纳米羟基磷灰石复合骨髓基质细胞修复兔股骨缺损的实验研究

目的探讨使用纳米羟基磷灰石(Nano-Hydroxyapitite,n-HA)作为骨组织工程支架材料的可行性。方法以成骨条件培养液培养兔骨髓基质细胞(BMSCs)至第3代并以1×106/cm2的密度与n-HA复合培养后回植于骨缺损区(1.0cm×0.8cm×0.5cm)。术后6周、12周处死动物,取缺损区及周围骨质进行肉眼、X线片、免疫组化染色观察及计算机图像分析。结果所有植入物无排除或感染。6周及12周通过肉眼及免疫组化观察实验组修复效果明显优于对照组,新骨面积百分比高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论n-HA作为骨组织工程支架材料具有可行性。     

南宁某警犬基地蜱虫及病原体感染调查

目的了解广西南宁某警犬养殖训练基地蜱虫及病原体携带情况。方法 2013年7月在广西南宁某警犬养殖训练基地,采用逆毛式检蜱法采集犬体表以及犬舍墙壁的蜱虫,用巴贝虫属18S rRNA通用引物的巢式PCR、原核生物16S rRNA及真核生物线粒体16S rRNA通用引物的PCR和序列测定方法,鉴定蜱虫体内的病原体感染情况和蜱虫种类。结果从警犬体表及犬舍墙壁共计采集5只饱血蜱和13只饥饿蜱;经PCR鉴定均为血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)。蜱虫体内扩增到田鼠巴贝虫(Babesia microti)、伯纳特氏立克次氏体(Coxiella burnetii)、假单胞球菌(Pseudomonas sp.)、甲基杆菌(Methylobacterium sp.)DNA序列,阳性率分别为27.8%(5/18)、22.2%(4/18)、11.1%(2/18)、11.1%(2/18)。结论南宁某警犬养殖训练基地蜱虫存在一定比例的田鼠巴贝虫、伯纳特氏立克次氏体、假单胞球菌、甲基杆菌感染阳性率,对接触人员、及其他牲畜有潜在感染的风险,应加强预防和控制。     

β-巯基乙醇和脑匀浆上清对骨髓间充质干细胞的神经诱导作用

目的探讨β-巯基乙醇(BME)和大鼠脑匀浆上清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为类神经元样细胞的作用。方法采用全骨髓培养法从SD大鼠骨髓中分离培养MSCs,经贴壁法体外扩增、传代和流式细胞仪鉴定。①以1mmol/L浓度BME的含血清DMEM培养基预诱导24 h,再以含5 mmol/L BME的无血清DMEM培养基诱导5 h至MSCs神经分化。②使用大鼠脑匀浆上清诱导MSCs,48 h至神经分化。免疫细胞化学染色分别检测两种诱导方法MSCs培养物神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果第5代MSCs有97.5%表达CD90抗原,1.72%表达CD45抗原。两种方法诱导后的细胞均具有神经细胞的形态特征;相比脑匀浆上清BME诱导组细胞形态变化更快。两种方法都可诱导MSCs表达NSE;鼠脑匀浆上清可诱导MSCs表达GFAP。结论MSCs具有向神经细胞分化的可塑性,相比BME,鼠脑匀浆上清具有诱导MSCs向胶质细胞分化的倾向。     

p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。     

基因重组EB病毒gp125抗原的鼻咽癌免疫荧光血清学诊断方法

目的　尝试用基因工程表达抗原建立鼻咽癌诊断血清学方法。方法　用重组痘苗病毒感染细胞为抗原片 ,用免疫荧光法检测鼻咽癌患者、其他肿瘤患者和正常人血清抗Epstein Barr病毒 (EBV)IgA/gp12 5抗体 ,同时用传统方法检测其IgA/VCA、IgA/EA和IgA/MA抗体 ,将所得结果进行比较。结果　其灵敏度远远高于IgA/EA ,接近于IgA/MA和IgA/VCA ,特异性高于IgA/MA和IgA/VCA ,接近于IgA/EA。结论　建立了一种可用于鼻咽癌的诊断和高发人群普查的灵敏、特异、经济、简便的方法     

滤纸片采血反向血型定型法的建立和应用

建立滤纸片采集样本反向血型定型方法。用此法对252名学生的血型进行了检测。结果表明，样本采集4周内均可检出血型，且与传统的正反定型结果一致，血型定型准确率100％。该法特别适用于学校和部队等大量、集中采集的样本的检测，也适用于偏远地区及厂矿、农村等基层卫生室的大量或零星样本的检测。     

IgA类单克隆抗体血型定型试剂的实验室研究及临床应用

目的:用实验室手段和大样本临床验证方法,研究IgA类抗血型单克隆抗体(mAb)用作人血型定型试剂的可行性。方法:根据《中国生物制品规程》、新药临床验证以及有关要求,检测规模化生产的mAb的有关指标,并在人群中用反向定型等方法进行验证。结果:所有指标均达到或超过国家标准,临床应用未出现错判和误判。结论:所生产的mAb完全可以用于中国人ABO血型定型。     

真核表达人呼吸道合胞病毒F蛋白的纯化方法

目的 真核表达人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,SV)融合蛋白(fusion protein,),并完成蛋白纯化及纯度测定.方法 根据编码F蛋白的基因序列设计引物,CR方法扩增出3'端带His标签的F基因序列,克隆入pGEM-T-easy载体,经核酸序列分析后,进一步克隆到pcDNA3.1( )真核表达载体,限制性内切酶鉴定,用脂质体Lipofectamine2000转染COS-7细胞,2 h后再用Westem blot检测目的蛋白的表达.Ni柱亲和层析纯化COS-7细胞表达的F蛋白,高效毛细管电泳分析纯化后蛋白纯度.结果 核酸序列分析证实获得带His标签的RSV F基因序列,没有发生无义突变.转染COS-7细胞后,利用Western blot方法检测到F蛋白的特异性条带,纯度达99%以上.结论 初步建立了真核表达RSV F蛋白的纯化方法,为进一步优化RSV F蛋白制备条件及单克隆抗体及诊断试剂等研究奠定了基础.     

医药生物技术专业综合实验课程的研究与实践

以教学实践为例，从授课内容、授课方式等方面探讨培养现代生物技术制药人才的医学生物技术专业综合实验课程的建设与创新问题。