shRNA干扰长链非编码RNA UCA1对乳腺癌移植瘤模型肿瘤生长的抑制作用

目的:探讨短发夹RNA(shRNA)干扰长链非编码RNA尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)对乳腺癌移植瘤模型肿瘤生长的抑制作用及潜在的作用机制。方法:实时荧光定量PCR分析乳腺癌肿瘤组织和细胞株中UCA1和miR-582-5p的表达;双荧光素酶报告实验检测UCA1与miR-582-5p的靶向关系;皮下注射乳腺癌细胞悬液构建乳腺癌移植瘤裸鼠模型;记录移植瘤模型裸鼠的存活率和肿瘤体积;TUNEL染色检测移植瘤组织中细胞凋亡情况;免疫组化检测移植瘤组织中Ki67、cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果:在临床乳腺癌样本和乳腺癌细胞株中UCA1高表达,miR-582-5p低表达。TargetScan和miRcode预测UCA1与miR-582-5p有保守的结合区域;miR-582-5p mimic与UCA1野生型载体共转时荧光素酶的活性显著降低,而与UCA1突变型载体共转时,荧光素酶的活性没有明显变化。shRNA干扰UCA1后,移植瘤裸鼠的存活率显著升高;肿瘤体积显著减小,肿瘤质量显著减轻;移植瘤组织中凋亡细胞比率显著升高,且cleaved Caspase-3的表达显著升高;Ki67、MMP-2和MMP-9的表达水平均显著降低。结论:shRNA干扰长链非编码RNA UCA1抑制乳腺癌移植瘤模型肿瘤生长,其作用机制可能与UCA1靶向抑制miR-582-5p相关。     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

miR-503靶向调控CXCL9抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭

目的:研究miR-503对人皮肤黑色素瘤细胞A375迁移、侵袭能力的影响及相关机制.方法:实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测黑色素瘤组织及细胞系中miR-503的表达水平;将miR-503模拟物(miR-503 mimics)或miR-503抑制物(miR-503 inhibitors)瞬时转染A375细胞,Transwell实验检测转染后细胞迁移及侵袭能力的变化;生物信息学预测miR-503与CXCL9的结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测其靶向结合关系;将CXCL9单独转染或与miR-503共转染A375细胞后,检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:黑色素瘤组织中miR-503的表达明显低于癌旁组织(t=6.602,P=0.000),且黑色素瘤细胞(A375、SK-MEL-1及SK-MEL-5)中miR-503的表达也均明显低于人表皮黑色素细胞HEM(F=19.445,P=0.000);A375细胞转染miR-503 mimics后迁移及侵袭能力明显受到抑制(P=0.017,P=0.049),而转染miR-503 inhibitors后迁移及侵袭能力明显增强(P=0.004,P=0.000);CXCL9是miR-503的直接靶基因;CXCL9能促进A375细胞的迁移和侵袭(P=0.000,P=-0.009),但其作用效果能被miR-503逆转.结论:miR-503通过靶向调控CXCL9而抑制黑色素瘤细胞的迁移及侵袭.     

缺氧状态下miR-145对兔平滑肌细胞生物学行为的影响

目的:探讨缺氧条件下miR-145对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移及凋亡的影响及可能作用机制。方法:采用组织贴壁方法培养获得兔原代VSMC。用脂质体转染法将miR-145mimics转入VSMC细胞。实验设置为常氧条件下(21%O_2,5%CO_2,74%N2)空白对照组、miR-NC组、miR-145mimic组、miR-145inhibitor组;缺氧条件下(3%O_2,5%CO_2,92%N_2)空白对照组,miR-NC组,miR-145mimic组,miR-145inhibitor组。应用real time PCR检测miR-145在各组细胞表达水平。采用EdU染色检测VSMC增殖能力,Transwell实验检测VSMC细胞迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡。采用targetScan,miRanda和PicTar靶基因预测软件和DAVID数据库对miR-145进行生物信息学分析,预测可能的靶基因。结果:在常氧与缺氧条件下,与miR-NC组相比,转染miR-145mimic组增殖率和迁移率明显减少,细胞凋亡率增高(P<0.05);转染miR-145inhibitor组增殖率和迁移率明显增加,细胞凋亡率下降(P<0.05)。同时与常氧条件相比,缺氧组增殖率和迁移率明显增加以及细胞凋亡率下降(P<0.05)。生物信息学分析提示miR-145靶基因的通路信号富集主要为促分裂素原活化蛋白激酶1(MAPK1),细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6),钙/钙调素依赖蛋白激酶2D(Ca2+/CAMK2D)信号通路等。结论:缺氧条件下,在VSMC细胞中miR-145低表达、miR-145过表达可以有效的抑制VSMC细胞增殖、迁移及促进该细胞凋亡。     

干扰UCA1及抑制miR-185-5p对非小细胞肺癌β-Catenin通路的活化、自噬和存活影响

目的探究在非小细胞肺癌中,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）尿路上皮癌抗原1（urothelial carcinoma associated 1,UCA1）敲降miR-185-5p对 β-Catenin通路的影响。方法选取非小细胞肺癌A549细胞为研究材料,设置A549空白对照组、sh-scramble阴性对照组、sh-UCA1干扰组、miR-185 inhibitor组和sh-UCA1+ inhibitor组。Western blot验证体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR鉴定体系中lncRNA UCA1和miR-185-5p的表达;生物信息学软件和荧光素酶实验检测lncRNA UCA1和miR-185-5p之间结合性。BrdU染色鉴定细胞增殖,免疫荧光染色检测细胞中LC3+细胞含量。结果在A549细胞中,lncRNA UCA1干扰后,UCA1表达量显著下降并促进miR-185-5p表达,有效抑制肺癌细胞增殖和自噬,促进凋亡发生（P<0.01）;经生物信息学和双荧光素酶报告系统验证lncRNA UCA1和miR-185-5p有较强结合性;并进一步验证lncRNA UCA1可以有效抑制β-Catenin/TCF-4及Beclin 1和LC3 Ⅱ表达,降低miR-185-5p对肺癌细胞增殖和自噬效果,减少细胞内LC3含量（P<0.01）。结论lncRNA UCA1干扰后,可以有效降低UCA1对miR-185-5p的抑制效果,进而解除β-Catenin/TCF-4、Beclin 1和LC3 Ⅱ受到的抑制作用,从而减少肺癌细胞自噬发生和减缓增殖。     

LncRNA UCA1通过调节miR-206/PTP1B轴影响宫颈癌细胞增殖迁移及侵袭

【摘要】 目的 探讨LncRNA UCA1通过miR-206 / PTP1B轴对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 将细胞培养后随机分为对照组、si-NC组（转染si-NC）、si-UCA1组（转染si-UCA1）、si-PTP1B组（转染si-PTP1B）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-206组（转染miR-206）、anti-miR-206组（转染anti-miR-206）、miR-NC+si-NC组（转染miR-NC 和si-NC）、miR-206+si-NC组（转染miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-NC组（转染anti-miR-206和si-NC）、anti-miR-206+si-UCA1组（转染anti-miR-206和si-UCA1）、miR-NC+si-PTP1B组（转染miR-NC和si-PTP1B）、anti-miR-206+si-PTP1B组（转染anti-miR-206和si-PTP1B）。qRT-PCR检测宫颈癌细胞UCA1和miR-206的表达;Western blot检测宫颈癌细胞PTP1B的表达;荧光素酶报告基因实验验证UCA1与miR-206、miR-206与PTP1B的靶向关系;CCK-8检测宫颈癌细胞活力;流式细胞术检测宫颈癌细胞凋亡;Transwell实验检测宫颈癌细胞迁移和侵袭能力。 结果 与人正常宫颈上皮细胞相比,宫颈癌细胞中UCA1表达显著升高（P＜0.01）,miR-206表达显著降低（P＜0.05）。与si-NC组相比,si-UCA1组细胞UCA1表达、细胞活力、迁移和侵袭能力均显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。UCA1和miR-206间存在相互调控作用;与miR-NC+si-NC组相比,miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）,anti-miR-206+si-NC组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-UCA1组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.01）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。miR-206靶向调控PTP1B;与miR-NC+si-NC组相比,anti-miR-206+si-NC组细胞活力、迁移和侵袭能力显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著降低（P＜005）,miR-NC+si-PTP1B组则呈现相反变化;与anti-miR-206+si-NC组相比,anti-miR-206+si-PTP1B组细胞活力、迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。 结论 LncRNA UCA1通过调节miR-206 / PTP1B轴促进宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

丙泊酚抑制缺氧/复氧HUVECs细胞中miR-15b表达及细胞凋亡的实验研究

目的:研究丙泊酚在缺氧/复氧细胞模型中对微小RNA-15b(miR-15b)及血管内皮细胞凋亡的影响。方法:建立缺氧/复氧细胞模型[人脐静脉内皮细胞(HUVECs)],设置实验组、对照组、空白组,其中实验组HUVECs缺氧/复氧培养24h后,加入丙泊酚(150μmol/L)干预培养6h;实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组HUVECs中miR-15b的表达情况;RT-qPCR、Western-blot检测各组HUVECs中miR-15b靶基因B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)的表达情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡能力。结果:RT-qPCR结果显示,实验组miR-15b的表达水平低于对照组(P<0.05);RT-qPCR及Western-blot结果显示,实验组bcl-2在mRNA和蛋白水平的表达均高于对照组(P<0.05);实验组HUVECs的细胞凋亡率低于对照组(P<0.05)。结论:丙泊酚能够抑制缺氧/复氧HUVECs细胞中miR-15b的表达,并影响其靶基因抗凋亡蛋白bcl-2的表达,从而降低细胞凋亡率。     

lncRNA MALAT1靶向调控miR-214在睾丸缺血再灌注损伤中的作用及其机制

目的:观察长链非编码RNA肺癌转移相关转录本1(IncRNA MALAT1)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型,qRT-PCR法检测不同复氧损伤时间点IncRNA MALAT1和微小RNA-214(miR-214)的表达变化;分别采用MTT实验、流式细胞术测定转染IncRNA MALAT1对GC-1细胞增殖和凋亡的影响;采用Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase-3和cytc蛋白表达;荧光素酶实验验证IncRNA MALAT1和miR-214的靶向关系,并采用qRT-PCR法检测转染IncRNA MALAT1后细胞中miR-214的表达变化。结果:IncRNA MALAT1随着复氧损伤时间的增加,其表达增高,在缺氧3 h/复氧24 h细胞上调最为明显,而miR-214的表达降低;过表达IncRNA MALAT1能显著抑制GC-1细胞增殖能力,促进细胞凋亡。沉默IncRNA MALAT1可使GC-1细胞的增殖能力增强,凋亡水平减弱;荧光素酶报告实验表明IncRNA MALAT1序列上有miR-214的结合位点。过表达IncRNA MALAT1抑制GC-1细胞miR-214表达,而沉默IncRNA MALAT1能促进miR-214表达。结论:IncRNA MALAT1可以通过靶向miR-214改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展。     

急性缺氧诱导小鼠心肌细胞微小RNA-34a升高和凋亡实验研究

目的:探讨急性缺氧对心肌细胞miR-34a表达、蛋白磷酸酶1核靶向亚基(PNUTS)蛋白和凋亡的影响。方法:原代培养小鼠乳鼠心肌细胞，缺氧24 h造模，使用antimiR-34a纳米颗粒干预。将其随机分为三组：对照组、缺氧组、缺氧+antimiR-34a纳米颗粒组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测miR-34a表达，Western blot检测PNUTS蛋白表达，流式细胞术测凋亡率。结果:与对照组相比，缺氧24 h后miR-34a表达明显增高(P<0.05),PNUTS水平降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与缺氧组相比，缺氧+antimiR-34a纳米颗粒组的miR-34a表达下降(P<0.05),PNUTS水平升高(P<0.05),凋亡率下降(P<0.05)。结论:急性缺氧上调小鼠心肌细胞miR-34a基因表达，下调其下游PNUTS蛋白表达，同时上调凋亡率；antimiR-34a纳米颗粒抑制急性缺氧诱导的小鼠心肌细胞miR-34a升高，PNUTS降低以及细胞凋亡。     

miR-200c在CIK细胞诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的 观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对胃癌细胞凋亡的影响,探讨微RNA-200c(miR-200c)在此过程中的作用.方法 实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞(MKN-45、BGC-803)miR-200c表达,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡.构建包含miR-200c作用位点的psiCHECK2-FAP-1 3’-UTR,转染胃癌细胞,双荧光素酶报告基因试剂盒检测胃癌细胞Fas相关磷酸酯酶-1(FAP-1)荧光素酶活性.结果 CIK细胞促进MKN-45细胞miR-200c表达[(2.10±0.25)倍,P＜0.05]及凋亡(P＜0.01),而miR-200c inhibitor能够拮抗此过程(P＜0.05).另外,miR-200c mimics诱导胃癌细胞凋亡(P＜0.05),BGC-803细胞也发现相似趋势.miR-200c直接作用于FAP-1基因3’-UTR区,且CIK细胞降低胃癌细胞荧光素酶活性[MKN-45细胞:(49.67±2.36)％,P＜0.01;BGC-803细胞:(43.86±4.41)％,P＜0.01].结论 CIK细胞通过上调miR-200c促进胃癌细胞凋亡,为CIK细胞治疗胃癌提供新的数据.     

miR-21-5p靶向TGF-β1调节大鼠心肌细胞增殖和凋亡

目的 探讨miR-21-5p通过调控转化生长因子-β₁(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)对大鼠心肌细胞H9c2增殖和凋亡的影响。方法 抑制或过表达TGF-β₁后,通过RT-qPCR检测H9c2细胞中miR-21-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-21-5p和TGF-β₁的靶向关系,CCK-8及Annexin V-FITC/PI检测H9c2细胞增殖和凋亡,Western blotting检测H9c2细胞中TGF-β₁的表达水平。结果 miR-21-5p表达抑制后使H9c2细胞增殖受到抑制并诱导其凋亡(P＜0.05)。miR-21-5p靶向负调控TGF-β₁的表达水平(P＜0.05)。过表达TGF-β₁显著抑制H9c2细胞增殖并诱导其凋亡(P＜0.05)。结论 miR-21-5p通过靶向下调TGF-β₁的表达水平,促进大鼠H9c2心肌细胞增殖和抑制细胞凋亡。     

FGD5-AS1/miR-519d-3p轴调控高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2炎症因子表达和细胞凋亡

目的：探讨FGD5-AS1对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)表达、细胞凋亡的影响及其机制。方法：25 mmol/L葡萄糖诱导HK-2细胞24 h后,RT-qPCR检测细胞中FGD5-AS1和miR-519d-3p表达量。分别转染FGD5-AS1过表达载体(pcDNA-FGD5-AS1)、miR-519d-3p抑制剂或共转染pcDNA-FGD5-AS1与miR-519d-3p模拟物至HK-2细胞,用25 mmol/L葡萄糖诱导转染后的细胞24 h, ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-6水平,流式细胞术、Western blotting分别检测细胞凋亡率及凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、cleaved-caspase9的表达。双荧光素酶报告基因实验验证FGD5-AS1和miR-519d-3p的调控关系。结果：与对照组比较,HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中FGD5-AS1表达量明显降低(P<0.01),miR-519d-3p表达水平明显升高(P<0.01)。上调FGD5-AS1或下调miR-5...     

lncRNA UCA1对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的 探究长链非编码RNA尿路上皮癌相关基因1（lncRNA UCA1）通过靶向miR-206调控Yes相关蛋白1（YAP1）的表达,介导口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖、凋亡的分子机制。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测人正常口腔角质细胞系HOK和人口腔鳞状细胞癌细胞株TSCCA、SCCl5、HN13、CAL27、HSC3和SCC9中lncRNA UCA1和microRNA-206（miR-206）的表达;在HN13细胞中敲除IncRNA UCA1,采用CCK-8法和流式细胞术检测其对HN13细胞增殖和细胞凋亡的影响;通过生物信息学网站starBase预测IncRNA UCA1、YAP1与miR-206的互补结合位点,并通过双荧光素酶实验验证它们之间的结合关系;Western blotting检测YAP1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,相比于人正常口腔角质细胞系HOK,6种OSCC细胞中lncRNA UCA1 mRNA相对表达量上调（P <0.05）,而miR-206 mRNA相对表达量均降低（P <0.05）。与转染siNC的对照组相比,siUCA1组细胞活力下降,凋亡比例升高（P <0.05）。生物信息学预测结合双荧光素酶实验证实miR-206与lncRNA UCA1、YAP1均存在互补结合。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,siUCA1组miR-206 mRNA相对表达量较对照组升高（P <0.05）,YAP1 mRNA相对表达量较对照组降低（P <0.05）,而同时转染siUCA1和miR-206 inhibitor则抑制miR-206表达,恢复YAP1的表达（P <0.05）。结论 lncRNA UCA1在OSCC细胞中高表达,通过抑制miR-206的表达,上调YAP1,从而促进OSCC细胞增殖,抑制凋亡。     

miR-503-5p对IL-1β诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响

目的探讨miR-503-5p对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响和分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分为NC组、IL-1β组、IL-1β+anti-miR-con组及IL-1β+anti-miR-503-5p组。分别采用噻唑蓝（MTT）法、黏附实验、流式细胞术、Transwell实验检测HUVECs增殖、黏附、凋亡和迁移能力。Western blotting检测细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著降低,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著升高（P < 0.01）。与IL-1β+anti-miR-con组比较,IL-1β+anti-miR-503-5p组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著升高,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著降低（P < 0.01）。结论抑制miR-503-5p表达可促进血管内皮细胞增殖和迁移,抑制细胞黏附和凋亡,其机制可能与抑制ICAM-1和VCAM-1表达有关。     

lncRNA EGOT靶向miR-320a对LPS诱导肺泡上皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA (lncRNA)嗜酸性粒细胞转录因子(EGOT)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡、炎症反应的影响及可能机制。方法将A549细胞分为对照组(Con)、LPS组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-EGOT组、LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-320a组、LPS+pcDNA-EGOT+miR-NC组、LPS+pcDNA-EGOT+miR-320a组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测EGOT和miR-320a表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定EGOT和miR-320a之间靶向作用。结果与Con组比较,LPS组A549细胞凋亡率、IL-6和IL-1β水平均升高(P < 0.05),EGOT表达水平降低(P < 0.01),miR-320a表达水平明显升高(P < 0.01)。与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-EGOT组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均降低(P < 0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P < 0.05)。与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-320a组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P < 0.01),Bcl-2蛋白表达明显升高(P < 0.01)。与LPS+pcDNA-EGOT+miR-NC组比较,LPS+pcDNA-EGOT+miR-320a组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P < 0.01),Bcl-2蛋白表达明显降低(P < 0.01)。双荧光素酶报告实验显示,EGOT靶向负性调控miR-320a表达。结论lncRNA EGOT通过靶向miR-320a可减轻LPS诱导肺泡上皮细胞炎症反应和细胞凋亡。     

MicroRNA-34a通过下调Notch1的表达促进心肌细胞凋亡

目的：探讨microRNA-34a（miR-34a）对心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,分别转染miR-34a mimics、miR-34a inhibitor、随机合成的miR-NC片段、Notch1的siRNA、随机合成的siRNA-NC片段,将实验分为6 组：normal组、miR-34a组、miR-inhibitor组、miR-NC组、miRinhibitor+siRNA-Notch1组和miR-inhibitor+siRNA-NC组。RT-qPCR检测各组miR-34a的表达量,Westernbolt技术检测各组中caspase-3 和Notch1的表达量,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率。双荧光素酶报告实验鉴定Notch1为miR-34a的靶基因。结果：双荧光素酶报告实验证实miR-34a和Notch1间存在靶向关系。与miR-NC组比较,miR-34a组的miR-34a和caspase-3的表达量明显增多,Notch1的表达量明显减少,细胞凋亡率明显升高（P ＜0.01）。与miR-NC组比较,miR-inhibitor组的miR-34a和caspase-3的表达量明显减少,Notch1的表达量明显增多,细胞凋亡率明显减低（P ＜0.01）。与miR-inhibitor+siRNA-NC组比较,miRinhibitor+siRNA-Notch1组的Notch1的表达量明显降少,caspase-3的表达量明显减少,细胞凋亡率明显减低（P ＜0.01）。结论：miR-34a促进心肌细胞凋亡,其作用机制与靶向负调控Notch1有关。     

miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响

  目的  探讨miR-503-5p通过靶向调控E2F3对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化的影响。  方法  将宫颈癌HeLa细胞分为对照组、mimic-NC组、miR-503-5p mimic组、E2F3组、mimic+E2F3组,并通过Lipofectamine 2000将质粒分别或者联合转染进入各组HeLa细胞,运用基因预测软件预测靶基因,荧光素实验验证靶向关系,RT-PCR检测miR-503-5p和E2F3的表达,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、E-cadherin和N-cadherin的表达,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移。将裸鼠分为对照组和miR-503-5p mimic组,在裸鼠右后肢腹侧皮下分别注射0.2 mL转染mimic-NC或miR-503-5p mimic的宫颈癌HeLa细胞悬液,第30天颈椎脱位法处死裸鼠,测量肿瘤质量,并用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki67和Vimentin表达情况。  结果  宫颈癌HeLa细胞中miR-503-5p的表达量明显下调,miR-503-5p与E2F3在3′UTR区存在结合位点, miR-503-5p直接靶向作用于E2F3,过表达miR-503-5p抑制E2F3表达; miR-503-5p过表达降低细胞生长速度、Ki67和PCNA表达量,减少侵袭细胞数目,增宽划痕、降低愈合率,上调E-cadherin表达、下调N-cadherin表达（P<0.01）;miR-503-5p过表达减小移植瘤体积、减轻移植瘤重量,减少Ki67和Vimentin的阳性所占比率（P<0.01）。  结论  miR-503-5p通过靶向调控E2F3抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质化。     

miR-133b靶向YES1抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡和活性氧簇的积累

目的 探究miR-133b对心肌缺血再灌注（I/R）诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法 体内实验,将大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、转染腺病毒对照组、转染miR-133b腺病毒组,每组9只。在左心室心肌的6个随机点注射转染复合物后,利用左侧冠状动脉前降支打活结方法诱导心肌I/R。通过RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能,酶联免疫吸附法测定血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（I CTnI）水平,HE染色观察心肌损伤,流式细胞术检测细胞凋亡,2,7-二氯荧光素双乙酸酯（DCFH-DA）探针测定ROS含量。体外实验,心肌H9C2细胞经缺氧/复氧（H/R）处理后,转染miR-NC或miR-133b mimic,RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量;双荧光素酶报告实验验证靶向关系;转染pc-YES1或miR-133b mimic后,Western blot检测YES1的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量。结果 与I/R组相比,AdmiR-133b组大鼠心肌中miR-133b的表达显著上调,LVEDP、cTnI和CK-MB水平显著降低,LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR和CF水平显著升高,病理损伤显著减轻,心肌细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。与H/R组相比,miR-133b mimic组H9C2细胞的miR-133b表达显著上调,细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。miR-133b与YES1在3’UTR区存在靶向结合位点,共转染YES1 WT和miR-133b mimic可以显著降低荧光素酶活性（P<0.01）。miR-133b mimic 组与H/R组相比H9C2细胞中YES1蛋白的表达显著下调（P<0.01）。共转染pc-YES1逆转miR-133b过表达对心肌细胞凋亡和ROS积累的作用。结论 无论是在体内还是体外,miR-133b靶向YES1抑制I/R引起的心肌细胞凋亡和ROS的积累,从而减轻心肌I/R损伤。     

心肌梗死相关转录本对视网膜母细胞瘤影响机制的研究

  目的   探讨心肌梗死相关转录本(MIAT)靶向miR-145对视网膜母细胞瘤增殖和凋亡的影响。   方法   选取2015年9月—2020年9月在郑州大学附属儿童医院因视网膜母细胞瘤行眼球摘除患儿30例,收集患儿肿瘤组织及癌旁组织。培养人视网膜母细胞瘤细胞Y79,按照随机数字表法分为si-NC组、si-MIAT组、miR-NC组、miR-145组、si-MIAT+anti-miR-NC组、si-MIAT+anti-miR-145组。采用RT-qPCR检测细胞MIAT和miR-145的表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测CyclinD1、p21、Bcl-2、Bax、p-PI3K、p-Akt蛋白表达;双荧光素酶报告检测MIAT与miR-145的靶向关系。   结果   与癌旁组织比较,视网膜母细胞瘤组织中MIAT表达显著上调(3.61±0.28 vs. 1.05±0.11),miR-145表达显著下调(0.33±0.03 vs. 1.03±0.09,均P＜0.05)。与si-NC组比较,si-MIAT组细胞活力显著下调;细胞凋亡率显著上调;p-PI3K蛋白、p-Akt蛋白表达显著下调(均P＜0.05)。与miR-NC组比较,miR-145组细胞活力显著下调;细胞凋亡率显著上调(均P＜0.05)。与si-MIAT+anti-miR-NC组比较,si-MIAT+anti-miR-145组细胞活力显著上调;细胞凋亡率显著下调;p-PI3K蛋白、p-Akt蛋白表达显著上调(均P＜0.05)。   结论   抑制MIAT表达、上调miR-145表达可促进视网膜母细胞瘤凋亡,抑制增殖,其机制与PI3K/Akt通路有关。      

miR-127对皮肤鳞状细胞癌细胞生物学行为调控作用研究

目的探讨miR-127对皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)细胞的生物学行为调控作用。方法收集皮肤鳞癌组织、癌旁正常组织标本,采用实时定量PCR检测miR-127在2组标本中的表达水平。调控鳞癌细胞株A431中miR-127表达水平,检测鳞癌细胞增殖、侵袭能力的变化。通过生物信息学预测网站及分子生物学方法验证miR-127的作用靶点。结果miR-127在皮肤鳞癌组织中表达明显高于癌旁组织(P < 0.01)。相较于HaCaT细胞,miR-127表达水平在A431细胞以及HSC-5细胞中显著升高,差异有统计学意义(P < 0.05)。上调miR-127表达后,A431细胞的增殖及侵袭能力显著增强;下调miR-127的表达后,A431细胞的增殖及侵袭能力受到抑制(P < 0.05)。通过双荧光素酶报告基因实验发现miR-127可以与PTEN直接结合,调控miR-127后PTEN在蛋白水平的表达发生改变(P < 0.05)。结论miR-127参与调控鳞癌细胞的生物学行为,miR-127可能作为治疗皮肤鳞癌的一个潜在的靶点。