近红外量子点单克隆抗体荧光探针对U14头颈部移植鳞癌的原位可视化成像研究

目的：观察近红外荧光量子点（Near-infrared fluorescent quantum dots,NIRF-QDs）表皮生长因子受体单克隆抗体（Epi－dermal growth factor receptor monoclonal antibody,EGFR mAb）荧光探针对U14头颈部移植鳞癌的原位可视化成像情况。方法：将EGFR mAb偶联发射波长为800 nm的近红外荧光量子点（Quantum dot,QD800）制备近红外量子点表皮生长因子受体单克隆抗体荧光靶向探针（QD800-EGFR mAb）,将高表达表皮生长因子受体的U14鳞癌细胞和QD800-EGFR mAb共培养,观察QD800-EGFR mAb与U14细胞表达的EGFR结合情况;建立U14头颈部移植鳞癌裸鼠模型,通过尾静脉注射QD800-EGFR mAb,观察对U14头颈鳞癌活体原位可视化动态成像情况。结果：体外实验证明：QD800-EGFR mAb能与U14细胞表达的EGFR特异性结合;体内活体成像显示：QD800-EGFR mAb静脉注射后能对U14头颈部移植鳞癌进行清楚的原位可视化荧光成像,荧光成像一直持续到24 h,在1～6 h时间段内肿瘤成像最完整和信噪比最高。结论：基于以EGFR为靶点的NIRF-QDs技术对头颈部鳞癌的发生发展、原位可视化成像和个体化治疗具有独特的优势和发展前景。     

金黄地鼠颊癌差异表达基因谱的构建及相关生物信息学分析

目的:构建二甲基苯并蒽(9,10-Dimethylen-1,2Benzanthracene,DMBA)诱导金黄地鼠颊囊黏膜癌变过程中基因差异表达谱,用相关生物信息学分析方法筛选在癌变过程中起重要作用的基因和信号通路.方法:用DMBA诱导建立金黄地鼠颊鳞癌模型,以Ratio≥2和Ratio≤0.5为阈值,用Agilent全基因表达谱芯片检测金黄地鼠颊囊黏膜癌变的差异表达基因,并对这些差异基因进行(Gene ontology,GO)功能分类和Pathway通路分析.结果:金黄地鼠正常颊黏膜和癌变组织之间共有1 943条差异表达基因,其中上调基因787条,下调基因1 156条;GO分析差异表达基因涉及结构分子相关基因群、转录调控相关基因群和代谢相关基因群等10类;Pathway分析在颊黏膜癌变中共有27条通路发生显著性异常改变,有136条差异基因在以上27条异常通路上发生富集,其中Ppp3r2、Actn1、Src等13条基因均分别富集在3条以上异常改变的通路上.结论:金黄地鼠颊癌的发生共有1 943条基因发生差异表达和27条通路发生异常改变,其中Ppp3r2、Actn1、Src等13条基因是导致细胞通路改变而最终发生癌变的重要致病基因,针对以上基因和通路的深入研究,将有助于揭示口腔黏膜癌变的分子机制,并为基因治疗提供新的靶点.     

DMBA诱导金黄地鼠颊囊癌变的组织学动态变化研究

目的:观察分析金黄地鼠在致癌剂二甲基苯并蒽(9,10-Dimethyl-1,2 Benzanthracene,DMBA)作用下颊囊粘膜癌变不同时期在肉眼和光镜下的组织学动态变化过程.方法:用DMBA涂抹金黄地鼠颊囊粘膜,每周3次.在肉眼下动态观察颊囊粘膜的癌变过程;分别在第2、4、6、8、10、12、14周时处死动物,在光镜下动态观察颊囊粘膜癌变过程的显微组织学改变.结果:DMBA涂抹金黄地鼠颊囊粘膜2周时出现单纯增生改变,4周时出现轻度上皮异常增生,6周时出现中度异常增生,8周时出现重度异常增生,部分出现原位癌改变,10周时已发生癌变,实验中得到的癌症模型均为高分化鳞状细胞癌.结论:DMBA诱导的金黄地鼠颊囊粘膜癌和人类口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)相似,是研究口腔鳞癌多阶段、多步骤动态发展的理想模型.     

用全基因芯片技术对金黄地鼠口腔颊黏膜癌前病变相关基因的筛选和分析

目的:利用全基因芯片技术筛选口腔颊黏膜癌前病变发生发展的相关致病基因.方法:用9、10-二甲基;1,2-苯并蒽(Dimethylbenzanthracene,DMBA)诱导建立金黄地鼠颊鳞癌模型,分别提取正常颊黏膜和癌前病变组织的总RNA并合成用Cy3荧光标记的cRNA,分别与含有41 000个基因/ESTs序列的Agilent大鼠全基因芯片杂交,以Log2Ratio≥2.5和Log2Ratio≤-2.5为阈值来确定差异表达基因,然后用Gene Ontology对差异表达基因行功能分类分析,最后用RT-PCR对部分差异表达基因进行验证.结果:金黄地鼠颊黏膜自正常黏膜到癌前病变发展过程中,共得到1 331条差异表达基因,其中上调基因747条,下调基因584条.Gene Ontology分析发现这些差异基因主要涉及到大分子代谢、信号传导等8大功能分类.对上调基因Atp6vOd2和下调基因Sfrp2行RT-PCR验证结果与芯片结果相符.结论:口腔颊黏膜癌前病变的发生涉及众多基因表达的改变,通过对这些基囚的进一步研究,将对探索口腔黏膜癌前病变的发病机制、有效的干预防止癌前病变的发生或逆转癌前病变具有重要意义.     

口腔鳞状细胞癌和颊黏膜癌前病变基因表达和细胞通路的差异性研究?

目的：筛选出口腔鳞状细胞癌与颊黏膜癌前病变组织中的差异基因,并进行生物信息分析,探讨癌前病变转向鳞癌的分子机制。方法通过二羟甲基丁酸(DMBA)诱导金黄地鼠来建立颊黏膜癌前病变和鳞癌模型,提取病变组织总 RNA,合成单标 Cy3荧光标记的 cRNA,采用基因芯片技术,筛选出两组模型口腔组织中表达差异的基因,对筛选出的差异基因进行功能分类(GO)和信号通路(Pathway)分析,最后用 RT-PCR 验证其中部分差异基因。结果口腔鳞状细胞癌与颊黏膜癌前病变模型组织相比,有1981条基因差异表达(120条为未知基因),其中1037条为上调基因,944条为下调基因。GO 分析显示差异表达基因包括代谢、细胞结构、机体发育等14类相关的功能基因。通路分析结果显示有9条通路发生异常改变,在已知的1861条差异表达基因中,有14条基因富集于以上9条改变的通路上。结论颊黏膜癌前病变恶性转变到鳞癌共有1981条基因产生差异表达和9条通路发生异常改变,其中 Casp3和 CXCL12等14条基因参与了改变细胞通路,很可能就是癌前病变恶性转变成鳞癌的重要致病基因。     

黄癸素对人口腔上皮样癌KB细胞株及化学诱导性仓鼠颊癌作用的研究

目的研究黄癸素对体外培养人口腔上皮样癌KB细胞及化学诱导仓鼠的口腔癌变抑制作用。方法 MTT法检测黄癸素对KB肿瘤细胞株的影响,计算24,48,72h的IC50。采用8周龄仓鼠,建立二甲基苯丙蒽(DMBA)诱发的颊囊癌模型,用黄癸素进行干预。结果黄癸素对KB细胞有抑制作用,24,48,72h的IC50分别为(12.74±0.13),(4.56±0.22),(2.88±0.11)mg/L;对KB细胞生长呈浓度、时间依赖性抑制作用。DMBA诱导的仓鼠在36,54,72mg/kg的黄癸素作用下,颊黏膜不典型增生与癌变的发生率有不同程度的降低,其中54,72mg/kg剂量组的病变总发生率分别为66.6%和53.3%,比模型组(86.6%)分别降低了20.0%和33.3%(P<0.01)。结论黄癸素能显著的抑制KB细胞生长,对化学物诱导的仓鼠口腔癌变也有抑制作用。     

精子蛋白17靶向的小鼠肿瘤近红外荧光成像

目的人精子蛋白17(human sperm protein 17,Sp17)异常表达在一些恶性肿瘤细胞,可被用作肿瘤特异性分子诊断和治疗的靶点。文中将抗Sp17单克隆抗体与近红外染料偶联,制成高亲和力探针,用近红外成像技术对活体动物肿瘤靶点进行确认。方法用免疫组化技术证明,Sp17在肝细胞癌细胞系SMMC-7721及裸鼠皮下移植瘤组织高水平异常表达。将近红外染料吲哚花箐素衍生物(ICG-Der-02)与抗Sp17单克隆抗体(anti-Sp17 mAb)偶联,获得特异性探针。静脉注射至荷瘤小鼠体内,用光学成像系统进行活体实时肿瘤显像。结果 anti-Sp17-ICG-Der-02探针进入动物体内后,快速聚集到肿瘤部位,发出强烈的荧光信号。随着未结合染料逐渐排出体外,动物肝、肾等内脏器官的非特异荧光信号消褪,清晰显示出肿瘤的部位及大小,且可以持续至少7d。结论高亲和力探针anti-Sp17-ICG-Der-02对体内肿瘤特异性诊断有潜在应用价值。     

应用N-乙酰-L-半胱氨酸合成紫色-近红外荧光发射的量子点

应用生物活性分子N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)作为配体,采用加热回流和水热合成法制备具有紫色-近红外荧光发射、高质量的水溶性碲化镉量子点(CdTe QDs),并通过紫外可见、荧光分光光度计表征量子点的光学性质,透射电镜(TEM)和粉末X射线衍射(XRD)表征量子点结构。结果表明,以N-乙酰-L-半胱氨酸为配体可以合成出荧光量子产率为11%～62.4%、荧光发射峰在415～800 nm宽范围内可调的Zn_1-xCd_xSe和CdTe水溶性量子点。XRD结果表明量子点荧光发射峰与其粒径相关。这是首次应用单一配体——N-乙酰-L-半胱氨酸作为稳定剂,合成具有紫色近红外宽荧光发射的水溶性荧光量子点。用此方法制备的水溶性量子点具有较好的荧光量子产率、较窄的半峰宽以及较强的光稳定性。     

叶酸受体靶向的CdTe/CdS量子点荧光探针的制备和表征

【目的】 研制一种叶酸受体修饰的CdTe/CdS量子点荧光探针并初步验证其靶向性?【方法】 以巯基丁二酸(MSA)为稳定剂,采用水相合成法合成CdTe/CdS核壳型量子点?利用紫外分光光度计?荧光分光光度计?X线粉末衍射仪?透射电镜分别对其紫外吸收情况?光致发光性质?晶体结构?形貌进行表征?采用连接了叶酸的氨基聚乙二醇与CdTe/CdS量子点偶联,制备叶酸受体靶向的(FA-PEG-CdTe/CdS)量子点荧光探针?通过凝胶电泳和光谱分析鉴定偶联效果?在荧光倒置显微镜下观察已知细胞表面叶酸受体阳性的鼻咽癌细胞株HNE-1和人喉癌细胞株Hep-2及叶酸受体阴性的鼻咽癌细胞株CNE-2和FA-PEG- CdTe/CdS 量子点探针的摄取情况?通过观察分析不同细胞被标记的情况去检验荧光探针的靶向性和特异性?【结果】 以巯基丁二酸为稳定剂,当pH = 10,物质的量比为n(Te2-):n(Cd2+):n(MSA) = 1:10:10.5的条件下,随加热回流反应时间的延长,CdTe量子点的粒径不断增长,吸收光谱和光致发光谱不断红移?在反应10 min时获得了量子产率高达72.5%的CdTe量子点;X射线粉末衍射图显示出对应立方晶型 CdTe 的三个晶面(111),(220),(311),透射电子显微镜下呈近似球形,粒径分布较均匀,平均粒径约为3 nm(反应10 min)?琼脂糖凝胶电泳和荧光光谱分析证实CdTe/CdS量子点与PEG-FA成功偶联,荧光显微镜下显示出叶酸受体阳性的HNE-1?Hep-2被FA-PEG-CdTe/CdS量子点荧光探针特异性标记?【结论】 CdTe量子点可作为新型的荧光标记材料,核壳型CdTe/CdS量子点与叶酸偶联后稳定性较好,FA-PEG-CdTe/CdS 量子点荧光探针具有良好的靶向性,在高表达叶酸受体的肿瘤诊断和治疗方面具有良好的应用前景?     

近红外荧光靶向探针用于前列腺神经血管束术中成像

目的：研究近红外荧光靶向探针ICG-NP41在大鼠体内实验中对前列腺周围神经血管束(neurovascular bundles, NVB)的成像效果。方法：构建近红外荧光靶向探针ICG-NP41,建立Sprague-Dawley大鼠(250～400 g)NVB体内成像的动物模型，利用本团队自主研发的近红外二区小动物活体成像系统进行大鼠体内试验，采用ImageJ及Origin对采集的图像进行处理，利用GraphPad Prism对荧光信号数据进行统计分析，定量计算探针用于NVB成像的信背比(signal to background ratio, SBR),探索有效的给药剂量及成像时间，并对成像结构进行石蜡病理切片及HE染色。结果：除对照组大鼠(n=2)外，两组尾静脉注射ICG-NP41的大鼠(n=2)均在给药后2 h、4 h后于NIR-Ⅱ荧光模式下拍摄到右侧NVB中的海绵体神经。给药后2 h和4 h, 2 mg/kg组大鼠的海绵体神经在荧光模式下的平均SBR分别为1.651±0.142和1.619±0.110,均高于白光模式(1.111±0.036),但差异无统计学意义(P>0.0...     

层粘连蛋白在金黄地鼠颊囊癌形成中的表达

目的检测了层粘连蛋白(LN)在金黄地鼠颊囊癌发生、发展过程中的表达,探索LN与颊囊癌侵袭性的关系。方法金黄地鼠60只,随机分成6组,1～5组用0.5％二甲基苯蒽涂擦金地鼠颊囊,每周3次,分别于6、8、10、12及14周处死。免疫组化法观察颊囊病变中LN的表达。结果轻、中、重度不典型增生原位癌中LN表达呈连续、线状;侵袭癌中LN则模糊、消失;侵袭前沿LN表达缺失;分化好的癌巢周围LN呈连续、线状。结论 LN可作为口腔癌侵袭性诊断的指标,可反映癌细胞的分化程度,可直观、准确地对原位癌进行诊断。     

丹酚酸B对口腔癌的化学预防作用

目的探讨丹酚酸B对二甲基苯丙蒽（DMBA）诱导的金地鼠颊囊黏膜癌变的化学预防作用及其对血管生成的影响。方法60只雄性金地鼠随机分四组。连续6周（每周3次）在A组（n=20）和B组（n=20）动物右侧颊囊黏膜涂搽DMBA诱发口腔癌，C组（n=10）动物右侧颊囊黏膜涂搽丙酮，D组（n=10）动物不做任何处理，正常饲养。从第7周开始B组和D组动物每天给予丹酚酸B溶液灌胃（10mg／kg），干预癌变过程；A组和C组动物每天给予同等体积的生理盐水灌胃，持续12周。实验结束时处死所有动物，取颊囊黏膜进行组织病理学检查，免疫组化法对血管内皮细胞染色后计数血管密度。结果丹酚酸B能显著降低金地鼠颊囊黏膜癌的发生率（P〈0．01），并能抑制癌变过程中新生血管的形成（P〈0．005）。结论丹酚酸B有望成为一种理想的口腔癌化学预防药物。     

大豆卵磷脂促进胰岛素透口腔粘膜渗透作用研究

目的 :研究大豆卵磷脂 (SPC)对胰岛素 (Ins)透口腔粘膜渗透扩散的作用。方法 :分别采用离体猪、兔口腔粘膜固定在Ussing Chambers扩散池中进行体外渗透实验和共聚焦激光扫描显微成像研究异硫氰酸荧光素标记胰岛素 (FITC insulin)透口腔粘膜上皮细胞的扩散分布。结果 :5 0mmol·L- 1 SPC对 1mg·ml- 1 Ins的透口腔粘膜渗透扩散有显著的促进作用。结论 :大豆卵磷脂 (SPC)可作为胰岛素透口腔粘膜渗透作用的促进剂     

DMBA诱发金黄地鼠颊粘膜癌及肉瘤形成的观察

为探讨化学致癌剂诱导实验性口腔癌发生过程中结缔组织改变及其肿瘤起源和意义． 年轻金黄地鼠, 用０５ ％ Ｄ Ｍ Ｂ Ａ （ 二甲基苯并蒽） 丙酮液处理其右侧颊囊, 对照组不处理或仅纯丙酮液处理． ３ , ６ ,９ ,１２ 和１６ 周分批处死动物, 观察诱癌区病理学改变; 拟有结缔组织恶变者, 用抗ｋｅｒａｔｉｎ , ｖｉｍｅｎｔｉｎ 和ｄｅｓｍｉｎ 抗体进行免疫组化染色 （ Ｌ Ｓ Ａ Ｂ 法） ． 结果表明 Ｄ Ｍ Ｂ Ａ 作用于地鼠颊粘膜, 不仅可诱发上皮癌变, 而且结缔组织也发生一序列改变： 纤维细胞增殖, 血管增生和炎性细胞浸润等, 甚至少数（８／３０ 例） 动物在异常增生上皮下方或癌巢周围出现类似纤维肉瘤或梭形鳞癌的肿瘤细胞, 免疫组化证实为来自间叶组织的纤维肉瘤． 本研究结果提示化学致癌剂致癌过程可能存在上皮结缔组织相互作用, 此将有助于提高对口腔癌发生生物学及防治策略的认识．     

建立家兔颊黏膜鳞状上皮癌前病变模型初探

目的探讨建立与人类食管结构近似的鳞状上皮癌前病变动物模型方法。方法将含有致癌剂二甲基苯并葸（Dimethyl—Benzanthracene,DMBA）的溶液及药膜涂抹或贴附于48只家兔口腔颊黏膜,给药16周后,做病理组织学检查和免疫组织化学检查,以12只家兔作为空白对照。结果家兔口腔颊黏膜应用二甲基苯并蒽16周后,Ⅱ-Ⅲ级不典型增生发生率达到64．6％（31／48）,贴膜法所致Ⅱ-Ⅲ级不典型增生发生率达到70．8％（17／24）,高于涂药法的58．3％（14／24）。免疫组化结果显示：随着病变的进展,P53、PCNA及Bcl-2的表达逐渐增强。结论应用致癌剂二甲基苯并葸可初步构建家兔口腔颊黏膜鳞状上皮癌前病变模型,贴膜法是一种比较好的局部给药方法。     

直肠癌及癌周不同部位粘膜表皮生长因子受体表达的研究

目的探讨人体直肠癌周不同部位粘膜表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）在正常直肠粘膜、直肠腺瘤、直肠癌及癌周不同部位粘膜上皮细胞中的表达及意义。方法采取正常直肠粘膜１０例,直肠腺瘤２０例,直肠癌远旁、近旁和癌粘膜各３０例。应用免疫组化染色（ＳＰ法）检测ＥＧＦＲ的表达。结果正常直肠粘膜、直肠腺癌和直肠癌粘膜ＥＧＦＲ阳性率分别为０、３０％和７３．３％,各组间比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。直肠癌远旁、近旁和癌粘膜ＥＧＦＲ阳性率分别为３．３％、２０．０％和７３．３％,三者之间均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＧＦＲ表达与直肠癌的分化程度、分期和淋巴结转移有关;与组织学类型无关;ＥＧＦＲ与直肠癌的发生发展密切相关。     

结直肠癌组织乳腺癌易感基因1与表皮生长因子受体的蛋白表达及其临床意义

目的：探讨乳腺癌易感基因1（ BRCA1）和表皮生长因子受体（ EGFR）蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集结直肠癌标本80例、腺瘤标本20例、正常黏膜标本20例,采用免疫组化法检测BRCA1和EGFR蛋白的表达情况,比较不同临床病理特征结直肠癌患者的癌组织BRCA1蛋白、EGFR蛋白的阳性表达率,分析结直肠癌患者的癌组织BRCA1蛋白、EGFR蛋白表达的相关性。结果（1） BRCA1蛋白的阳性表达率在结直肠癌组织低于腺瘤及正常黏膜组织（P＜0．05）,有淋巴结转移患者其BRCA1蛋白阳性表达率也低于无淋巴转移患者（P＜0．05）。（2）EGFR蛋白阳性表达率在结直肠癌组织高于腺瘤及正常黏膜组织（P＜0．05）;肿瘤直径＞5 cm、中（低）分化腺癌、Duke C＋D期、有淋巴结转移的患者EGFR蛋白阳性表达率更高（P＜0．05）。（3）结直肠癌组织中BRCA1与EGFR蛋白表达呈负相关（r＝－0．219, P＜0．05）。结论 BRCA1及EGFR蛋白在结直肠癌的异常表达,对肿瘤的发生发展起到重要作用。     

Effect of gynostemma pentaphyllum mak on carcinomatous conversions of golden hamster cheek pouches induced by dimethylbenzanthracene: a histological study

OBJECTIVE: To evaluate the effect of gynostemma pentaphyllum mak (GP) on carcinomatous conversions of leukoplasia of the golden hamster cheek pouch induced by dimethylbenzanthracene (DMBA). METHODS: 284 golden hamsters, ranging from 4 to 8 weeks of age, 80 to 100 grams in weight were randomly divided into three groups: control, model and experimental groups. Control group (8 hamsters) were sacrificed at week 0 and week 12 for control. Model group (123 hamsters) were pasted in bilateral cheek pouches with 0.5% DMBA, 3 times a week for establishment of experimental leukoplasia, and sacrificed at week 2 to week 9 (12-22 hamsters were sacrificed a week). Experimental group (153 hamsters) were divided into three subgroups. Subgroup A underwent simultaneous DMBA pasting and oral taking of GP, and were sacrificed at week 6 and week 9. Subgroup B underwent oral taking of GP for 12 weeks after completion of DMBA pasting. Subgroup C underwent DMBA pasting after completion of oral taking of GP for 12 weeks. RESULTS: The earliest epithelial dysplasia and carcinoma in situ occurred at week 3 and week 6 after DMBA pasting. There were significant differences between subgroup B and model group for 3 weeks' administration of DMBA (P < 0.05), and between subgroup C and model group (P < 0.01), while there was no difference between subgroup B and model group for 6 week's administration of DMBA (P > 0.05). CONCLUSIONS: GP could inhibit and reverse the carcinomatous conversions of leukoplasia of golden hamster cheek pouches, indicating its positive anticarcinogenic effect.