视网膜S抗原在不同动物诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎

本研究从牛视网膜提纯了S抗原，将其免疫Hartley原鼠，SD大鼠和Lewis大鼠，诱发的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎（EAU），但其发生率、临床及组织学表现则有很大没。根据本文的结果及文献报道的结果，胜者就其差异的原因及人类葡萄膜视网膜炎的关联性等方面进行了有关讨论。     

不同剂量光感受器间维生素A类结合蛋白诱导的实验性自体免疫性葡萄膜炎

目的：探讨不同剂量光感受器间维生素A类结合蛋白fIRBP）的致葡萄膜视网膜炎活性,为研究人类葡萄膜视网膜炎发生机制及治疗方案等提供稳定的动物模型。方法：根据IRBP剂量的不同分为10μgIRBP组、30P,gIRBP组、50txgIRBP组和对照组,前3组采用IRBP联合完全弗氏佐剂和400ng百日咳毒素免疫Lewis大鼠,对照组采用生理盐水联合弗氏佐剂和400ng百日咳毒素免疫。结果：30μgIRBP组和50μgIRBP组均可诱发出实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）,与对照组相比有统计学意义,而低剂量组（10μg）则不能,而且50μgIRBP组与30μgIRBP组相比,在炎症严重程度和炎症持续时间上有统计学意义。结论：IRBP具有强烈的致葡萄膜视网膜炎活性,可以成功诱发出EAU,且疾病严重程度和炎症持续时间呈剂量依赖性。     

TGF-β2玻璃体腔注射对EAU大鼠视网膜IL-2和IL-10表达的影响

目的 以实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(EAU)为研究对象,探讨TGF-β2玻璃体腔注射对EAU大鼠IL-2和IL-10合成、表达的影响及对EAU的治疗作用.方法 制备EAU动物模型,按照随机数字表法将Lewis大鼠分为正常对照组、EAU未治疗组和EAU TGF-β2治疗组.治疗组于第1,4,7,10,13,16,19...     

葡萄膜视网膜炎发病机制的研究取得进展

葡萄膜视网膜炎是常见和重要的致盲眼病之一,其发病机制目前尚不完全清楚,缺乏理想的治疗方法,一直成为该领域研究的焦点。该校中山眼科中心杨培增教授与潘苏华研究员、谢楚芳副研究员等在毛文书、李绍珍教授指导下,从1987年开始,用11年时间对该病的发病机制进行了系列研究,     

针对大鼠ICOS基因的shRNA表达质粒的构建与鉴定

目的 构建针对大鼠可诱导共刺激因子(inducible co-stimulater,ICOS)基因的特异性RNA干扰质粒,并进行鉴定.方法 采用U6启动子,分别把被9bp序列间隔的19bp长短的ICOS靶序列的反向重复序列,连接到线性化处理的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒中,分别构建ICOS短发夹环RNA(ShRNA),产生重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS.结果 将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,并作测序分析,经测序鉴定确定为所需序列.结论 针对大鼠ICOS基因的特异性RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-ICOS的成功构建,为进一步研究阻断ICOS表达对实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎(experimental autoimmune uveoretinitis,EAU)的影响奠定基础.     

葡萄膜视网膜炎发病机制研究的进展

葡萄膜视网膜炎是一种发病机制尚不完全清楚的疾病,目前尚无理想的治疗方法,一直由于发病机制不明,成为困扰眼科医师的一个常见和重要的致盲眼病之一,也成为此领域研究焦点。中山医科大学中山眼科中心杨培增教授等人从１９８７年开始,用了１１年时间分别在毛文书、李...     

实验自身免疫性葡萄膜视网膜炎中Bcl-2、FasL的表达

目的 通过检测Bcl-2、FasL在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的表达,探讨Fas/FasL介导的细胞凋亡在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发病机制中的作用.方法 自新鲜牛眼球中提取S抗原,与弗氏完全佐剂制成乳化物注入Wistar 大鼠皮内.观察大鼠实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎发作时间、临床表现及组织病理学改变,采用免疫组织化学S-P方法,检测 EAU 组和正常对照组视网膜Bcl-2、FasL的表达.结果 EAU组动物的14只眼睛在免疫后不同时间发生临床可见的炎症(发病率为100%),正常对照组无临床可见炎症,所有具有阳性体征者均有组织病理学改变.免疫组织化学染色发现,EAU 组及正常对照组视网膜组织中均有FasL表达,而EAU组Bcl-2表达增高,正常对照组Bcl-2低表达.结论 Fas/FasL介导的细胞凋亡在维持免疫赦免中有重要意义;Bcl-2 对Fas/FasL 介导的细胞凋亡有调节作用;EAU的发生与细胞凋亡有关.     

iNOS与IFN-γ参与EAU发病机制的研究

目的建立大鼠EAU模型,探讨iNOS与IFN-γ参与EAU发病及其相互作用的机制。方法用视网膜S抗原与Freund完全佐剂免疫大鼠诱导EAU模型。观察EAU发作时间、EAU临床评分及组织病理学改变;并采用免疫组织化学SP法,检测EAU组和对照组动物眼后部葡萄膜视网膜iNOS、IFN-γ的表达。结果EAU组动物的眼睛在免疫后不同时间发生不同程度的炎症（发病率为100%）,临床评分为3.14±0.61,具有阳性体征者均有葡萄膜视网膜组织病理学改变,模型建立成功。经免疫组织化学染色发现,EAU组iNOS、IFN-γ表达阳性率分别为93%、93%。结论iNOS与IFN-γ在Th1细胞参与EAU的发病机制中发挥一定作用。     

miRNA-145通过调控IRS-1影响葡萄膜黑色素瘤细胞增殖

背景：微小RNA（miRNA）在肿瘤发生过程中可以作为癌基因或者抑癌基因发挥作用。本文中我们研究了miR-145在葡萄膜黑色素瘤发生过程中所起的作用。 方法：采用安捷伦miRNA芯片在葡萄膜黑色素瘤中检测miRNA的表达谱,并用实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）验证miR-145在正常葡萄膜组织,葡萄膜黑色素瘤组织和葡萄膜黑色素瘤细胞系中的表达水平。使用慢病毒表达系统构建了稳定过表达miR-145的葡萄膜黑色素瘤细胞系MUM-2B和OCM-1。使用MTT方法检测细胞增殖。使用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。通过生物信息学预测miR-145的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因检测来验证。使用Western blot检测潜在的miR-145靶蛋白IGF-1R和IRS-1的表达。在OCM-1细胞系中敲除IRS-1基因通过TUNEL, BrdU以及流式细胞术验证其在细胞中的功能。 结果：与正常葡萄膜组织样本比较,葡萄膜黑色素瘤组织中发现了47种miRNA上调,61种miRNA下调。其中miR-145在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中表达比正常葡萄膜组织显著下调。在葡萄膜黑色素瘤细胞系中过表达miR-145可以抑制细胞增殖,并将阻断细胞从G1期进入S期,同时还可以促进肿瘤细胞的凋亡。鉴定了IRS-1可能为miR-145在葡萄膜黑色素瘤中的靶基因。敲除IRS-1基因与过表达miR-145具有类似的效果。 结论：我们的数据首次表明了miR-145可能通过下调IRS-1而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖。     

氩激光治疗葡萄膜渗漏

葡萄膜渗漏又称葡萄膜特发性浆液性脱离,或特发性葡萄膜渗漏综合征。Schepens及 Brockhurst 于1963年首次报告以后,相继有多篇报道,描述了本病的临床特征、病因探讨、病理表现、视网膜下液的分析、治疗效果等。国内也曾报道本病的手术治     

Apoptosis of infiltrating cells in experimental autoimmune uveoretinitis

Objective To investigate the cellular phenotype and apoptosis of infiltrating cells involved in experimental autoimmune uveoretinitis (EAU). Methods Immunohistochemical staining and in situ apoptosis staining were performed using monoclonal antibodies to monocytes and macrophages (ED1), major histocompatibility complex (MHC) class-Ⅱ antigen (OX6), T lymphocytes (R73) and TACS 1 Klenow kit on both ocular sections and wholemounts from Lewis rats after immunization with interphotoreceptor retinoid-binding protein (IRBP). Results EAU was induced in 12 of 16 Lewis rats with a mean clinical inflammation score of 1.29±0.7.Influx of monocytes, lymphocytes and MHC class Ⅱ-positive cells into the uvea and retina was noted after immunization with IRBP. Apoptosis of infiltrating cells was observed in the uvea and retina, and more apoptotic cells were present in the iris and ciliary body compared with those in the choroid and retina. Conclusion Apoptosis of infiltrating cells occurs at the early stage of EAU, which may greatly contribute to the rapid regression of the inflammation induced by IRBP.     

牛S抗原的提取、鉴定及EAU模型的建立

目的 建立实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）动物模型，研究自身免疫病的发病机制。方法 依据AI－Mahdawi等的方法并加以改进，自牛视网膜组织提取S抗原，并用免疫Wistar大鼠。结果 提取的S抗原与文献报告结果大致相同，免疫的Wistar大鼠全部出现典型的EAU病变，观察临床症状及病理检测。结论 以牛S抗原免疫Wistar大鼠的EAU模型建立成功。     

一步离子交换层析法提纯牛视网膜可溶性抗原

目的：探讨一步离子交换层析法提纯牛视网膜可溶性抗原（S-Ag)。方法：利用DEAESepharoseFF凝胶及自动层析系统一步层析分离提纯牛视网膜S-Ag，聚丙烯酰胺凝胶电泳确定分子量，等电聚焦电泳确定等电点。结果：分析证实，S-Ag分子量52000，等电点6.20，利用提纯S-Ag成功地诱发出实验性自身免疫性葡萄膜视网膜类（EAU）动物模型。结论：经一步层析法提纯的S-Ag，可用于EAU动物模型的建立。     

Role of T-cell receptor V beta 8.3 peptide vaccine in the prevention of experimental autoimmune uveoretinitis

Background T-cell receptor （TCR） plays an important role in the development of autoimmune diseases. Recently, it was reported that immunization of animals with TCR peptide derived from the pathogenic cells could prevent autoimmune diseases. The aim of this study was to investigate whether vaccination with a synthetic peptide from the hypervariable region of TCR Vβ 8.3, an experimental autoimmune uveoretinitis （EAU）-associated gene, was able to prevent the disease. Methods EAU was induced in Lewis rats by immunization with IRBP R16 peptide emulsified in complete Freund＇s adjuvant （CFA）. The clinical and histological appearances were scored. Delayed type hypersensitivity （DTH） and lymphocyte proliferation were detected. Cytokine levels of aqueous humour, supernatants of cells from spleen and draining lymph nodes were measured by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Gene expression of TCR Vβ8.3 on CD4^＋ T cells was examined by real time quantitative polymerase chain reaction （PCR）. Results After vaccination, the intraocular inflammation was significantly mitigated, antigen specific DTH and lymphocyte proliferation responses were suppressed, interleukin （IL）-2 in aqueous humour, interferon （IFN）-γ and IL-2 produced by the spleen and draining lymph node cells were significantly decreased, whereas the production of IL-4 and IL-10 were increased. The response of draining lymph node cells to TCR Vβ 8.3 peptide was enhanced after vaccination. Inoculation with CFA alone did not affect the severity of EAU and the above parameters. The suppression of EAU was much stronger in the group of four fold inoculations than the group of two fold inoculations. The expression of TCR Vβ 8.3 gene was significantly reduced in the group of fourfold inoculations. Conclusion Vaccination with the synthetic TCR Vβ 8.3 peptide could remarkably inhibit the development of EAU.     

Influence of Yanyankang Powder(眼炎康散)on Th1/Th2 in Rats with Experimental Autoimmune Uveitis

Objective:To study the influence of Yanyankang Powder(眼炎康散) on Th1/Th2 in rats with experimental autoimmune uveitis(EAU).Methods:The EAU models were induced in Lewis rats by immunization with interphotoreceptor retinoid binding protein(IRBP) 1177-1191 in complete Freund's adjuvant.The rats were randomly divided into 3 groups:a model control group,a Yanyankang group,and a prednisone group,9rats in each group.The model control group was intervened with saline solution by gavage.The Yanyankang group was intervened with Yanyankang Powder 4 g/(kg·day) by gavage.The prednisone group were intervened with prednisone acetate tablets 5 mg/(kg·d) by gavage.All groups were intervened after immunization once every 2 days for 18 days and monitored by slit-lamp biomicroscopy daily until day 18.The levels of gamma interferon(INF-7) and interleukin-10(IL-10) in the supernatants of T cells were determined by enzyme-linked immunosorbent assay.Polymerase chain reaction(PCR) technology was used for measuring Th1 and Th2 related cytokine mRNA expressions.Results:Slighter intraocular inflammation was found in the Yanyankang group and the prednisone group than the control group.The levels of the IFN-γ and IL-10 in the supernatants of the spleen lymph node cells were 382.33 ± 6.30,155.87 ±4.46 μ/L in the Yanyankang group and270.93 ± 7.76,265.32 ±11.88 μg/L in the prednisone group.Both had significant differences compared with the control group(941.53 ± 8.59,20.67 ±4.65 μg/L;P=0.01).The PCR results showed the same tendency.Conclusion:Yanyankang Powder showed favorable effects in the rats with EAU by influencing the function of Th1 and Th2 cells.     

雷公藤内酯醇对试验性色素膜视网膜炎Th_1反应相关因子的抑制作用

目的:探讨雷公藤内酯醇（TP）对试验性色素膜视网膜炎（EAU）Th1反应相关因子的抑制作用。方法:用ELISA检测IL-12、IFN-γ水平;采用原位杂交染色法,观测TP对EAU的T淋巴细胞IL-12mRNA的表达的影响;采用电泳迁移率改变试验对EAU T淋巴细胞NF-AT活性检测。结果:①TP能有效的降低S-抗原诱导产生的EAU（P<0.05）;②TP能降低EAU T淋巴细胞IL-12、IFN-γ分泌水平;③P能抑制EAT淋巴细胞IL-12 mRNA的表达;④TP抑制EAU T淋巴细胞NF-AT活性。结论:TP对EAU的免疫抑制作用可能是通过抑制与Th1反应相关的调节因子使Th1反应减弱,而使EAU的发病率明显降低。     

重组IL-15/Fc融合蛋白治疗EAU的实验研究

目的 探讨重组小鼠IL-15/Fc融合蛋白治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)的效应和机制.方法 C57小鼠输注IRBPI-20抗原特异性T细胞,构建EAU模型,通过静脉注射重组IL-15/Fc融合蛋白,眼底镜和HE染色评价融合蛋白治疗EAU的疗效.用auto-MACS分离IRBPI-20抗原免疫小鼠T细胞,通过CFSE染色,3HTdR渗入抑制法,流式细胞仪,ELISA法检测IL-15/Fc融合蛋白对IRBPl-20特异性T细胞抗原特异性活化、增殖、分化和分泌炎症细胞因子的作用.结果 IL-15/Fc融合蛋白能有效抑制IRBPI-20特异性CD8 T细胞增殖、扩增、向CD44highCD62Llow效应细胞亚群的分化和分泌炎症性细胞因子.体内应用能有效抑制EAU的临床症状.结论 该重组IL-15/Fc融合蛋白能抑制IRBP1-20特异性CD8 T细胞活化、增殖、分化和分泌炎症性细胞因子,从而抑制EAU的炎症反应.     

荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎T细胞增殖研究中的应用

目的 探讨荧光染料CFSE在实验性葡萄膜炎(EAU)抗原特异T细胞增殖研究中的应用价值. 方法 以人类光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP)的多肽片段IRBP161-180为抗原,免疫B10RⅢ小鼠使其产生EAU.用CFSE荧光染料标记细胞,结合荧光单抗和流式细胞术,检测T细胞及其亚群在特异抗原刺激下,不同时间点细胞增殖的情况.结果 IRBP161-180刺激4 d后出现T淋巴细胞增殖分裂,表现为CFSE荧光强度的系列减半.使用荧光单抗双标记发现CD4+ T和CD8+ T细胞增殖反应不同步,CD8+ T细胞较CD4+T细胞增殖分裂更活跃,亲代细胞百分率下降更明显(P<0.01).结论 CFSE荧光标记技术是分析EAU抗原特异性T细胞及亚群增殖分裂的有力工具.