脊髓哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路参与大鼠外周神经损伤诱发的痛觉过敏

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素(rapamycin,RAPA)靶蛋白(mammalian target of RAPA,mTOR)信号通路是否通过激活脊髓背角星形胶质细胞参与外周神经损伤诱发的大鼠痛觉过敏。方法：取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,随机分为6组(n=5)：1 d组(D1组)、4 d组(D4组)、7 d组(D7组)、14 d组(D14组)、正常组、假手术组。其中 D1,D4,D7,D14组建立坐骨神经慢性压榨损伤(chronic constriction injury,CCI)模型,Normal组不做处理,Sham 组仅暴露坐骨神经。于CCI术后第1,4,7,14天分别测定各组大鼠左后肢机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)。D1,D4,D7,D14组分别于CCI术后第1,4,7,14天,假手术组和正常组于相应第14天采集腰段脊髓。采用免疫组织化学法观察mTOR在大鼠脊髓的分布,采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测CCI大鼠腰段脊髓mTOR mRNA和蛋白的表达。另取雄性SD大鼠30只,完 成鞘内置管后,随机分为6组(n=5)：空白组、CCI组、早给药组(CCI+early RAPA组)、早溶剂组[CCI+early二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide,DMSO)组]、晚给药组(CCI+later RAPA组)、晚溶剂组(CCI+later DMSO组)。空白组不建立CCI模型也不给药;CCI组建立左后肢CCI模型;CCI+early RAPA组于CCI术后4 h开始鞘内注射1% RAPA 10 μL,连续给药3 d;CCI+early DMSO组于CCI术后4 h开始鞘内注射同浓度等体积溶剂4% DMSO 10 μL作为对照;CCI+later RAPA组于CCI术后第7天开始鞘内注射1% RAPA 10 μL,连续给药3 d;CCI+later DMSO组于CCI术后第7天开始鞘内注射同浓度等体积溶 剂DMSO10 μL作为对照。各组于鞘内置管前后以及CCI术后隔天测定痛阈。于CCI术后第14天取腰段脊髓,免疫组织 化学检测脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。结果：mTOR免疫组织化学阳性颗粒广泛分布于正常脊髓神经元胞浆中;D14组大鼠术后第1,4,7,14天的PWMT与其基础值比较明显降低,术后第4,7,14天的PWTL与其基础值比较明显降低(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,CCI组(D1,D4,D7和D14组)大鼠腰段脊髓mTOR的mRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01);与CCI+early DMSO组相同时间点比较,CCI+early RAPA组 CCI术后第4,6,8,10,12,14天的PWMT和PWTL均升高(P<0.05或P<0.01);与CCI+later DMSO组相同时间点比较, CCI+later RAPA组CCI术后第8,10,12,14天的PWMT和PWTL均升高(P<0.05或P<0.01);CCI+early RAPA组与CCI+early DMSO组、CCI+later RAPA组与CCI+later DMSO组相比较, CCI大鼠术侧腰段脊髓背角GFAP免疫组织化学阳性面积与吸光度值均下降(均P<0.05或P<0.01)。结论：脊髓mTOR信号通路可能通过脊髓背角星形胶质细胞活化参与外周神经损伤诱发的痛觉过敏。     

细胞周期素依赖蛋白激酶-5抑制剂Roscovitine对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响

目的 探讨预先鞘内注射细胞周期素依赖蛋白激酶-5(Cdk5)抑制剂Roscovitine对瑞芬太尼痛觉过敏大鼠痛行为的影响.方法 SD雄性大鼠45只,随机数字表法分成5组(n=9):对照组(C)、切口痛组(Ⅰ)、瑞芬太尼组(R)、Roscovitine组(ROS)、Roscovitine+瑞芬太尼组(ROS+ R).ROS,ROS+R组术前30 min鞘内给予Roscovitine10μl(50μg),余组给予20％ DMSO10μl.除C组外均制作切口痛模型;R和ROS+R组切皮同时皮下泵注瑞芬太尼0.4ml (0.04mg/kg) 30 min.于术前24h、术后2h、6h、24h、48h检测大鼠术侧足底机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL).结果 与C组相比,Ⅰ组术后PWMT、PWTL明显降低(P＜0.01).与Ⅰ组相比,R组术后PWMT,PWTL明显降低(P＜0.01);而ROS组术后PWTL明显升高[2h:(20.26±1.33)s,(17.97±0.47) s;48h:(22.15±0.60)s,(19.89±1.27)s] (P＜0.05).ROS+R与R组相比,术后2h PWTL[ (19.13±1.72)s,(14.41±2.30)s]及PWMT[(10.4±1.95)g,(6.38±0.91)g]开始升高,分别持续至48h[(19.24±2.80)s,(14.87±1.95)s]和24h[ (8.88±1.41)g,(6.83 ±0.80)g] (P＜0.05).结论 Roscovitine能减轻大鼠切口引起的热痛敏,并能缓解瑞芬太尼诱发的切口痛大鼠痛觉过敏.     

鞘内注射m-AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响

目的 观察鞘内注射钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ特异性抑制剂m-AIP对坐骨神经结扎大鼠疼痛感觉分辨和情绪体验的影响.方法 SD雄性大鼠18只按随机数字表法分为3组(每组n=6):假手术对照Sham组(S组)、坐骨神经结扎模型对照Control组(C组)、m-AIP组.C组和m-AIP组制备坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型,S组仅显露坐骨神经不结扎.术后7dS组和C组鞘内注射0.9％NaCl20μl,m-AIP组鞘内注射溶于0.9％ NaCl的m-AIP 0.5 nmol/20μl.各组于给药后1.5h行反映痛情绪的大鼠位置逃避实验(Place escape/avoidance paradigm,PEAP),给药前及给药后2h、4h、8h检测大鼠的热缩足反射潜伏期(Paw withdrawal thermal latency,PWTL)和机械性缩足反射阈值(Paw withdrawal mechanical threshold,PWMT).结果 鞘内给予m-AIP 0.5 nmol能够改善大鼠痛行为反应,减少位置逃避行为.给药后2h、4hm-AIP组PWTL[(11.45±2.04)s,(10.26±1.48)s],PWMT[(21.15±4.32)g,(20.45 ±4.09)g]比C组PWTL[(9.63±1.65)s,(9.30±0.73)s],PWMT[(13.87±2.36)g,(14.80±3.12)g]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).给药前及给药后8h m-AIP组PWTL,PWMT与C组PWTL,PWMT相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CaMKⅡ在坐骨神经痛的感觉分辨和情绪体验中起重要作用,鞘内注射m-AIP能够改善CCI大鼠痛行为和痛相关负性情绪.     

背根神经节脉冲射频对 CCI 模型大鼠机械性痛阈及相关炎性因子表达的影响

目的 通过制备慢性坐骨神经缩窄损伤(CCI)模型,并对模型大鼠实施背根神经节(DRG)脉冲射频(PRF),探讨其对SD大鼠模型的干预效果及机制研究。方法 60只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、CCI组、CCI+PRF组、CCI+假脉冲射频组(CCI+NPRF组),每组15只。观察大鼠造模前及造模后1、3、5、7 d,脉冲射频后1、7、14 d的痛阈改变。造模前、CCI-7 d、PRF-14 d,采用ELISA检测脊髓SDF-1/CXCR4、TRPV1的表达;造模前、CCI-1 d、PRF-1 d检测大鼠血清中TNF-α、IL-6细胞因子变化。结果 与Sham组比,CCI组、CCI+PRF组、NPRF组大鼠在神经损伤后右后爪PWMT和PWTL均显著降低(P0.05),而脊髓SDF-1/CXCR4、TRPV1表达增强,大鼠血清TNF-α、IL-6表达明显上升(P0.05)。PRF治疗后CCI+PRF组大鼠机械性痛阈较其他三组显著升高(P0.05),但仍低于Sham组(P0.01),脊髓SDF-1/CXCR4、TRPV1表达则明显减少,同时血清中TNF-α、IL-6表达明显下降(P0.05)。结论 脉冲射频能有效减轻CCI模型大鼠的痛敏,其机制可能与抑制趋化因子SDF-1/CXCR4、TRPV1及调节TNF-α、IL-6的表达有关。     

P2X4受体在瑞芬太尼诱发大鼠术后痛觉过敏中的作用

目的：探究P2X4受体在阿片类药物诱导的痛觉过敏中的作用。方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随 机分为尾静脉泵注生理盐水组(N0组)、瑞芬太尼0.5 μg/(kg.min)组(R1组)、瑞芬太尼1.0 μg/(kg.min)组(R2组)、瑞芬太尼1.5 μg/(kg.min)组(R3组)、瑞芬太尼5.0 μg/(kg.min)组(R4组)。于处理前1 d(T1),尾静脉置管后30 min(T2),停药后30 min(T3),1 h(T4),2 h(T5),24 h(T6)测量大鼠机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL),获得诱导痛觉过敏最佳的瑞芬太尼输注速度;随后取成年雄性SD大 鼠,分为尾静脉置管后泵入生理盐水组(N组)、尾静脉置管后泵入瑞芬太尼1.0 μg/(kg.min)组(R组)。于上述处理时间 点T1,T2,T4测量大鼠PWMT和PWTL,并于停药后1 h选取大鼠脊髓腰膨大检测P2X4受体的mRNA和蛋白表达。另取 成年雄性SD大鼠,并将其分为切口痛模型并尾静脉置管后泵入生理盐水组(I+N组)和切口痛模型并尾静脉置管后泵入瑞 芬太尼1.0 μg/(kg.min)组(I+R组)。于上述处理时间点T1,T2,T3,T4,T5,T6以及8 h(T7)和72 h(T8)测量大鼠PWMT 和PWTL,于停药后1 h取大鼠脊髓腰膨大组织检测P2X4受体的mRNA和蛋白表达,免疫荧光检测小胶质细胞激活的 状态。结果：T3和T5时间点PWMT和PWTL的趋势均为R4组0.05)。与I+N组相比,I+R组大鼠在T4,T5,T6时间点的PWMT和PWTL明显降 低,差异均有统计学意义(均P<0.05),同时I+R组大鼠脊髓P2X4受体mRNA和蛋白表达水平均明显上调,差异均有统 计学意义(均P<0.05)。此外,I+R组大鼠脊髓背角的小胶质细胞的活化较I+N组明显增强。结论：静脉注射瑞芬太尼可致大鼠痛觉过敏,单纯静脉注射瑞芬太尼导致的痛觉过敏可能与P2X4受体无关;瑞芬太尼可导致切口痛大鼠出现更明显的痛觉过敏,其中小胶质细胞活化及P2X4受体可能参与瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏的形成机制。     

瑞芬太尼痛觉过敏小鼠中脑导水管周围灰质Mu 阿片受体和神经元限制性沉默因子表达水平的变化

目的：观察瑞芬太尼痛觉过敏小鼠中脑导水管周围灰质(periaquductal gray,PAG)中Mu阿片受体(Mu-opioid receptor,Mor)和神经元限制性沉默因子(neuron-restrictive silencer factor,NRSF)表达水平的变化。方法：32只小鼠采用 随机数字表法随机分入4组(n=8)：对照组(C组)、切口痛组(I组)、瑞芬太尼组(R组)和切口痛+瑞芬太尼组(IR组)。采 用Von Frey细丝和BME-410A型热痛刺激仪测量小鼠术前24 h和术后2,6,24,48 h的机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical thresholds,PWMT)和热缩足反射潜伏期((paw withdrawal thermal latency,PWTL)。Western印迹检测术后48 h 小鼠PAG中Mor和NRSF的表达水平。结果：与C组和术前基础值比较,I组、R组和IR组术后2~48 h PWMT和PWTL均 显著降低(P<0.01);术后2,6 h时R组较I组PWMT和PWTL略高(P<0.01),术后24,48 h时两组间差异无统计学意义(P> 0.05);与I组比较,IR组术后PWMT和PWTL显著降低,并持续到术后48 h(P<0.01)。与C组和I组比较,R组和IR组Mor 表达均显著降低(P<0.01),NRSF表达显著升高(P<0.01),C组和I组之间Mor和NRSF表达差异无统计学意义(P>0.05)。 结论：术中短时程输注瑞芬太尼可诱导小鼠术后痛觉过敏,同时瑞芬太尼还诱导PAG中Mor水平降低及NRSF水平增 加,该变化可能参与瑞芬太尼诱导的痛觉过敏的形成。     

抑制脊髓络丝蛋白表达对神经性疼痛成年大鼠疼痛行为的影响研究

背景　络丝蛋白是主要参与神经元发育和成熟大脑突触过程的大分子细胞外基质糖蛋白。在神经元迁移过程终止后,脊髓尤其是脊髓背角浅层的神经元中仍有络丝蛋白的表达。神经性疼痛大鼠脊髓背角中络丝蛋白的表达明显减少,但其在伤害性感受和疼痛中的作用仍不明确。目的　探讨鞘内注射络丝蛋白shRNA对成年大鼠疼痛行为的影响。方法　2015年,选取8~10周龄的SPF级雄性SD大鼠119只,置管成功108只,采用随机分组法将其分为正常（Norm）组12只、RNA干扰（RNAi）组12只、假手术（Sham）组12只、Sham+RNAi（SR）组6只、慢性坐骨神经压迫性损伤（CCI）组27只、CCI+RNAi（CR）组27只、CCI+空载体（EV）组12只。CCI组、CR组和EV组制备CCI模型,RNAi组、SR组、CR组鞘内给予络丝蛋白shRNA慢病毒载体,EV组给予空载体。计算干预后第4、7、10、14、21天络丝蛋白表达水平,于干预后第10天进行免疫组织化学观察络丝蛋白定位情况,检测干预前及干预后第1、4、7、10、14、17、21天大鼠足底机械缩足阈值（PWMT）、热辐射刺激潜伏期（PWTL）。结果　RNAi组第10天左、右侧络丝蛋白表达水平均高于Norm组,CR组第10天左侧络丝蛋白表达水平低于Sham组、CCI组,CCI组、CR组、EV组第10天右侧络丝蛋白表达水平均低于Sham组,CR组第10天右侧络丝蛋白表达水平低于CCI组,CCI组第4天右侧络丝蛋白表达水平低于CCI组左侧,CR组第4天右侧络丝蛋白表达水平低于CR组左侧,CCI组右侧、CR组左侧第7、10、14、21天络丝蛋白表达水平均低于CCI组左侧,CR组右侧第7、10、14、21天络丝蛋白表达水平均低于CCI组右侧（P<0.05）。Norm组络丝蛋白弥漫性分布于脊髓背角Ⅰ~Ⅱ、Ⅴ板层和外侧脊髓核（LSN）;RNAi组双侧脊髓背角的Ⅰ~Ⅱ板层及LSN中仅有极少量络丝蛋白,Ⅴ板层仍存少量表达;Sham组双侧脊髓背角中络丝蛋白表达则无明显影响;CCI组右侧脊髓背角中络丝蛋白表达水平低于对侧;CR组双侧脊髓背角浅层仅有少量络丝蛋白表达;空载体对EV组络丝蛋白的表达无明显影响。第1、4、7、10、14、17、21天CCI组、CR组、EV组的PWMT、PWTL均低于Sham组,第7、10、14、17、21天CR组的PWMT、PWTL均低于CCI组（P<0.05）。结论　在生理状态下,脊髓背角络丝蛋白对痛觉阈值无明显作用,但脊髓背角络丝蛋白表达减少可能参与神经损伤引起的神经性疼痛的发展过程。     

17β-雌二醇对大鼠神经病理性疼痛阈值的影响

目的 探讨17β-雌二醇对神经病理性大鼠疼痛阈值的影响.方法 SD雌性大鼠50只,采用随机数字表法分5组,假手术组(分离暴露左侧坐骨神经但不结扎,注射生理盐水),其余4组建立坐骨神经慢性压榨损伤(CCI)模型,CCI组(注射生理盐水),雌二醇组(注射17β-雌二醇),拮抗剂组(注射AP-5),复合组(注射17β-雌二醇+ AP-5),每组10只.采用机械刺激缩足反射阈值(PWMT)检测大鼠的机械痛阈值,热刺激缩足反射潜伏期(PWTL)检测大鼠的热痛阈值,免疫组织化学法和Western blot法测定脊髓背根神经节 N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDARl)蛋白的表达.结果 与假手术组比较,CCI组和雌二醇组大鼠PWMT 降低(P<0.05),PWTL缩短(P<0.05),NMDARl蛋白的表达显著增加(P< 0.05).与 CCI组比较,雌二醇组大鼠PWMT 降低(P<0.05),PWTL缩短(P<0.05),NMDARl蛋白的表达显著增加(P<0.05).结论 17β-雌二醇可以通过增加NMDARl的表达,降低神经病理性大鼠的疼痛阈值.     

自噬调节在脉冲射频治疗神经病理性疼痛中的作用

目的：观察腰5(L5)脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)致慢性疼痛大鼠接受背根神经节脉冲射频(pulse radiofrequency,PRF)治疗后痛觉行为学的变化,检测脊髓背角自噬相关基因LC3和自噬受体蛋白P62的表达情况,研 究PRF是否能通过调节脊髓背角神经元自噬水平发挥镇痛作用。方法：36只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、SNL 组(行左侧L5脊神经的暴露和结扎)和SNL+PRF组(建立SNL模型后即刻给予1次同侧背根神经节PRF治疗)。分别于手 术前1 d及术后1,3,7,14,28 d观察各组大鼠机械刺激缩足反应阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)改 变,Western印迹检测自噬相关基因LC3和细胞自噬受体蛋白P62在大鼠损伤侧相应节段脊髓背角的表达改变。结果： 与Sham组相比,SNL组大鼠在术后各时点PWMT均明显下降(P<0.05);与SNL组相比,SNL+PRF组大鼠在PRF治疗术 后第1天即出现PWMT的升高,并持续28 d(P<0.05);与Sham组相比,SNL组大鼠在术后7 d脊髓背角LC3-II和P62蛋白 表达明显升高(P<0.05);与SNL组相比,SNL+PRF组大鼠在术后7 d脊髓背角LC3-II和P62蛋白表达明显下调(P<0.05)。 结论：SNL慢性疼痛大鼠接受背根神经节PRF治疗后出现疼痛行为学改善,PRF治疗可能通过上调脊髓背角神经元自 噬水平发挥镇痛作用。     

伤害性杏仁核中mGluR5在芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏中的作用

目的：探讨伤害性杏仁核(laterocapcular division of central nucleus of amygdala,CeLC)中代谢型谷氨酸受体5 (metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5)在芬太尼即阿片类药物诱发的痛觉过敏(opioid-induced hyperalgesia,OIH)中 的作用。方法：取SD雄性大鼠12只,随机分为正常1组(n=6)与OIH1组(n=6),OIH1组通过颈下皮肤注射芬太尼制备 OIH模型,正常1组注射等量生理盐水。造模后6.5 h分别测量大鼠机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold, PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)以确定造模成功,随后取右侧CeLC组织行蛋白质印迹 法检测mGluR5的表达量。另取SD雄性大鼠40只,随机分为OIH+DMSO组、OIH+MTEP(3.0 μg)组、OIH+MTEP(7.5 μg) 组、OIH+MTEP(15.0 μg)组4组,每组10只,其中MTEP为mGluR5的选择性抑制剂。每组CeLC置管并恢复1周后制备 OIH模型,随后向各组CeLC分别注射0.5 μL DMSO和3.0,7.5,15.0 μg MTEP。观察给药前后大鼠PWMT和PWTL的变 化,并取CeLC组织检测mGluR5蛋白的表达水平。另取SD雄性大鼠8只,随机分为正常2组与OIH2组,前者皮下注射 生理盐水,后者注射等量芬太尼制备OIH模型,在脑片上记录两组CeLC神经元MTEP(1 μmol/L)给药前后的微小兴奋 性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic currents,mEPSCs)。结果：与正常1组相比,OIH1组PWMT明显降低且 PWTL明显缩短,mGluR5蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。各组造模后PWMT与PWTL均明显下降(P<0.05),提示造 模成功,CeLC中mGluR5的表达水平明显升高,以上变化可被MTEP呈剂量依赖性逆转(P<0.05)。脑片膜片钳电生理记 录显示：与正常2组相比,OIH2组mEPSCs幅度与频率均明显升高(P<0.05),并可被MTEP逆转。结论： CeLC mGluR5 的高表达可能参与了OIH的维持,抑制CeLC mGluR5的活性可以减轻芬太尼诱导的痛觉过敏症状。     

DNA甲基转移酶类在大鼠神经病理性疼痛发病机制中的作用

目的：探索DNA甲基转移酶类(DNA methyltransferases,DNMTs)在坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain,NPP)发病机制中的作用。方法：腰段鞘内置管成功的27只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组+生理盐水组(sham+NS组)、CCI+NS组及CCI+5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-AZA)组(CCI+5-AZA组),每组9只。CCI术后第3天至第14天,sham+NS组和CCI+NS组每天鞘内注射1次NS,CCI+5-AZA组每天鞘内注射1次10 μmol/L 5-AZA。分别于术前及术后第3,5,7,10,14天测定各组大鼠术侧后足机械痛阈和热痛阈。术后第14天各组大鼠于深麻醉下处死,取脊髓腰膨大,采用RT-PCR,Western印迹和免疫组织化学测定DNMT1,DNMT3a和DNMT3b的表达。结果：术后第3天至第14天,CCI+NS组的机械痛阈和热痛阈均较sham+NS组明显下降(均P<0.05)。术后第5天至第14天,CCI+5-AZA组的机械痛阈和热痛阈均较CCI+NS组明显上升(均P<0.05),但仍低于sham+NS组(均P<0.05)。DNMT1,DNMT3a和DNMT3b在大鼠脊髓腰膨大背角处有致密表达,且以胞核分布为主。术后第14天CCI+NS组的DNMT1,DNMT3a和DNMT3b表达较sham+NS组均明显上升(均P<0.05)。CCI+5-AZA组的DNMT1,DNMT3a和DNMT3b表达均较CCI+NS组明显下降(均P<0.05),但仍高于sham+NS组(均P<0.05)。结论：DNMTs在脊髓腰膨大处的表达上调很可能在CCI大鼠NPP发病机制中起重要作用。DNMTs抑制剂5-AZA可下调DNMTs的表达和缓解CCI诱导的NPP,可能成为NPP的潜在治疗药物。     

血管内皮生长因子抗体缓解大鼠糖尿病周围神经痛

目的：探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在大鼠糖尿病周围神经痛(diabetic peripheral neuropathic pain,DPNP)发病机制中的作用。方法：24只8周Sprague-Dawley雄性大鼠,随机分为3组,每组8 只：对照组(C组),单次腹腔注射柠檬酸钠溶液10 mL/kg;模型组(M组),单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)65 mg/kg;干预组(T组),单次腹腔注射STZ 65mg/kg建立模型,且在造模后第1,3,7,10天分别单次腹腔注 射抗VEGF抗体10 mg/kg。C组和M组分别在相同时间点腹腔注射等体积柠檬酸钠溶液。注射STZ前1 d(基础值)、注 射STZ后第1,3,7,14天检测大鼠空腹血糖值;注射STZ前1 d、注射STZ后第1,3,5,7,10,14天分别测定大鼠 体重及后足机械痛阈和热痛阈;应用Western印迹法测定腰段脊髓磷酸化蛋白激酶B(phospho protein kinase B,p-Akt) 和瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)的蛋白表达。结果：注射STZ后,M组及T 组大鼠与C组大鼠各时间点体重差异有统计学意义,C组大鼠体重增加(P<0.01)。与C组大鼠相同时间点比较,M组 及T组大鼠空腹血糖升高(P<0.01)。3组大鼠足底机械缩足反射阈值(paw withdraw mechanical threshold,PWMT)和足底 皮肤热刺激缩足反射潜伏期(paw withdraw thermal latency,PWTL)随时间变化差异有统计学意义(P<0.01),与C组相 同时间点比较,M组(第3,5,7,10,14天)及T组(第5,7,10,14天)PWMT和PWTL降低(P<0.01)。与M组比较, T组大鼠第10和14天PWMT和PWTL升高(P<0.01或P<0.05)。与C组比较,M组和T组大鼠脊髓p-Akt和TRPV1表达升高 (P<0.01);与M组比较,T组大鼠p-Akt和TRPV1表达降低(P<0.01)。结论：VEGF可能通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶 B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路调控TRPV1的表达参与大鼠DPNP,抗VEGF治疗可能 成为DPNP治疗的靶点之一。     

鞘内注射人前脑啡肽原基因单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体对神经性疼痛大鼠的镇痛作用

目的 观察鞘内注射人前脑啡肽原基因(HPPE)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用.方法 60只成年雄性SD大鼠,体重260～320 g,鞘内置管成功3 d后,建立坐骨神经结扎致神经痛(CCI)模型,随机分为以下4组(n=15):假手术组+生理盐水(Sham组),Sham组仅暴露右侧坐骨神经分支;CCI+生理盐水(NS组);CCI+Phsvires-LacZ空白载体组(SHZ组);CCI+Phsvires-HPPE-LacZ载体组(SHPZ组).将构建好的含HPPE的重组HSV-Ⅰ扩增子载体注入大鼠鞘内,1周后从NS组、SHZ组和SHPZ组中各抽出9只大鼠用于X-gal染色原位检测LacZ的表达,RT-PCR方法检测HPPE的表达,放免法检测脊髓组织L-脑啡肽(L-EK)浓度,所有大鼠均测基础痛阈值,并在第3天、1、2,3、4、5周时测定大鼠右后爪机械痛阈值(PMWT)和热痛阈值(PWTL).结果 鞘内注射SHPZ后,外源人前脑啡肽原基因能有效表达,与对照组比较,SHPZ组PMWT和PTWL较注射前明显延长,于第1周开始差异有统计学意义(P<0.05),于第3周达到高峰,镇痛作用可持续5周.结论 鞘内注射人前脑啡肽原基因单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体对神经病理性疼痛大鼠有明显的镇痛作用.     

鞘内注射CREB反义寡核苷酸对坐骨神经结扎小鼠疼痛行为的影响

目的 探讨鞘内注射cAMP反应元件结合蛋白(CREB)反义寡核苷酸(ODN)对坐骨神经结扎小鼠痛行为的影响.方法 鞘内置管成功C57BL/6雄性小鼠24只,体质量20 ～25g,随机分为4组(n=6),生理盐水组(NS组),CREB同义寡核苷酸组(S组),CREB错义寡核苷酸组(M组),CREB反义寡核苷酸组(A组).制备坐骨神经慢性挤压伤(CCI)模型,造模后第1～6天,4组分别鞘内给予生理盐水5μl、同义寡核苷酸5μg／5μl、错义寡核苷酸5μg/μl、反义寡核苷酸5μg/5μl,每天1次.于造模前、后第1,3,5,7,10,14,17,21天测量CCl小鼠同侧足底机械刺激痛阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).结果 A组小鼠1～7d内的疼痛阈值维持在基础值水平[第7天,PWMT:(0.81±0.20),(1.00±0.19)g,P＞0.05;PWTL:(5.96±0.69),(6.93±1.08)s,P＞0.05].在小鼠CCI后的第10天,A组损伤侧足出现疼痛[第10天,PWMT:(0.56 ±0.19),(1.00±0.19)g,P＜0.05;PWTL:(3.93±0.28),(6.93±1.08)s,P＜0.05],但是与NS组[第10天,PWMT:(0.56±0.19),(0.37±0.08)g,P＜0.05; PWTL:(3.93±0.28),(3.14±0.45)s,P＜0.05]、S组、M组相比,疼痛明显减轻,并且持续到术后第21天.结论 在CCI诱导的神经病理性疼痛的发展阶段连续鞘内注射CREB反义寡核苷酸可以完全抑制给药期内痛行为表现,并且在停止给药后15d仍有明显缓解疼痛的作用.     

腹腔注射沙利度胺对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 观察腹腔注射沙利度胺对骨癌痛小鼠痛行为的影响.方法 36只C3H/HeJ小鼠随机分为肿瘤组(n=18)和假手术组(n=18),每组抽取6只小鼠用于观察肿瘤细胞接种后小鼠痛行为学的变化.将含2×105个纤维肉瘤NCTC2472细胞的最小必需培养基(α-MEM)注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内,制作骨癌痛模型,假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM.在接种前1 d,肿瘤组再分为两组(n=6):肿瘤+Thalidomide组,肿瘤+Vehicle组;假手术组相应分为假手术+Thalidomide组,假手术+Vehicle组.肿瘤+Thalidomide组和假手术+Thalidomide组在术后第1天到第7天,每天腹腔注射50 mg/kg的沙利度胺;肿瘤+Vehicle组和假手术+Vehicle组于同一时间注射等量体积的溶剂.各组于接种前1 d,接种后第3天、5天、7天、10天、14天检测痛行为学指标,包括机械缩足阈值(PWMT)和热缩足潜伏期(PWTL).结果 (1)接种肿瘤细胞后第7天,肿瘤组小鼠PWMT(1.07±0.30)g与假手术组(1.70±0.33)g相比,显著降低(P＜0.05);接种后第10天,肿瘤小鼠的PWTL(12.60±1.69)s较假手术小鼠(17.70±1.54)s明显缩短(P＜0.05),肿瘤小鼠的痛行为学随时间逐渐加重;(2)接种肿瘤细胞后第7天,肿瘤+Thalidomide组小鼠PWMT(1.53±0.39)g与肿瘤+Vehicle组(1.07±0.39)g相比,显著升高(P＜0.05);接种后第10天,肿瘤+Thalidomide组小鼠的PWTL(16.48±1.13)s较肿瘤+Vehicle组小鼠(12.64±1.56)s明显延长(P＜0.05).结论 腹腔注射沙利度胺能够显著改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

强痛定联合对乙酰氨基酚对神经病理性疼痛大鼠模型促炎因子的影响

目的观察强痛定联合对乙酰氨基酚治疗神经病理性疼痛大鼠促炎症细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1（IL-1）和前列腺素E2（PGE2）的影响。方法 40只SD大鼠随机分为5组：假手术组、坐骨神经慢性压迫模型（CCI）组、对乙酰氨基酚组、强痛定组和联合组（n=8）。手术前1天和手术后第1,3,5,7天测定各组动物的机械性痛阈和热痛阈。采用酶联免疫吸附实验方法检测脊髓TNF-α、IL-1和PGE2浓度变化。采用t检验和方差分析法进行结果分析。结果 CCI可导致大鼠机械性痛阈和热痛阈明显降低,CCI组脊髓TNF-α[（3.25±0.34）pg/mg]、IL-1[（15.36±1.49）pg/mg]和PGE2[（162.57±13.63）pg/mg]升高。与CCI组比较,两种药物联合治疗后能明显改善CCI大鼠痛敏状态,差异均有统计学意义（均P〈0.05）,并显著降低TNF-α[（1.58±0.27）pg/mg]、IL-1[（7.61±0.85）pg/mg]和PGE2[（95.16±8.74）pg/mg]的表达,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论两种药物联合抑制炎症细胞因子释放可减轻CCI大鼠的疼痛反应。