细胞因子对乳腺癌细胞钠碘转运体基因表达的调控

目的 :研究 3种细胞因子 (肿瘤坏死因子 α ,干扰素 γ和IL 6 )对乳腺癌细胞钠碘转运体 (NIS)基因表达的影响 ,探讨乳腺肿瘤组织NIS的表达特点和调控因素。方法 :采用乳腺癌细胞株MCF 7进行培养 ,分别给予不同浓度的肿瘤坏死因子 α、干扰素 γ或IL 6进行刺激 72h培养。采用RT PCR方法检测细胞中NIS的mRNA表达情况。结果 :乳腺癌细胞MCF7在经过肿瘤坏死因子 α、干扰素 γ或IL 6刺激后 ,细胞中NIS的mRNA表达比对照组有明显降低 ,并且与细胞因子浓度浓度成反比趋势。结论 :细胞因子肿瘤坏死因子 α、干扰素 γ和IL 6对乳腺癌细胞MCF 7的NIS基因表达有抑制作用 ,这提示细胞因子可能通过调节乳腺癌NIS基因的表达 ,从而影响乳腺癌细胞对放射性碘治疗的敏感性。     

甾体激素及拮抗剂对乳腺癌细胞粘附功能的影响

目的　探讨甾体激素及拮抗剂对乳腺癌细胞粘附功能的影响及与雌 /孕激素受体 (ER/PR)的关系。方法　ER+ /PR+ 的MCF 7和ER-/PR-的MDA MB 4 35s乳腺癌细胞株 ,予以不同浓度的 17β雌二醇、孕酮、4 羟他莫西芬处理 2 4小时和 72小时后 ,用MTT法做细胞粘附试验 ,测吸光度 (A)值。结果　MDA MB 4 35s细胞粘附能力明显高于MCF 7细胞(P <0 .0 1) ;较高浓度的 17β雌二醇、孕酮及雌激素部分拮抗剂 4 -羟他莫西芬可以增加ER+ /PR+ 的MCF 7乳腺癌细胞的粘附能力 ,而对ER-/PR-的MDA MB 4 35s乳腺癌细胞株无明显作用。结论　甾体激素及拮抗剂对乳腺癌细胞粘附功能的调节可能与雌孕激素受体状态有关     

维甲酸对乳腺癌细胞MDA-MB453钠碘转运体调控

目的本实验通过维甲酸对乳腺癌细胞的钠碘转运体(NIS)基因及蛋白表达和摄碘功能的影响,探讨乳腺癌细胞NIS的表达特点和调控因素.方法我们采用乳腺癌细胞MDA-MB453进行培养,分别给予不同浓度的维甲酸(RA)进行刺激72 h.采用RT-PCR方法检测细胞中NIS的mRNA表达;用WesternBloot方法检测NIS蛋白水平;采用125I测定乳腺癌细胞摄碘功能的变化.结果乳腺癌细胞MDA-MB453在经过RA刺激后,细胞中NIS的mRNA表达比对照组有明显增加,并且与RA浓度成正比.细胞中NIS的蛋白表达比对照组也有明显增加,并且与RA浓度相关.经过RA刺激的乳腺癌细胞摄碘能力明显增加.结论维甲酸对乳腺癌细胞MDA-MB453的NIS基因和蛋白表达均有促进作用,而且促进乳腺癌细胞的摄碘,这提示维甲酸可能通过调节乳腺癌NIS基因和蛋白的表达,从而影响乳腺癌细胞对放射性碘治疗的敏感性.     

核受体激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶的调节作用

目的：探讨各种核受体包括过氧化酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和α(PPARα)、维甲酸受体(RAR)、维甲类X受体(RXR)、维生素D受体(VDR)、甲状腺素受体(TR)和糖皮质激素受体(GR)的激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性的调节作用。方法：测定人卵巢颗粒细胞和MCF—7细胞在上述各种核受体激动剂处理前后芳香化酶活性的变化和细胞色素P450芳香化酶(P450arom)mRNA的表达水平。结果：(1)PPARγ和RXR激动剂均能显著抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性，两者结合使用抑制作用更进一步增强，并且伴有P450arom mRNA水平下降；(2)RAR和RXR激动剂合用能显著刺激乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性，并使P450arom mRNA表达水平升高。结论：人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性受不同的核受体激动剂调节。     

S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因沉默抑制乳腺癌MCF7细胞生长的研究

目的探讨S 腺苷甲硫氨酸脱羧酶（SAMDC）基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖及侵袭能力的抑制作用。方法用特异性沉默SAMDC基因表达的RNA干扰真核表达载体SAMDC shRNA表达载体(pGPU6 SAMDC)转染乳腺癌MCF 7细胞,采用RT PCR和Western blot技术分别检测SAMDC mRNA和蛋白质表达水平;细胞增殖实验（CCK 8法）和细胞周期分析评价SAMDC基因沉默对乳腺癌MCF 7细胞增殖的影响,肿瘤侵袭实验观察SAMDC基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7侵袭活性的影响。结果SAMDC shRNA表达载体转染后,MCF 7细胞SAMDC mRNA水平下调43.8％,蛋白表达水平下降66.5％;MCF 7细胞的增殖活性和侵袭能力均受到明显抑制,细胞增殖活性下降37%,细胞周期分析G1期细胞增加。结论SAMDC基因沉默可通过延长细胞周期的G1期而抑制乳腺癌MCF7细胞的增殖,并能降低癌细胞侵袭活性,提示SAMDC可作为乳腺癌基因治疗的靶分子。     

外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞的乙醛脱氢酶1 mRNA及蛋白表达

 目的 本研究旨在探讨外源性TGF β1诱导人乳腺癌MCF 7细胞对乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)mRNA及蛋白表达的影响。方法 用不同浓度(1、5 ng/mL)的TGF β1诱导体外培养的MCF 7细胞48 h后,RT PCR 检测ALDH1 mRNA的表达变化,Western blot检测ALDH1蛋白的表达变化。结果 TGF β1(1、5 ng/mL)诱导的MCF 7细胞的ALDH1 mRNA及蛋白表达均高于未诱导的MCF 7亲本细胞,差异有统计学意义(P均<0.001);高浓度(5 ng/mL)TGF β1诱导的MCF 7细胞的ALDH1 mRNA及蛋白表达均高于低浓度(1 ng/mL)TGF β1诱导的MCF 7细胞,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论 外源性TGF β1可诱导人乳腺癌MCF 7细胞上调ALDH1 mRNA及蛋白的表达,可能诱导ALDH1+乳腺癌肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)的转化,并有一定的浓度依赖性。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期作用及分子机制探讨

目的 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期的作用及机制.方法 用0.5、1.0、1.5;μmol/L MS-275作用于乳腺癌MCF7细胞24 h,用MTT 法观察不同浓度MS-275对乳腺癌MCF7细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测乳腺癌MCF7细胞生长及周期,Western-blotting法检测MS-275对乳腺癌MCF7细胞周期相关基因表达的影响.结果 1.0 μmol/L的MS-275对乳腺癌MCF7细胞有明显的生长抑制作用,并呈现一定的量效关系,在1.0 μxmol/L浓度之上可明显诱导乳腺癌MCF7细胞周期阻滞,增强p21、p27基因的表达,降低CCNDl、Cdk4D基因的表达.结论 一定剂量MS-275抑制乳腺癌MCF7细胞的生长,细胞阻滞的发生与p21、p27基因表达的增加及CCND1、Cdk4D基因表达的减少相关.     

RT-PCR分析工频磁场暴露后MCF-7细胞p53 mRNA的表达

目的：观察工频磁场暴露对MCF－7细胞p53mRNA表达的影响。方法：将人乳腺癌MCF－7细胞暴露或假暴露于60Hz,5mT工频场中4，8和24h，采用RT－CR方法定量分析照射后不同时间MCF－7细胞p53mRNA的表达水平。结果：工频磁场暴露4，8和24h，MCF－7细胞p53mRNA的表达水平保持不变，结论：工频磁场暴露对MCF－7细胞p53mRNA的表达没有影响。     

肺鳞癌细胞中PTHrP基因表达与性激素的相关性研究

目的 研究人的雌性激素17β-雌二醇和雄性激素睾酮对肺鳞癌细胞中甲状旁腺激素相关蛋白甲状旁腺素相关肽(PTHrP)基因表达的影响.方法 分别用17β-雌二醇和睾酮按不同的浓度梯度刺激肺鳞癌细胞的生长,利用EVA荧光实时定量PCR技术检测各浓度雌雄性激素刺激作用后肺鳞癌细胞中PTHrP基因表达的情况.结果 肺鳞癌细胞中PTHrP基因相对表达量随着睾酮浓度的增加而递减,但是17β-雌二醇作用后,PTHrP基因相对表达量没有明显的增强和减弱的趋势.结论 睾酮对肺鳞癌细胞中PTHrP基因表达起负调节作用,而17β-雌二醇对PTHrP基因表达的调节作用不明显.     

孕激素对乳腺癌细胞系MCF-7中硫酸酯酶和硫转移酶的影响

目的 WHI的研究结果发现，与单用雌激素比较，雌孕激素合用的激素替代治疗可能增加了乳腺癌发生的危险性。从而使得人们对于孕激素的作用引起关注。由于局部雌激素浓度的增高与乳腺癌的发生和发展密切相关，本研究旨在探讨乳腺癌细胞系中孕激素对两种雌激素代谢酶，硫酸酯酶和硫转移酶的影响。方法 将人乳腺癌细胞系MCF-7在加入了雌二醇和孕激素的培养液中进行培养。用同位素标记的底物和RT--PCR技术分别测定硫酸酯酶和硫转移酶的活性和mRNA表达水平。结果 与单用雌二醇相比，安宫黄体酮／雌二醇合用刺激硫酸酯酶，使其活性和mRNA表达水平均显著升高，差异具有显著性。黄体酮表现了类似的作用，但刺激幅度低于安宫黄体酮。左炔诺孕酮，炔诺酮和地诺孕酮无刺激作用。五种孕激素对硫转移酶的活性和mRNA表达影响。结论 本研究表明，乳腺癌细胞中，不同类型的孕激素对雌激素代谢酶具有不同的作用。对于目前激素替代治疗中常用的孕激素安宫黄体酮是否可以通过影响雌激素代谢酶的活性而增加乳腺癌的危险性，尚有待于更深入的研究。     

分化型甲状腺癌细胞株FTC-133失分化现象与^131I辐射的关系

目的研究体外培养的分化型甲状腺癌细胞株FTC-133失分化现象与放射性碘（^131I）辐射的关系。方法体外培养的甲状腺癌细胞株FTC-133分为实验组（以经筛选不造成细胞增殖抑制剂量的Na^131I辐射细胞48h,长期传代培养）、对照组（不加入Na^131I,长期传代培养）和空白组（细胞冻存,实验时复苏）。测定各组细胞摄碘率;分别采用RT—PCR、Western blotting和放射免疫分析法（RIA）检测各组细胞甲状腺球蛋白（Tg）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、钠碘转运体（NIS）、促甲状腺激素受体（TSHR）mRNA和蛋白表达。结果细胞摄碘率为空白组〉对照组〉实验组,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。与空白组比较,实验组和对照组细胞Tg、TPO、NIS、TSHR蛋白表达均明显下降,且以实验组下降尤为显著,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;三组Tg、TPO、NIS和TSHRmRNA与蛋白表达变化一致。结论分化型甲状腺癌细胞FTC-133长期体外培养自动经历失分化过程,^131I辐射促进这一过程的发展,可能与甲状腺特异蛋白表达下降有关。     

甲状腺组织中钠/碘转运体基因表达的研究

目的：研究各种病理甲状腺组织中钠／碘转运体（NIS）基因的表达情况，探讨NIS与甲状腺疾病之间的关系。方法：甲状腺组织取自3例Graves病（GD）患者，2例桥本甲状腺炎（HT），2例甲状腺乳头状癌（TC），2例癌旁正常甲状腺组织，运用半定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术检测NIS mRNA的表达情况。结果：癌旁正常甲状腺组织表达NIS mRNA,GD甲状腺组织NIS基因表达量明显增多（P＜0．05）；HT组织中，1例NIS mRNA表达量减少，1例不表达；甲状腺癌组织不表达NIS基因。结论：不同病理甲状腺组织中NIS基因表达存在一定变化，NIS可能参与自身免疫性甲状腺疾病及甲状腺癌的发病机理。     

甲状腺乳头状癌中促甲状腺激素受体与钠碘转运体mRNA的表达

目的钠碘转运体(Na+/I-symporter,NIS)是介导甲状腺细胞摄取碘的重要载体,其表达、定位与促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)关系密切。文中主要研究甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinomas,PTC)及癌旁组织中TSH受体(TSH receptor,TSHR)与NIS基因的表达。方法实时荧光定量PCR法测定36例PTC及癌旁组织,20例正常组织中TSHR mRNA及NIS mRNA的表达水平。结果 PTC及癌旁组织中TSHR mRNA表达水平明显低于正常组织,P<0.05;NIS mRNA表达水平在PTC组织中显著下降,P<0.05。结论 PTC组织中TSHR与NIS mRNA基因表达水平呈现同步下降趋势,可能与TSH-TSHR信号通路的调控有关。     

hTERT启动子引导的NIS基因重组腺病毒的构建

目的：构建在人端粒酶逆转录酶（hTERT）核心启动子引导钠碘转运体（NIS）基因的重组腺病毒。方法：PCR扩增目的片断;通过荧光分析实验,选取启动效果最好的hTERT启动子片断;建立3个重组腺病毒：Ad—hTERT—NIS、Ad—CMV—NIS及Ad—CMV-TPO,培养胶质瘤细胞系U87、U251及细胞系MRC-5（正常人胚胎成纤维细胞系）,然后转染病毒并进行westem bolt分析等实验。结果：胶质瘤细胞U87及U251中端粒酶为阳性,hTERT启动子片段204启动效率比较其他片段效率高。该启动子片段可以引导NIS基因的靶向性表达。结论：成功构建在hTERT核心启动子引导NIS基因的Ad—hTERT—NIS及重组腺病毒Ad—CMV—NIS和Ad-CMV—TPO,该重组腺病毒转染胶质细胞U87和U251后能成功表达NIS及TPO基因。     

钠/碘转运蛋白和促甲状腺激素受体在甲状腺癌中的表达及相关性

目的 研究钠/碘转运蛋白(NIS)和促甲状腺激素受体(TSHR)在甲状腺癌中的表达特征,探讨二者表达的相关性.方法 收集正常甲状腺组织18例、结节性甲状腺肿标本27例和甲状腺癌标本23例,通过荧光定量分析和免疫组化法研究NIS和TSHR的表达.结果 甲状腺癌NIS和TSHR mRNA的表达显著低于正常甲状腺组织和结节性...     

替代激活的单核细胞促进人乳腺癌细胞SKBR3的生长侵袭

目的 研究不同激活状态的单核细胞在乳腺癌发展中的作用,探索肿瘤相关巨噬细胞在乳腺癌中的作用机制.方法 体外分离培养人外周血单核细胞,分为经典激活、替代激活、空白对照3组,分别采用细菌脂多糖IL-4、培养基进行相应激活.48～72 h后,采用RT-PCR、与人乳腺癌细胞株SKBR3共培养、建立鸡胚尿膜囊血管生成模型等方法检测各组TNF-α、AMAC-1、β-actin mRNA表达的差异,观察3种不同活化状态的单核巨噬细胞对乳腺癌细胞生长的影响以及对肿瘤诱导新生血管形成的影响.结果 经典激活组高表达TNF-α,替代激活组则高表达AMAC-1,3组间分子标志物的表达差异具有统计学意义(P＜0.05).共培养实验显示经典激活的单核细胞呈现出明显抑瘤效应,3 d后效应明显高于其他两组(P＜0.05),替代激活的单核细胞则在第5天开始呈现出明显促肿瘤效应(P＜0.05).在鸡胚尿囊膜血管生成模型中,替代激活的单核细胞可以明显促进肿瘤新生血管的生成(5733±14.82),与经典激活(20.44±6.50)及未激活组(32.22±8.33)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-4可以促进人外周血单核细胞向替代激活的方向分化并高表达替代激活的分子标志物AMAC-1,而替代激活的单核巨噬细胞在与肿瘤细胞的共培养中可以促进肿瘤细胞的生长以及刺激肿瘤新生血管的生成.提示肿瘤相关巨噬细胞在体内很可能主要以替代激活的方式存在,从而直接或间接地促进了肿瘤的进展.