神经生长因子对新生大鼠HIBD后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:应用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,观察神经生长因子对海马区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax的影响,探讨其神经保护作用的分子生物学机制. 方法:72只大鼠随机分为对照组、HIBD组和NGF治疗组. 应用改良RICE法制作大鼠HIBD模型,TUNEL法检测各组动物海马区细胞凋亡数,免疫组化染色观察Bcl-2, Bax蛋白的表达. 结果:与假手术组相比,新生大鼠HIBD后海马区存在不同程度的细胞凋亡,Bcl-2表达轻度升高,Bax表达明显升高. 与HIBD组比较,NGF治疗后,凋亡细胞减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.01),Bax表达下降(P＜0.01). 结论:HIBD后,新生大鼠海马区细胞存在细胞凋亡,NGF治疗增强Bcl-2表达,减少损伤基因Bax表达,抑制细胞凋亡,具有脑保护作用.     

维拉帕米对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的：研究维拉帕米对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响。方法：对40只成年Wistar雄性大鼠建立冠状动脉左前降支（LAD）缺血再灌注模型，其中16只大鼠在缺血前及再灌注前给予给维拉帕米进行干预治疗，观察大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡情况，以及维拉帕米对其影响。采用末端标记法（TUNEL）进行细胞凋亡检测。结果：假手术组及单纯缺血凋亡细胞无明显增多，而缺血再灌注组凋亡细胞明显增多（P＜0．001）；在缺血前及再灌注前给予维拉帕米治疗均可减少细胞凋亡的数量（P＜0．01）。结论：在缺血再灌注可见心肌细胞凋亡发生，再灌注可加速细胞凋亡的发生；维拉帕米可抑制心肌细胞凋亡。     

新生鼠缺氧缺血再灌注后海马c-Fos, c-Jun的表达与神经保护

目的：探讨新生鼠缺氧缺血再灌注后c-fos,c-jun表达与神经元损伤后存活的关系。方法：7日龄SD鼠，经弹性管穿线阻断右颈总动脉3h，予低氧1h；制备成缺氧缺血脑损伤（HIBD）模型。后施以不同时期的再灌注，彩色多普勒监测血流。用免疫组织化学的方法，观察c-fos,c-jun在仔鼠HIBD后不同再灌注时间点海马的表达变化。Thionin染色观察神经元的凋亡。结果：HIBD组右侧海马c-fos,c-jun 6h达高峰，24h稍降，48h又升高，7d后显降低但仍明显高于对照组（P＜0．01）。对照组c-fos,c-jun有极少数表达。Thionin染色发现：CA1区锥体细胞在HIBD再灌注24h后神经元有明显凋亡（P＜0．01），但7d后细胞凋亡无统计学意义（P＞0．05），CA3，DG区神经元也保持形态上的完好。对照组海马各区仅极少数神经元凋亡。结论：c-Fos,c-Jun参与HIBD后海马神经元损伤后修复和存活。     

缺血缺氧新生大鼠脑内HO-1的表达及与CO的相关性

目的：研究缺血缺氧时新生大鼠脑内血红素氧化酶－1（HO－1）表达的变化及其与内源性一氧化碳的相关性。方法：7d龄SD仔鼠110只，随机分为3组：假手术对照组（Control,10只），缺血缺氧组（HI，50只）及缺血缺氧＋锌原卟啉组（HI＋Znpp,50只），于模型建立后0，1，4，12和24h处死，观察各组脑组织HO－1活性的变化及CO和cGMP含量。结果：（1）缺血缺氧组cGMP及CO水平在缺血缺氧后0h即升高，与对照组相比较有明显差异（P＜0．01），但与HI＋Znpp组无显著差别（P＞0．05）。（2）缺血缺氧后0h各组HO－1活性均无显著差异（P＞0．05）。（3）缺血缺氧组在1，4和12hHO－1，cGMP，CO水平与对照组及HI＋Znpp组比较均 明显升高（P＜0．01），在12h达到高峰，在24h恢复正常水平。与HI和12h均明显减低（P＜0．01），但仍高于正常组（P＜0．01）。结论：缺血缺氧对脑内HO－1诱导高表达，并与内源性一氧化碳的增高密切相关。HO－CO－cGMP系统可能在缺血缺氧脑损伤的病理生理过程中起着重要作用。     

多种细胞保护剂联合治疗胎儿窘迫探讨

目的：探讨使用多种细胞保护剂对胎儿窘迫治疗作用。方法：除对胎儿窘迫孕妇（40例,治疗组）予常规处理外,同时使用自由基清除剂、钙离子阻滞剂、兴奋性氨基酸抑制剂、糖皮质激素等多种细胞保护剂联合治疗,并与同期未用细胞保护剂的常规治疗组（40例,对照组）进行对比。观察治疗后异常胎监图形恢复情况,新生儿出生后Apgar评分,及两组新生儿窒息,吸入性炎及缺氧缺血性脑病的发生率。结果：治疗组异常胎监图形明显恢复（P＜0．01）;新生儿窒息发生率显低于对照组（P＜0．05）。新生儿生后1分钟Apgar评分显高于对照组（P＜0．05）。治疗组新生儿窒息、吸入性肺炎及缺氧缺血笥脑病的发生率明显低于对照组。结论：多种细胞保护剂有改善心脑循环,保护心脑细胞免受缺氧的损害。     

亚低温对大鼠短暂性脑缺血迟发性神经元死亡的影响

目的 观察亚低温（33℃）对大鼠短暂性脑缺血后神经元的保护作用。方法 32只DS大鼠分为假手术组、常温缺血组和即刻亚低温组，采用尼氏体亚甲蓝特殊染色观察存活神经元、原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）检测及电镜观察脑缺血后大鼠CA1区神经元凋亡情况。结果 与假手术组相比，常温缺血组海马CA1区存活的锥体细胞数目减少（P＜0．01）；与常温缺血组相比，亚低温缺血组海马CA1区存活的锥体细胞数目明显增多（P＜0．01）。亚低温缺血组大鼠海马CA1区TUNEL染色阳性细胞数目明显少于常温缺血组（P＜0．01）。结论 脑缺血后迟发性神经元死亡很可能通过凋亡途径，亚低温对缺血后神经元的保护作用与减少神经元凋亡有关。     

细胞凋亡与BCL-2在葛根素干预新生鼠缺血缺氧性脑损伤模型中的表达

目的探讨葛根素治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型的疗效.方法将28只7日龄SD大鼠随机分为四组.其中葛根素治疗组、生理盐水对照组、HIBD模型组各8只,均结扎右颈总动脉后吸入8%O22h,制成HIBD模型;假手术组4只.治疗组用葛根素1g/kg体重腹腔注射7d,对照组用生理盐水腹腔注射7d,HIBD模型组为空白对照.7d后处死,均采用原位末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡和SP染色BCL-2.结果假手术组可见少量凋亡细胞;HIBD模型组与生理盐水对照组细胞凋亡数显著多于葛根素治疗组,P＜0.01;BCL-2的免疫强度低于葛根素治疗组,P＜0.05.结论葛根素对细胞凋亡有抑制作用,对BCL-2蛋白的免疫强度有增强作用,证实其可治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤.     

细胞外组蛋白通过促进凋亡参与新生大鼠缺氧缺血性脑病损伤过程

目的：研究细胞外组蛋白是否通过促进凋亡参与新生大鼠缺氧缺血性脑病的损伤。方法：将54只7日龄新生SD大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组和治疗组,每组18只,各组组内再随机分为3个亚组：6 h组、24 h组及72 h组,每亚组6只;采用改良Rice法制备HIBD模型,治疗组予选模前5 min尾静脉注射特异性组蛋白H4中和抗体20 mg/kg。各组大鼠在造模后6 h、24 h和72 h检测血浆中细胞外组蛋白的含量、脑组织病理学及凋亡相关指标。结果：相比于假手术组,HIBD组大鼠脑含水量较高（P ＜0.05）,HE染色显示脑组织结构破坏,尼氏染色显示脑组织损失率增加（P ＜0.05）,血浆细胞外组蛋白含量上升（P ＜0.05）,Tunel 染色显示脑组织凋亡细胞增加（P ＜0.05）,凋亡蛋白cleaved casepase-3表达升高（P ＜0.05）;相比于HIBD组,治疗组大鼠脑含水量减少（P ＜0.05）,HE染色显示脑组织结构破坏减少,尼氏染色显示脑组织损失率减少（P ＜0.05）,血浆细胞外组蛋白含量降低（P ＜0.05）,Tunel 染色显示凋亡细胞减少（P ＜0.05）,凋亡蛋白cleaved casepase-3 表达下降（P ＜0.05）。结论：细胞外组蛋白可能是通过促进凋亡,从而参与新生大鼠缺氧缺血性脑病的损伤。     

硫酸镁对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的　研究硫酸镁对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤 (HIBD)的保护作用。方法　建立HIBD模型 ,采用TUNEL法检测皮质凋亡细胞 ,观察硫酸镁 1次 (实验 1组 )及 3次 (实验 2组 )对大鼠体重、左右脑重量差及脑细胞凋亡的影响。结果　HIBD后皮质凋亡细胞数显著增高 ,实验 1组、实验 2组及HIE对照组体重增长 (3 1 8± 0 78)g,(3 4 0± 0 4 2 )gvs (2 34± 1 2 7)g(P <0 0 1 ) ,左右脑重量差值 (0 0 74 2± 0 0 35 5 )g,(0 0 397± 0 0 2 81 )gvs(0 1 0 98± 0 0 377)g(P <0 0 1 )和凋亡细胞数 (31 84± 9 6 1 ,2 6 91± 8 0 7vs 6 2 2 5± 1 7 77;P <0 0 1 )实验组均较对照组明显改善。不同疗程硫酸镁对脑水肿的改善有量效作用 (P <0 0 1 ) ,而对凋亡无显著影响 (q =2 33,P >0 0 5 )。结论　硫酸镁能改善HIBD后的体重增长 ,减轻脑水肿及脑细胞凋亡 ,具有一定的神经保护作用     

线粒体 ATP 敏感性钾通道开放对大鼠肺缺血－再灌注损伤的保护作用

目的：探讨线粒体 ATP 敏感性钾通道（mitoKATP）开放对大鼠肺缺血－再灌注损伤（I ／R）的保护作用。方法：建立大鼠肺 I ／R 模型,设立假手术组、肺 I ／R 组、mitoKATP 开放剂二氮嗪（DE）＋I ／R 组、mitoKATP 阻断剂5-羟基葵酸（5-HD）＋DE ＋I ／R 组,每组10只大鼠;检测各组肺组织湿／干重比,HE 染色法观察各组肺组织形态学变化,免疫组织化学染色法检测肺组织细胞色素 C 的表达,TUNEL 法检测肺细胞凋亡指数。结果：与假手术组相比,I ／R 组肺组织湿／干重比明显增加（P ＜0．05）,肺组织出现出血、水肿等损伤性病理学变化,细胞色素 C 表达明显增多（P ＜0．01）、肺细胞凋亡指数明显增大（P ＜0．01）;与 I ／R 组相比,DE ＋I ／R 组肺组织湿／干重比明显降低（P ＜0．05）、肺组织损伤性病理变化明显减轻、肺细胞色素 C 表达明显减少（P ＜0．05）、细胞凋亡指数明显减小（P ＜0．05）,而5-HD ＋DE ＋I ／R 组各项指标与 I ／R 组比较无差异（P ＞0．05）。结论：mitoKATP 的开放可减轻肺水肿、抑制细胞凋亡,对大鼠肺缺血－再灌注损伤具有保护作用。     

脑细胞生长肽对缺氧缺血新生鼠脑保护作用的实验研究

目的 探讨脑细胞生长肽对缺氧缺血新生鼠（HIBD）脑的保护作用。方法 7日龄Wistar大鼠，72只，随机分成3组，（1）假手术组（n=12）；（2）观察组（n=30）：HIBD模型后即刻给脑细胞生长肽10mg腹腔注射；（3）对照组（n=30）HIBD模型后即刻腹腔注射等体积的生理盐水。于处置后0、24、48、72h检测脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）水平；并于处置后24h作HE和Tunel染色光镜下检测脑细胞凋亡数。结果 观察组脑组织SOD、MDA、NO水平及脑细胞凋亡数与对照组比较均有显著性差异。结论 脑细胞生长肽可通过拮抗氧自由基、抑制NO合成和阻止神经细胞凋亡，发挥对HIBD时脑的保护作用。     

IGF-1对新生鼠低氧缺血性脑损伤的治疗作用

目的 :观察胰岛素样生长因子 1(IGF 1)对新生大鼠低氧缺血性脑损伤 (Hypoxic ischemicbraindam age ,HIBD)的治疗作用。方法 :制作新生大鼠HIBD模型 ,把HIBD大鼠分成IGF 1治疗组 (n =6)和非治疗组 (n= 6) ,HIBD后 72h取脑标本、病理切片 ,予HE染色 ,观测两组大鼠大脑皮层梗死面积率、海马坏死细胞率 ,用Tunel法测定凋亡细胞率。结果 :与非治疗组相比 ,IGF 1治疗组的皮层梗死面积率、皮层凋亡细胞率、海马坏死细胞率 ,均显著降低 (P <0 .0 5)。但两组海马凋亡细胞率差别无显著性。结论 :基因重组人类IGF 1(rhIGF 1)治疗新生鼠HIBD疗效明显     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡的影响

目的:探讨神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡及FasL、Caspase-3表达的影响.方法:新生7 d龄Wistar大鼠54只随机分为3组:假手术组、生理盐水对照组(NS组)和NGF组,每组18只.NS组和NGF组动物制作新生大鼠缺氧缺血动物模型.假手术组只分离左侧颈总动脉后缝合切口,不进行动脉结扎和缺氧处理.NS组和NGF组术后分别腹腔注射生理盐水和NGF.各组分别于模型制作后1 d,3 d,6 d各处死6只动物,取脑组织切片行TUNEL染色检测神经细胞凋亡,同时行免疫组化检测FasL、Caspase-3的表达.结果:NGF组脑组织神经细胞凋亡和FasL、Caspase-3的表达明显低于NS组,但仍高于假手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:NGF可抑制新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞的凋亡,其机制可能与其减少FasL和Caspase-3的表达有关.     

Calpain-1在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌中的表达及意义

目的：了解缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠心肌细胞凋亡和Calpain-1表达的变化。方法：采用改良的Rice法构建新生大鼠HIBD模型,64只大鼠随机分为对照组和HIBD后2、12、24 h及2、3、5、7 d组。应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,并计数凋亡指数（AI）,RT-PCR法和Western blot法检测各组大鼠心肌中Calpain-1mRNA及蛋白活性的变化。结果：对照组偶见凋亡细胞,HIBD组凋亡细胞均明显增多（P〈0.01）,3 d达凋亡高峰（P〈0.001）,此后开始降低,7 d仍高于对照组（P〈0.001）。与对照组相比,Calpain-1mRNA于HIBD后12 h开始增高（P〈0.001）,2 d达到高峰,3～5 d表达量仍维持在较高水平（P〈0.001）;蛋白活性自HIBD后2 h增高（P〈0.05）,3 d达高峰（P〈0.001）后开始降低,7 d与对照组无统计学差异（P〉0.05）;Calpain-1 mRNA及蛋白活性均与AI呈直线正相关（r=0.786,P〈0.01;r=0.853,P〈0.01）。结论：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌中Calpain-1表达增强,且与细胞凋亡有关。     

姜黄素对大鼠脑损伤恢复作用的实验研究

目的探讨姜黄素对大鼠脑缺氧缺血损伤时NOS活力、caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法采用大鼠Rice模型。雄性SD大鼠48只,每组6只。随机分为假手术对照组（SH组）、脑缺氧缺血组（HI组）、姜黄素组（CU组）、溶剂对照组（SC组）;生化方法检测脑组织NOS（一氧化氮合酶）活力;免疫组织化学测定大脑海马CA1区caspase-3（半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3）的表达;电镜观察大脑海马形态学结构变化。结果姜黄素可显著减少大脑海马神经细胞损伤数量,NOS酶活力含量明显减低,并且抑制caspase-3蛋白的表达。结论细胞凋亡参与了大脑缺氧缺血损伤的发生,姜黄素可能通过减低NOS酶活力、下调caspase-3的表达,从而抑制细胞凋亡,减轻脑缺氧缺血性损伤。     

新生大鼠缺氧缺血脑组织水肿及水通道蛋白-4的表达变化

目的 探讨新生SD大鼠缺氧缺血不同时间点脑组织水肿及水通道蛋白-4 (AQP-4) 表达的功能意义。 方法 健康3 d龄SD大鼠60只, 分为对照组 (12只) 和缺氧缺血脑损伤模型 (HIBD)组 （48只)。HIBD 组行右侧颈总动脉结扎后,分为吸入80 mL/L O2+920 mL/L N2 4 h、8 h、16 h、24 h 四个亚组,每组12只大鼠。对照组仅行假手术, 不予右颈总动脉结扎和缺氧缺血。HIBD各亚组分别于持续缺氧缺血4 h、8 h、16 h、24 h后处死动物,对照组于手术后12 h处死。取脑组织分别进行HE染色观察脑组织病理改变、脑含水量测定、实时荧光定量PCR检测大脑海马AQP-4 mRNA表达。 结果 HE染色示:随着缺氧缺血时间延长,右脑神经细胞与胶质细胞肿胀进行性加重,24 h组神经细胞溶解损伤明显,胶质细胞稀疏变性。HIBD 组右侧大脑持续缺氧缺血8 h、16 h和24 h脑组织含水量均较对照组增加, 差异有统计学意义 (P<0.05);实时荧光定量PCR显示右脑海马AQP-4 mRNA表达较对照组减少 (P<0. 05)。 结论 新生大鼠缺氧缺血后脑组织水肿,海马AQP-4表达下调,提示AQP-4与脑组织水肿有关。     

早期干预对脑损伤大鼠神经可塑性相关蛋白的影响

目的 研究早期干预对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠学习记忆能力及脑细胞中神经生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法 选用SD大鼠建立宫内HIBD动物模型，随机分为HIBD干预组、HIBD非干预组和对照组，每组12只。HIBD干预组采取早期触摸和丰富环境刺激，HIBD非干预组与对照组常规饲养。干预28d后，通过三等臂Y型迷宫试验检测大鼠学习记忆功能，而后取大鼠额皮质和海马组织，用免疫组织化学染色法检测GAP-43表达情况。结果 HIBD非干预组学习与记忆能力明显低于对照组（P〈0．01），HIBD干预组Y迷宫测试成绩则优于HIBD非干预组（P〈0．01）。同时，HIBD非干预组额皮质和海马神经元GAP-43阳性系数高于对照组（P〈0．01），而HIBD干预组GAP-43的表达又明显高于HIBD非干预组（P〈0．01）。结论 早期干预具有改善HIBD大鼠认知能力的效果，其促进HIBD脑功能修复的作用与增加脑组织GAP-43的表达有关。     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。