人类羊膜细胞表达神经细胞和脂肪细胞表型

目的 探索羊膜组织来源的细胞向神经细胞分化的可能性，为神经移植探寻新的细胞来源。方法 采用组织块培养法培养羊膜细胞，酶消化法对细胞进行传代，应用免疫细胞化学的方法对细胞进行鉴定。结果 从羊膜组织成功培养出细胞，细胞贴壁生长，在体外短期内可以稳定增殖和传代，传代细胞在神经于细胞的培养基中可以形成典型的球状结构，类似神经于细胞的神经球。细胞表达波形蛋白和巢蛋白两种神经于细胞的标志物，也表达神经元的标志物神经元特异性烯醇化酶和βⅢ管蛋白；大部分细胞表达多巴胺能神经元的标志物酪氨酸羟化酶。少数细胞表达星型胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白。部分细胞可以随机分化为平滑肌细胞，表达平滑肌肌动蛋白；在诱导条件下，羊膜细胞也可以分化为脂肪细胞。结论 羊膜组织来源的细胞可以表达神经细胞的标志物，能够分化为脂肪细胞和平滑肌细胞，这种细胞对于神经移植有潜在的应用前景。     

脂肪组织来源的基质细胞向神经元样细胞分化

目的：研究脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化的可能性，为神经移植探索新的细胞来源。方法：采用β-巯基乙醇诱导脂肪来源的基质细胞向神经元样细胞分化，以免疫细胞化学方法对分化的和未分化的细胞进行鉴定。结果：从成年大鼠的脂肪组织中分离出基质细胞，在体外生长形态类似成纤维细胞，可以维持在未分化状态稳定增殖，体外扩增可超过10多代。β-巯基乙醇可诱导这种细胞向神经元样细胞分化，分化的细胞早期表达巢蛋白，后期则表达神经元的标志物——神经元特异性烯醇化酶和神经微丝，在最适合的诱导条件下约60％～85％的细胞表达这两种神经元的标志物。结论：脂肪组织中存在能分化为神经元样细胞的干细胞。     

大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化的研究

目的:探索骨髓基质细胞体外定向诱导分化为神经细胞的可能性。方法:取大鼠的骨髓基质细胞在体外培养,用免疫组化方法检测正常脊髓提取液和脑源性神经生长因子诱导分化,观察诱导后细胞的形态。结果:骨髓基质细胞在体外培养呈梭形。诱导后细胞呈神经元样细胞改变。神经元烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白染色阳性。结论:骨髓基质细胞可在体外诱导分化。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的：探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法：从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定。结果：诱导1h、2h、3h后有部分细胞表达神经干细胞标志蛋白nestin,且随诱导时间延长呈下降趋势;诱导5h后,大部分细胞具有典型神经元形态,表达神经元标志物,神经元特异性烯醇化酶(NSE),少部分细胞呈星型胶质细胞状,表达胶质细胞标志物—胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论：骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞和星型胶质样细胞。     

成年大鼠骨骼肌肌源性干细胞向神经细胞的分化

目的 研究成体骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向神经细胞分化的潜能.方法 从成年 SD 大鼠骨骼肌组织中培养出肌源性干细胞,采用 bFGF、EGF 诱导出神经球样细胞团,并检测 nestin 表达.再在贴壁培养条件下,用 RA、BDGF 诱导分化,并检测 NSE、GFAP 的表达.结果 MDSCs 能被诱导出神经球样细胞团,并表达 nestin.这些细胞进一步诱导,部分细胞表现出神经元样或胶质细胞样形态,并表达 NSE 或 GFAP.结论 MDSCs 能向神经细胞样细胞分化,有望用于神经系统疾病的治疗.     

体外诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化的形态学观察

目的:探讨骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源.方法:无菌取成大鼠长骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(BMSC),在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导其分化为神经元样细胞.结果:增殖培养24～72h见细胞分裂像和克隆单位;继续增殖培养仍可见细胞克隆(干细胞特性);诱导培养第10日有成熟神经细胞形成.说明BMSC在体外培养条件下,经过多种因子的"程序性"作用,可以向神经干细胞、成熟神经元及胶质细胞方向分化.结论:在适宜培养条件及诱导因子联合作用下,BMSC可成功诱导出神经元样细胞.     

人脐带血细胞分化为神经样细胞的实验研究

为探讨人脐带血细胞分化为神经样细胞的可行性 ,无菌条件下采集正常人脐血 5 0～ 10 0mL置于加有抗凝剂的采血袋中 ,分离脐血单个核细胞进行培养 ,并加入细胞因子加以诱导分化 ,利用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果显示 :脐血单个核细胞能在体外培养中增生分化和表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白 (nestin) ,并最终分化为神经元样和神经胶质样细胞。免疫组化染色可见神经元特异性烯醇化酶 (NSE)和胶质原性纤维酸性蛋白 (GFAP)抗原表达。碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮生长因子 (EGF)协同作用对脐血细胞的分化有促进作用。提示 :脐血单个核细胞具有增生和分化潜能 ,可分化为神经元样及神经胶质细胞样细胞 ,可以作为神经细胞的种子细胞。     

阿魏酸钠诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的初步研究

目的 探讨阿魏酸钠诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的可能作用。方法 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，采用阿魏酸钠对其进行诱导培养，倒置显微镜下观察诱导培养不同时间后细胞的形态变化，并应用免疫细胞化学方法鉴定诱导培养后细胞表面神经细胞特异性标志物神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达。结果 阿魏酸钠诱导培养6h后即可见细胞形态发生明显变化，24h后表现为典型的神经细胞样形态，NF和NSE神经细胞特异性标志物呈阳性表达。结论 初步证实阿魏酸钠具有诱导体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用。     

脑源性神经生长因子促进骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究

目的 探索脑源性神经生长因子（BDNF）在诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为神经元样细胞过程中的作用。方法 应用Ficoll分离骨髓中单核细胞,贴壁培养细胞,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含β-巯基乙醇（BME）、BDNF及碱性成纤维细胞因子（bFGF）的条件培养基使培养的细胞向神经细胞诱导分化;采用免疫荧光染色法对分化的细胞进行鉴定。结果 分离培养的贴壁细胞具有典型的BMSCs的形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星型胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶（NSE）、和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。结论 BMSCs在体外具有分化为神经元样细胞的能力,BDNF具有促进分化的作用。     

β-巯基乙醇和脑匀浆上清对骨髓间充质干细胞的神经诱导作用

目的探讨β-巯基乙醇(BME)和大鼠脑匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为类神经元样细胞的作用。方法采用全骨髓培养法从SD大鼠骨髓中分离培养MSCs,经贴壁法体外扩增、传代和流式细胞仪鉴定。①以1mmol/L浓度BME的含血清DMEM培养基预诱导24 h,再以含5 mmol/L BME的无血清DMEM培养基诱导5 h至MSCs神经分化。②使用大鼠脑匀浆上清诱导MSCs,48 h至神经分化。免疫细胞化学染色分别检测两种诱导方法MSCs培养物神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果第5代MSCs有97.5%表达CD90抗原,1.72%表达CD45抗原。两种方法诱导后的细胞均具有神经细胞的形态特征;相比脑匀浆上清BME诱导组细胞形态变化更快。两种方法都可诱导MSCs表达NSE;鼠脑匀浆上清可诱导MSCs表达GFAP。结论MSCs具有向神经细胞分化的可塑性,相比BME,鼠脑匀浆上清具有诱导MSCs向胶质细胞分化的倾向。     

Bone marrow stromal cells express neural phenotypes in vitro and migrate in brain after transplantation in vivo

Objective To investigate the differentiation of bone marrow stromal cells （BMSC） into neuron-like cells and to explore their potential use for neural transplantation. Methods BMSC from rats and adult humans were cultured in serum-containing media. Salvia miltiorrhiza was used to induce human BMSC （hBMSC） to differentiate. BMSC were identified with immunocytochemistry. Semi-quantitative RT-PCR was used to examine mRNA expression of neurofilamentl （NF1）, nestin and neuron-specific enolase （NSE） in rat BMSC （rBMSC）. Rat BMSC labelled by Hoschst33258 were transplanted into striatum of rats to trace migration and distribution. Results rBMSC expressed NSE, NFI and nestin mRNA, and NF1 mRNA and expression was increased with induction of Salvia miltiorrhiza. A small number of hBMSC were stained by anti-nestin, anti-GFAP and anti-S 100. Salvia miltiorrhiza could induce hBMSC to differentiate into neuron-like cells. Some differentiated neuron-like cells, that expressed NSE, beta-tubulin and NF-200, showed typical neuron morphology, but some neuron-like cells also expressed alpha smooth muscle protein, making their neuron identification complicated, rBMSC could migrate and adapted in the host brains after being transplanted. Conclusion Bone marrow stromal cells could express phenotypes of neurons, and Salvia milliorrhiza could induce hBMSC to differentiate into neuron-like cells, If BMSC could be converted into neurons instead of mesenchymal derivatives, they would be an abundant and accessible cellular source to treat a variety of neurological diseases.     

单味黄芪红花丹参注射液对神经干细胞分化影响的初步研究

目的寻找对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的增殖、分化和存活有促进作用的单味中药成分,进而确定对NSCs的增殖和分化有影响的中药有效成分。方法本研究筛选了黄芪、红花、丹参3种中药注射液分别刺激培养的NSCs,观察NSCs的分化状态。结果发现黄芪、红花有明显的促进NSCs分化的作用,其中黄芪效果最佳,而丹参却有促进NSCs凋亡的作用,这种作用随着其浓度的升高而加强。结论黄芪、红花对NSCs的分化起积极作用,丹参对NSCs的分化有毒性作用,也可能促进NSCs的凋亡,为进一步从细胞水平和分子水平研究中药的作用机制和NSCs的分化机制提供了依据。     

表皮生长因子在新生大鼠神经干细胞培养中的作用

目的探讨表皮生长因子（EGF）在神经干细胞培养中的作用。方法取新生SD大鼠神经干细胞用无血清培养技术进行培养、传代和鉴定,在传代且培养基撤除EGF后观察细胞的变化,并进行神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经胶质酸性蛋白（GFAP）检测,以做细胞鉴定。结果成功培养出新生大鼠神经干细胞,并进行传代,培养的神经干细胞在培养基去除EGF后能分化为神经元细胞和神经胶质细胞,EGF反应性神经干细胞主要向神经胶质细胞分化。结论新生大鼠神经干细胞能在体外适宜条件下进行长期培养、传代,且具有多向分化潜能;EGF具有促进神经干细胞快速增殖、维持神经干细胞状态、抑制神经干细胞分化的功能;EGF反应性神经干细胞具有向星形胶质细胞分化的趋势。     

血管性痴呆大鼠海马神经干细胞移植

目的 探讨新生大鼠脊髓神经干细胞(NSC)移植至血管性痴呆(VD)大鼠海马后在体内的存活、迁移和分化。方法 用无血清培养和单克隆技术从新生大鼠脊髓分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养，鉴定为NSC后，将其用BrdU标记后移植入VD大鼠海马内，利用免疫荧光化学技术检测移植后细胞的生存、迁移和分化。结果 从脊髓分离的细胞群具有NSC的特性，这些细胞在移植入VD大鼠海马8周后能检测到其存在并向四周迁移，并且分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从脊髓分离的细胞是脊髓NSC，将其移植到VD大鼠海马内能生存、迁移和分化。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养和鉴定

目的建立神经千细胞分离、培养方法。方法从新生大鼠海马组织分离神经干细胞，进行体外培养、传代，应用免疫荧光细胞化学方法观察鉴定神经干细胞和分化后神经细胞抗原的表达。结果从海马组织中分离出的神经千细胞具有增殖能力，可进行传代培养，获得的细胞克隆表达Nestin阳性，分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。绪论分离堵养的细胞具有自我更新、增殖和多分化潜能，是神经干细胞。     

猪诱导多能干细胞可定向分化为前脑GABA能神经元前体

目的 探讨猪诱导多能干细胞（iPSCs）体外定向分化为GABA能神经元前体的方法体系。方法 猪iPSCs诱导分化为GABA能神经元前体遵循两个阶段,第1阶段,猪iPSCs悬浮培养,第3天时形成类胚体,采用神经诱导培养基NIM（SB431542、DMH1、FGF2）继续诱导,第12天分化为原始神经上皮细胞。第2阶段,使用含Pur、B27的NIM培养基悬浮培养形成神经球,至第21天时形成GABA能神经元前体。CM-DiI标记后,定向移植帕金森（PD）模型大鼠黑质纹状体,检测其在宿主脑内存活、迁移及分化状况。结果 猪iPSCs在饲养层细胞上稳定传代,表达多能性标记OCT4、Nanog、SSEA1和TRA-160,并且核型分析显示没有其他物种来源细胞污染。第12天经诱导分化获得原始神经上皮细胞能够形成玫瑰花环结构,并表达其表面标记物（PAX6、SOX2 和 Nestin）与神经微管蛋白标志物 Tuj1。第 21 天诱导细胞高表达 GABA 能神经元前体的表面特异性抗原NKX2.1和前脑标志物FOXG1。移植8周后,体内可分化为GABA能神经元与多巴胺能神经元,明显改善PD大鼠运动行为。结论 结合无血清培养基筛选法逐步定向诱导猪iPSCs高效分化为前脑GABA能神经元前体,移植后能够显著改善PD大鼠的运动功能障碍,为诱导GABA能神经元前体移植治疗神经损伤疾病奠定基础。