PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒

建立一种简便,有效的从细菌培养物中纯化ＰＶ１病毒的方法用于水病毒消毒实验。方法ＰＶ１Ｈｅｎａｎ株在Ｈｅｐ－２细胞中增殖后用聚乙二醇６０００沉淀结合差速离心的方法纯化病毒,ＲＴ－ＰＣＲ和透射电镜鉴定提纯病毒的形态学和分子生物学特性。结论ＰＥＧ６０００结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离方法易于操作且比单独ＰＥＧ沉淀有更高的纯化系数,是一种简便,有效的方法。     

脂蛋白及载脂蛋白对脂蛋白受体作用的研究——Ⅰ.一步超速离心分离血清VLD.LDL及部分HDL和LDS

本文报道一步超速离心分离VLDI、LDL、HDL和LDS的方法,该方法既不同于国外Havel的分步顺序超速离心法,又不同于国内DS沉淀合并密度梯度区带超速离心。只是利用区带头设计的优点,不用密度梯度液,仅将样品密度调高,这样可以避免长时间离心及使用KBr给脂蛋白带来的变化,分离样品量大、效果好、时间短、新鲜并具备生理功能,已成功地刚于脂蛋白受体研究达三年之久。     

亲和层析纯化兔肝谷胱甘肽过氧化物酶

兔肝GSH-px纯化包括:硫酸铵沉淀、亲和层析和DEAE-Sephadex A-25层析。在最后一步中GSH-px被纯化均一。纯化倍数340,比活102,回收率33.7%,SDS-PAGE表明为单一区带。亚基分子量为19842u。     

乙型肝炎表面抗原疫苗实验研究

本文描述了一种乙型肝炎表面抗原血源性疫苗,采用免疫亲和层析,溴化钾和蔗糖两次密度梯度区带超速离心,三步法从无症状携带者血清中提取HBsAg,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析证明纯度合格。过滤除菌,甲醛灭活,氢氧化铝佐剂吸附,制成每毫升含23μg疫苗,动物试验表明具有较好免疫原性。     

天花粉引产有效成分——蛋白质的系统分离

天花粉引产的有效成分为蛋白质。天花粉中蛋白质的组分,纸上电泳可得到3个区带;醋酸纤维素薄膜电泳可得到6个区带,其中主要的3个区带,与纸上电泳的3个区带相当。用丙酮分级沉淀或甲醇沉淀,配合硫酸铵分级盐析等方法,从天花粉中提取和分离天花粉蛋白质,可得到引产活性最强的一种蛋白质。小鼠有效剂量为0.06毫克/只,它是天花粉引产的主要有效成分。     

乙型肝炎研究的十五年

肝病研究所十五年来围绕乙型肝炎进行了大量实验室研究工作:①乙型肝炎病毒(HBV)方面:首先应用区带密度梯度超速离心法纯化HBsAg及从尸肝中大量精制了HBcAg,免疫动物从而得到相应的抗体,建立了特异、敏感的检测方法。继而利用此超离技术从HBsAg阳性血清中提取了HBV DNA并制备成~(32)P HBV DNA探针,研制出含有完整HBV基因     

干扰素治疗慢性乙型肝炎过程中HBsAg发生阴转的病例分析

目的 通过分析聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者发生HBsAg阴转病例的临床及实验室指标的特点,探讨影响HBsAg阴转的相关因素.方法 选择中山大学附属第三医院3年间收治并给予聚乙二醇干扰素α-2a治疗的CHB患者61例,对其中发生HBsAg阴转的病例进行临床、实验室指标等分析.结果 经聚乙二醇干扰素α-2a治疗的61例患者中,5例发生HBsAg阴转(占8.2%),56例未阴转(占91.8%);HBsAg阴转组平均年龄(26.5±7.5)岁,HBsAg阳性史平均(4.3±1.7)年;HBsAg未阴转组平均年龄(35.7±8.3)岁,HBsAg阳性史平均(6.7±2.8)年.阴转组基因分型均为B型,HBV DNA滴度治疗前较未阴转组低,未合并其他肝炎病毒感染,无乙肝家族史,既往未用过抗病毒药物治疗,治疗前均为HBeAg阳性的乙型肝炎.结论 聚乙二醇干扰素α-2a抗病毒治疗CHB可以获得HBsAg的阴转,HBsAg的阴转可能与患者的基因分型、HBV DNA滴度、年龄、HBsAg阳性史、家族史等因素有关.     

聚乙二醇干扰素治疗低水平HBsAg慢性乙肝患者疗效

目的 分析聚乙二醇干扰素（PEg-IFNα-2a、PEg-IFNα-2b）治疗低水平HBsAg慢性乙型病毒性肝炎（CHB）的临床疗效。方法 采用回顾性研究,选取2017年1月1日—2019年1月1日于北京大学深圳医院感染性疾病科门诊就诊,HBsAg<500 IU/mL且开始使用聚乙二醇干扰素治疗的慢性乙型病毒性肝炎患者,分析在治疗第24周、第48周HBsAg清除率及相关疗效影响因素。结果 共纳入88例患者,在0~48周达到HBsAg清除有45例,其中应答组与未应答组性别、HBsAg基线水平差异有统计学意义（P<0.05）;达到HBsAg清除的45例中,24例使用PEg-IFNα-2a治疗,21例使用PEg-IFNα-2b治疗,两组HBsAg清除率差异无统计学意义（P=0.195）;治疗第24周时新增HBsAg清除患者25例,经多因素分析,基线HBsAg水平差异有统计学意义（OR=0.991,95%CI=0.983~1.000,P=0.042）;治疗第48周时新增HBsAg清除患者10例,经多因素分析,第24周HBsAg下降率有统计学意义（OR=1.063,95%CI=1.077~1.123,P=0.027）。结论 聚乙二醇干扰素治疗HBsAg<500 IU/mL慢性乙型病毒性肝炎患者HBsAg 清除率明显高于基线水平高者;PEg-IFNα-2a、PEg-IFNα-2b疗效无差异。治疗过程中第24周HBsAg下降幅度可预测治疗48周时HBsAg清除率。     

用于日立区带转头的等容积蔗糖密度梯度溶液

浮力密度相同的粒子,在区带转头里用等容积蔗糖梯度分离的效果,优于等速蔗糖梯度和线性蔗糖梯度。本文给出用于日立RPZ48T,RPZ35区带转头,实验参数为:温度5℃,20℃,初始蔗糖浓度5%(W/W),20%(W/W),粒子密度1.33(g/cm~3),1.41(g/cm~3),1.89(g/cm~3)条件下构成等容积蔗糖梯度所需的容积与蔗糖浓度的数值,及用日立DGP型密度梯度程序泵配制此梯度液的方法。     

常规的、亲和层析分离纯化HBsAg法

鉴于目前对纯化的HBsAg需求不断增加,而用于纯化HBsAg的方法多数沿用氯化铯等比重带和蔗糖密度梯度超离心分离法。但上述方法设备昂贵,一般实验室无力购置。我们提出的“常规的、亲和层析分离纯化HBsAg法”弥补了上述经典方法的缺陷,而用它制得的HBsAg其纯度与用经典方法制得的没有什么两样,故可满足各实验室之所需。本方法的工艺流程为:     

一种去除聚合酶链式反应引物二聚体的简便方法

目的提供一种去除聚合酶链式反应(PCR)引物二聚体的简便方法。方法根据聚乙二醇(PEG)能够选择性沉淀DNA片段的原理,确定分别去除100 bp、100～200 bp、100～300 bp条带的PEG 6000最终质量分数,因引物二聚体大小一般为200 bp,最终运用到去除含有引物二聚体的PCR产物中。结果最终质量分数为10.67%、9.00%、8.00%的PEG能分别除去100 bp、100～200 bp、100～300 bp条带。最终质量分数为24.00%的PEG能有效去除PCR引物二聚体并纯化PCR产物。结论 PEG 6000能有效去除PCR扩增产物的引物二聚体,达到纯化PCR产物的效果。     

基因工程乙肝疫苗的研制——Ⅲ.MT-5细胞的HBsAg纯化与鉴定

采用超过滤、PEG沉淀和超速离心综合步骤对MT-5细胞培养上清中的HBsAg进行纯化。所得纯化HBsAg经SDS-PAGE银染色结果显示两条多肽,分子量分别为23k和27k,与血源HBsAg的多肽成分相同,为重组HBsAg的两条特异性多肽,且在凝胶中无其它杂蛋白带存在,纯度高。经PAGE银染色结果证实纯HBsAg中的杂蛋白含量符合疫苗生产的要求。经此综合方法提纯的HBsAg回收率可达44.1％以上。     

基于PEG6000富集精液来源外泌体的提取及鉴定

目的介绍PEG6000富集精液来源外泌体的提取和鉴定方法,为精液外泌体相关研究奠定基础。方法选自南方医科大学 南方医院检验中心6名正常志愿者精液,经8% PEG6000富集并多步离心结合超速离心方法获取提取物,然后采用透射电子显 微镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析仪分析其大小,蛋白印迹法检测其蛋白组成成分。结果提取物呈类圆形、椭圆形囊泡,质 膜完整,大小约为30~150 nm,内部含有低电子密度物质,均阳性表达CD63、ALIX、TSG101 蛋白,且不含精子细胞内质网 Calnexin蛋白。结论经过对提取物的形态、大小以及其蛋白成分分析证实所提取到的物质为精液来源的外泌体,为后续开展 精液外泌体临床及基础研究提供了方法学基础。     

罗布麻泡腾片制剂工艺研究

目的：研究罗布麻泡腾片的制剂工艺.方法：采用正交设计L9（34）表安排实验,选择柠檬酸、碳酸氢钠、PEG6000、安赛密为罗布麻泡腾片辅料,采用直接压片法制备泡腾片,以泡腾片外观、硬度、崩解时限、口感为综合考察指标,优化罗布麻泡腾片的处方组成.结果：罗布麻泡腾片优化处方配比为：罗布麻干浸膏用量35％,崩解剂柠檬酸用量29％、碳酸氢钠用量29％,PEG6000用量4％、矫味剂安赛密用量3％.结论：按优化处方制备的罗布麻泡腾片崩解迅速,口感良好,制备方法简便可行.     

聚乙二醇沉淀试验检测不同类型日本血吸虫病患者血清循环免疫复合物

本文报导PEG沉淀试验检测不同临床病型日本血吸虫病人血清免疫复台物,结果44例急性期病人及22例晚期病人复合物均值含量高于正常人均值,P<0.01,差异显著;52例慢性期病人免疫复合物均值与68例正常人均值无明显差异。     

轮状病毒的提纯和理化性质

用PEG6000沉淀和密度梯度离心从组织培养病毒感染液和粪便标本中浓缩提纯了人和牛轮状病毒,这有助于低浓度大体积标本的检出。对纯化病毒作了电镜、浮力密度、结构蛋白和紫外吸收等理化性质的研究。     

运用聚乙二醇6000沉淀筛检巨催乳素血症患者

目的：运用聚乙二醇6000沉淀筛检血清催乳素（PRL）水平升高患者中巨催乳素血症并进行临床样本验证。方法：运用聚乙二醇6000沉淀去除PRL升高患者血清中的巨催乳素分子（MPRL）。采用Sephacryl S-100HR层析柱联合化学发光免疫分析法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳联合蛋白质印迹法检测聚乙二醇6000沉淀血清MPRL的效果。采用聚乙二醇6000沉淀及化学发光免疫分析法检测PRL升高患者血清样本中的MPRL并筛查巨催乳素血症。分析真性高催乳素血症、高催乳素血症+巨催乳素血症、真性巨催乳素血症患者不同临床表现。结果：聚乙二醇6000沉淀后,血清样本中MPRL峰或MPRL杂交信号明显降低,但对大分子催乳素（BPRL）和小分子催乳素（SPRL）无明显影响。1538例血清PRL升高患者中,16.1%（247/1538）为巨催乳素血症,其余83.9%（1291/1538）为真性高催乳素血症。247例巨催乳素血症样本中,93.5%（231/247）为真性巨催乳素血症,6.5%（16/247）为巨催乳素血症+高催乳素血症。508例真性高催乳素血症患者中86.2%（438/508）有月经不调、停经／闭经、不孕不育或垂体瘤疾病,85.7%（6/7）高催乳素血症+巨催乳素血症患者有上述临床表现,真性巨催乳素血症患者仅15.5%（11/71）有上述临床表现。结论：血清PRL升高患者中有一定比例的真性巨催乳素血症（假性高催乳素血症）,运用聚乙二醇6000沉淀检测能简便有效地区分真性或假性高催乳素血症患者。     

PEG6000修饰的流感疫苗脂质体的制备和稳定性

目的 筛选出PEG6000流感疫苗脂质体的最佳制备工艺并且评价其稳定性.方法 将小鼠免疫7d,通过MTT法确定加入PEG6000的最佳摩尔百分比和最佳制备工艺.采用冻融冻干法制备PEG修饰的流感疫苗脂质体,将样品分别储存于不同温度[4℃、(25±2)℃、(37±2)℃]下,在设定时间取样测定包封率、胸腺指数和抗体滴度,...     

PEG 6000处理对黄芩种子萌发和幼苗生长的影响

目的 以PEG 6000溶液模拟干旱胁迫条件,研究黄芩种子的萌发和幼苗生长对干旱胁迫的响应.方法 分别用10%和20%PEG 6000处理黄芩种子,对种子的含水量、萌发率、萌发势、萌发指数、幼苗鲜质量及各器官的长度进行测量.结果 PEG 6000处理对黄芩种子的含水量、萌发率和幼苗的生长均产生影响.结论 10%PEG6000浸种4 h、20%PEG 6000浸种1 h可以提高黄芩种子的萌发率,可以选择20%PEG 6000处理黄芩种子8 h作为模拟干旱条件,用于幼苗黄芩抗旱材料的选育工作.