神经干细胞、成体神经发生以及神经变性疾病的细胞移植治疗

成体哺乳动物的神经元是退出细胞周期的终末分化细胞,因此长期以来神经系统被认为缺乏再生能力。自神经干细胞（neural stem cells,NSCs）及神经发生在许多物种尤其哺乳动物的成体中被广泛发现和证实后,成体中枢神经系统的可塑性和神经发生的机制和功能成为神经科学研究的热点。神经干细胞的基因组在多种表观遗传因子和微环境的共同调节下,在特定时间和空间中表达出特异的RNA及蛋白质。新生神经细胞经过增殖、分化、迁移、整合并最终成熟为特化的神经细胞,这一过程即为成体神经发生。成体哺乳动物脑中的神经发生贯穿整个生命周期,且已在侧脑室的室管膜下区（subventricular zone,SVZ）和海马齿状回（dentate gyrus,DG）的颗粒下区（subgranular zone,SGZ）被明确证实。成体神经发生受到多种生理和病理因素的调控,与嗅球和海马等脑区的功能密切相关。移植神经干细胞治疗中枢神经系统（central nervous system,CNS）变性疾病被广泛研究并且在临床前实验中有明显的治疗效果。然而,成体神经发生的分子机制尚不明确,尤其新生神经细胞如何与CNS的神经细胞、免疫细胞、以及微环境相互作用而发挥治疗作用需要深入研究。此外,神经干细胞移植疗法还需要解决神经干细胞来源、体外培养技术、免疫排斥、移植剂量、脑部定位以及各种疾病治疗的最佳时间窗口选择等问题。总之,深入了解神经干细胞及神经发生的机制不仅会极大地推动神经科学的基础研究,也为CNS相关疾病提供了新的有效的治疗方案,有着广阔的理论和应用前景。     

人神经干细胞移植治疗小脑萎缩

目的:探索入神经干细胞(neural stem cell,NSC)移植治疗小脑萎缩(cerebellar atrophy,CA)的有效性.方法:8～10周龄人胚胎的小脑细胞在体外稳定扩增后,借助立体定向技术将其植入经MRI证实的21例CA患者的小脑齿状核内,将NSC(3×107/0.3 ml)缓慢注入小脑齿状核(此前注入地塞米松0.5 mg/0.1 ml).本组男8例,女13例,年龄19～71岁(平均46岁).结果:人胚胎小脑神经细胞可以在体外扩增,扩增的细胞可达1×107倍.移植病例未见明显的移植排斥反应.CA患者移植术后3个月临床症状改善的有效率为61.9%,术后6个月有效率为85.7%;随访12～28个月(平均18个月),有效率达90.4%.结论:应用体外扩增的人NSC可以治疗CA,而且临床安全、有效.     

神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究与进展

近年来对神经干细胞移植治疗中枢系统疾病的研究成为热点，神经干细胞作为具有自我增殖及分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，因此应用神经干细胞移植治疗神经变性、脊髓损伤和神经脱髓鞘等疾病具有广阔的临床实用价值和应用前景。本文就神经干细胞的概述、移植的方法和意义、临床应用、目前存在的问题以及应用前景等作一综述。     

神经干细胞移植治疗帕金森病的研究进展

帕金森病(Parkinson's Disease,PD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病,以静止性震颤、肌张力增高和运动迟缓为主要症状,病理基础为中脑黑质-纹状体通路多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性和脑内Lewy小体(Lewy's body,LB)形成.当黑质纹状体DA能神经元丢失70%时出现典型的临床症状.PD的患病率为总人口的0.2%,55岁以上人口占1.4%,75岁以上人口占3.4%[1].     

神经干细胞移植治疗大鼠脑外伤

已有报道表明神经干细胞移植可在一定程度上恢复受损中枢神经系统的功能[1,2],其治疗机制是通过移植入宿主体内的神经干细胞在中枢神经系统损伤部位定居、增殖并分化成具有修复神经损伤功能的神经元和神经胶质细胞等,同时这些分化的神经元应能与周围神经系统建立起正确的突触联系[3]。     

大鼠神经干细胞移植治疗大鼠脑梗死的实验研究

目的研究大鼠神经干细胞治疗脑梗死的可能性.方法从孕16 d的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞,通过免疫组织化学技术研究其特征.制作大鼠脑缺血再灌注模型,3 d后移植未分化的神经干细胞于梗死灶同例的侧脑室内.记录损伤和移植后的大鼠运动功能,不同时间杀死大鼠,研究移植后的神经干细胞迁徙、分化的情况.结果大鼠神经干细胞体外培养显示其具有良好的自我繁殖能力,体外诱导可分化为神经元细胞.结论大鼠神经干细胞能在缺血区内分化成为神经元细胞,移植后能有效穿透室管膜进入脑组织,迁徒至脑缺血病灶,侧脑室移植神经干细胞能有效改善脑缺血动物运动功能.     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的：探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的新方法，为治疗脊髓功能障碍性疾病打下基础，方法：制作脊髓横断大鼠模型，造成大鼠下肢瘫痪，分别在损伤急性期和损伤3周后移植胎鼠组织神经干细胞，观察移植后的动物行为变化，脊髓神经电生理变化和脊髓组织形态学变化，结果：细胞移植后第8d即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复，2－3周后可出现爬行，4周后后肢活动沃跃；对照组瘫痪的肢体无任何恢复。脊髓诱发电位部分出现，动作电位波幅较高，对照组未出现诱发电位，且动作电位波幅明显减低，脊髓移植肉眼可见有增生的组织充填，镜下有大量新生的细胞，表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色，结论：神经干细胞移植可使脊髓横断大鼠运动功能恢复，有望成为治疗脊髓损的有效手段。     

神经干细胞移植对帕金森大鼠的疗效观察

目的观察神经干细胞移植对帕金森大鼠脑内多巴胺含量的影响。方法采用6-羟基多巴胺定点注射毁损黑质纹状体的方法构建帕金森大鼠模型;向造模成功的大鼠纹状体内分别移植1×106（共计20μl）的第3代胚鼠神经干细胞或等量生理盐水。结果与结论神经干细胞移植后3周,免疫组化检测发现帕金森大鼠脑黑质部位酪氨酸羟化酶阳性细胞数明显增多,纹状体内可见酪氨酸羟化酶阳性细胞。干细胞移植后8周,高效液相色谱检测显示大鼠纹状体内多巴胺含量明显增高（P〈0.01）。说明神经干细胞脑内移植能够减轻由6-羟基多巴胺引起的大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的损伤,改善大鼠的帕金森症状。     

神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的：观察神经干细胞（NSCs）移植对脊髓损伤（SCI）大鼠功能恢复的作用。方法：30只Wistar大鼠随机分为对照组、损伤组和移植组,每组10只;损伤组和移植组制作成L4平面的脊髓全横断模型,将培养的大鼠NSCs悬液注入移植组损伤脊髓处,损伤组注射等量的生理盐水。术后2mo,采用BBB评分、皮层体感诱发电位（CSEP）和辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪技术观察大鼠脊髓运动和传导功能的恢复程度。结果：术后2mo,BBB评分损伤组、移植组大鼠有所恢复,但都未达到正常水平,其中移植组的大鼠恢复较好,评分较高,与损伤组有统计学差异。SCI后,损伤组、移植组的CSEP波消失,术后2mo移植组的波形有所恢复,但潜伏期延长。对照组脊髓前角可见到许多HRP标记阳性神经元,损伤组未见阳性神经元,移植组可见有阳性神经元,但数目较对照组少。结论：NSCs脊髓内移植能促进损伤脊髓运动和传导功能的部分恢复。     

神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的实验研究

目的 研究神经干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的临床效果.方法 选择年龄在12个月左右的60只健康成年Wistar大鼠作为该次实验对象,实验时间为2015年5—10月,大鼠的体重均在300~400 g左右,用于制备血管性痴呆2VO模型,将大鼠随机分成3组,分别为假手术组、对照组及NSCs组,在移植前后对3组大鼠实施Morris水迷测试.结果 移植后5周、10周时,NSCs组大鼠逃避潜伏期(36.85±7.14)、(40.26±8.11)相对于对照组(52.11±6.57)、(54.10±7.16)有了显著的减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 针对VaD大鼠模型采用神经干细胞移植的效果显著,能有效改善大鼠学习记忆能力.     

GDNF基因修饰的神经干细胞移植治疗大鼠局灶性脑缺血的实验研究

目的:观察转染胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的神经干细胞(Neural stem cells ,NSCs)移植在脑缺血大鼠脑组织的分布,探讨其神经保护作用.方法:体外培养新生大鼠NSCs,采用改良的线栓法制作脑缺血再灌注模型,3 d后用脑立体定位仪分别经脑室移植生理盐水、NSCs和GDNF/NSCs.各组移植前及再灌注1～7周进行神经功能损伤程度评分(Neurological severity scores,NSS).免疫组织化学方法观察移植后NSCs的存活及分布情况.结果:NSCs经GDNF基因转染后2 d发绿色荧光,抗nestin免疫荧光检测呈阳性.GDNF/NSCs组与NSCs组NSS评分比较,在再灌注2周和3周显著降低(P＜0.05).移植的NSCs分布于缺血侧皮质、纹状体,移植后3、5、7周,阳性细胞数分别较1、2周显著增多(P＜0.05).GDNF/NSCs组与NSCs组比较,第2、3、5、7周纹状体、皮质阳性细胞数显著增多(P＜0.05).从病理学上观察,GDNF/NSCs组神经毡较NSCs移植组致密.结论:移植GDNF基因修饰的神经干细胞能改善脑缺血大鼠神经功能,对脑缺血所致的损伤具有一定修复作用.     

自体骨髓干细胞移植治疗终末期肝病临床研究

目的 探讨自体骨髓干细胞(BMSC)移植对肝衰竭及肝硬化失代偿期患者的治疗作用.方法 24例肝硬化失代偿期及肝衰竭患者无菌抽取骨髓65～95ml,Kai W01 lert方法分离纯化BMSC,然后经肝动脉或脾动脉导管注入肝脏或脾脏.术后定期检测肝功能和凝血功能,并观察同期的症状体征和不良反应情况.结果 术后2周内所有血清学指标均无显著性改变;与术前比较,术后4周,清蛋白(g/L)为30.91±4.00 vs 27.75±5.40(P<0.05),至12周,升至32.00±6.18(P<0.01);前清蛋白(mg/d1)为18.28±3.78 vs 15.63±3.16(P<0.01);总胆红素(μmmol/L)为36.94±21.15 vs 125.01±150.05;总胆汁酸(μmmol/L)为41.63±33.91 vs 78.00±59.80,凝血酶时间(s)及纤维蛋白原(g/L)分别为14.81±1.69 vs 22.40±7.07和2.63±0.62 vs 1.76±0.95,P均<0.05;球蛋白及肝酶指标均无明显变化(P>0.05).术后1周食欲、体力改善分别为91.67%和87.5%;第2周62.5%肝病面容好转,有1例蜘蛛痣明显减少;术后12周的总生存率为62.5%,其中移植2周后死亡及失访者共9例,其原因为慢性肝衰竭合并白发性细菌性腹膜炎或DIC或肝肾综合征.BMSC肝内灌注术中有2例发现小肝癌,即改予脾内灌注BMSC并术后行经皮肝穿刺肝癌瘤内无水酒精注射,其中1例AFP由80 ng/ml降至9 ng/ml,恢复良好,另1例手术后11周死于肝肾综合征.所有患者均未发现细胞移植并发症.结论 自体BMSC移植治疗终末期肝病近期安全有效,患者肝功能、凝血功能改善明显,生存质量提高,但应严格掌握适应证.     

干细胞移植在胃肠道疾病中的应用

消化道干细胞的研究对于消化道疾病发病机制的探索及治疗有着重要的指导意义。本文就近年来有关干细胞移植在胃肠道疾病中的应用作一简要概述。     

神经干细胞移植治疗脊髓横断损伤的研究

目的研究神经干细胞移植治疗对脊髓横断损伤的修复作用.方法采用成年S-D大鼠,随机分为脊髓(胸10)横断损伤对照组(n=7)和神经干细胞移植治疗组(n=7).术后10周,感觉运动区皮质注射10?A示踪剂.动物再存活两周后取出相应的脑和脊髓组织,冰冻切片后,采用自由漂浮法行BDA染色显影,光镜观察.两组实验动物均于脊髓横断术后采用BBB评分法定期评估运动功能.结果神经干细胞移植治疗组所有大鼠BBB运动功能评分在横断损伤4周以后明显高于对照组(P＜O.05).BDA神经束路示踪技术研究显示神经干细胞治疗组7只中的6只大鼠在术后12周有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓横断损伤部位,而对照组大鼠均未见再生的皮质脊髓束通过.结论在脊髓横断损伤后应用神经干细胞移植治疗,可明显改善损伤的运动功能.神经干细胞移植治疗促进了皮质脊髓束的再生并重新建立了部分神经纤维联系.BDA神经束路示踪技术为脊髓损伤后神经功能的恢复提供了解剖形态学依据.     

Experimental Study on Treatment of Glioma by Embyonic Neural Stem Cell Transplnation in Rats

The neural stem cells in Wistar rats were cultured in vitro,purified,and transplanted into C6 glioma model in order to observe their biological characters and provide a basic foundation for treatment of neurological diseases by neural stem cell transplantation.The cells at hippocampal area from gestation 15-day rats were cultured in vitro,and frozen and preserved in liquid nitrogen.C6 tumor-bearing models(n=25) and neural stem cells transplantation models(n=35) were established.When the tumor grew to 3 to 4 weeks,5 rats in each group were randomly selected for MRI examination.At different intervals,the rats were perfused and sampled for HE staining,GFAP and BrdU immunohistochemical staining.The results showed that after resuscitation of neural stem cells at 1-4 passages,the cell viability was 40%-63% with the difference being not significant.The cells could proliferate,passage,and most cells transplanted into glioma model survived.The mean survival time in neural stem cell transplantation group and control was 4.28 and 3.88 weeks respectively,and the average tumor size in the former was smaller than in the latter.It was concluded that embryonic neural stem cells in rats could proliferate and differentiate,and after resuscitation the biological characteristic and viability of the cells were not influenced.Neural stem cells had inhibitory effects on the growth of glioma cells and could prolong the survival of rat model.     

神经干细胞移植在缺血性脑损伤治疗中的应用

20世纪90年代以来,神经干细胞（neural stem cell,NSC）相继从胚胎和其他成体哺乳动物的中枢神经系统分离培养成功,“中枢神经系统受损后不能再生”的传统观点被打破,这为中枢神经系统疾病的治疗提供了新途径。NSC的研究成为神经科学领域研究的热点。NSC能分化为神经元和神经胶质细胞,参与脑组织结构和功能的修复,还可作为基因修饰载体用于中枢神经系统疾病的基因治疗。     

神经干细胞移植治疗脑性瘫痪的疗效观察

目的探讨神经干细胞（neural stem cells,NSCs）移植治疗脑性瘫痪的疗效。方法对1例脑性瘫痪的患者进行静脉及椎管内NSCs移植。治疗方案：在30mins内将30ml含108～109数量的NSCs注入体内,共4次,每次间隔3～4d,第1,2,4次均为静脉注射,第3次为5mlNSCs椎管内注射＋25ml静脉注射。分别于治疗前及治疗后60d对患儿进行韦氏儿童智力量表测评,日常生活活动能力指数（Barthel index,BI）及改良Ashworth痉挛评定量表评定。结果术后60d患儿肌张力下降,肢体活动能力提高,改良Ashworth痉挛评定量表由术前的Ⅱ级降至术后Ⅰ级,BI由术前的46分提高至69分,韦氏儿童智力测验无明显改善。结论NSCs治疗脑性瘫痪对本例患儿近期临床效果尚可,远期临床疗效有待进一步观察。     

造血干细胞移植与血管新生对脑梗死的作用

目的 探讨造血干细胞能否促进血管发生,重建微循环环路。方法 建立大鼠大脑中动脉脑栓塞模型,模型制作成功后7天,定向植入Brdu标记的1×106个HSCs,对照组植入等量的PBS液。观察移植前、后NSS评分变化;免疫组化方法观察梗死侧半球Brdu/CD34、Brdu/vWF、VEGF、vWF的分布情况;TCC染色观察移植后梗死体积。结果 移植后第1周Brdu/CD34、Brdu/vWF、VEGF、vWF在HSCs组有大量表达(P<0.01),Brdu/vWF、vWF随移植时间延长增加(P<0.05);移植后第4周HSCs组较对照组神经功能显著改善、梗死体积明显缩小(P<0.01)。结论 外源性HSCs在脑梗死大鼠脑内能够促进血管发生,改善神经功能,缩小梗死体积。