电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.     

放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:采用6MV-X射线照射细胞,提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,观察细胞发生凋亡的情况,并采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2蛋白的表达。同时观察细胞周期改变情况。结果:照射后48h,2Gy、4Gy和6Gy出现明显DNA降解("梯形结构"),但对照组及8Gy和10Gy无"梯形结构"出现。Bax和Bcl-2蛋白的表达在时间和剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048)。4Gy照射剂量作用细胞48h后,HepG2细胞中Bax表达显著上调,而Bcl-2表达明显降低。4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期、S期阻滞,G2/M期阻滞峰值为正常的56倍,在6~48h阻滞"崩溃",细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡。结论:6MV-X射线照射HepG2细胞,可诱使其产生凋亡,其机制可能通过促进Bax蛋白表达和抑制Bcl-2蛋白的表达来诱导肝癌细胞凋亡。4Gy照射引起的G2期阻滞释放可能与凋亡水平上调有关。     

电离辐射对人HepG2肝癌细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察电离辐射对人HepG2肝癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用6MV-X射线照射人HepG2肝癌细胞,Western blotting蛋白印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达.结果:6MV-X照射后48小时,2Gy、4Gy、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白的表达明显高于假照射对照组(0Gy)(P＜0.05,P＜0.01).结论:电离辐射可诱导HepG2细胞Caspase-3蛋白表达增高.     

不同剂量60 Co γ射线照射对大鼠颌下腺凋亡的影响

目的 探讨不同剂量60Coγ射线照射对大鼠颌下腺凋亡及相关因子表达的影响.方法 将Wistar大鼠随机分4组：（1）正常对照组;（2）放疗7.5Gy组;（3）放疗15 Gy组;（4）放疗22.5 Gy组.放疗组大鼠给予一次性γ射线辐射,每只辐射量按分组设定的剂量（7.5、15、22.5 Cy）给予.对照组未予照射.采用免疫组织化学法检测P53、Caspase-3表达情况以及原位切口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,放疗组P53与Caspase-3的表达增强.Tunel染色显示的细胞凋亡主要见于导管细胞,随着放疗剂量增加,凋亡愈明显.结论 60Co γ射线照射可引起大鼠颌下腺早期细胞凋亡.60Co γ射线（7.5、15、22.5 Gy）照射诱导的颌下腺细胞凋亡有剂量-效应关系.     

不同剂量X线照射对小鼠免疫功能损伤的动态观察研究

目的:观察不同剂量X线照射对小鼠免疫功能的影响进而研究辐射损伤的机制.方法:100只小鼠随机分为0Gy、2Gy和8 Gy3个剂量组,三个干预组分别为20、30、50只小鼠.分别用X射线全身照射1次,照射后4h、3d和14d,分别抽取小鼠眼球血,用流式细胞仪进行外周血T淋巴细胞亚群CD4 和CD8 的测定.另取出新鲜胸腺和脾脏分别研碎,制成细胞悬液,用流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果:不同剂量的X线照射后4h,胸腺和脾脏细胞的凋亡率即明显升高,3天时达高峰,14天时略有恢复.且同一时段细胞的凋亡率与照射剂量成正比.外周血淋巴细胞亚群数量改变,CD4 与CD8 均下降,其中以CD8 T细胞对辐射最为敏感,下降幅度最大.结论:本实验着重观察了大剂量X射线整体照射后,小鼠胸腺、脾脏及外周血淋巴细胞凋亡的规律.     

高能X线照射对人肝癌细胞株HepG2凋亡及bcl-2、Fas表达的影响

目的:研究高能X线照射后不同时间点人肝癌细胞株HepG2凋亡及bcl-2、Fas表达的变化,为原发性肝癌放射治疗的时间剂量分割提供借鉴。方法:用吸收剂量为5Gy的6MVX线单次照射HepG2细胞,以流式细胞仪测定受照后不同时间的细胞凋亡率,以免疫细胞化学法检测细胞受照前后bcl-2和Fas的表达水平。结果:高能X线可诱导HepG2细胞发生凋亡,照射后6h细胞凋亡率达到高峰(32%),同时bcl-2表达水平下降,Fas表达水平升高。结论:高能X线能够诱导肝癌细胞株HepG2发生凋亡,bcl-2及Fas可能参与其细胞凋亡的调控。     

电离辐射对缺氧条件下肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨缺氧条件下电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子(HIF)-1α及血管生成因子(VEGF)表达的影响,从理论上寻找一种提高放射治疗肿瘤有效性的方法.方法 将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组.缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照照射率4 Gy/min,共8 Gy的剂量利用X射线照射细胞;缺氧加照射组:氯化钴处理细胞一定时间后,按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞.利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况,MTT法分析细胞存活分数,RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况.结果 (1)细胞凋亡情况:对照组未观察到细胞凋亡,缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡,单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡,但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少(P＜0.05).(2)MTT检测结果:细胞存活分数排列顺序为:对照组＞缺氧组＞缺氧加照射组＞单纯照射组.(3)HIF-1α表达情况:缺氧加照射组＞缺氧组＞正常组(P＜0.05).单纯照射组与正常组无明显差异;VEGF表达变化情况:缺氧加照射组＞缺氧组＞单纯照射组＞正常组(P＜0.05).结论 提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用,从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性.     

线粒体DNA4977bp缺失检测肿瘤细胞辐射敏感性的初步研究

目的:探讨mtDNA4977bp缺失用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性。方法:分别采用MTT法和巢式PCR法测定人肿瘤细胞株—肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7)不同剂量γ射线照射后的存活分数(SF)和mtDNA4977bp缺失率。结果:MTT法:2Gy、4Gy和8Gy照射后,HepG2和EC-9706的SF显著低于MCF-7,表明HepG2和EC-9706细胞具有更高的辐射敏感性,HepG2细胞照射后的SF略低于EC-9706细胞,但统计学差异不显著。PCR法:1Gy和4Gy照射后3种肿瘤细胞mtDNA4977bp缺失率无显著性差异。8Gy照射后HepG2和EC-9706 mtDNA4977bp缺失进一步增加,而MCF-7的缺失率下降,显著低于HepG2与EC-9706细胞的缺失率,但HepG2和EC-9706细胞的缺失率无统计学差异,提示HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞,这与MTT法测定结果相符。结论:测定mtDNA4977bp缺失作为快速、简便的检测方法,有望用于肿瘤细胞辐射敏感性预测。     

X射线对BGC-803胃癌细胞凋亡及Survivin蛋白表达的影响

目的分析X射线对BGC-803胃癌细胞凋亡及Survivin蛋白表达的影响。方法将BGC-803胃癌细胞分为对照组、实验组;实验组分别给予1、2、5 Gy X射线照射。流式细胞仪检测各组细胞凋亡及Survivin蛋白表达情况。结果随着X射线剂量增大,BGC-803细胞凋亡率增大;在2 Gy、5 Gy组,随X射线照射时间延长,细胞凋亡率增大,而1 Gy组无明显改变。大剂量(5 Gy)X射线引起BGC-803胃癌细胞Survivin蛋白表达增加,而小剂量X射线(1 Gy、2 Gy组)对BGC-803胃癌细胞Survivin蛋白表达无显著影响。结论 X线辐射引起BGC-803胃癌细胞凋亡具有辐射剂量、时间依赖性;大剂量X射线照射使Survivin蛋白表达增加,可能与细胞周期、DNA同源重组修复有关。     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL-60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL-60细胞的影响,建立X射线诱导HL-60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性.采用对数生长期的HL-60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用流式细胞仪分析HL-60细胞周期的改变.结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势.经2,5Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞和G2/M期细胞的比例均减少.结果显示,以X射线照射HL-60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系.     

咖啡因对X射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响

目的 探讨细胞周期检测点对不同放射剂量射线的耐受性及咖啡因对细胞周期检测点的影响。方法 对数生长期的急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)细胞经不同剂量的X射线照射，并加入终浓度为5mmol／L的咖啡因培养4h后．用亚G1峰法检测细胞凋亡，用DNA链缺口标记法(TdT)分析凋亡细胞的细胞周期特异性。结果 不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡，2Gy X射线的照射主要诱导G1期细胞凋亡，20Gy X射线照射诱导的细胞凋亡由G1期发展至以S期和G2期为主。加入咖啡因能使射线诱导的细胞凋亡减少，其中2Gy X射线照射的细胞表现为G1期细胞凋亡减少，而20Gy X射线照射的细胞主要表现为以S期和G2期为主的细胞凋亡的减少。结论 细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系，咖啡因对射线诱导的细胞凋亡及检测点的影响与射线的剂量有关。     

电离辐射对Jurkat T细胞凋亡与坏死的影响

目的：研究电离辐射诱导Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的变化规律,探讨电离辐射作用后细胞的死亡模式与机理。方法：采用Annexin V-EGFP和PI 双染、流式细胞术(FCM)检测不同剂量（0.075、0.500、1.000、2.000、4.000和6.000 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞凋亡与细胞坏死的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系,2.000 Gy X射线照射后,与假照组比较,Jurkat细胞凋亡百分率在照射后18 h显著增加,至24 h始终维持在较高水平（P＜0.001）;细胞坏死百分率于照射后4 h显著增加,12 h 达峰值,至48 h始终维持在较高水平（P＜0.001）。剂量-效应关系,0.075Gy X射线照射后18 h,Jurkat T细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组相比较未见明显变化（P＞0.05）。2.000~6.000 Gy较大剂量X射线照射后18 h,细胞凋亡百分率和细胞坏死百分率与假照组比较均呈剂量依赖性增加（P＜0.001）。结论：2.000 Gy以上剂量X射线可以诱导Jurkat T细胞发生凋亡和坏死,细胞坏死比细胞凋亡出现时间更早,持续时间更长。     

低剂量辐射联合pEgr-P16基因治疗诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的:研究大剂量(2Gy)和低剂量(0.075Gy)X射线诱导pEgr P16重组质粒稳定转染的食管癌细胞株EC9706凋亡的作用。方法:将脂质体包裹的pEgr P16重组质粒,转染食管癌细胞系EC9706中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞;采用Westernblot方法检测不同剂量X射线诱导后P16的表达;观察不同剂量X射线照射后,EC9706细胞凋亡率的变化。结果:pEgr P16重组质粒转染EC9706细胞,并获得稳定转染的细胞;2Gy和0.075GyX射线照射均可诱导P16表达增强;稳定转染的细胞经2Gy和0.075GyX射线照射,细胞凋亡率明显高于假照射(0Gy)组(P<0.05～0.01)。结论:0.075GyX射线照射可诱导稳定转染的EC9706细胞中P16表达增强,使诱导细胞凋亡率提高。     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL—60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL－60细胞的影响,建立X射线诱导HL－60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性,采用对数生长期的HL－60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用硫式细胞仪分析HL－60细胞周期的改变,结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL－60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势,经2,5Cy剂量照射的HL－60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2／M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL－60细胞主要表现为S期细胞和G2／M期细胞的比例均减少,结果显示,以X射线照射HL－60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测之间存在一定的关系。     

放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞株Hep-G2中Bax和Bcl-2蛋白表达水平的影响.方法:6MV-X射线照射细胞,采用免疫组织化学染色观察人肝癌细胞株中Bax和Bcl-2的表达.结果:Bax和Bcl-2的表达在照射时间和照射剂量之间存在交互作用(F=1.733,P=0.042;F=1.700,P=0.048).4Gy照射剂量作用细胞48h后,Hep-G2细胞中Bax的表达达高峰、Bcl-2的表达至低谷.结论:放射线可能通过促进Bax表达和抑制Bcl-2表达诱导肝癌细胞凋亡.     

电离辐射对小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的作用机制

目的:研究不同剂量X射线照射对小鼠胸腺bcl-2 蛋白表达及细胞凋亡的作用机制.方法:用免疫组织化学、图像分析技术及透射电镜技术分别检测小鼠胸腺bcl-2蛋白表达及细胞凋亡.结果:假照组胸腺实质内bcl-2蛋白表达主要分布于髓质,胸腺皮质内可有少量凋亡的胸腺细胞.2 Gy照射后4、8和12 h胸腺髓质内bcl-2表达减少,皮质内出现许多典型的凋亡细胞;0.075 Gy照射后bcl-2蛋白表达增多,皮质内凋亡细胞减少,且可见较多的细胞分裂像.结论:不同剂量电离辐射对胸腺细胞凋亡的影响与胸腺髓质内bcl-2蛋白表达水平有关.     

海带多糖对放疗后颌下腺细胞凋亡的影响

目的 探讨海带多糖(LJP)对放疗后颌下腺细胞凋亡的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、放疗对照组,放疗LJP A组(LJP 30 mg/kg)及放疗LJP B组(LJP 300 mg/kg).放疗对照组、放疗LJP A组及放疗LJP B组的大鼠颌下腺给予一次性γ射线照射,每只总剂量15 Gy.采用免疫组化法及原位切口末端标记(TUNEL)法分别检测大鼠颌下腺细胞的Bcl-2,Bax表达及凋亡情况.结果 与放疗对照组比较,放疗LJP A组及放疗LJP B组大鼠颌下腺细胞的Bcl-2表达水平明显增强(P＜0.05),Bax水平无明显改变(P＞0.05);与正常对照组比较,放疗对照组的凋亡细胞明显增加(P＜0.05),而与放疗对照组比较,放疗LJP A组及放疗LJP B组的凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论 LJP可调节细胞Bcl-2及Bax的表达水平,抑制细胞凋亡,从而保护颌下腺免受放疗损伤.     

X射线全身照射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的：观察不同剂量 X 射线全身照射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法：Annexin-V和PI双染后，采用流式细胞术检测小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞在照射后不同时间的细胞凋亡变化。结果：2 Gy X 射线全身照射与假照射组比较，小鼠脾细胞 凋亡百分率在照射后24 h明显升高（Ｐ< 0.05），腹腔巨噬细胞凋亡百分率从照射后4 h开 始明显升高（Ｐ< 0.05，Ｐ< 0.01），持续到48 h（Ｐ< 0.001）；0.075 Gy X 射 线全身照射与假照射组比较，小鼠脾细胞凋亡百分率在照射后24 h明显降低（Ｐ< 0.05）， 腹腔巨噬细胞凋亡百分率从照射后2 h开始至照射后16 h均有显著降低（Ｐ< 0.05）。 结论：较高剂量辐射促进小鼠脾细胞和腹腔巨噬细胞凋亡，而低剂量辐射对小鼠脾细胞和腹腔巨噬细 胞凋亡没有促进作用，并且能降低免疫细胞凋亡。     

人肺腺癌细胞A549放射治疗前后Dystrobrevin蛋白表达的变化

目的射线诱导肺腺癌A549细胞凋亡,于凋亡高峰时检测放疗前后dystrobrevin的表达,探讨其与放射剂量及凋亡的关系。方法人肺腺癌A549细胞株培养24 h后用10 Gy X线照射,分别培养6 h、14 h、23 h、40 h,应用Hoechest33258荧光染色在荧光显微镜下观察细胞形态变化——细胞的凋亡,并计算凋亡率。采用Western blot检测0 Gy、6 Gy、10Gy照射A549细胞14 h后dystrobrevin蛋白表达水平的变化。结果 10 Gy X射线照射A549细胞株后14 h凋亡率达到高峰。Western blot检测显示,随着放射剂量的增加,α-dystrobrevin有下降的趋势,而ε-dystrobrevin有升高的趋势。结论人肺腺癌A549细胞株在能量为6-MV,剂量率为300 cGy/分,接受10 Gy X线照射后14 h出现明显的凋亡;并且在此时间点上随着放射剂量的增加α-dystrobrevin和ε-dystrobrevin变化趋势不同。     

不同剂量X线照射对小鼠免疫功能损伤的动态观察研究

目的 观察不同剂量X线照射对小鼠免疫功能的影响，进而研究辐射损伤的机制。方法 100只小鼠随机分为0、2和8Gy3个剂量组，三个干预组分别为20、30、50只小鼠。分别用X射线全身照射1次，照射后4h、3d和14d，分别抽取小鼠眼球血，用流式细胞仪进行外周血T淋巴细胞亚群CD4^＋和CD8^＋的测定。另取出新鲜胸腺和脾脏分别研碎，制成细胞悬液，用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 不同剂量的X线照射后4h，胸腺和脾脏细胞的凋亡率即明显升高，3天时达高峰，14天时略有恢复，且同一时段细胞的凋亡率与照射剂量成正比。外周血淋巴细胞亚群数量改变，CD4^＋与CD8^＋均下降，其中以CD8^＋T细胞对辐射最为敏感，下降幅度最大。结论 大剂量X-射线整体照射后，小鼠胸腺、脾脏及外周血淋巴细胞规律性凋亡。