二砷对人卵巢癌细胞的作用研究

目的:探讨顺铂(DDP)、三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞 HO-8910 的联合作用及其分子生物学机制.方法:采用形态学方法研究 DDP、As2O3 对细胞增殖的影响,免疫化学染色法检测基因表达.结果:1.联合作用时,As2O3 浓度在 1.5μmol/L 以上、DDP浓度在2μmol/L 以上时,有显著性差异;当三氧化二砷、顺铂浓度分别是12μmol/L、4μmol/L 时,72h 时癌细胞接近100%死亡.2.DDP、As2O3 引起HO-8910 细胞 p53 基因表达增强.结论:DDP、As2O3对人卵巢癌细胞 HO-8910的生长有协同抑制作用;DDP、As2O3 联合作用引起卵巢癌细胞凋亡的机制与 p53 基因表达增强有关.     

磷酸氟达拉滨对MUTZ-1细胞作用及机制研究

目的：在体外研究磷酸氟达拉滨（fludarabine）对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞的作用以及可能的作用机制。方法：采用MTT法、透射电境、DNA凝胶电泳、流式细胞仪以及RT-PCR等分析方法。结果：磷酸氟达拉滨能抑制MUTZ-1细胞的生长，24、48、72h的IC50分别为137．65mg／L、6．27mg／L、0．51mg／L，具有浓度和时间依赖性。经透射电境、DNA凝胶电泳和Annexin、V／PI检测，证实1～16mg／L磷酸氟达拉滨对MUTZ-1细胞作用24h后，可以诱导MUTZ-1细胞凋亡，其对Bcl-2、Bax、survivin、XIAP、cIAP1和cIAP2基因mRNA表达均无明显下调作用，但可以导致MUTZ-1细胞线粒体膜电位的下降。结论：1mg／L～16mg／L磷酸氟达拉滨不但能抑制MUTZ-1细胞生长而且能诱导细胞凋亡，诱导细胞凋亡是其主要细胞毒作用之一。线粒体膜电位下降是其诱导细胞凋亡的重要环节之一。     

不同浓度As2O3对293t细胞和HeLa细胞的凋亡及增殖的影响

目的初步研究三氧化二砷(As2O3)作为急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)的治疗剂和环境污染物的毒副作用.方法用As2O3作用于293t细胞和HeLa细胞不同时间后,用流式细胞仪、Hoechst33258染色、形态学和超微结构观察检测细胞凋亡和增殖;检测293t细胞增殖用细胞记数板连续记数6天.结果 3～5μmol/L As2O3作用24h可诱发HeLa细胞发生凋亡,而293t则不发生明显的凋亡.低浓度As2O3(<2μmol/L)可抑制293t细胞增殖.结论不同浓度的As2O3对HeLa细胞和293t细胞的增殖和凋亡作用不同.     

氧自由基对内皮祖细胞的损伤及槲皮素的保护作用

目的研究氧自由基对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的损伤及槲皮素(quercetin,Que)的保护作用。方法分离并诱导分化人脐血EPCs,随机分为对照组、过氧化氢(H2O2)组:加入500μmol/L的H2O2建立氧化应激损伤EPCs模型、Que干预组:先分别加入浓度为60μmol/L、90μmol/L、120μmol/L的Que预处理30min后,后加500μmol/L H2O2共同培养。培养24h及48h后使用WST-1法观察EPCs增殖情况。结果与空白对照组比较,60～90μmol/L的Que可以促进EPCs增殖,120μmol/L的Que则表现出抑制EPCs增殖的作用,与培养24h比,在48h对EPCs的抑制作用较为明显。差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,H2O2组EPCs增殖能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。加入60～120μmol/L的Que处理后,损伤后EPCs的细胞增殖能力得到明显改善,且具有明显的时间和浓度依赖性,与H2O2组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论氧化应激损害内皮祖细胞的增殖能力,而槲皮素有显著的改善作用。     

As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对恶性淋巴瘤CA46细胞株增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨。方法磺酰罗丹明B（SRB）法观察不同浓度（O．625,1．25,2．5,5．0,10．0,20．0μmol／L）As2O3分别处理24,48,72,96h后CA46细胞系生长曲线,并计算上述各浓度As2O3处理72h后CA46细胞系的细胞增殖抑制率;观察不同浓度（0．5,1．0,2．0μmol／L）As2O3作用72h后CA46细胞系的克隆形成率;流式细胞仪DNA倍体分析法探讨不同浓度（O．5,1．0和2．0μmol／L）As2O3作用72h对CA46细胞系细胞周期的影响;RT—PCR法检测不同浓度（0．5,1．0和2．0μmol／L）As2O3作用72h后CA46细胞系p16基因mRNA的表达。同时设相应对照组进行比较。结果（1）与未处理组相比,各浓度As2O3均可明显抑制CA46细胞生长,且G0～G1期细胞逐渐增加,呈剂量依赖性。（2）未处理组细胞p16基因呈微弱表达,不同浓度As2O3作用72h后,未处理组、不同浓度（0．5,1．0和2．0μmol／L）As2O3处理组p16基因表达阳性条带灰度值与actin比值分别为（O．11±0．11）,（0．33±0．10）,（O．57±0．11）和（0．67±0．09）,各As2O3处理组p16基因mRNA表达明显高于未处理组,其差别有统计学意义（P〈0．01）。结论As2O3可将细胞周期阻滞于G0～G1期,抑制肿瘤细胞的增长,其机制可能与诱导p16基因表达有关。     

三氧化二砷对兔晶体上皮细胞增殖的影响及其机制的实验研究

目的:观察不同浓度的三氧化二砷作用不同时间对兔晶体上皮细胞影响及其作用机理。方法:应用不同浓度的三氧化二砷作用于兔晶体上皮细胞后,观察三氧化二砷对兔晶体上皮细胞生长状态的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法、透射电镜技术观察其对兔晶体上皮细胞增殖的影响;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞技术检测三氧化二砷对兔晶体上皮细胞凋亡的诱导作用。结果:不同浓度的三氧化二砷作用于兔晶体上皮细胞有明显的时间和剂量依赖性。三氧化二砷作用后细胞生长明显受抑制,并出现明显的凋亡特征性改变;8μmol/L三氧化二砷作用24小时、48小时及72小时后TUNEL法可检测到细胞凋亡水平显著性升高,流式细胞仪分析显示,兔晶体上皮细胞在G1峰前出现明显的凋亡峰。结论:三氧化二砷可明显抑制兔晶体上皮细胞的生长,其机理主要是诱导兔晶体上皮细胞凋亡。     

H2O2对ECV304细胞Grx mRNA表达的影响

目的通过体外实验，研究H2O2对人脐静脉内皮细胞（ECV304）谷氧还蛋白（Grx）mRNA表达水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（ECV304）；MTT实验观察H2O2对ECV304细胞增殖的影响；在时间相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L H2O2作用5min、10min、30min、60min、120min；在剂量相关性研究中，将细胞分为6组，第1组为正常对照组，第2、3、4、5、6组分别给予终浓度100μmol／L、200μmol／L、300μmol／L、400μmol／L、500μmol／L H2O2作用30min，采用Trizol一步法提取细胞总RNA，并用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）研究各组细胞Grx mRNA表达水平的差异。结景MTT结果表明，100μmol／L H2O2对细胞增殖无影响，200—500μmol／L H2O2均在不同程度上抑制细胞增殖（P〈0．05）。RT-PCR结果显示，在时间相关性研究中，终浓度100μmol／L H2O2作用10min、30min、60min均能使ECV304细胞中Grx mRNA表达水平增高，30min达到最大值，差异显著（P〈0．05）；剂量相关性研究表明，终浓度100μmol／L H2O2．400μmol／L H2O2作用30min均能使Grx mRNA表达水平增高，差异显著（P〈0．05），其中终浓度300μmol／L H2O2可使Grx mRNA的表达量最高（P〈0．01）。结论H2O2影响人脐静脉内皮细胞Grx mRNA的表达水平。     

三氧化二砷对肝癌细胞增殖的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O2）对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。方法：应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验，研究As2O2对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和细胞毒作用。结果：AS：0，能显著抑制肝癌细胞的生长，5μmol／L As2O2抑制程度明显强于1μmol／L。1．5μmol／L和1μmol／L As2O2作用后细胞克隆形成率分别为（1．5±1．2）％和（12．3±2．2）％，明显低于对照组的（30．0±4．2）％，（P〈0．01）。As2O2对肝癌细胞有较强的细胞毒作用，且呈明显剂量和时间依赖性，其对肝癌细胞的杀伤率高于5-氟脲嘧啶（5-Fu）和丝裂霉素（MMC），但差异无统计学意义。As2O2与5-Fu及MMC存在协同效应，联合应用杀伤率明显升高。结论：As2O2具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用，有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值。     

三氧化二砷联合阿霉素对人淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合阿霉素（adriamycin, ADM）对淋巴瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法：将Raji细胞分为实验组与对照组,实验组分为1 μmol/L As2O3组、2 μmol/L As2O3组、ADM组、1 μmol/L As2O3与ADM联合组、2 μmol/L As2O3与ADM联合组。用As2O3和ADM干预不同时间的人淋巴瘤细胞株Raji,采用Wright-Giemsa染色法观察细胞凋亡的形态学变化;采用噻唑蓝比色法检测As2O3联合ADM对淋巴瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测As2O3联合ADM对淋巴瘤细胞凋亡率及淋巴瘤细胞内ADM荧光强度的影响;半定量聚合酶链反应检测As2O3和ADM对淋巴瘤细胞p53表达的影响。结果：As2O3联合ADM作用细胞24h后,可观察到细胞出现凋亡形态学改变。与As2O3和ADM单药组相比,As2O3联合ADM可增强对Raji细胞的抑制率,差异有统计学意义（P＜0.05）,其作用呈浓度和时间依赖性;As2O3与ADM联合组与单药组相比,Raji细胞的凋亡率差异具有统计学意义（P＜0.05）;As2O3和ADM单药组及联合组p53的表达水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;另外,加入1 μmol/L和2 μmol/L As2O3后细胞内ADM的荧光强度分别为18.53和18.12,分别增加0.056倍和0.023倍,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：As2O3和ADM单药及两种药物联合体外均可抑制淋巴瘤细胞增殖,诱导凋亡和下调突变型p53;As2O3和ADM联合体外有协同抗淋巴瘤作用;As2O3对Raji细胞内ADM浓度无显著影响;As2O3可增强淋巴瘤细胞的化疗敏感性,其下调突变型p53的表达可能是其分子水平的作用机制之一。