免疫细胞化学技术在胸腹水脱落细胞学诊断中的应用

目的:探讨免疫细胞化学技术在胸腹水脱落细胞学诊断中的应用及其临床意义。方法:对200例胸腹水脱落细胞采用免疫细胞化学法观察抗体上皮细胞膜抗原(EMA)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白(CK)、肢纹蛋白(VIM)、CAL、P53蛋白、钙结合素(PCNA)在细胞中的表达及表达的强弱程度,借此判断细胞的类型,并与常规脱落细胞学及部分组织病理学比较。结果:癌细胞EMA、CK( ),CEA、P53蛋白、PCNA部分( ),VIM大部分(-)、CAL(-)、间皮细胞、恶性间皮瘤细胞VIM、CAL( ),EMA、CK、PCNA部分( ),CEA(-)。联合免疫细胞化学技术及常规脱落细胞学,200例胸腹水脱落细胞检出恶性114例,良性78例。结论:免疫细胞化学技术对胸腹水性质的判断及确定肿瘤的类型有重要的辅助作用,联合应用抗体能进一步提高准确率。     

不同固定方法制作细胞蜡块的效果比较

目的比较在脱落细胞学检查过程中采用不同固定方法制作细胞蜡块所获效果的差异，寻求最佳固定方法。方法收集2020年1至4月浙江省台州医院病理科送检的胸腹水标本60例。采用10%中性缓冲甲醛和95%乙醇联合固定、薄层液基细胞学检查指定保存液固定以及细胞蜡块制作试剂盒固定3种不同的固定方法对同一体腔积液进行处理，离心富集细胞后，制成细胞蜡块，行HE染色和免疫组化染色，观察切片HE染色结果和免疫抗体标志物表达情况。结果10%中性缓冲甲醛和95%乙醇联合固定的细胞富集蜡块HE染色鲜艳，细胞形态基本完好，核质分明，免疫标记定位良好；薄层液基细胞学检查指定保存液固定的细胞蜡块HE染色偏红，细胞核偏小有固缩现象，免疫标记欠佳；细胞蜡块制作试剂盒固定的细胞蜡块细胞量偏少，HE染色细胞轮廓较模糊，细胞核重叠现象严重，免疫标记欠佳。结论在病理细胞学检查过程中，采用10%中性缓冲甲醛和95%乙醇联合固定效果最佳，且操作简便，费用低廉，更适合于各级医疗单位。     

细胞角蛋白19、癌胚抗原联合检测对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的　探讨细胞角蛋白 19(CYFRA2 1- 1)、癌胚抗原 (CEA)联合检测对良恶性胸腔积液 (以下简称胸液 )的诊断价值。方法　采用放射免疫分析法 (RIA)检测 5 2例良恶性胸液中的 CYFRA 2 1- 1和 CEA。同时检测 16例恶性胸液患者化疗前后血清 CYFRA 2 1- 1、CEA。结果　良恶性胸液中 CYFRA 2 1- 1、CEA差异明显 (P<0 .0 1) ,如以 CYFRA2 1- 1>3.3ng/ml,CEA >15 ng/ml作为阳性判定值 ,则 CYFRA2 1- 1对恶性胸液阳性检出率为 83.3% ,特异性 90 .9% ,CEA阳性检出率为86 .7% ,特异性 95 .4% ,CYFRA2 1- 1与 CEA联合检测对恶性胸液阳性检出率提高到 98.1% ,特异性提高到 10 0 %。结论　联合检测 CYFRA2 1- 1、CEA对良恶性胸液具有较高的鉴别诊断价值 ,并可作为观察化疗效果、病情转归的指标。     

血性胸水细胞蜡块制作的体会

目的研究血性胸水细胞蜡块制作的效果。方法南京大学附属鼓楼医院病理科2013—2015年临床2 h内送检新鲜血性胸水20例,每份标本均分3份,95%乙醇固定3种不同时间进行细胞蜡块制作,常规切片HE染色观察结果。结果本研究方法制作的细胞蜡块常规HE切片完整、镜下细胞结构清楚、背景干净;三种不同时间做出细胞蜡块个数率并无统计学意义,但从获取细胞量和时间上综合考虑95%乙醇固定4 h的制作效果最好。结论本研究方法选取95%乙醇固定4 h时间段,可得到最佳血性胸水的细胞蜡块制作效果。     

不同固定液对细胞骨架荧光染色标记效果的影响

目的 比较不同固定液对细胞骨架荧光染色的差异,选择最佳固定方法.方法 分别采用4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇和4%多聚甲醛/MES 4种固定液,对人肺腺癌细胞H1299进行固定,对其微管和微丝荧光标记后,在共聚焦显微镜下观察其形态结构.结果 4%多聚甲醛/MES对细胞的微管和微丝都有很好的固定作用.4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇对细胞的微丝基本能起到固定作用,而4%甲醛对微管的固定效果略差,2%戊二醛、95%乙醇固定的细胞看不到微管的具体形态结构.结论 细胞骨架的固定中需加入骨架稳定剂,且根据实验目的,选择适当的固定液获得最佳标记效果.     

人前列腺癌PC-3细胞的荧光标记及其脊椎转移动物模型的建立

目的对人前列腺癌PC-3细胞进行绿色荧光蛋白(GFP)标记,并建立其在动物活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及
转移的前列腺癌脊柱转移模型。方法常规肿瘤细胞培养、传代,在细胞状态最佳时以不同病毒感染复数实行GFP慢病毒对
PC-3的感染,7 d后在荧光显微镜下观察GFP在PC-3的表达情况。选取感染GFP阳性表达率最高的孔继续扩大培养,然后采用
悬液注射于小鼠的下腔静脉,动物活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移,3个月后处死荷瘤鼠,常规石蜡切片苏木素-
伊红（HE）染色观察。结果经绿色荧光蛋白标记后人前列腺癌PC-3细胞在荧光显微镜下发出绿光,并可在体内、外持续稳定表
达;下腔静脉注射1.5×l06转染后的前列腺癌细胞后1周即可在活体荧光成像系统下观察到腰背部有绿色荧光显像,4周时可见
表达绿色荧光的肿瘤增大,肿瘤骨转移率为19%（3/16）;3个月后解剖裸鼠可见有3只裸鼠腰椎有肿瘤浸润,与动物活体荧光成
像系统结果一致,转移率约为19%（3/16）。结论GFP慢病毒能够高效标记人前列腺癌PC-3细胞且不影响其生物学特性,并能
够持久稳定表达;用绿色荧光蛋白标记的人前列腺癌PC-3细胞成功地建立了裸鼠脊柱骨转移模型,为进一步研究前列腺癌骨
转移提供了一种简便、可行的新方法。
     

联合检测细胞蜡块中的napsin A和甲状腺转录因子-1有助于肺腺癌胸水的诊断

目的探讨细胞蜡块免疫组织化学napsin A和甲状腺转录因子-1（TTF-1）的检测对肺腺癌胸水的诊断价值。方法收集48
例有肺腺癌病史胸水的细胞涂片、细胞蜡块切片及对应的免疫组织化学切片,比较细胞涂片和细胞蜡块免疫组化两种方法诊断
肺腺癌阳性率;对免疫指标napsin A和TTF-1诊断肺腺癌价值进行评估。结果细胞蜡块免疫组化诊断肺腺癌阳性率高于细胞
涂片,差异具有统计学意义（84.44% vs 55.56% P<0.05）。TTF-1和napsin A在肺腺癌细胞蜡块中表达率分别为94.74%（36/38）
和78.95%（30/38）,二者在间皮反应增生中均不表达,差异均具有统计学意义（P<0.05）;联合napsin A和TTF-1检测有较高的诊
断价值,其诊断肺腺癌的灵敏度和特异度为97.37%和100%。结论细胞蜡块免疫组织化学napsin A和TTF-1检测较传统细胞
涂片有助于提高肺腺癌胸水诊断阳性率,二者联合检测对肺腺癌胸水有较高的诊断价值。
     

乙醛脱氢酶2在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的抗凋亡作用

摘要：目的观察乙醛脱氢酶2（ALDH2）在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注凋亡发生中的作用。方法大鼠分为正常组、糖尿病组和
ALDH2激动剂乙醇+糖尿病组。4周后行离体心肌缺血/再灌注（I/R）。测定复灌期间冠脉流出液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。检
测心肌组织细胞ALDH2、caspase-3的活性;RT-PCR测定左心室前壁心尖组织Bcl-2、Bax mRNA的表达。结果与正常大鼠I/R
相比,糖尿病大鼠复灌期冠脉流出液中LDH释放增加,心肌组织caspase-3活性增加,ALDH2活性降低,Bcl-2/Bax mRNA比值
降低;与糖尿病大鼠心肌I/R相比,ALDH2激动剂乙醇使得心肌复灌期间冠脉流出液中LDH释放减少,心肌caspase-3活性降
低,ALDH2活性增高,Bcl-2/Bax mRNA比值增高。结论增强ALDH2在糖尿病大鼠心肌中的表达对缺血/再灌注损伤有明显
的保护作用;其机制可能与抑制细胞凋亡的发生有关。
     

肿瘤标志物联合检测在182例胸腹水性质鉴别中的应用价值

[目的]探讨癌胚抗原(CEA)、糖链抗原125(CA125)、细胞角蛋白片段19(CYFRA21-1)等8项肿瘤标志物联合检测在胸腹水性质鉴别诊断中的应用价值.[方法]采用电化学发光法分别对182例患者的胸水和/或腹水进行CEA,CA125,CYFRA21-1等8项肿瘤标志物检测,其中恶性胸腹水82例,结核性胸腹水47例,肝硬化及炎症性胸腹水53例,评价上述指标在鉴别胸腹水性质诊断中的灵敏度及特异性.[结果] 8项肿瘤标志物在良、恶性胸腹水中的表达水平具有显著差异(P<0.05).恶性胸腹水中CA125,CYFRA21-1,神经特异烯醇化酶(NSE)及CEA水平及阳性率较高,分别为91.5%,81.7%,62.2%,52.4%.恶性胸腹水CEA,CA125,CYFRA21-1,NSE联合检测阳性率为94%,为首选,其次为CEA,NSE,CYFRA21-1联合检测,阳性率为89%.[结论]胸腹水中CEA,CA125,CYFRA21-1,NSE联合检测对良恶性胸腹水的鉴别诊断有重要价值.     

条件培养基抑制L-抗坏血酸钠介导的小鼠黑色素瘤细胞凋亡

摘要：目的探讨肿瘤细胞B16F10通过自分泌对抗由L-抗坏血酸钠（VitC Na）介导的凋亡作用。方法常规在75 cm2培养瓶中
培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,待细胞长至90%~95%融合时吸取原DMEM/高糖培养液,用PBS反复清洗后加入无血清的
DMEM/高糖10 ml在培养箱中培养6~8 h,收集培养液用2500 r/min离心5 min后上清用0.22 μm滤器过滤,-20 ℃保存备用,在
6孔板中每孔接种1×106 B16F10,常规培养24 h后,实验组每孔加入2 ml条件培养液（含有10%胎牛血清）,对照组用普通培养
液,两组均用10 mmol/L VitC Na促凋亡,分别在3、6、24 h观察细胞凋亡情况,hoechst染核,收集细胞免疫荧光检测caspase3和
TUNEL、RT-PCR检测Bcl2表达。进而分离出条件培养液中相对分子质量大于5 000和小于5 000成分,分别煮沸,用蛋白酶K
灭活后对B16F10 促凋亡。结果发现条件培养基能够抑制VitC Na 介导的小鼠黑色素瘤细胞B16F10 凋亡,抗凋亡成分小
于5 000,且不能被煮沸和蛋白酶K灭活,提示其是小分子抗凋亡物质。结论B16F10可以分泌出拮抗细胞凋亡的小分子物质。
     

免疫组织化学染色在妇科盆腹腔积液细胞学诊断中的应用

目的探讨免疲组化染色在妇科腹腔脱落细胞学诊断中的应用价值。方法选取45例盆腹腔积液及腹腔冲洗液中有异型细胞的女性病例,对液体离心沉淀后,沉淀物石蜡包埋,切片后进行CK7,CK20,Calretinin,WT1,p53,ER,PR,CK5／6的免疫组织化学染色检测。结果在含有肿瘤细胞的阳性病例组中,CK7,WT1和p53有较高的阳性表达率,阳性率分别为89.3％,62．9％和68．4％。而在未找到肿瘤细胞的阴性病例组中,CK7,Calretinin和CK5,6阳性表达率较高,分别为72．7％,71．4％和57．1％。结论盆腹腔积液的沉淀细胞团块经包埋切片后,可以用于免疫组织化学染色,对于盆腹腔渗出液的细胞学诊断具有帮助。     

CYFRA21-1、CEA联合测定对良恶性胸水的鉴别诊断价值

目的　探讨细胞角蛋白 19片段 (CYFRA2 1— 1)、癌胚抗原 (CEA)联合测定对良、恶性胸水的鉴别诊断价值。方法　应用放射免疫法 ,分别测定了 82例胸腔积液患者胸水及血清中CYFRA2 1— 1、CEA的浓度 ,并计算其比值。结果　恶性胸水组胸水及血清的CYFRA2 1— 1、CEA浓度均显著高于良性胸水组 (P <0 .0 1) ,且恶性胸水组中胸水的CYFRA2 1— 1、CEA浓度显著高于血清的CYFRA2 1— 1、CEA浓度 (P <0 .0 1)。胸水 /血清CYFRA2 1— 1比值 >4.5 ,胸水 /血清CEA比值 >1.2均提示恶性胸水可能性大。CYFRA2 1— 1检测恶性胸水 ,血清中敏感性为 60 .0 % ,特异性为 81.0 % ,胸水中敏感性为 92 .5 % ,特异性为 5 7.1% ;CEA检测恶性胸水 ,血清中敏感性为 5 5 .0 % ,特异性为 90 .5 % ,胸水中敏感性为 75 % ,特异性为 90 .5 %。CYFRA2 1— 1、CEA联合检测恶性胸水 ,血清中敏感性为 77.5 % ,特异性为 78.6% ,胸水中敏感性为 95 .0 % ,特异性为 85 .7%。结论　联合检测CYFRA2 1— 1、CEA对良恶性胸水具有良好的鉴别诊断价值。     

胸腹水液基薄层细胞涂片中Ki-67的表达联合CA 153、CYFRA 211、CEA的检测与胸腹水良恶性质的相关性

目的 本实验通过选用单克隆抗体Ki-67标记胸腹水液基薄层细胞涂片,并联合定量分析CA153、CYFRA211及CEA等三项肿瘤标志物在胸腹水中的含量,对比这几种检测指标的不同检测组合的效能评价来鉴别胸腹水的良、恶性质.方法 本实验共收集恶性组胸腹水标本51例,良性组胸腹水标本34例,对每份标本部分采用免疫细胞化学染色法检测液基薄层细胞涂片中Ki-67表达及半定量分析,其余部分检测肿瘤标志物CA 153、CYFRA211及CEA的含量,后分别对4项指标单独及联合检测的不同组合进行效能评价.结果 恶性组中胸腹水Ki-67的表达分析及CYFRA211、CEA含量均高于良性胸腔积液组,差异有统计学意义(P<0.05).在效能评价中,4个项目单独检测胸腹水时,敏感度和阴性预测值最低的是CA 153、特异性最低的是CYFRA 211、阳性预测值最低的是CEA.当两两组合检测中Ki-67和CYFRA 211的敏感性最高,可达98.0%,但特异性最低.而Ki-67和CA 153联合检测,特异性尽管最高,达76.4%,但敏感性却最低,为88.3%.而在3项组合中,每种组合均可将敏感性提高到90.0%以上,但特异性却比单项检测或两两结合检测的结果均低.而当以上4项指标共同联合检测时敏感度为100.0%,而特异性却为几种检测方式中的最低,为44.1%.结论 分析所测结果,细胞免疫组化Ki-67的表达联合CEA、CYFRA 211检测可将恶性胸腹水诊断的敏感性提高到98.0%,而特异性也可达到70.5%,从而成为在鉴别胸腹水良、恶性质中最大互补作用的项目组合.     

胸腹水沉渣切片在脱落细胞学中的作用

目的探讨胸腹水沉积物石蜡包埋切片在细胞学诊断的意义。方法对358例胸腹水沉积物进行拉片和石蜡包埋连续切片,HE染色。结果在组织学证实的85例胸腹腔癌瘤所致的胸腹水沉积物连续切片,全部为阳性,而拉片中阳性为49例,两者之间有显著差异性（P〈0.01）,拉片38例可疑恶性肿瘤,沉积物连续切片32例为阴性,6例为恶性肿瘤。结论胸腹水沉积物石蜡包埋切片避免了单一拉片的局限性,切片细胞丰富,易于观察肿瘤细胞的组织学形态,可降低脱落细胞学的误诊风险,从而提高脱落细胞学诊断价值。     

胸水细胞端粒酶活性检测对良恶性胸腔积液的鉴别诊断价值

目的：探讨胸水细胞端粒酶活性对良、恶性胸腔积液的鉴别诊断价值。方法：用改良的PCR-ELISA法检测37例恶性、32例良性胸水细胞端粒酶活性,并与胸水细胞学、癌胚抗原（CEA）诊断结果进行比较。结果：37例恶性胸腔积液中有26例端粒酶活性阳性（26/37）,阳性率为70.27%,高于良性胸腔积液中端粒酶海性表达（2/32,P＜0.01);端粒酶活性检测诊断恶性胸水敏感性为70.27%,特异性为93.75%,与胸水细胞学诊断符合率为54.05%;其敏感性高于胸水CEA诊断结果（敏感性为51.35%)。结论：胸水细胞端粒酶活性检测作为细胞学检查的辅助手段能提高恶性胸水的诊断率,有助于良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

胸腔积液273例临床分析

目的　探讨胸腔积液的病因分布及癌胚抗原的测定对鉴别良恶性胸腔积液的参考价值。方法　回顾性分析 2 73例胸腔积液的临床资料。结果　良性胸液 12 9例 ,其中结核性 5 5例 ( 4 2 .64 % ) ,心功能不全 2 7例 ( 2 0 .93 % ) ,糖尿病及其合并症 12例( 9.3 % ) ,其他 3 5例。恶性胸腔积液 14 4例 ,其中原发性支气管肺癌 114例 ( 79.17% ) ,乳腺癌 18例 ( 12 .5 % ) ,其他 12例。良恶性两组胸腔积液CEA水平测定 ,差异显著 (P <0 .0 1)。结论　原发性支气管肺癌是导致恶性胸腔积液的主要原因 ;胸液CEA水平的测定不失为初步鉴定良恶性胸液的方法之一。     

ADA及CEA在结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值

目的评价腺苷脱氨酶（ADA）、癌胚抗原（CEA）在结核性及恶性胸腔积液鉴别诊断中的价值。方法检测68例结核性胸液及31例恶性胸腔积液中ADA、CEA含量,制作ROC曲线,求得不同诊断界值时的灵敏度和特异度。结果结核性胸液组平均ADA浓度为（58．76±19．44）U／L,恶性胸液组ADA浓度为（29．35±9．21）U／L,两者有非常显著性差异（P〈0．01）;结核性胸液组CEA为（4．31±1．25）μg／L,恶性胸液组为（12．34±3．65）μg／L,两者有非常显著性差异（P〈0．01）。根据ROC曲线结果判断,结核组胸液ADA（U／L）诊断临界值在≥30、≥40、≥50时,其灵敏度分别为82．3％、78．4％、60．6％,其特异度分别为76．5％、90．7％、95．3％。恶性胸液CEA（μg／L）诊断临界值≥5、≥10、≥30、≥50时,其灵敏度分别为68．1％、50．3％、46．5％、31．3％,其特异度分别为36．8％、93．2％、96．7％和98．1％。结论联合检测ADA、CEA对结核性及恶性胸腔积液的诊断及鉴别诊断具有重要意义。     

胸腔积液细胞块免疫组化染色的病理诊断价值

目的探讨细胞块切片免疫组化染色对胸腔积液病理诊断与鉴别诊断的应用价值。方法收集78例患者胸腔积液,分别行常规细胞涂片和细胞块切片,HE染色观察细胞的形态特点,免疫组化S-P法检测CK7、MOC-31、CD15、BerEP4、CEA、TTF-1、CK5/6、Calretinin、WT-1和Desmin的表达,筛选肺腺癌和间皮病变鉴别诊断相关的免疫标记组合。分析临床与随访资料与不同细胞学诊断方法结果之间的差异。结果细胞块制片阳性检出率高于常规细胞涂片,二者HE染色对胸腔积液细胞阳性检出率无显著性差异(P>0.05)。细胞块免疫组化明显优于单纯细胞涂片,二者比较具有显著差异性(χ2=4.17,P<0.01),其对恶性胸腔积液的分型诊断符合率达97.2%,组合性抗体检测显示,肺腺癌中CK7、MOC-31、CD15、BerEP4、CEA、TTF-1呈高表达,间皮病变显示CK5/6、Calretinin、WT-1、Desmin高表达。结论胸腔积液细胞块对诊断恶性胸腔积液具有一定的价值,结合免疫组化选择适当的抗体组合对肺腺癌和恶性间皮瘤的鉴别诊断具有一定的意义,值得临床推广应用。     

DNA定量分析法联合癌胚抗原测定在良恶性胸水鉴别诊断中的应用

目的 探讨细胞DNA定量分析法在恶性胸水诊断中的应用价值.方法 324例胸腔积液患者抽取胸水,巴氏染色行脱落细胞学检查,Feulgen染色行细胞DNA定量分析;同时进行胸水和血清癌胚抗原(CEA)测定.结果 脱落细胞学检测良恶性胸水的敏感性61.27%,特异性94.5%,准确率79.94%;细胞DNA定量分析检测良恶性胸水的敏感性为95.07%,特异性为100%,准确率为97.84%;胸水CEA检测良恶性胸水的敏感性为66.9%,特异性为92.3%,准确率为81.17%;血清CEA检测良恶性胸水的敏感性为50%,特异性为84.62%,准确率为69.44%.结论 脱落细胞学联合细胞DNA定量分析及CEA检测可提高良恶性胸水鉴别诊断的准确性.     

CEA、CA15—3检测对良恶性胸腔积液的诊断价值

目的探讨胸腔积液患者CEA、CA15—3表达水平及其对良恶性胸腔积液的诊断价值。方法应用ARCHITECTi2000SR免疫分析检测仪对45例恶性胸腔积液患者进行血清和胸腔积液CEA、CA15—3测定,并与32例良性胸腔积液患者作比较。结果恶性胸腔积液组血清和胸腔积液表达均显著高于良性胸腔积液组的表达（P〈0．05）;恶性胸腔积液组CEA和CA15—3的胸腔积液／血清比值显著高于良性组（P〈0．05）;胸腔积液CEA、CA15—3的表达同血清中的表达比较具有显著性差异（P=0．05）。单项肿瘤标志物检测胸腔积液CEA检测的准确度最高,两项指标联合检测胸腔积液检测的准确度高于血清检测的准确度（P〈0．05）。结论检测胸腔积液患者CEA、CA15—3表达水平有助于积液性质的良恶性鉴别。胸腔积液CEA、CA15—3的检测对恶性胸腔积液的诊断较血清学检测更有价值。多肿瘤标志物联合检测能提高恶性胸腔积液诊断的准确度。