实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)C57BL/6J小鼠模型构建

目的建立慢性-非缓解的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型,以便用于多发性硬化症的研究和治疗。方法采用背部多点MOG35-55免疫建立EAE模型,模型期间按Benson评分标准对EAE的病程进行临床评估,取发病高峰期脊髓和脑组织进行H&E染色,观察炎症细胞浸润情况。结果经该方法建立C57BL/6J小鼠EAE模型,具有稳定、发病率高的特点。对EAE小鼠的脊髓、脑组织进行的病理学检测结果表明,与对照组小鼠相比,EAE小鼠的脊髓、脑组织中炎性细胞浸润增多。结论本研究成功构建了MOG35-55免疫的C57BL/6J EAE小鼠模型。     

不同剂量MOG抗原免疫诱导小鼠自身免疫性脑脊髓炎模型的比较

目的 比较不同剂量髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG_(35-55))免疫诱导C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的作用.方法 将C57BL/6小鼠分为正常组和三组不同剂量MOG_(35-55)诱导的EAE模型组,共4组.模型组分别以每只200、100、50μg的MOG_(35-55)与完全弗氏佐剂(complete Freund''s adjuvant,CFA)混合的乳化抗原皮下注射免疫诱导EAE模型,正常组以生理盐水替代.观察不同剂量MOG_(35-55)对C57BL/6小鼠体重、发病率以及神经功能评分等影响,同时取小鼠脑和脊髓,利用光镜和透射电镜观察小鼠病理组织学改变.结果 三组不同剂量MOG_(35-55)均能诱导EAE模型,发病率为100%,呈慢性单相病程,病理学观察发现小鼠脑和脊髓有炎性细胞浸润、脱髓鞘及轴突损伤等改变.但小剂量组在体重减轻、临床症状评分及病理学改变等方面均较中、大剂量组明显.结论 用MOG_(35-55)50μg剂量免疫诱导的C57BL/6小鼠EAE模型稳定,可在今后的研究中应用.     

C57BL/6J小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立及其病理特征

目的 探讨C57BL/6J小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的可能性及其发病特点.方法 使用PLP139-151抗原及其C57BL/6J小鼠自制脑脊髓匀浆(spinal cord homogenate,SCH)免疫C57BL/6J小鼠,使用完全福(氏)免疫佐剂为免疫佐剂,并在尾静脉注射百日咳杆菌,建立EAE模型,与经典的PLP139-151免疫的SJL/J小鼠EAE模型进行对比.结果 PLP139-151免疫C57BL/6J小鼠仅有一只小鼠表现为尾部张力明显降低;自制SCH免疫C57BL/6J小鼠可见明显脱髓鞘改变.与PLP139-151免疫SJL/J小鼠组相比发病率较低(P<0.05),神经功能评分比较没有明显差异(P>0.05),但发病时间长于PLP139-151免疫SJL/J小鼠组(P<0.05).结论 SCH免疫C57BIJ6J小鼠的EAE动物模型,主要表现为急性单相病程,从临床表现和病理学特点来看符合人类MS的病理特点,值得在以后的研究中进一步研究探讨.     

巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠纤维蛋白沉积的影响

目的:观察巴曲酶对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠发病情况及脑组织纤维蛋白沉积的影响.方法:将50只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、EAE对照组、巴曲酶低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组,采用MOG35-55免疫C57BL/6小鼠诱发EAE动物模型.观察小鼠发病潜伏期、进展期和高峰期神经功能障碍评分变化;免疫组化染色法检测脑组织纤维蛋白沉积,计算其相对阳性面积.结果:与EAE对照组比较,巴曲酶各治疗组的潜伏期明显延长,进展期明显缩短,发病高峰期神经功能障碍评分明显降低,呈剂量依赖关系;巴曲酶各治疗组中纤维蛋白沉积量较EAE组明显减少,且呈剂量依赖关系;EAE对照组、巴曲酶各治疗组的纤维蛋白沉积量与潜伏期呈明显负相关,与进展期及发病高峰期神经功能障碍评分呈明显正相关.结论:巴曲酶通过减少脑组织纤维蛋白沉积而发挥对EAE的保护作用.     

不同神经功能评分标准在小鼠EAE模型评价中的比较

目的：比较不同的神经功能损伤评分标准对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）运动功能障碍评估的效能。方法：应用MOG35—55多肽加完全福氏佐剂乳化后免疫20只C57BL／6小鼠,复制EAE小鼠模型,并使用3种不同的评分标准（Kono’s 5分法、Hooper’s 7分法、Weaver’s 15分法）观察和评估实验动物的发病情况,对实验小鼠在发病初期、高峰期的神经功能障碍进行定量的功能损伤评价。结果：3种评分标准比较,在发病初期,15分法和7分法评估神经损伤症状的敏感性相当,比5分法高;高峰期,以症状评分与病理评分的相关性程度来比较3种评分法的效度,15分法效度最高,7分法次之。结论：Weaver’s15分法评价EAE模型神经功能损伤症状,具有明显的优势,推荐作为今后EAE研究的首选评分法．     

慢性EAE模型C57BL/6J小鼠脑和脊髓EBI3和p28 mRNA表达

目的：观察IL-27两个亚单位EBI3 mRNA和p28 mRNA在慢性实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型C57BL/6J小鼠脑和脊髓动态表达的变化,探讨其在EAE发病机制中的作用。方法：72只近交系无特定病原体的6～8周健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、佐剂组和慢性EAE模型组,采用RT-PCR技术观察不同时期脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达变化。结果：EAE组小鼠在发病初期即有EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达升高,在疾病高峰期迅速增加,并在慢性期仍维持在较高水平;与空白对照组和佐剂组相比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。空白对照组小鼠脑和脊髓EBI3 mRNA和p28 mRNA的表达与佐剂组相比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-27有可能在早期促进EAE发病,并维持最后阶段的炎症反应。     

6-姜酚治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫学机制

目的研究6-姜酚治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的可能性及有效性。方法应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelinoligodendrogliaglycoprotein,MOG)免疫C57BL/6小鼠,诱发慢性复发-缓解型EAE模型,观察6-姜酚对EAE小鼠模型的淋巴细胞浸润及TNF-α、IFN-γ、IL-1和IL-6等细胞因子分泌的作用,通过神经功能评分及病理分析等探索6-姜酚治疗EAE的有效性。结果 6-姜酚可抑制MOG诱导的免疫应答反应,通过改变TNF-α、IL-6等细胞因子的分泌,显著改善EAE小鼠神经功能评分,使发病时间延迟(P<0.05)。结论6-姜酚可有效缓解EAE,为6-姜酚用于临床多发性硬化的治疗提供实验依据.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的建立及其病理学和影像学表现

目的：建立实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠模型并做病理学及影像学鉴定,为研究多发性硬化的发病机制奠定基础。方法：C57BL/6雌性小鼠80只,分为EAE1组、EAE2组、EAE3组、EAE4组,各15只,用MOG35-55抗原加完全弗氏佐剂不同注射方法制作EAE小鼠模型;佐剂组10只用生理盐水代替MOG35-55制备免疫乳剂,对照组10只仅注射生理盐水;用MRI对小鼠脑和脊髓进行扫描,HE、LFB染色和Bielschowskys银染观察小鼠脑和脊髓病理学改变。结果：免疫后第14天,EAE1组、EAE2组、EAE3组、EAE4组小鼠开始出现EAE临床症状,发病率分别为80%、80%、73%、67%;EAE2组、EAE3组小鼠临床症状评分与EAE1组比较,P〉0.05,EAE4组小鼠临床症状评分与EAE1组比较,P〈0.05;佐剂组与对照组小鼠均未出现临床神经系统症状;EAE小鼠脑和脊髓小血管周围炎细胞浸润呈袖套状或脱髓鞘改变,神经元变性及轴突损伤,MRI可显示脑和脊髓病灶。结论：应用背部、颈部、腋窝、蹊部多点注射可提高EAE发病率,1次免疫与两次免疫小鼠对EAE发病率的影响没有明显差别。     

桂枝茯苓丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的防治作用及机制研究

目的:探讨桂枝茯苓丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的防治作用及可能机制。方法:建立EAE模型后,将C57BL/6雌性小鼠随机分为EAE对照组和桂枝茯苓丸高、中、低剂量组。免疫后第3天起,进行药物干预,直到免疫后第28天。每天记录各组小鼠体重变化和神经功能评分。第28天处死动物,观察EAE对照组和桂枝茯苓丸各组动物的脊髓和髓鞘的病理改变,ELISA法测定脾细胞上清液中细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的水平。结果:与EAE对照组比较,桂枝茯苓丸高、中、低剂量组均可减轻EAE症状,降低神经功能评分(P0.01),抑制EAE小鼠体重丢失,以中剂量组效果最优。与EAE对照组比较,桂枝茯苓丸可明显抑制EAE小鼠脊髓炎性细胞浸润,减轻髓鞘脱失(P0.05),抑制TNF-α、IL-6分泌(P0.05,P0.01)。结论:桂枝茯苓丸可改善EAE小鼠神经功能评分,明显抑制EAE小鼠脊髓炎性细胞浸润和减轻髓鞘脱失,其机制可能与抑制炎性细胞表达有关。     

大麻素对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸激活电流的抑制作用

目的探讨人工合成大麻素WIN55,212-2对大鼠三叉神经节神经元γ-氨基丁酸(GABA)激活电流(IGABA)的调制作用。方法采用全细胞膜片钳技术。结果①实验中大部分受检细胞(91.84%,99/108)对胞外给予GABA(10～1000μmol/L)敏感,可记录到具有浓度依赖性的内向电流,该电流可被GABAA受体特异性拮抗剂荷包牡丹碱(Bicuculline)阻断。②预加WIN55,212-2(0.03～10μmol/L)对IGABA产生抑制作用,该抑制作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性。WIN55,212-2使IGABA的量效曲线明显下移,而两者的阈值基本不变;最大反应浓度时IGABA幅值减少了(48.83±4.78)%;两条曲线的半数有效浓度(EC50)值比较接近(36.85μmol/Lvs25.76μmol/L)。③WIN55,212-2对IGABA的抑制作用可被大麻素CB1受体选择性拮抗剂AM281阻断,不能被大麻素CB2受体选择性拮抗剂AM630阻断。细胞外灌流蛋白激酶C(PKC)的抑制剂BIM可部分逆转WIN55,212-2对IGABA的抑制作用。结论大麻素WIN55,212-2作用于CB1受体,部分通过激活PKC途径来减少GABAA受体介导的电流,加强突触前抑制作用,这可能是大麻素的外周镇痛机制之一。     

重组白细胞介素-35对支气管哮喘模型小鼠T淋巴细胞亚群及细胞因子的影响*

目的 探究重组白细胞介素-35（rIL-35）对支气管哮喘模型小鼠T淋巴细胞亚群和细胞因子的影 响及其作用机制。方法 100只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组、rIL-35低剂量组、rIL-35中 剂量组和rIL-35高剂量组,每组20只。哮喘组和rIL-35各剂量组小鼠采用卵白蛋白（OVA）复制支气管哮喘模 型,对照组小鼠则以生理盐水代替OVA进行处理。rIL-35各剂量组小鼠在OVA激发结束后腹腔注射不同剂量 rIL-35,连续3 d,对照组和哮喘组小鼠注射等剂量的生理盐水。比较各组小鼠的气道反应性、肺泡灌洗液 （BALF）中总细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的数量;采用流式细胞仪检测各组小鼠BALF中T淋 巴细胞亚群的水平;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠BALF中IgE、白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ （IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-22（IL-22）、 白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β（TGF-β）水平。结果 对照组小鼠未见明显异常状态。哮喘组小 鼠致敏后活动减少,雾化激发时出现不同程度的咳嗽、呼吸急促、烦躁不安等症状。rIL-35低、中和高剂量组小 鼠雾化激发时上述反应症状减轻。不同组激发时肺阻力（RL） 和肺顺应性（Cdyn） 比较,差异有统计学意义 （P <0.05）,不同剂量乙酰甲胆碱激发时RL和Cdyn比较,差异有统计学意义（P <0.05）。乙酰甲胆碱与rIL-35存 在交互作用,随着乙酰甲胆碱剂量增大,rIL-35剂量减小,激发时RL越大（F =202.320,P =0.000）,Cdyn越小（F = 5.623,P =0.000）。与对照组比较,哮喘组小鼠BALF中的细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞等炎 症细胞的数量均增加（P <0.05）,Th2、Th17、Th17/Treg、IgE、IL-4、IL-5、IL-17、IL-22 水平升高（P < 0.05）,而Th1、Treg、Th1/Th2、IL-2、IFN-γ、IL-10 和TGF-β水平降低（P <0.05）。与哮喘组小鼠比较, rIL-35低、中和高剂量组小鼠BALF中的细胞总数、淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞等炎症细胞的数量降 低（P <0.05）,均呈随rIL-35剂量增加而减少的趋势,Th2、Th17、Th17/Treg、IgE、IL-4、IL-5、IL-17、IL- 22水平降低（P <0.05）,均呈随rIL-35剂量增加而降低的趋势,而Th1、Treg、Th1/Th2、IL-2、IFN-γ、IL-10 和TGF-β水平升高（P <0.05）,且呈随rIL-35蛋白剂量增加而升高的趋势。结论 rIL-35可通过调控Th1/Th2 和Th17/Treg细胞的失衡及炎症细胞因子的分泌,抑制支气管哮喘小鼠体内的炎症反应。     

14-3-3/HIP-55复合体增强HIP-55蛋白稳定性

目的:用双分子荧光互补及免疫共沉淀技术验证HIP-55与14-3-3在HEK293细胞中存在相互作用,并进一步研究其生物学意义. 方法:利用GATEWAY系统构建PDEST-N-Venus-HIP-55WT(野生型),PDEST-N-Venus-HIP-55AA(突变体S269A/T291A),PDEST-GST-HIP-55WT及PDEST-C-Venus-14-3-3τ重组质粒,利用双分子荧光互补及免疫共沉淀技术检测两者的相互作用,同时应用14-3-3蛋白相互作用抑制肽R18和HIP-55蛋白突变体( HIP-55AA突变体S269A/T291A不能与14-3-3相互作用)作为工具研究两者结合后对嘌呤霉素诱导的HIP-55蛋白表达的影响. 结果:外源转入的Venus-HIP-55WT、Venus-HIP-55AA及Venus-14-3-3蛋白能够在HEK293细胞中表达;双分子荧光互补实验结果表明HIP-55与14-3-3存在相互作用,HIP-55蛋白的S269/T291位点介导HIP-55与14-3-3的相互作用;免疫共沉淀技术表明内源性HIP-55与14-3-3存在相互作用;进一步研究发现HIP-55与14-3-3复合体增强HIP-55蛋白的稳定性,保护HIP-55不被降解. 结论:14-3-3与HIP-55存在相互作用,14-3-3/HIP-55复合体可以促进HIP-55蛋白的稳定性.     

孟鲁斯特对哮喘模型IL-5mRNA和IL-5蛋白表达的影响

目的 探讨白三烯受体拮抗剂孟鲁斯特(MK)对哮喘小鼠IL-5mRNA、IL-5蛋白表达的影响。方法 采用原位杂交、免疫组化LSAB法,检测哮喘小鼠及孟鲁斯特治疗后哮喘小鼠骨髓细胞IL-5mRNA的表达及肺、骨髓、脾IL-5蛋白的表达情况。 结果 孟鲁斯特可显著减轻哮喘小鼠肺组织炎症细胞浸润、细支气管痉挛、粘液分泌等;亦可减少骨髓IL-5mRNA阳性细胞数(P<0.02),并使骨髓、肺、脾IL-5蛋白表达下降。 结论 白三烯受体拮抗剂孟鲁斯特不仅使肺部炎症显著减轻,也抑制骨髓细胞表达IL-5mRNA、IL-5蛋白,提示白三烯可能通过调节炎症细胞、细胞因子合成来应答过敏原反应。     

达英-35联合二甲双胍治疗多囊卵巢综合征120例

目的观察达英-35联合二甲双胍治疗多囊卵巢综合征（PCOS）的疗效。方法选择2005年6月～2008年12月在我院就诊PCOS患者120例,口服达英-35联合二甲双胍治疗3个周期,测定患者血清黄体生成素LH、黄体生成素/卵泡刺激素LH/FSH和睾酮T,测量腰臀比值WHR、测量体重指数BMI,并将治疗前后进行比较。结果治疗后LH、LH/FSH、T、WHR、BMI均较治疗前明显下降P〈0.05或P〈0.01,治疗后月经均来潮且规则,痤疮、多毛症状也减轻。结论达英-35联合二甲双胍是治疗多囊卵巢综合征的理想选择。     

二甲双胍联合达因-35治疗多囊卵巢综合征

目的:观察分析二甲双胍联合达因-35治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的疗效。方法:选择2000年1月至2005年10月在佛山市顺德区妇幼保健院就诊的PCOS患者40例,随机分为A、B、C3组。A组14例,口服二甲双胍联合达因-35治疗;B组16例,口服二甲双胍治疗;C组10例,口服达因-35治疗。3组用药时间均为12周。测定患者血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮(T),测量腰臀比值(WHR)及体重指数(BMI)并进行治疗前后的比较。结果:A组治疗后LH、LH/FSH、T及WHR均较治疗前明显降低(P<0.05或P<0.01)。B、C两组治疗后LH、LH/FSH、T较治疗前明显降低(P<0.01),但WHR明显升高(P<0.05)。A、B、C3组治疗后各项指标比较:LH、LH/FSH及T差异无显著性(P>0.05),而B、C组WHR明显高于A组(P<0.01),且两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:口服二甲双胍联合达因-35治疗PCOS疗效优于单用口服二甲双胍或单用达因-35。     

不同学历的大学生心理健康调查研究

目的：探讨不同学历对大学生心理状况的影响.方法： 以280名大学生为研究对象,采用SCL-90对不同学历的大学生进行了评定.结果：专科生在强迫、人际敏感和抑郁方面高于本科生,两者均存在显著性差异（P〈0.01）.结论：大学生中低学历存在一定的心理缺陷,应针对性地开展专业教育,帮助大学生建立稳定、乐观和积极进取的健康心理.     

盐酸多奈哌齐对侧脑室注射Aβ25-35大鼠海马脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察盐酸多奈哌齐（DN）对侧脑室注射Aβ25—35大鼠海马脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法3月龄Wistar大鼠24只随机分为对照租、干预组、模型组,每组8只,向大鼠侧脑室立体定向注射Aβ25—35建立AD动物模型,然后干预组予以腹腔注射DN,对照组与模型组腹腔注射等量0．9％氯化钠溶液,最后用免疫印迹法检测大鼠海马BDNF的表达。结果免疫印迹法测定结果显示模型组大鼠海马BDNF的表达量较对照组下降,差异有统计学意义（P〈0．01）,干预组大鼠BDNF的表达量较模型组增加,差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论侧脑室注射Aβ25—35的大鼠其海马BDNF的表达较对照组明显下降,干预组与模型组相比BDNF的表达增加,盐酸多奈哌齐可能会增加AD模型大鼠海马BDNF表达。     

心肌保护药物35S-SPRC的制备及其生物分布定量研究

 目的 制备心肌保护药物35S-炔丙基半胱氨酸(35S-propargyl cysteine,35S SPRC)并以其为示踪剂研究SPRC在SD大鼠体内的生物学分布。方法 以半胱氨酸为起始原料合成非标记的SPRC,通过冷试验确定合成路线、反应条件及分析鉴定方法。在此基础上,以35S-L-半胱氨酸为原料合成35S-SPRC,35S-SPRC的鉴定采用TLC法及放射自显影法。按实验要求,将35S-SPRC配制成一定比活度的放射性溶液。取SD大鼠18只,随机分成3组,按15 mg/kg的剂量通过灌胃给药35S-SPRC。在不同时相将大鼠处死,取各脏器,称重、匀浆、消化,用液体闪烁计数器测定各样本的放射性活度。结果 最终产物35S-SPRC的TLC结果与SPRC完全一致, 35S-SPRC的放化纯度大于95%。大鼠体内的生物学分布表明,35S-SPRC在大部分器官内0.5 h达到峰值。结论 运用35S-SPRC能准确地测定SPRC在大鼠体内的生物分布。