内异症中芳香化酶的表达与其局部雌激素异常合成的关系

目的 研究卵巢巧克力囊肿异位内膜腺上皮、间质细胞及卵巢内异症的在位内膜中P450芳香化酶蛋白和mRNA表达,探讨其在子宫内膜异位症发病中的作用及其临床意义.方法 采用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)和免疫组化技术检测45例卵巢巧克力囊肿的囊壁(巧囊)、32例卵巢内异症的在位内膜和35例正常子宫内膜中P450芳香化酶(P450A)mRNA及蛋白的表达.结果 巧囊壁异位内膜P450A mRNA表达量高于在位内膜(P＜0.01);35例正常子宫内膜中仅有2例表达;免疫组化检测巧囊壁P450A蛋白其表达特征与mRNA一致.结论 子宫内膜异位症异位灶中有P450A表达,这种雌激素的合成酶能在异位灶局部合成异常的雌激素;卵巢内异症的在位内膜有P450A表达,提示在位内膜本身局部有雌激素的合成,其保护机制劣于正常内膜.子宫内膜异位症中P450A的表达在其发病中起到重要作用.     

子宫内膜异位症在位及异位内膜中雌激素含量的变化

子宫内膜异位症（以下简称内异症）是生育期妇女的常见病，发病机制仍不完全清楚。近年来研究提出，内异症是雌激素依赖性疾病，因内异症患者在位、异位内膜组织异常表达芳香化酶，而芳香化酶是雌激素合成的关键酶，故本研究通过检测内异症在位、异位内膜组织中雌激素含量来进一步证实内异症的发病与性激素的关系。     

子宫内膜异位症患者内膜中芳香化酶P450的表达及组织和血清中雌激素的测定

目的 检测子宫内膜异位症患者血清和内膜雌激素与细胞色素芳香化酶P450的表达。探讨它们在发病中的作用，为临床诊断治疗提供新思路。方法分别用免疫组化和发光免疫分析法，测定内异症患者外周血和内膜中雌激素的含量和内膜细胞色素芳香化酶P450的表达。结果芳香化酶P450在内异症患者在位、异位内膜组织中强表达，而正常内膜无表达，两者差异有显著性（P〈0．001）；内异症患者的在位、异位的内膜组织中雌激素含量均高于正常内膜，两者差异有显著性（P〈0．05）。内异症患者内膜组织中雌激素含量与内膜组织中芳香化酶P450的表达有相关性（r=0．582），而与血清中雌激素含量无相关性（r=0．19）。结论内异症患者在位、异住内膜组织中芳香化酶P450异常表达，使局部组织中的雌激素浓度增高，促使内异症的发生发展。通过抑制芳香化酶P450的活性及局部组织中雌激素效应有可能会成为内异症治疗的方向。     

p450arom基因、COX-2基因在子宫内膜异位症组织的表达及其抑制剂对大鼠模型的作用

目的　探讨芳香化酶 (p4 5 0arom )基因、环氧合酶 2(COX 2 )基因mRNA在子宫内膜异位症 (内异症 )患者异位及在位子宫内膜组织中的表达与意义及芳香化酶抑制剂(Arimidex)、环氧合酶 2抑制剂 (celecoxib)对大鼠子宫内膜异位症 (内异症 )模型的作用。　方法　建立大鼠内异症模型 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测内异症在位及异位子宫内膜及对照子宫内膜中 p4 5 0arommRNA、COX 2mR NA的表达。检测模型血清E2 、FSH、LH ,并观察 p4 5 0arom基因、COX 2基因mRNA对异位囊肿体积的回缩作用及对异位内膜病理形态学影响。　结果　…     

细胞色素芳香化酶及环氧合酶-2在子宫内膜异位症的表达

目的 探讨细胞色素芳香化酶(P450arom)及环氧合酶-2(COX-2)在子宫内膜异位症(内异症)患者异位及在位子宫内膜组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化法检测内异症患者在位及异位子宫内膜及对照组正常子宫内膜中P450arom,COX-2的表达情况.结果 P450arom在内异症患者异位及在位子宫内膜中均有强表达,正常子宫内膜无表达,增生期、分泌期差异无显著性(P＞0.05).COX-2在内异症患者异位及在位子宫内膜亦有强表达,增生期、分泌期差异无显著性(P＞0.05);正常子宫内膜弱表达,分泌期表达强于增生期(P＜0.05).P450arom与COX-2在异位内膜中的表达呈正相关.结论 内异症组织中芳香化酶、COX-2的高表达可能是病变发生发展的重要因素,因此,抑制芳香化酶及COX-2活性可为内异症治疗提供新靶点,对在位内膜芳香化酶的检测也可能成为内异症辅助诊断的重要手段.     

细胞色素芳香化酶基因及环氧合酶-2基因mRNA在子宫内膜异位症异位与在位内膜的表达

目的 探讨细胞色素芳香化酶（P450arom）基因、环氧合酶-2（COX-2）基因mRNA在子宫内膜异位症（内异症）患者异位、在位子宫内膜组织中的表达及其意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测内异症患者在位及异位子宫内膜及正常子宫内膜中P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达情况。结果 P450arom mRNA在内异症患者异位及在位子宫内膜均有强表达，正常子宫内膜无表达，分泌期、增殖期无差别；COX-2 mRNA在内异症患者异位及在位子宫内膜均有强表达，正常子宫内膜弱表达（P〈0．05），且内异症患者在位子宫内膜及正常子宫内膜COX-2 mRNA表达分泌期均略强于增殖期，但差别均无统计学意义（P〉0．05），异位内膜分泌期、增殖期无差别。不同rAFS分期内异症子宫内膜P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达无差别。结论 子宫内膜P450arom mRNA、COX-2 mRNA的高表达与内异症的发生、发展可能密切相关。     

IL-8在子宫内膜异位症发病中的作用

目的:探讨白细胞介素8(IL鄄8)与子宫内膜异位症(内异症)发病的关系。方法:内异症患者36例作为研究组,非内异症患者20例作为对照组。ELISA方法测定内异症患者血清及腹水中IL鄄8的表达情况。Northern杂交比较不同类型异位病灶之间以及内异症患者的在位内膜与非内异症的对照子宫内膜之间IL鄄8mRNA表达强度的差异。MTT法分析IL鄄8、anti鄄IL鄄8对体外培养的子宫内膜基质细胞增殖的影响。结果:内异症组腹水中IL鄄8显著高于对照组(P=0.03熏0.003),并且与疾病的严重程度呈正相关(r分别为0.823,0.934)。重度内异症组血清中IL鄄8显著高于轻度组穴P=0.0012雪。血清中IL鄄8与疾病的严重程度无明显相关(r为0.348,P>0.05);IL鄄8mRNA的表达强度:腹膜红色病灶>在位内膜>卵巢巧克力囊肿>宫骶韧带结节。在分泌期,内异症患者的子宫内膜组织中IL鄄8mRNA的表达强度明显高于非内异症患者的在位内膜;IL鄄8刺激内膜基质细胞增殖具有浓度和时间效应熏该作用可被anti鄄IL鄄8抑制。结论:IL鄄8在内异症发病的多个环节如腹腔微环境异常及刺激异位细胞增殖等方面起到重要作用。     

SRC-1对异位内膜雌激素调控的CXCL12表达的影响

目的 研究子宫内膜异位症患者的异位内膜中类固醇激素受体辅活化子-1(SRC-1)和趋化因子配体12(CX-CL12)的表达水平,从而了解SRC-1对异位子宫内膜雌激素(E2)调控的CXCL12表达的影响.方法 2014年9月—2016年9月,方便选择在苏州大学附属第一医院妇科因内异症接受手术治疗,术后标本证实为内异症的15例患者的异位内膜及同期放置宫内节育器的无内异症且月经周期正常的健康妇女10名的正常内膜,应用实时荧光定量RT-PCR方法 比较正常子宫内膜和异位子宫内膜在月经的增生期和分泌期SRC-1和CXCL12mRNA表达水平.ELISA检测沉默异位内膜SRC-1的表达对雌激素诱导异位内膜基质细胞表达CXCL12的影响.结果 正常子宫内膜基质细胞中SRC-1和CXCL12的表达呈现周期性变化,而异位内膜这两种因子的表达并没有周期性的改变.异位内膜SRC-1和CXCL12mRNA的表达与正常内膜相比明显升高.沉默异位内膜SRC-1表达后,E2诱导的CXCL12表达下降50.04%(P<0.05).结论 类固醇激素受体辅活化子调控异位内膜表达CXCL12的作用中,SRC-1是雌激素的主要辅激活化子.     

热休克蛋白70在异位子宫内膜细胞上皮间质化中的作用研究

目的 研究子宫内膜异位症患者在位内膜热休克蛋白70的表达及其对内膜细胞上皮间质化过程的影响。方法(1) 采用Real-time PCR法测定子宫内膜异位症患者在位及异位内膜组织,以及非子宫内膜异位症患者在位内膜组织中HSP70 mRNA表达量;(2) 采用半定量法分析上述三种组织HSP70蛋白含量;(3) 将HSP70与子宫内膜细胞共培养后使用免疫荧光法测定上皮间质化标志物E-cadherin和α-SMA蛋白表达量的变化,使用Real-time PCR法测定E-cadherin和α-SMA蛋白mRNA表达变化。结果(1) 内异症患者及非内异症患者分泌期内膜组织内HSP70 mRNA表达量和蛋白含量均高于增生期内膜组织(P＜0.05)。(2) 分泌期内异症患者在位和异位内膜组织内HSP70 mRNA表达量及蛋白含量高于非内异症患者(P＜0.05)。(3) 子宫内膜细胞与HSP70共培养后E-cadherin表达降低,α-SMA蛋白表达增加。结论 HSP70蛋白能够促进子宫内膜细胞上皮间质化,帮助异位内膜细胞种植转移。     

子宫异位内膜组织中MMP-7的表达

目的:研究基质金属蛋白酶7(MMP-7)在子宫内膜异位症(内异症)中异位内膜组织中的表达,探讨MMP-7基因在子宫内膜异位症发生中的作用。方法:分别选取内异症异位内膜组织(研究组)27例、正常子宫内膜(对照组)20例为研究对象,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测MMP-7 mRNA的表达。结果:①子宫内膜异位症中异位内膜中MMP-7基因的mRNA相对表达量为(0.6981±0.2351),明显高于正常子宫内膜组织(0.5250±0.1931),差异有显著统计学意义(P<0.05)。②内异症异位内膜组织中MMP-7基因mRNA的表达强度有随美国生育学会修订的内异症分期法(r-AFS)的临床分期升高而增加的趋势,但差异没有显著性(P>0.05)。结论:MMP-7在异位内膜组织中呈高表达,认为MMP-7在子宫内膜异位的发生发展中可能发挥一定的作用。     

GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症患者间质细胞 分泌VEGF作用的比较

目的：测定GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症（EMs）患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨GnRH II对EMs患者可能的作用。方法：给予原代培养的EMs患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH II,GnRH I类似物（戈舍瑞林,goserelin）处理,同时设对照组（不加GnRH）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中VEGF浓度,并进行比较。结果：EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）,且较GnRH I类似物（戈舍瑞林）的作用更强（P＜0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位（P＜0.05）。结论：EMs患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH II呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH II明显强于GnRH I,为寻找EMs抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据。     

miRNA-221在EMS组织及间质细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的 探讨microRNA-221（miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis,EMS）患者组织及细胞中的表达及对EMS间质细胞增殖的影响。 方法 收集非EMS患者在位内膜（正常子宫内膜）及EMS患者卵巢异位内膜,分离培养及鉴定子宫内膜间质细胞,采用茎环法实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测在位、异位内膜组织及间质细胞中miRNA-221的表达;雌激素（17β-E₂,终浓度为10-8mol/L）刺激间质细胞48 h后检测miR-221-3p表达变化;异位间质细胞转染miR-221-3p inhibitor和inhibitor阴性对照（NC）后,观察其对miR-221-3p、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）表达和增殖的影响。 结果 miR-221-3p在EMS组织中的表达为正常子宫内膜组织的4.2倍（P=0.039）,在EMS间质细胞中的表达为正常子宫内膜间质细胞的2.66倍（P=0.029）。与正常子宫内膜组织及间质细胞相比,miR-221-5p在EMS组织及间质细胞中表达差异均无统计学意义（P>0.05）。雌激素处理正常及异位间质细胞48 h后miR-221-3p表达差异无统计学意义。抑制miR-221-3p功能后,异位间质细胞增殖抑制（P=0.018）,PTEN基因表达上调（P=0.021）。 结论 miRNA-221在EMS组织及间质细胞中表达上调,抑制miR-221-3p功能可促进PTEN表达从而抑制EMS间质细胞增殖。     

GnRH-Ⅱ对子宫内膜异位症患者离体培养的子宫内膜间质细胞分泌VEGF的影响

目的:检测体外培养的子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜间质细胞分泌的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度,并观察不同浓度的II型促性腺激素释放激素（GnRH-Ⅱ)对在位和异位内膜间质细胞分泌VEGF的影响。方法:分别给予原代培养的EMs患者在位与异位子宫内膜间质细胞不同浓度（1×10-10~1×10-6 mol/L)的GnRH-Ⅱ处理,不加GnRH-Ⅱ组作为对照,采用酶联免疫吸附法（ELISA)测定培养液中VEGF浓度并进行比较。结果:体外培养的EMs患者异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF,培养48 h后分泌量与在位子宫内膜间质细胞比较差异无统计学意义（P﹥0.05)。1×10-10~1×10-6 mol/L的GnRH-Ⅱ可呈浓度依赖性地抑制体外培养的在位和异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF（P<0.01),且对异位子宫内膜间质细胞的抑制作用强于在位（P<0.01)。结论:EMs患者的异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF的能力与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH-Ⅱ对EMs患者体外培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,且作用明显强于对在位内膜间质细胞的。     

GnRH Ⅱ与GnRH Ⅰ对子宫内膜异位症患者间质细胞分泌VEGF作用的比较

目的:测定GnRH Ⅱ与GnRH Ⅰ对子宫内膜异位症(Ems)患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨GnRH Ⅱ对Ems患者可能的作用.方法:给予原代培养的Ems患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH Ⅱ,GnRH Ⅰ类似物(戈舍瑞林,goserelin)处理,同时设对照组(不加GnRH),采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养液中VEGF浓度,并进行比较.结果:Ems患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义(P＞0.05).不同浓度的GnRH Ⅱ对Ems患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性(P＜0.05),且较GnRH Ⅰ类似物(戈舍瑞林)的作用更强(P＜0.05).不同浓度的GnRH Ⅱ对Ems患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位(P＜0.05).结论:Ems患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对Ems的形成和发展可能起重要作用.GnRH Ⅱ呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH Ⅱ明显强于GnRH Ⅰ,为寻找Ems抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据.     

血管内皮生长因子在异位和在位子宫内膜中的表达

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在子宫内膜异位症（endometrio-sis,EM）患者的异位和在位内膜中的表达及其在EM发病机制中的作用。方法应用ELISA法检测有或无EM的妇女的血管内皮生长因子（VEGF）水平、采用免疫组织化学S-P法测定VEGF在EM患者异位与在位内膜及对照组增殖期和分泌期子宫内膜组织中的表达,并以抗第八因子相关抗原（F8-RA）抗体标记间质微血管并进行微血管计数（MVD）。结果在整个月经周期中,研究组异位和在位内膜中VEGF表达均持续高于对照组（P〈0.01）。EMs患者异位内膜和在位内膜的微血管密度（MVD）明显高于对照组内膜（P〈0.05）。结论VEGF在EMs患者的高表达,说明其通过促血管生成在该病发生发展中起着重要作用。     

促性腺激素释放激素受体在EMS患者子宫内膜的表达

【目的】检测促性腺激素释放激素受体（GnRH—R）在子宫内膜异位症（EMS）患者子宫内膜组织的表达，探讨其存在的意义。【方法】应用免疫组化和巢式PCR方法，从蛋白和mRNA水平检测GnRH—R表达。【结果】GnRH—R蛋白在EMS和对照组在位子宫内膜组织及体外培养子宫内膜细胞中持续表达；在异位内膜组织中的表达率为54．2％，低于对照组（P〈0．01）。GnRH—R mRNA的表情况与蛋白相符。【结论】在EMS在位、异位内膜存在着GnRH—R的自／旁分泌调节，GnRH—R可能成为临床GnRH类似物（GnRH—α）治疗的靶点。     

异位和正常子宫内膜间质细胞对上皮细胞间隙连接细胞间通讯的影响

目的 研究体外异位和正常子宫内膜间质细胞对内膜上皮细胞间隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication, GJIC)功能的不同影响.方法 取24例卵巢处子宫内膜异位灶以及10例正常子宫内膜,分离、纯化上皮细胞和间质细胞,建立体外上皮细胞单独培养、上皮细胞与间质细胞共培养模型.在激光共聚焦显微镜下采用荧光漂白后恢复技术分别检测各组上皮细胞的GJIC功能.结果 ①异位内膜上皮、间质细胞纯度分别为92%、95%,对照组内膜上皮、间质细胞纯度分别为95%、98%;②单独培养的异位内膜上皮细胞与单独培养的正常内膜上皮细胞的GJIC功能无显著性差异(P＞0.05);③与正常间质细胞共培养后,上皮细胞中GJIC功能明显上调,而与异位内膜间质细胞共培养的上皮细胞中GJIC功能未见明显变化.结论 异位间质细胞丧失了调节上皮细胞GJIC的能力,这种调节能力的异常可能与子宫内膜异位症发生有关.     

NO/ET对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响

目的 :探讨NO和ET对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响。方法 :体外培养原位和异位子宫内膜间质细胞 ,应用ELISA检测内皮素表达 ,用硝酸还原酶法检测一氧化氮 ,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 :与原位子宫内膜间质细胞相比 ,异位子宫内膜间质细胞NO和ET的合成增加 ,NO/ET比值下降 ,细胞凋亡率降低(P <0 .0 5 )。结论 :NO和ET单独应用时都不可能很好的解释异位子宫内膜间质细胞的凋亡 ,NO/ET比值可理想的解释这两个因子对细胞凋亡的影响。     

神经生长因子对子宫腺肌病基质细胞生存率及雌激素受体α表达的影响

目的研究神经生长因子（NGF）对子宫腺肌病患者离体培养在位子宫内膜基质细胞雌激素受体仅表达的影响。方法用10ng／ml、50ng／ml和100ng／ml的神经生长因子分别对体外原代培养人子宫内膜细胞进行干预,用MTT法测定内膜基质细胞生长的增殖情况,用Westen—blotting测定50ng／mlNGF对病例组基质细胞雌激素受体仪表达的变化。结果50ng／ml的NGF可促进子宫内膜基质细胞增殖,细胞存活率为82．61％,比其他浓度NGF显著升高（P〈0．05）;50ng／mlNGF对病例组和对照组不同细胞雌激素受体表达有影响,病例组腺上皮细胞和基质细胞总体均数差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论50ng／ml的NGF可促进子宫腺肌病在位内膜基质细胞增殖及腺上皮细胞和基质细胞雌激素受体仅表达。     

雄激素和雌激素对人类前列腺间质细胞bFGF、TGFβ2以及smoothelin表达的影响

目的 研究雄激素和雌激素对培养的人前列腺间质细胞碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和转化生长因子（TGFβ2）表达的影响。方法 本实验培养出11株良性前列腺增生症（BPH）病人前列腺间质细胞，并给予双氢睾酮（DHT）和雌二醇（E2）刺激，通过RT-PCR法观察bFGF和TGFβ2的mRNA表达，同时观察了平滑肌细胞分化特异性抗原（smoothelin)的mRNA表达。结果 DHT能明显上调bFGF表达，E2能明显上调TGFβ2和smoothelin表达，且TGFβ2和smoothelin表达量成正相关。结论 DHT能诱导bFGF表达，E2能诱导TGFβ表达，E2诱导向平滑肌的细胞转化可能与TGFβ2有关。